Kultur Sel

EFEK KURKUMIN TERHADAP VIABILITAS KULTUR SEL GRANULOSA
BABI (Sus
Sus domesticus)
domesticus DENGAN METODE PENGECATAN TRYPAN
BLUE
SKRIPSI
Untuk Memenuhi Sebagian Syarat

Memperoleh Derajat Sarjana Kedokteran
Universitas Gadjah Mada
Disusun oleh :
WISNU ADHI SAPUTRO
09/282416/KU/13283
FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS GADJAH MADA
YOGYAKARTA
2013
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur penulis haturkan kepada Tuhan Yang Maha

Kasih, yang telah memberikan rahmat-Nya dalam proses
pengerjaan penelitian dan penulisan skripsi ini.
Penulis berharap hasil dari penelitian ini dapat
menambah data ilmiah mengenai efek kurkumin terhadap
uji viabilitas pada sel granulosa. Pada kesempatan ini,
penulis ingin menyampaikan ucapan terima kasih yang
tidak terhingga kepada berbagai pihak yang telah
membantu dalam penyelesaian penelitian ini, yaitu :
1. dr. Rul Afiyah Syarif, M.Kes. selaku dosen
pembimbing materi, penulis mengucapkan terima
kasih atas bimbingan, kesabaran, serta kemurahan
hati yang beliau berikan kepada penulis dalam
proses pengerjaan penelitian dan penulisan skripsi
ini.
2. Prof. dr. Sri Kadarsih Soejono, M.Sc. Ph.D selaku
dosen pembimbing metodologi, penulis mengucapkan
terima kasih atas waktu dan bimbingan yang beliau
sediakan kepada penulis.
3. Prof. Dr. Mae Sri Hartati Wahyuningsih, Apt.,
M.Si. selaku dosen penguji, penulis mengucapkan
terima kasih atas masukan-masukan yang sangat
berguna dalam penulisan skripsi ini.
4. Keluarga di Semarang yang tercinta, Ir. Valentinus
Wiyono dan Monica Sriwahyuni selaku orangtua yang
penulis hormati dan adik yang tercinta, Anastasia
Dewi Maharani, penulis mengucapkan terima kasih
banyak atas dukungan serta doanya yang membuat
penulis bersemangat dalam pengerjaan skripsi ini.
iv
5. Teman-teman penelitian dan penulisan skripsi
penulis, Alexey Fernanda Napitupulu, Ridwan Bayu
Sunaryo, dan Jonathan Hasian Haposan, penulis
mengucapkan banyak terima kasih atas dukungan
moral dan kerjasamanya dalam melakukan penelitian
dan penulisan skripsi ini.
6. Teman-teman Penulis, Keluarga Mahasiswa Katolik
Fakultas Kedokteran UGM angkatan 2009 dan teman-
teman Pendidikan Dokter Reguler Fakultas
Kedokteran UGM angkatan 2009 yang luar biasa atas
semangat dan segala bantuan yang diberikan kepada
penulis dalam menyelesaikan proses pengerjaan
skripsi ini.
7. Seluruh pengajar dan staf di Fakultas Kedokteran
Universitas Gadjah Mada atas segala ilmu yang
telah diberikan.
8. Dan kepada berbagai pihak yang tidak dapat penulis
sebut satu per satu, penulis mengucapkan terima
kasih sebanyak-banyaknya atas dorongan, bantuan,
serta doa yang diberikan sehingga penulis dapat
menyelesaikan skripsi ini.
Penulis menyadari masih banyak kekurangan dalam skripsi

ini, maka penulis sangat mengharapkan kritik dan saran
yang membangun agar skripsi ini bisa lebih berguna
bagi semua pihak.
Penulis
v
DAFTAR ISI
Halaman Judul ........................................ i
Halaman Pengesahan .................................. ii
Halaman Pernyataan ................................. iii
Prakata ............................................. iv
Daftar Isi .......................................... vi
Daftar Tabel ...................................... viii
Daftar Gambar ....................................... ix
Daftar Singkatan ..................................... x
Intisari ............................................ xi
Abstract ........................................... xii
Bab I: Pendahuluan ................................... 1
I.A. Latar Belakang Masalah ........................ 1
I.B. Rumusan Masalah ............................... 3
I.C. Tujuan Penelitian ............................. 3
I.D. Manfaat Penelitian ............................ 4
I.E. Keaslian Penelitian ........................... 4
Bab II: Tinjauan Pustaka ............................. 7
II.A. Telaah Pustaka ............................... 7
II.A.1. Kurkumin ................................ 7
II.A.2. Sel granulosa .......................... 12
II.A.3. Uji viabilitas dan pengecatan
dengan Trypan blue ..................... 18
II.B. Landasan Teori .............................. 21
II.C. Kerangka Penelitian ......................... 22
II.D. Hipotesis ................................... 22
Bab III: Metode Penelitian .......................... 23
III.A. Jenis Penelitian ........................... 23
III.B. Waktu dan Tempat Penelitian ................ 23
vi
III.C. Variabel Penelitian ........................ 23
III.D. Definisi Operasional Variabel
Penelitian ................................. 24
III.E. Subjek Penelitian ......................... 25
III.F. Alat dan Bahan ............................. 25
III.G. Jalannya Penelitian ....................... 26
III.G.1 Pembuatan larutan stok kurkumin ........ 26
III.G.2 Pengaturan volume kurkumin yang
diberikan .............................. 27
III.G.3 Isolasi sel granulosa babi ............. 31
III.G.4 Administrasi kurkumin pada sel
granulosa .............................. 32
III.H. Uji Viabilitas Sel Granulosa ............... 33
III.I. Analisis Hasil ............................ 35
Bab IV : Hasil Penelitian dan Pembahasan ............ 37
IV.A. Hasil Penelitian ............................ 37
IV.B. Pembahasan .................................. 43
Bab V : Kesimpulan dan Saran ........................ 46
V.A. Kesimpulan ................................... 47
V.B. Saran ....................................... 47
Daftar Pustaka ...................................... 48
Lampiran
vii
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Berbagai konsentrasi kurkumin yang
diberikan pada sel granulosa .............. 33
Tabel 2. Perbandingan persentase viabilitas
sel granulosa pada kelompok yang
menerima berbagai konsentrasi
kurkumin dengan kelompok kontrol
media pada masa inkubasi 24 jam dan
32 jam .................................... 38
Tabel 3. Nilai rerata persentase viabilitas
sel pada kelompok inkubasi 24 jam dan
32 jam .................................... 39
viii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Proses perkembangan folikel ovarium ...... 16
Gambar 2.2 Produksi estrogen oleh sel granulosa
yang terdapat di folikel ovarium ....... 17
Gambar 2.3 Kerangka Penelitian ...................... 22
Gambar 4.1 Diagram nilai rerata viabilitas sel
granulosa dari masing-masing
konsentrasi kurkumin pada inkubasi
selama 24 jam ........................... 40
Gambar 4.2 Diagram nilai rerata viabilitas sel
granulosa dari masing-masing
konsentrasi kurkumin pada inkubasi
selama 32 jam ........................... 41
ix
DAFTAR SINGKATAN
DMEM : Dulbeccos Modified Eagles Medium

DMSO : Dimetil sulfoksidase
FBS : Fetal Bovine Serum
PBS : Phosphate Buffered Saline
x
EFEK KURKUMIN TERHADAP VIABILITAS SEL GRANULOSA BABI
DENGAN METODE PENGECATAN TRYPAN BLUE
Wisnu Adhi Saputro1
INTISARI
Latar belakang : Kurkumin adalah senyawa hasil

isolasi dari Curcuma longa L. yang berpotensi sebagai
antifertilitas. Penelitian kurkumin secara in vitro
yang dilakukan pada sel granulosa babi didapatkan bahwa
kurkumin menghambat aktivitas steroidogenesis dan
proliferasi. Masih belum diketahui apakah penghambatan
aktivitas steroidogenesis yang dilakukan oleh kurkumin
ini disebabkan karena adanya penurunan jumlah sel
granulosa setelah diberi kurkumin atau tidak. Selain
itu, masih belum diketahui apakah perbedaan waktu
pajanan kurkumin terhadap sel granulosa akan
menyebabkan perubahan jumlah sel granulosa yang
tersedia. Masih diperlukan uji viabilitas sel granulosa
terhadap kurkumin.
Tujuan : mengkaji efek berbagai konsentrasi
kurkumin terhadap viabilitas sel granulosa dengan
metode Trypan blue dan mengkaji adanya perbedaan
viabilitas sel granulosa pada pemberian kurkumin selama
24 jam dengan 32 jam.
Metode : Penelitian ini merupakan penelitian post
test only with control unequivalent design dengan
metode in vitro. Penelitian ini dilakukan dengan
mengadministrasi berbagai konsentrasi kurkumin pada sel
granulosa, kemudian diinkubasi selama 24 jam dan 32
jam, kemudian jumlah sel yang hidup dihitung dengan
metode pengecatan Trypan blue.
Hasil : Pada kelompok sel yang menerima kurkumin
berbagai dosis pada masa inkubasi 24 jam didapatkan
bahwa kenaikan konsentrasi kurkumin tidak mempengaruhi
viabilitas sel. Pada kelompok sel yang menerima
kurkumin berbagai dosis pada masa inkubasi 32 jam
didapatkan bahwa kenaikan konsentrasi kurkumin
meningkatkan viabilitas sel. Terdapat penurunan
viabilitas pada konsentrasi 12,5 M, 25 M, dan 50 M
jika dilakukan perbandingan persentase viabilitas
antara waktu inkubasi 24 jam dan 32 jam.
Kesimpulan : Kenaikan kadar kurkumin tidak akan
menurunkan viabilitas sel granulosa ovarium babi. Makin
lama sel granulosa ovarium babi terpajan oleh kurkumin,
viabilitas sel akan menurun.
Kata kunci : kurkumin, viabilitas sel, sel

granulosa, Trypan blue
1
Mahasiswa S-1 Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran UGM
xi
EFFECT OF CURCUMIN ON CULTURED PORCINE (Sus domesticus)
GRANULOSA CELLS VIABILITY USING TRYPAN BLUE
Wisnu Adhi Saputro1
ABSTRACT
Background : Curcumin is a compound isolated from

Curcuma longa L. that has a potential antifertility effect.
An in vitro experiment has showed that curcumin inhibited
steroidogenesis and proliferation activity of porcine
granulosa cells. It is still unknown whether inhibition of
steroidogenesis activity by curcumin is caused by decreasing
of the granulosa cells numbers after being treated by
curcumin or not. Besides that, it is still unknown whether
different exposure time of curcumin to granulosa cells will
change their numbers. Therefore, viability assay of
granulosa cells to curcumin is needed.
Objective : To understand the effect of several

different concentrations of curcumin to viability of
granulosa cells using Trypan blue method and examine the
difference of granulosa cell viability treated by curcumin
in incubation time of 24 hours compared to 32 hours.
Methods : The type of this experiment was post test

only with control unequivalent design. This experiment was
done by administrating several different concentrations of
curcumin to granulosa cells, then incubating the cells for
24 and 32 hours, followed by calculating the numbers of
viable cells using Trypan blue method.
Results : Groups of curcumin-treated cells incubated

for 24 hours showed that increasing of curcumin
concentration didnt increase nor decrease the viability of
the cells. Groups of curcumin-treated cells incubated for 32
hours showed that the increasing of concentration of
curcumin caused increasing of cells viability. There was a
decreasing of cells viability on concentration 12,5 M, 25
M, and 50 M in the comparation of cell viability between
incubation time of 24 hours and 32 hours.
Conclusions : The increasing of curcumin

concentration wouldnt decrease the viability of porcine
granulosa cells. The longer of the exposure of porcine
granulosa cells to curcumin, the lower the cell viability.
Keywords : curcumin, cell viability, granulosa cells,

Trypan blue.
1
Undergraduate medical student of Faculty of Medicine of
UGM
xii
BAB I
PENDAHULUAN
I.A. Latar Belakang
Kurkumin adalah senyawa hasil isolasi dari
Curcuma longa L. yang berpotensi sebagai
antifertilitas. Sebagai kontrasepsi, serbuk C.
longa L. diminum pada 8 hari pertama masa
menstruasi (Bhate, 2003). Pada masa menstruasi,
terjadi penurunan kadar progesteron di dalam tubuh
yang menandakan berhentinya supresi folikulogenesis
(pemasakan folikel di dalam ovarium), sehingga
proses folikulogenesis dapat berlangsung kembali
dan peristiwa ovulasi dapat terjadi kembali.
Semakin matang folikel, semakin tinggi sekresi
estrogen yang dihasilkan. Kadar estrogen yang
semakin tinggi akan menghambat produksi FSH namun
akan memicu umpan balik positif terhadap sekresi LH
sehingga pada folikel matur akan terjadi
peningkatan yang dramatis (surge) estrogen, lalu
diikuti oleh surge LH dan sedikit surge FSH.
Meningkatnya kadar FSH meskipun sedikit akan memicu
penambahan jumlah reseptor LH (Nurcahyo, 2003).
1
2
Peningkatan kadar LH juga akan memicu dihasilkannya
prostaglandin lokal sehingga terjadilah proses
ovulasi (Duffy and Stouffer, 2001).
Penelitian kurkumin secara in vitro yang
dilakukan pada sel granulosa babi didapatkan bahwa
kurkumin menghambat aktivitas steroidogenesis dan
proliferasi (Nurcahyo and Soejono, 2006). Sel
granulosa adalah sel penghasil estrogen pada
folikel ovarium. Sebelumnya, telah diketahui peran
estrogen dalam proses ovulasi. Namun, masih belum
diketahui apakah penghambatan steroidogenesis yang
dilakukan oleh kurkumin ini disebabkan karena
adanya penurunan jumlah sel granulosa setelah
diberi kurkumin atau tidak. Selain itu, masih belum
diketahui apakah perbedaan waktu pajanan kurkumin
terhadap sel granulosa akan menyebabkan perubahan
jumlah sel granulosa yang tersedia sehingga akan
menyebabkan perubahan aktivitas steroidogenesis.
Masih diperlukan uji viabilitas sel granulosa
terhadap kurkumin sehingga ke depannya dapat
diketahui kadar kurkumin yang tepat untuk
menimbulkan efek yang diinginkan pada sel
granulosa.
3
I.B. Perumusan Masalah
Rumusan masalah dalam penelitian ini adalah :
1. Apakah kenaikan kadar kurkumin menurunkan
viabilitas sel granulosa?
2. Apakah lama pajanan kurkumin menurunkan
viabilitas sel granulosa ovarium?
I.C. Tujuan Penelitian
Tujuan penelitian memiliki tujuan umum dan tujuan
khusus, yaitu sebagai berikut :
1. Tujuan Umum
Untuk mengetahui kadar kurkumin dan waktu
inkubasi yang tidak menimbulkan efek berupa
penurunan viabilitas sel granulosa untuk
penelitian menggunakan sel granulosa babi
sebagai subjeknya
2. Tujuan Khusus
a. Mengkaji efek berbagai konsentrasi kurkumin
terhadap viabilitas sel granulosa dengan
metode Trypan blue

4
b. Mengkaji adanya perbedaan viabilitas sel
granulosa pada pemberian kurkumin selama 24
jam dengan 32 jam
I.D. Manfaat Penelitian
1. Bagi para akademisi
Dapat digunakan sebagai masukan informasi
mengenai viabilitas sel granulosa yang diberi
kurkumin yang menjadi dasar dalam penelitian
selanjutnya.
2. Bagi industri
Hasil penelitian ini diharapkan dapat digunakan
oleh industri obat sebagai acuan dalam
menentukan konsentrasi kurkumin yang aman dalam
terapi terhadap sel granulosa.
I.D. Keaslian Penelitian
Ada beberapa penelitian yang berhubungan dengan
penelitian ini, yaitu :
1. Penelitian yang dilakukan oleh Nurcahyo dan
Soejono (2006) dengan judul The Effects of

5
Curcumin and Pentagamavunon-0 (PGV-0) on the
Steroidogenesis, Proliferative Activity, and
Apoptosis in Cultured Porcine Granulosa Cells
at Varying Stages of Follicular Growth . Hasil
dari penelitian ini :
a. Terjadi penghambatan sintesis progesteron dan
estrogen serta adanya penghambatan
proliferasi pada sel granulosa yang dikultur
pada folikel matur
b. Terjadi stimulasi apoptosis sel granulosa
pada tiap tingkatan maturasi folikel
c. Tidak terjadi efek yang signifikan pada
proses steroidogenesis, proliferasi, maupun
apoptosis sel granulosa pada tiap tingkatan
folikel dengan penambahan PGV-0
2. Penelitian yang dilakukan oleh Hadi dan Soejono
(2010) dengan judul Curcumin Analogue
(Pentagamavunone-0) Induces Luteal Cell
Apoptosis by Increased Bax/Bcl-2 Protein
Ratio. Hasil dari penelitian ini adalah PGV-0
mengurangi ekspresi protein Bcl-2, meningkatkan
ekspresi protein Bax, meningkatkan rasio
protein Bax/Bxl-2 sehingga memicu apoptosis sel
luteal.
6
Penelitian yang penulis lakukan adalah uji
viabilitas sel granulosa babi pada pemberian
kurkumin untuk mendeteksi apakah terjadi
penurunan, kenaikan, atau tidak terjadi perubahan
apa pun pada jumlah sel granulosa.

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
II.A. Telaah Pustaka
II.A.1 Kurkumin
Menurut Chattopadhyay dkk. (2004), kurkumin
(disebut juga diferuloymethane) adalah senyawa
bioaktif berwarna kuning dari tanaman kunyit
(Curcuma longa L.). Ada 3 jenis kurkuminoid yang
terkandung pada ekstrak C. longa murni, yaitu
kurkumin I (94%), kurkumin II (6%), dan kurkumin
III (0,3%). Kurkumin pertama kali diisolasi pada
tahun 1815 dan struktur kimianya ditemukan oleh
Roughley dan Whiting pada tahun 1973. Kurkumin
memiliki gugus fungsional yang bertanggung jawab
atas aktivitas biologisnya, yaitu : 1) gugus -
diketon yang terletak di tengah, 2)ikatan ganda
pada rantai alifatik, 3)gugus hidroksil / fenol,
4) gugus metoksi pada cincin terminal aromatis.
Titik leburnya pada 176-1770C. Kurkumin membentuk
garam coklat kemerahan dengan alkali dan larut
dalam etanol, alkali, keton, asam asetat, dan
kloroform.
7
8
Berikut adalah aksi farmakologis kurkumin :
1. Efek pada sistem gastrointestinal
a. Lambung
Percobaan dengan marmut, diketahui kurkumin
dapat melindungi lambung dari efek
ulcerogenik phenylbutazone dengan konsentrasi
50 mg/kg (Dasgupta dkk., 1969 cit
Chattopadhyay dkk., 2004) . Kurkumin juga
melindungi lambung dari ulcerasi yang
diinduksi 5-hydroxytryptamine (Sinha dkk.,
1974). Efek antiulkus dari kurkumin dimediasi
dengan scavenging radikal bebas, terutama ROS
(reactive oxygen species) (Venkatesan & Rao,
2000).
b. Usus
Pengujian kurkumin dengan uji in vitro dan in
vivo pada tikus, diketahui terdapat aktivitas
antiflatulensi (antikentut) (Bhavani Shankar
and Sreenivasa Murthy, 1979 cit Chattopadhyay
dkk., 2004). Kurkumin juga merangsang
aktivitas lipase, sukrase, dan maltase usus
(Platel and Srinivasan, 1996).

9
c. Hepar
Kurkumin dan analognya melindungi hepatosit
tikus yang dikultur dari karbon tetraklorida,
D-galactosamine, peroksida, dan toksisitas
yang diinduksi oleh ionophore(Hikino, 1965).
Studi pada anjing menunjukkan adanya
peningkatan produksi getah empedu dengan
pemberian kurkumin dan minyak esensial
Curcuma longa L. (Jentzch dkk., 1959 cit
Chattopadhyay dkk., 2004)
2. Efek pada sistem kardiovaskuler
Studi pada tikus menunjukkan bahwa kurkumin
mengurangi keparahan dari perubahan patologis
dan terdapat efek protektif dari kerusakan dari
infark miokardium (Nirmala and Puvanakrishnan,
1996). Kurkumin meningkatkan transpor Ca+ dan
kelicinannya dari retikulum sarkoplasma sel
otot jantung (Sumbilla dkk. , 2002 cit
Chattopadhyay dkk., 2004).
3. Efek pada sistem saraf
Kurkumin dan kompleks mangan dari kurkumin
menunjukkan adanya aksi protektif melawan
demensia vaskuler dengan melakukan aktivitas
antioksidan (Thiyagarajan and Sharma, 2004).

10
4. Efek pada metabolisme lipid
Studi pada tikus menunjukkan bahwa kurkumin
mengurangi kadar LDL (low density lipoprotein)
dan VLDL (very low density lipoprotein) secara
signifikan pada plasma dan kadar total
kolesterol pada hepar bersamaan dengan
meningkatkan kadar -tokoferol (Kamal-Eldin
dkk., 2000 cit Chattopadhyay dkk., 2004).
Kurkumin berikatan dengan phosphatidylcholine
dari telur dan kedelai, yang akan berikatan
dengan ion logam divalen yang merupakan
aktivitas antioksidan (Began dkk., 1999).
5. Aktivitas anti-inflamasi
Studi pada tikus putih, diketahui bahwa
kurkumin efektif melawan edema yang diinduksi
oleh carrageenan (ekstrak koloidal yang berasal
dari alga merah tertentu, terdiri atas campuran
natrium, kalium, kalsium, dan magnesium dari
asam sulfat polisakarida yang mengandung
galaktosa. Terutama digunakan sebagai suatu
agen suspensi dalam makanan, farmasi, dan
kosmetik)(Ghatak and Basu, 1972 cit
Chattopadhyay dkk., 2004). Kurkumin juga memicu
penyembuhan luka pada kerusakan yang dipicu

11
hidrogen peroksida pada keratinosit dan
fibroblas manusia (Phan dkk., 2001 cit
Chattopadhyay dkk., 2004).
6. Efek antioksidan
Telah dijelaskan sebelumnya bahwa efek
antioksidan kurkumin berasal dari kemampuan
untuk scavanging radikal bebas. Pada percobaan
dengan tikus putih, kurkumin diketahui
mengurangi jumlah protein teroksidasi pada
proses patologi amiloid pada penyakit Alzheimer
(Lim dkk., 2001).
7. Efek antikarsinogenik
Efek antikarsinogenesis dari kurkumin dicapai
dengan menginduksi apoptosis pada sel kanker
dengan cara inhibisi protein tirosin kinase,
protein kinase C, ekspresi c-myc mRNA dan Bcl-
2. Selain itu, efek antikarsinogenesis kurkumin
juga dicapai dengan aksi antiproliferatif
dengan cara inhibisi protein tirosin kinase dan
ekspresi c-myc mRNA (Chen and Huang, 1996 cit
Nurcahyo and Soejono, 2006).

12
8. Aktivitas antifertilitas
Percobaan dengan tikus, administrasi kurkumin
secara oral mempunyai efek antifertilitas
(Garg, 1974).
9. Efek antidiabetik
Percobaan dengan tikus, kurkumin mengurangi
kadar gula darah pada tikus diabetes yang
diinduksi oleh alloxan (Arun and Nalini, 2002),
dan mengurangi efek komplikasi diabetes yaitu
advanced glycation end products (Sajithlal
dkk., 1996)
10. Efek antifibrosis
Percobaan dengan tikus, curcumin mensupresi
proses fibrosis pulmo yang diinduksi oleh
bleomycin (Punithavathi dkk., 2000).
II.A.2 Sel granulosa
Menurut Junqueira dan Carneiro (2003), sistem
reproduksi wanita terdiri atas 2 ovarium (indung
telur), 2 saluran Tuba Fallopi, uterus (rahim),
vagina, dan genitalia eksterna. Fungsinya adalah
menghasilkan gamet wanita (oosit) dan
mempertahankan oosit yang telah dibuahi oleh

13
sperma selama perkembangan lengkapnya melalui
tahap embrional dan fetal sampai lahir. Sistem
ini juga menghasilkan hormon seksual yang
mengendalikan organ-organ sistem reproduksi dan
mempengaruhi organ lain di tubuh.
Menurut Junqueira dan Carneiro (2003),
ovarium merupakan struktur berbentuk buah kenari
dengan panjang sekitar 3 cm, lebar 1,5 cm, dan
tebal 1 cm. Permukaannya dilapisi epitel gepeng
selapis atau kuboid selapis, yaitu epitelium
germinativum. Di bawah epitelium germinativum
terdapat selapis jaringan ikat padat, yakni
tunika albuginea, yang menyebabkan warna ovarium
menjadi keputihan. Di bawah tunika albuginea
terdapat daerah korteks, yang terutama ditempati
oleh folikel ovarium beserta oositnya. Folikel
ovarium ini terbenam dalam jaringan ikat
(stroma) di daerah korteks. Bagian terdalam
ovarium adalah daerah medulla, dengan anyaman
pembuluh darah luas di dalam jaringan ikat
longgar.
Menurut Junqueira dan Carneiro (2003),
sekitar bulan pertama kehidupan embrio, sejumlah
kecil populasi sel benih primordial bermigrasi

14
dari kantong yolk sac ke primordia gonad, yang
lalu bertransformasi menjadi oogonia. Pada bulan
ketiga kehamilan, oogonia memasuki profase dari
pembelahan meiosis pertama tetapi terhenti pada
tahap diploten dan tidak berlanjut pada tahapan
meiosis berikutnya. Sel-sel ini adalah oosit
primer. Oosit primer ini dikelilingi oleh sel-
sel gepeng yang bernama sel-sel folikel.
Menjelang bulan ketujuh kehamilan, kebanyakan
oogonia telah berubah menjadi oosit primer.
Namun, banyak oosit primer akan lenyap melalui
proses degeneratif yang disebut atresia. Atresia
ini terus berlanjut hingga saat sang wanita
berumur 40-45 tahun, hanya tersisa sekitar 8.000
oosit. Karena pada umumnya hanya 1 oosit yang
dilepaskan oleh ovarium di setiap siklus
menstruasi dan lama masa reproduksi seorang
wanita lebih kurang 30-40 tahun, hanya sekitar
450 oosit yang dibebaskan. Oosit lainnya akan
mengalami atresia.
Menurut Junqueira dan Carneiro (2003), saat
masih di dalam kandungan, sel folikel yang
melapisi oosit primer disebut sel folikel
primordial. Sejak masa pubertas, sekelompok

15
kecil folikel primordial memulai proses
pertumbuhan folikel yang diatur oleh FSH
(Follicle Stimulating Hormone). Pada fase
pertumbuhan folikel, sel-sel folikel pada
folikel primordial terus-menerus melakukan
proliferasi hingga membentuk folikel unilaminer
( 1 lapis) yang berbentuk kuboid. Sel-sel
folikel ini terus melakukan pembelahan membentuk
epitel folikel berlapis yang dinamakan lapisan
sel granulosa. Komunikasi antarsel granulosa
berupa taut rekah. Pada masa ini, folikel
disebut folikel multilaminer / preantrum. Sel-
sel granulosa ini ikut tumbuh seiring
pertumbuhan folikel hingga menjadi folikel
sekunder sampai folikel matang/matur (Graaf).
Pada folikel matang dapat dilihat sel granulosa
menyelubungi oosit membentuk kumulus ooforus dan
korona radiata. Di bagian luar sel granulosa,
fibroblas stroma di sekeliling folikel
berdiferensiasi menjadi teka folikuli. Teka
folikuli kemudian berdiferensiasi menjadi
lapisan teka interna dan teka eksterna.

16
Gambar 2.1 : Proses perkembangan folikel ovarium

(Junqueira and Carneiro, 2003 )
Sel granulosa menunjukkan adanya suatu
antigen yang dinamakan proliferating cells
nuclear antigen (PCNA), yang merupakan sebuah
kofaktor DNA polimerase sebagai penanda
sensitif adanya proliferasi sel granulosa
(Robker and Richards, 1996 cit Nurcahyo and
Soejono, 2006).
Sel granulosa memiliki kepentingan untuk
mensekresikan hormon estrogen. Berikut bagannya :

17
Gambar 2.2 : Produksi estrogen oleh sel granulosa yang

terdapat di folikel ovarium
(+) : menstimulasi
Keterangan :
1. LH (Luteinizing Hormone) menstimulasi sel teka di
folikel ovarium untuk mengubah kolesterol menjadi
androstenedion.
2. Androstenedion kemudian berdifusi dari sel teka ke
sel granulosa.
3. Di bawah pengaruh FSH, sel granulosa mengubah
androstenedion menjadi estrogen.
4. Estrogen yang dihasilkan disekresikan ke dalam darah
dan berdifusi ke seluruh tubuh, namun ada pula yang
tetap di folikel untuk memicu pembentukan antrum
serta bersama dengan FSH, menstimulasi proliferasi
sel granulosa.
Selanjutnya, kadar estrogen yang dihasilkan
akan semakin tinggi yang menyebabkan terjadinya
peningkatan selektif pada sekresi LH sehingga
pada folikel matur akan terjadi peningkatan yang
dramatis (surge) estrogen, lalu diikuti oleh
surge LH dan sedikit surge FSH. Meningkatnya
kadar FSH meskipun sedikit akan memicu
penambahan jumlah reseptor LH. Peningkatan kadar

18
LH juga akan memicu dihasilkannya prostaglandin
lokal sehingga terjadilah proses ovulasi
(pelepasan folikel matur beserta oositnya untuk
segera dibuahi oleh sperma) (Sherwood, 2010).
II.A.3 Uji viabilitas dan pengecatan dengan Trypan
blue
Menurut Crutchfield dkk. (1999), uji
viabilitas adalah pengujian untuk menentukan
apakah sel atau jaringan masih dapat
mempertahankan viabilitasnya. Penghitungan
kualitatif dari fungsi fisiologis tidak
mengindikasikan apakah sel atau jaringan yang
diuji viabilitasnya masih viabel atau tidak. Uji
viabilitas digunakan untuk menilai kesuksesan
teknik cryopreservation, toksisitas dari suatu
substansi, atau efektifitas dari suatu substansi
dalam menangani efek toksisitas suatu substansi
lainnya.
Adapun pembagian/klasifikasi uji viabilitas,
yaitu s.b.b. :
1. Pengukuran kebocoran membran atau sitolisis.
Kategori ini mengikutsertakan penghitungan

19
enzim laktat dehidrogenase, suatu enzim stabil
yang umum pada seluruh sel di mana enzim
tersebut dapat dideteksi saat membran sel tak
lagi intak. Contohnya adalah dengan pewarnaan
Propidium iodida, Trypan blue, dan 7-
Aminoactinomycin.
2. Pengukuran aktivitas mitokondria atau
pengukuran caspase. Resazurin dan Formazan
dapat menilai berbagai tingkatan proses
apoptosis yang menandakan kematian sel.
3. Pengukuran fungsional. Pengukuran ini menilai
fungsi sel yang spesifik, contohnya, uji
motilitas digunakan untuk menilai motilitas
sperma, uji fertilitas menilai keberhasilan
gamet untuk bertahan hidup, dan uji
deformabilitas, fragilitas osmotik, dan
hemolisis untuk menguji keadaan eritrosit.
4. Pengukuran genomik dan protoemik. Pengukuran
ini menilai aktivasi dari jalur stress suatu
sel menggunakan DNA microarray dan chip
protein.
Uji viabilitas yang akan dilakukan kali ini
menggunaan pewarnaan vital (vital stain), yaitu

20
suatu pewarnaan pada sel tanpa menyebabkan
kematian sel. Menurut Rodrigues dkk. (2009),
pewarnaan vital ini berguna untuk teknik
diagnosis dan pembedahan pada berbagai macam
spesialisasi bidang medis. Pewarnaan Propidium
iodida, Trypan blue, dan 7-Aminoactinomycin
termasuk di dalam pewarnaan ini. Sel atau
jaringan yang menerima pewarnaan ini akan
mengalami 2 kondisi, yakni tidak terwarnai pada
sel yang masih viabel, dan terwarnai pada sel
yang sudah mati.
Menurut Shapiro (1996), metode Trypan blue
merupakan cara menguji viabilitas sel dengan
cara pengecatan. Pada sel yang masih hidup,
terdapat membran yang masih intak, maka, zat-zat
pewarna seperti trypan blue, eosin, dan
propidium tidak akan memasuki dan mewarnai sel,
sehingga, sitoplasma sel yang masih hidup akan
berwarna bening. Pada sel mati, membrannya sudah
tidak intak lagi sehingga zat-zat pewarna akan
dengan mudah memasuki dan mewarnai sel, maka
sitoplasma sel yang mati pada pengecatan dengan
metode trypan blue ini akan berwarna biru.

21
II.B. Landasan Teori
Kurkumin memiliki efek berupa apoptosis sel
granulosa, penghambatan proliferasi dan
steroidogenesis. Namun, masih belum diketahui
apakah penyebab penurunan proliferasi dan
steroidogenesis ini adalah sebagai akibat dari
penurunan jumlah atau fungsi dari sel granulosa.
Untuk itu, dilakukan uji viabilitas sel, di mana
sel granulosa akan diuji viabilitasnya dengan
pemberian kurkumin, dan dinilai viabilitasnya
dengan metode pengecatan Trypan blue, di mana
metode pengecatan Trypan blue ini merupakan
pengecatan vital, yakni hanya mewarnai sel yang
sudah mati, sedangkan sel yang masih hidup tidak
akan terwarnai.
22
II.C. Kerangka Penelitian
Gambar 2.3 : Kerangka penelitian
II.D. Hipotesis
1. Kenaikan kadar kurkumin menurunkan viabilitas sel
granulosa ovarium babi
2. Makin lama sel granulosa ovarium babi terpajan
oleh kurkumin, viabilitas selnya akan menurun

BAB III
METODE PENELITIAN
III.A. Jenis Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian post test only
with control unequivalent design dengan metode in
vitro.
III.B. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Faal
bagian kultur Fakultas Kedokteran UGM dalam jangka
waktu 4 bulan.
III.C. Variabel Penelitian
Variabel yang akan diteliti meliputi :
1. Variabel bebas yaitu variabel yang akan diteliti
pengaruhnya terhadap variabel terikat. Variabel
bebas dalam penelitian ini adalah konsentrasi
kurkumin dan lama waktu pemberian kurkumin.
2. Variabel terikat adalah variabel yang akan
dipengaruhi oleh variabel bebas. Variabel terikat
dalam penelitian ini adalah viabilitas sel
granulosa babi
23
24
III.D. Definisi Operasional Variabel Penelitian
1. Kurkumin yang dipakai di dalam penelitian ini
adalah kurkumin sintetis.
2. Viabilitas sel adalah presentase sel hidup
setelah diberikan senyawa kurkumin. Sel yang
hidup adalah sel yang sitoplasmanya terlihat
bening saat diwarnai dengan Trypan blue. Sel yang
mati adalah sel yang sitoplasmanya terwarnai biru
saat diwarnai dengan Trypan blue. Viabilitas sel
diperoleh dengan cara pengamatan dengan mikroskop
untuk menghitung jumlah sel yang hidup
dibandingkan kontrol media (tanpa pemberian
senyawa kurkumin).
3. Konsentrasi kurkumin yang akan diberikan adalah
berbagai konsentrasi kurkumin yang diberikan
kepada sel granulosa babi yang hendak diuji
viabilitasnya.
4. Lama waktu pemberian kurkumin adalah jangka waktu
yang dimulai dari pemberian kurkumin pada sel
granulosa sampai waktu di mana sel granulosa
dikeluarkan dari inkubator untuk dihitung
viabilitas selnya. Lama waktu pemberian kurkumin
pada percobaan ini adalah 24 jam dan 32 jam.

25
III.E. Subjek Penelitian
Subjek yang digunakan dalam penelitian ini
adalah sel granulosa babi, diisolasi dari folikel
ovarium babi berukuran besar (> 5mm) yang peroleh
dari pejagal hewan Yogyakarta. Ovarium dikumpulkan
dalam waktu 15 menit setelah babi dipotong.
III.F. Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian meliputi :
1. Kultur sel : laminary air flow cabinet, botol,
termos es, disposable spuit 3 cc, conical tube
15 mL, sentrifugasi, hemositometer (Neubauer),
cover slip, plate 96 sumuran, pipet Pasteur,
micropippete 20-200 L, vortex, cawan petri,
bekerglas, mikroskop inversi, tabung gelas,
inkubator CO2 5%, blue tip, yellow tip, cell
counter
2. Uji viabilitas : laminary air flow cabinet,
sentrifus, plate 96 sumuran, conical tube 15
mL, tabung gelas, inkubator CO2 5%,
micropippete 10 L, mikroskop inversi,
hemositometer (Neubauer), cover slip, Eppendorf

26
tube, vortex, blue tip, yellow tip, cell
counter
Bahan yang digunakan dalam penelitian adalah :
1. Kultur sel : ovarium babi, aquadest, Phospate
buffered saline (PBS) plus Penicillin 1 x 105
U/L & Streptomisin 100mg/L, Dulbeccos Modified
Eagless Medium (DMEM), Fetal bovine serum
(FBS) 5%, media komplit penumbuh (DMEM, FBS
10%, Penstrep 5%, dan Fungizone 1%), Trypan
blue 0,4%
2. Uji viabilitas : senyawa kurkumin, trypan blue
0,4%, tripsin 0,25 %, PBS, aquadest
3. Senyawa kurkumin diperoleh dari Tim Molnas,
Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada,
Yogyakarta
III.G. Jalannya Penelitian
III.G.1. Pembuatan larutan stok kurkumin
Dibuat larutan stok kurkumin dengan
konsentrasi 100 mM (0,1 M). Kurkumin memiliki
berat molekul 368,38. Volume stok yang dibuat
adalah 100 L (0,0001 Liter), maka berat

27
kurkumin yang dibutuhkan untuk membuat larutan
stok adalah :
x M = x g / berat molekul / L
0,1 M = x g / 368,38 / 0,0001 L
0,1 x 368,38 = x g / 0,0001 L
36,838 = x g / 0,0001 L
36,838 x 0,0001 = x
x = 36,838 x 10-4 g
x = 3,838 x 10-3 g
x = 3,838 mg
Karena kadar kurkumin 86,607 %, maka
kurkumin yang ditimbang :
100
X 3,6838 = 4,25347 mg
86,607
Kurkumin seberat 4,25347 mg inilah yang akan
ditambahkan dengan pelarut (DMSO) sebanyak 100
L sehingga didapatkanlah larutan stok dengan
konsentrasi 100 mM.
III.G.2. Pengaturan volume kurkumin yang diberikan
Konsentrasi kurkumin yang terkandung di dalam
well : 12,5 ; 25 ; 50 ; 75 ; 100 M. Pengaturan
volume kurkumin ini adalah dengan cara dosis
serial, di mana untuk mendapatkan larutan dengan

28
konsentrasi lebih kecil digunakan larutan yang
telah didapat sebelumnya kemudian dilakukan
pengenceran.
Langkah-langkah pengaturan volume dan
konsentrasi kurkumin yang akan diberikan :
a. Membuat larutan kurkumin (larutan 1)
dengan konsentrasi 200 M sebanyak 10 mL
dari larutan stok 100 mM (100.000 M).
Maka, volume yang harus diambil dari
larutan stok adalah :
V1 x N1 = V2 x N2
10 mL x 200 M = V2 x 100.000 M
V2 = 20 L
Setelah diambil sebanyak 20 L dari
larutan stok, untuk mendapatkan volume
sebanyak 10 mL maka ditambahkan media DMEM
sebanyak : 10 mL 20 L = 10.000 L 20
L = 9.980 L
b. Membuat larutan kurkumin dengan
konsentrasi 150 M (larutan 2) sebanyak
7,5 mL, maka volume yang diambil dari
larutan kurkumin dengan konsentrasi 200 M
adalah :
V1 x N1 = V2 x N2
29
7,5 mL x 150 M = V2 x 200 M
V2 = 5,625 mL
Setelah diambil sebanyak 5,625 mL dari
larutan 1, untuk mendapatkan volume
sebanyak 7,5 mL maka ditambahkan media
DMEM sebanyak :
7,5 mL 5,625 mL = 1,375 mL
c. Membuat larutan kurkumin dengan
konsentrasi 100 M (larutan 3) sebanyak
7,5 mL, maka volume yang diambil dari
larutan kurkumin dengan konsentrasi 150 M
adalah :
V1 x N1 = V2 x N2
7,5 mL x 100 M = V2 x 150 M
V2 = 5 mL
Setelah diambil sebanyak 5 mL dari larutan
2, untuk mendapatkan volume sebanyak 7,5
mL maka ditambahkan media DMEM sebanyak :
7,5 mL 5 mL = 2,5 mL
d. Membuat larutan kurkumin dengan
konsentrasi 50 M (larutan 4) sebanyak 7,5
mL, maka volume yang diambil dari larutan
kurkumin dengan konsentrasi 100 M
adalah :
30
V1 x N1 = V2 x N2
7,5 mL x 50 M = V2 x 100 M
V2 = 3,75 mL
DMEM sebanyak :
7,5 mL 3,75 mL = 3,75 mL
e. Membuat larutan kurkumin dengan
konsentrasi 25 M (larutan 5) sebanyak 7,5
mL, maka volume yang diambil dari larutan
kurkumin dengan konsentrasi 50 M adalah :
V1 x N1 = V2 x N2
7,5 mL x 25 M = V2 x 50 M
V2 = 3,75 mL
DMEM sebanyak :
7,5 mL 3,75 mL = 3,75 mL
Saat dilakukan pengenceran dalam pembuatan
dosis serial, tidak hanya konsentrasi kurkumin
yang mengalami penurunan, konsentrasi
pelarutnya, yakni dimetil sulfoksidase (DMSO),

31
juga mengalami penurunan. Konsentrasi DMSO pada
dosis 200 M adalah :
20 L
x 100 % = 0,2 %
10.000 L
Konsentrasi DMSO pada konsentrasi yang lebih
rendah juga ikut menurun seiring dengan proses
pengenceran larutan dalam pembuatan dosis
serial.
III.G.3. Isolasi sel granulosa babi
Ovarium babi dalam penelitian ini diperoleh
dari pejagal hewan di Yogyakarta. Lima belas
menit setelah babi dipotong, ovarium dimasukkan
ke dalam botol yang berisi PBS yang mengandung 1
x 105 U/L Peniciline dan 100 mg/L Streptomycine
dalam termos es, kemudian dibawa ke laboratorium
dalam waktu 2 jam untuk dibersihkan.
Sel granulosa kemudian diambil dengan cara
aspirasi folikel ovarium yang berukuran besar
(>5 mm) (Nurcahyo, 2003) menggunakan spuit 1 mL
dan jarum berukuran 26 G. Pengambilan sel
granulosa ini dilakukan dengan menempatkan
ovarium dalam cawan petri dengan diameter 10 cm
yang diisi dengan PBS.

32
Setelah dilakukan aspirasi sel granulosa dari
folikel, sel granulosa kemudian dimasukkan ke
dalam conical tube berukuran 15 mL. Sel granulosa
disentrifugasi selama 5 menit dengan kecepatan
500g dan suhu 40C. Setelah selesai
disentrifugasi, supernatan dibuang, pelet dicuci
dengan PBS 2-3 kali. Lalu pelet diresuspensi
dengan DMEM dan dihitung jumlah selnya dengan
haemocytometer setelah diberi Trypan blue 0,4%.
Sel granulosa 1-2 x 104 per well dikultur dalam
plate 96-well. Langkah selanjutnya adalah
penginkubasian kultur sel dalam inkubator CO2 5%
dengan suhu 370C. Setelah dilakukan inkubasi
selama 48-72 jam atau sel konfluen, larutan DMEM
sebagai media penumbuh sel dibuang dan kultur sel
diberi perlakuan dengan senyawa uji, yakni
kurkumin.
III.G.4. Administrasi kurkumin pada sel granulosa
Kurkumin berbagai konsentrasi dimasukan dalam
96-well microplate yang berisi sel granulosa
1-2 x 104/well dalam media bebas serum dan
diinkubasi selama 24 dan 32 jam. Pada uji
viabilitas ini juga disertakan 2 macam kontrol,

33
yaitu kontrol media yang berisi sel dan media
saja dan kontrol pelarut berisi sel, media, dan
DMSO 1 % yang digunakan untuk melihat apakah
DMSO yang digunakan bersifat toksik atau tidak.
Begitu senyawa kurkumin dimasukkan ke dalam
sumuran, konsentrasinya akan menjadi setengah
dari konsentrasi semula.
Tabel 1. Berbagai konsentrasi kurkumin yang diberikan

pada sel granulosa
1 2 3 4 1 2 3 4
A 12,5 M 12,5 M 12,5 M 12,5 M 12,5 M 12,5 M 12,5 M 12,5 M
B 25 M 25 M 25 M 25 M 25 M 25 M 25 M 25 M
C 50 M 50 M 50 M 50 M 50 M 50 M 50 M 50 M
D 75 M 75 M 75 M 75 M 75 M 75 M 75 M 75 M
E 100 M 100 M 100 M 100 M 100 M 100 M 100 M 100 M
F Kontrol Kontrol Kontrol Kontrol Kontrol Kontrol Kontrol Kontrol
media media media media media media media media
G Kontrol Kontrol Kontrol Kontrol Kontrol Kontrol Kontrol Kontrol
pelarut pelarut pelarut pelarut pelarut pelarut pelarut pelarut
Inkubasi 24 jam Inkubasi 32 jam
Kadar pelarut di konsentrasi terbesar
kurkumin (100 M) adalah sebesar 0,1 %. Karena
pembuatan larutan kurkumin dilakukan dengan cara
dosis serial yaitu melalui pengenceran, hal ini
menyebabkan konsentrasi pelarut akan semakin
rendah.
34
III.H. Uji Viabilitas Sel Granulosa
Uji viabilitas sel granulosa pada penelitian
kali ini adalah dengan pengecatan Trypan blue.
Pertama, buang media komplet yang berada di
dalam sumuran, kemudian sel dilepas menggunakan
tripsin 0,25%, setelah sel lepas, ditambahkan
media komplet dan masukkan sel dan media komplet
ke dalam Eppendorf tube, lalu disentifuse selama
5 menit pada 100x g dan buang supernatan.
Kemudian, larutkan kembali pelet sel pada 1 mL
PBS. Lalu, campur 1 bagian 0,4 % Trypan blue dan
1 bagian suspensi sel kemudian diinkubasi pada
suhu ruangan selama 3 menit. Teteskan 1 tetes
(10 L) Trypan blue pada hemositometer lalu
tempatkan pada mikroskop binokuler untuk
menghitung sel. Hitung jumlah sel hidup pada
kelompok yang diberi kurkumin dan pada kontrol
media. Lalu, hitung presentase sel hidup dengan
rumus berikut :
Jumlah sel hidup pada kelompok

yang diberi kurkumin
Viabilitas(%)= x 100%
Jumlah sel hidup pada kontrol
media
35
Keterangan : Nilai viabilitas pada kontrol media
dianggap 100%.
III.I. Analisis Hasil
Untuk mengkaji apakah DMSO yang digunakan sebagai
pelarut mempengaruhi viabilitas sel granulosa maka
dilakukan uji t sampel tidak berpasangan. Uji t
sampel tidak berpasangan ini membandingkan nilai
rerata viabilitas masing-masing konsentrasi dengan
nilai rerata viabilitas kelompok pelarut.
Hubungan asosiasi antara besar konsentrasi
kurkumin dengan viabilitas sel granulosa babi akan
diuji menggunakan uji korelasi Pearson. Perbedaan
nilai rerata viabilitas sel antara satu konsentrasi
dengan konsentrasi lain dianalisis dengan
menggunakan uji ANAVA (Analisis Varians) untuk
melihat apakah perbedaannya signifikan secara
statistik. Uji ANAVA dipilih karena ada lebih dari 2
nilai rerata nilai viabilitas yang dianalisis. Bila
hasil uji ANAVA signifikan, dilakukan uji post hoc
untuk mengetahui perbedaan antara 2 kelompok
perlakuan dengan tingkat signifikansi p kurang dari
0,05.
36
Untuk mengkaji nilai viabilitas pada kelompok
dengan inkubasi 24 jam dibandingkan dengan inkubasi
32 jam digunakan uji korelasi Pearson.
Berbagai metode analisis hasil dilakukan dengan
menggunakan program SPSS Statistic version 20.

BAB IV
HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
IV.A. Hasil Penelitian
Data hasil penghitungan jumlah sel hidup pada
kelompok yang diberi berbagai konsentrasi kurkumin,
kelompok kontrol pelarut, dan kelompok kontrol media
dapat dilihat pada Lampiran 1.
Setelah diketahui jumlah sel hidup pada kelompok
yang diberi kurkumin dan pada kedua kelompok
kontrol, selanjutnya jumlah sel hidup pada kelompok
yang menerima berbagai konsentrasi kurkumin dan
kelompok kontrol pelarut akan dibandingkan dengan
jumlah sel hidup kelompok kontrol media yang
dianggap bernilai 100%, sehingga akan didapatkan
hasil nilai perbandingan sebagai berikut :
37
38
Tabel 2. Persentase viabilitas sel granulosa pada

kelompok yang menerima berbagai konsentrasi
kurkumin dengan kelompok kontrol media pada
masa inkubasi 24 jam dan 32 jam
Persentase viabilitas sel granulosa

Konsentrasi
Inkubasi 24 Inkubasi
kurkumin (M) Plikat
jam 32 jam
1 78,2 17,5
2 118,1 23,3
12,5
3 380,8 57,5
4 321,8 78,7
1 91,5 40,0
2 84,1 32,0
25
3 231,7 38,5
4 188,9 40,7
1 69,4 27,5
2 73,8 30,5
50
3 175,6 54,5
4 190,4 97,5
1 62,0 54,5
2 39,9 56,0
75
3 165,3 104,0
4 310,0 141,8
1 33,9 81,5
2 28,0 63,3
100
3 75,3 68,4
4 66,4 77,1
1 239,1 160,7
Kontrol 2 96,9 38,5
Pelarut 3 53,1 106,2
4 60,5 242,2
1 100 100
2 100 100
Kontrol Media
3 100 100
4 100 100
Selanjutnya, setelah diketahui nilai-nilai
perbandingan jumlah sel hidup pada kelompok yang
diberi kurkumin dan kelompok kontrol pelarut dengan

39
kelompok kontrol media seperti yang tercantum pada
tabel di atas, baru dilakukan analisis data.
Hasil tes t sampel tidak berpasangan yang
digunakan untuk mengetahui apakah pelarut yang
berada di dalam sumuran mempengaruhi viabilitas sel
menunjukkan bahwa tidak ada perbedaan yang
signifikan (p > 0,05) pada nilai viabilitas sumuran
yang diberi pelarut DMSO 1% dengan nilai viabilitas
sumuran lainnya. Berarti dapat disimpulkan bahwa
pelarut tidak mempengaruhi viabilitas sel granulosa
di dalam sumuran.
Berikut adalah nilai rerata persentase viabilitas
sel pada kelompok inkubasi 24 jam dan 32 jam :
Tabel 3. Nilai rerata persentase viabilitas sel pada

kelompok inkubasi 24 jam dan 32 jam
Konsentrasi Rerata persentase viabilitas

kurkumin (M) Inkubasi 24 jam Inkubasi 32 jam
Kontrol media 100 0,000 100 0,000
12,5 224,725 149,0206 44,025 28,6090
25 240,428 68,4240 37,800 3,9741
50 127,300 64,6250 52,525 32,3162
75 144,300 123,2479 89,075 42,0003
100 50,900 23,4451 72,575 8,2379
Untuk menggambarkan dengan lebih mudah mengenai
pengaruh konsentrasi kurkumin terhadap persentase
viabilitas, maka nilai-nilai rerata viabilitas sel

40
granulosa tersebut dibuat diagram yang menggambarkan
nilai rerata data viabilitas sel granulosa pada
masing-masing konsentrasi kurkumin pada inkubasi
selama 24 jam (Gambar 4.1) dan pada inkubasi selama
32 jam (Gambar 4.2).
400
350
300
250
200
150
100
50
0
Kontrol
12,5 M 25 M 50 M 75 M 100 M
media
Rerata 100 224,725 240,428 127,3 144,3 50,9
Gambar 4.1. Diagram nilai rerata viabilitas sel

granulosa dari masing-masing konsentrasi
kurkumin pada inkubasi selama 24 jam
41
140
120
100
80
60
40
20
0
Kontrol
12,5 M 25 M 50 M 75 M 100 M
media
Rerata 100 44,025 37,8 52,525 89,075 72,575
Gambar 4.2. Diagram nilai rerata viabilitas sel

granulosa dari masing-masing konsentrasi
kurkumin pada inkubasi selama 32 jam
Hasil uji ANAVA pada perbandingan jumlah sel
hidup pada kelompok yang diberi kurkumin dengan
kelompok kontrol media pada inkubasi selama 24 jam
didapatkan nilai signifikansi p = 0,191 yang berarti
tidak ada perbedaan yang bermakna secara statistik
(dapat dilihat pada Lampiran 2). Maka dapat
disimpulkan bahwa pada kelompok dengan inkubasi 24
jam tidak terdapat perbedaan viabilitas antara satu
konsentrasi dengan konsentrasi lainnya.
Hasil uji ANAVA pada perbandingan jumlah sel
hidup pada kelompok yang diberi kurkumin dengan
kelompok kontrol media pada inkubasi selama 32 jam

42
didapatkan nilai signifikansi p = 0,011 yang berarti
ada perbedaan yang bermakna secara statistik (dapat
dilihat pada Lampiran 3). Maka dapat disimpulkan
bahwa pada kelompok dengan inkubasi 32 jam terdapat
perbedaan viabilitas antara satu konsentrasi dengan
konsentrasi lainnya.
Hasil uji ANAVA pada kelompok inkubasi 32 jam
yang signifikan disebabkan oleh adanya perbedaan
antara konsentrasi satu dengan konsentrasi lainnya.
Untuk mencari perbedaan tersebut, dilakukan uji post
hoc yang mengkaji adanya perbedaan antara
konsentrasi satu dengan konsentrasi lainnya. Hasil
uji post hoc dapat dilihat di Lampiran 4.
Hasil uji korelasi Pearson yang dilakukan untuk
melihat adanya hubungan antara konsentrasi kurkumin
dengan viabilitas sel pada inkubasi selama 24 jam
menunjukkan bahwa tidak terdapat hubungan asosiasi
antara konsentrasi dengan viabilitas (p = 0,222)
yang berarti kenaikan konsentrasi kurkumin tidak
mempengaruhi viabilitas sel granulosa (dapat dilihat
di Lampiran 5).
Hasil uji korelasi Pearson yang dilakukan untuk
melihat adanya hubungan antara konsentrasi kurkumin

43
dengan viabilitas sel pada inkubasi selama 32 jam
menunjukkan bahwa terdapat hubungan asosiasi positif
antara konsentrasi dengan viabilitas (p = 0,020)
yang berarti makin tinggi konsentrasi kurkumin,
makin tinggi viabilitas sel granulosa (dapat dilihat
di Lampiran 6).
Pada hasil uji korelasi Pearson untuk melihat
bagaimana perubahan persentase viabilitas pada
kelompok inkubasi 24 jam dibandingkan dengan
kelompok inkubasi 32 jam menunjukkan bahwa ditemukan
adanya korelasi negatif pada kelompok yang menerima
kurkumin dengan konsentrasi 12,5 M (p = 0,027),
(r = -0,697); konsentrasi 25 M (p = 0,017),
(r = -0,745); konsentrasi 50 M (p = 0,042),
(r = -0,645) yang menandakan bahwa ada penurunan
nilai viabilitas sel, namun tidak ditemukan adanya
hubungan korelasi pada kelompok yang menerima
kurkumin dengan konsentrasi 75 M dan 100 M (dapat
dilihat pada Lampiran 7 11).
IV.B. Pembahasan
Pada penelitian ini didapatkan bahwa konsentrasi
kurkumin yang meningkat tidak dapat menurunkan
viabilitas sel granulosa (pada masa inkubasi 24 jam)

44
atau justru meningkatkan viabilitas sel granulosa
(pada masa inkubasi 32 jam). Hasil temuan ini
berbeda dengan hasil penelitian yang dilakukan oleh
Chen dan Huang (1996) yang menyatakan bahwa terjadi
penurunan viabilitas sel yang menerima terapi
kurkumin dengan sel otot polos pembuluh darah
sebagai subjeknya. Hasil temuan ini juga berbeda
dengan hasil penelitian yang dilakukan oleh Mishra
dan Singh (2009) yang menyatakan bahwa terjadi
penurunan viabilitas pada spermatozoa tikus yang
diberi ekstrak Curcuma longa L. yang notabene
komponen terbesar dari ekstrak Curcuma longa L.
adalah kurkumin.
Saat dilakukan pengujian untuk melihat perbedaan
persentase viabilitas sel granulosa pada kelompok
inkubasi 24 jam dibandingkan dengan kelompok
inkubasi 32 jam, ditemukan bahwa terjadi penurunan
viabilitas pada kelompok inkubasi 32 jam
dibandingkan dengan kelompok inkubasi 24 jam, namun
penurunan ini hanya terjadi pada kelompok yang
menerima kurkumin dengan konsentrasi 12,5 M, 25 M,
dan 50 M sementara pada konsentrasi 75 M dan 100
M. Hasil temuan pada konsentrasi 75 M dan 100 M

45
ini berbeda dengan hasil penelitian yang dilakukan
oleh Mahakunakorn dkk. (2003) yang menyatakan bahwa
makin lama sel diinkubasi dengan kurkumin,
viabilitas sel akan menurun karena kurkumin pada
kondisi yang pas akan bersifat pro-oksidan sehingga
akan merusak DNA sel.
Hasil penelitian ini yang berbeda dengan
penelitian-penelitian sebelumnya mungkin disebabkan
oleh kerja kurkumin yang sangat cepat dalam menekan
viabilitas sel atau waktu inkubasinya yang terlalu
lama, sehingga apabila efek penekanan viabilitas sel
tersebut sudah habis, sel akan mempunyai kesempatan
untuk berproliferasi kembali sehingga tidak akan
ditemukan adanya penurunan viabilitas sel.
Penelitian yang penulis lakukan memiliki
keterbatasan. Keterbatasan penelitian ini antara
lain pewarnaan Trypan blue tidak dapat membedakan
sel yang masih hidup dengan sel yang mengalami
apoptosis, proses pewarnaan Trypan blue yang
dilakukan secara manual, serta proses penghitungan
jumlah sel yang hidup dan mati dengan cara manual,
yaitu menggunakan mikroskop binokuler yang
mengandalkan ketajaman penglihatan dan ketelitian

46
dalam mengidentifikasi sel yang masih hidup dengan
yang sudah mati oleh peneliti.

BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
V.A. Kesimpulan
1. Kenaikan kadar kurkumin tidak akan menurunkan
viabilitas sel granulosa ovarium babi.
2. Makin lama sel granulosa ovarium babi terpajan
oleh kurkumin, viabilitas sel akan menurun.
V.B. Saran
Diperlukan penelitian serupa dengan waktu inkubasi
yang lebih pendek untuk melihat efek penekanan
viabilitas oleh kurkumin dalam jangka waktu pendek
47
48
DAFTAR PUSTAKA
Arun, N., and Nalini, N. 2002. Efficacy of Turmeric on Blood

Sugar and Polyol Pathway in Diabetic Albino Rats. Plant
Food Hum. Nutr. 57, 41-52.
Bhate, S. 2003. Turmeric as Contaceptive.

http://www.indiadivine.org/audarya/ayurveda-health-
wellbeing/260760-turmeric-contraceptive.html. Cited 17
Oktober 2011.
Began, G., Sudharshan, E., Udaya Shankar, K. and Appu Rao,

A.G. Interaction of Curcumin with Phosphatidylcholine : A
Spectrofluorometric Study. J.Agric.Food Chem. 47, 4992-
4997.
Chattopadhyay, I., Biswas, K., Bandyopadhyay, U., and

Banerjee, R.K. 2004. Turmeric and Curcumin: Biological
Actions and Medicinal Applications. Current Science,
Vol.87, No.1
Chen, H.W. and Huang, H.C. 1998. Effect of Curcumin on Cell

Cycle Progression and Apoptosis in Vascular Smooth Muscle
Cells. British Journal of Pharmacology, 124, 1029 - 1040
Crutchfield A, Diller K, Brand J .1999. Cryopreservation of

Chlamydomonas reinhardtii (Chlorophyta). European Journal
of Phycology 34 (1): 4352
Duffy, D.M and Stouffer, R.L. 2001. The Ovulatory

Gonadotropins Surge Stimulates Cyclooxygenase Expression
and Prostaglandin Production by the Monkey Follicle.
Molecular Human Reproduction 7(8):731-739.
Garg, S.K. 1974. Effects of Curcuma longa on Fertility.

Planta Medica. 26:225-227
Hadi, Restu Syamsul, and Soejono, Sri Kadarsih. 2010.

Curcumin Analogue (Pentagamavunone-0) Induces Luteal Cell
Apoptosis by Increaded Bax/Bcl-2 Protein Ratio. Majalah
Kesehatan PharmaMedika Vol. 2 No. 1 : 110-115
Hikino, H. 1985. Antihepatotoxic Activity of Crude Drugs.

Yakugaku Zasshi.105, 109-118
Junqueira, L.C. and Carneiro, J. 2003. Basic Histology:

Text & Atlas, 10 Ed. The McGraw-Hill Companies, Inc.
Lim, G.P., Chu, T., Yang, F., Beech, W., Frantschy, S.A.,
and Cole, G.M. 2001. The Curry Spice Curcumin Reduces
49
Oxydative Damage and Amyloid Pathology in An Alzheimer

Transgenic Mouse. J. Neurosci. 21, 8370-8377.
Mahakunakorn, P., Tohda, M., Murakami, Y., Matsumoto, K.,

Watanabe, H., and Vajaragupta, O. 2003. Cytoprotective
and Cytotoxic Effects of Curcumin: Dual Action on H2O2-
Induced Oxidative Cell Damage in NG108-15 Cells. Biol.
Pharm. Bull. 26(5) 725728.
Martin-Cordero, C., Lopez-Lazaro, M., Galvez, M. and Ayuso,

M. J. 2003. Curcumin as a DNA topoisomerase II poison. J.
Enzyme Inhib. Med. Chem. 18, 505-509.
Mishra, R.K. and Sigh, S.K. 2009. Reversible antifertility

effect of aqueous rhizome extract of Curcuma longa L. in
male laboratory mice. Contraception 79, 479487
Nirmala, C. and Puvanakrishnan, R. 1996. Protective Role of

Curcumin Against Isoprotenol-induced Myocardial
Infarction in Rats. Mol. Cell. Biochem. 159, 85-93.
Nurcahyo, H. 2003. Steroidogenesis, Proliferasi, dan

Apoptosis pada Kultur Sel Granulosa Berbagai Ukuran
Folikel Ovarium Babi Setelah Pemberian Kurkumin atau
Pentagamavunon-0 dengan Rangsangan FSH, LH, dan/atau
PGF2. Disertasi. Universitas Gadjah Mada Yogyakarta.
Nurcahyo, H., and Soejono, S.K. 2006. The Effects of

Curcumin and Pentagamavunin-0(PGV-0) on the
Steroidogenesis, Proliferative Activity, and Apoptosis in
Cultured Porcine Granulosa Cells at Varrying Stages of
Follicular Growth. Recent Development in Curcumin
Pharmacochemistry Proceedings of The International
Symposium on Recent Progress in Curcumin Research.227-
241. Universitas Gadjah Mada Yogyakarta.
Platel, K. and and Srinivasan, K. 1996. Influence of

Dietary Spices or Their Active Principles on Dygestive
Enzymes of Small Intestinal Mucosa in Rats. Int. J. Food
Sci. Nutr.,47, 55-59.
Punithavathi D., Venkatesan, N., and Babu, M. 2000.

Curcumin Inhibition of Bleomycin Induced Pulmonary
Fibrosis in Rats. Br. J. Pharmacol.131, 160-172.
Rodrigues EB, Costa EF, Penha FM, Melo GB, Botts J, Dib E,
Furlani B, Lima VC, Maia M, Meyer CH, Hfling-Lima AL,
Farah ME. 2009. The use of vital dyes in ocular
surgery. Survey of Opthalmology 54 (5): 576617.
50
Sajithlal,G.B., Chittra, P., and Chandrakasan, G. 1998.

Effect of Curcumin on the Advanced Glycation and Cross-
linking of Collagen in Diabetic Rats. Biochem.
Pharmacol.56, 1607-1614.
Shapiro, H.M. 1998. Practical Flow Cytometry, 2nd ed.,

p.129. John Willey & Sons, New York.
Sherwood, L.2007.Human Physiology From Cells to System 7e.

Brooks/Cole Cengage Learning.
Sinha, M., Mukherjee, B.P., Mukherjee, B., Sikdar, S. and

Dasgupta, S.R. 1975. Study of the Mechanism of Action of
Curcumin; An Antiulcer agent. Indian J. Pharmacol. 7, 98.
Thiyagarajan M. and Sharma,S.S. 2004. Neuroprotective

Effect of Curcumin in Middle Cerebral Artery Occlution
Induced Focal Cerebral Ischemia in Rats. Life Sci.74,
969-985.
Venkatesan, P., and Rao, M.N.A., 2000. Structure Activity

Relationships for the Inhibition of Lipid Peroxidation
and the Scavenging of Free Radicals by Syntetic
Symetrical Curcumin Analogues. J. Pharm. Pharmacol. 52,
pp.: 1123-28.
LAMPIRAN
Lampiran 1. Jumlah sel granulosa setelah diberi kurkumin

berbagai konsentrasi dan diinkubasi selama 24
jam dan 32 jam
Jumlah sel hidup (104) pada tiap sumuran dengan kadar kurkumin (M)
Sampel
24 jam 32 jam
Kontrol Kontrol Kontrol Kontrol
12,5 25 50 75 100 12,5 25 50 75 100
media pelarut media pelarut
1 53 62 47 42 23 36 162 24 55 38 75 112 79 221
2 80 57 50 27 19 72 67 32 44 42 77 87 24 53
3 258 157 119 112 51 96 36 79 53 75 143 94 242 146
4 218 128 129 210 45 67 41 107 56 134 195 106 205 333
Lampiran 2.
Hasil uji ANAVA pada kelompok yang
menerima kurkumin dengan waktu
inkubasi 24 jam
ANAVA
persentase viabilitas
Sum of Df Mean F Sig.
Squares Square
Between 13074.85
65374.272 5 1.676 .191
Groups 4
Within 140415.29
18 7800.850
Groups 8
205789.57
Total 23
0
Lampiran 3. Hasil uji ANAVA pada kelompok yang menerima
kurkumin dengan waktu inkubasi 32 jam
ANAVA
Sum of Df Mean F Sig.
Squares Square
Between
12765.610 5 2553.122 4.128 .011
Groups
Within
11131.470 18 618.415
Groups
Total 23897.080 23
Lampiran 4. Hasil uji Post hoc metode LSD pada kelompok yang menerima
kurkumin dengan waktu inkubasi 32 jam
Multiple Comparisons
Dependent Variable: persentase viabilitas
(I) dosis (J) dosis Mean Std. Sig. 95% Confidence
curcumin curcumin Differenc Error Interval
e (I-J) Lower Upper
Bound Bound
17.584
12,5 ug/mL 55.9750* .005 19.032 92.918
3
17.584
25 ug/mL 62.2000* .002 25.257 99.143
3
Kontrol 17.584
50 ug/mL 47.4750* .015 10.532 84.418
media 3
17.584
75 ug/mL 10.9250 .542 -26.018 47.868
3
17.584
100 ug/mL 27.4250 .136 -9.518 64.368
3
Kontrol 17.584
-55.9750* .005 -92.918 -19.032
media 3
17.584
25 ug/mL 6.2250 .727 -30.718 43.168
3
17.584
12,5 ug/mL 50 ug/mL -8.5000 .635 -45.443 28.443
3
17.584
75 ug/mL -45.0500* .020 -81.993 -8.107
3
17.584
100 ug/mL -28.5500 .122 -65.493 8.393
3
Kontrol 17.584
-62.2000* .002 -99.143 -25.257
media 3
17.584
12,5 ug/mL -6.2250 .727 -43.168 30.718
3
17.584
25 ug/mL 50 ug/mL -14.7250 .413 -51.668 22.218
3
17.584
75 ug/mL -51.2750* .009 -88.218 -14.332
3
17.584
100 ug/mL -34.7750 .063 -71.718 2.168
3
Kontrol 17.584
-47.4750* .015 -84.418 -10.532
media 3
17.584
12,5 ug/mL 8.5000 .635 -28.443 45.443
3
17.584
50 ug/mL 25 ug/mL 14.7250 .413 -22.218 51.668
3
17.584
75 ug/mL -36.5500 .052 -73.493 .393
3
17.584
100 ug/mL -20.0500 .269 -56.993 16.893
3
Kontrol 17.584
-10.9250 .542 -47.868 26.018
media 3
17.584
12,5 ug/mL 45.0500* .020 8.107 81.993
3
17.584
75 ug/mL 25 ug/mL 51.2750* .009 14.332 88.218
3
17.584
50 ug/mL 36.5500 .052 -.393 73.493
3
17.584
100 ug/mL 16.5000 .360 -20.443 53.443
3
Kontrol 17.584
-27.4250 .136 -64.368 9.518
media 3
17.584
12,5 ug/mL 28.5500 .122 -8.393 65.493
3
17.584
100 ug/mL 25 ug/mL 34.7750 .063 -2.168 71.718
3
17.584
50 ug/mL 20.0500 .269 -16.893 56.993
3
17.584
75 ug/mL -16.5000 .360 -53.443 20.443
3
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
Lampiran 5. Hasil uji korelasi Pearson pada kelompok yang
menerima kurkumin dengan waktu inkubasi 24 jam
Correlations
dosis persentase
curcumin viabilitas
Pearson
1 -.259
Correlation
dosis
Sig. (2-
curcumin .222
tailed)
N 24 24
Pearson
-.259 1
Correlation
persentase
Sig. (2-
viabilitas .222
tailed)
N 24 24
Lampiran 6. Hasil uji korelasi Pearson pada kelompok yang

menerima kurkumin dengan waktu inkubasi 32
jam
Correlations 32 jam
dosis persentase
curcumin viabilitas
Pearson
1 .020
Correlation
dosis
Sig. (2-
curcumin .927
tailed)
N 24 24
Pearson
.020 1
Correlation
persentase
Sig. (2-
viabilitas .927
tailed)
N 24 24
Lampiran 7. Hasil uji korelasi Pearson pada perbandingan
persentase viabilitas antara kelompok waktu inkubasi
24 jam dengan 32 jam pada konsentrasi 12,5 M
Correlations
persentase waktu
viabilitas inkubasi
Pearson
1 -.697*
Correlation
persentase
Sig. (1-
viabilitas .027
tailed)
N 8 8
Pearson
-.697* 1
Correlation
waktu
Sig. (1-
inkubasi .027
tailed)
N 8 8
*. Correlation is significant at the 0.05 level
(1-tailed).

24 jam dengan 32 jam pada konsentrasi 25 M
Correlations
persentase waktu
viabilitas inkubasi
Pearson
1 -.745*
Correlation
persentase
Sig. (1-
viabilitas .017
tailed)
N 8 8
Pearson
-.745* 1
Correlation
waktu
Sig. (1-
inkubasi .017
tailed)
N 8 8
(1-tailed).

Correlations
persentase waktu
viabilitas inkubasi
Pearson
1 -.645*
Correlation
persentase
Sig. (1-
viabilitas .042
tailed)
N 8 8
Pearson
-.645* 1
Correlation
waktu
Sig. (1-
inkubasi .042
tailed)
N 8 8
(1-tailed).

Correlations
persentase waktu
viabilitas inkubasi
Pearson
1 -.327
Correlation
persentase
Sig. (1-
viabilitas .214
tailed)
N 8 8
Pearson
-.327 1
Correlation
waktu
Sig. (1-
inkubasi .214
tailed)
N 8 8
Correlations 100
persentase waktu
viabilitas inkubasi
Pearson
1 .580
Correlation
persentase
Sig. (1-
viabilitas .066
tailed)
N 8 8
Pearson
.580 1
Correlation
waktu
Sig. (1-
inkubasi .066
tailed)
N 8 8
Lampiran 12. Data deskriptif kelompok dengan waktu inkubasi 24
jam
Descriptives
dosis curcumin Statistic Std.
Error
Mean 224.725 74.5103
Lower
95% Confidence -12.400
Bound
Interval for
Upper
Mean 461.850
Bound
5% Trimmed Mean 224.194
Median 219.950
12,5 Variance 22207.143
ug/mL
Std. Deviation 149.0206
Minimum 78.2
Maximum 380.8
Range 302.6
Interquartile Range 277.9
Skewness .072 1.014
Kurtosis -4.900 2.619
persentase
Mean 131.550 34.2120
viabilitas
Lower
95% Confidence 22.672
Bound
Interval for
Upper
Mean 240.428
Bound
Median 105.200
25 Variance 4681.850
ug/mL
Minimum 84.1
Maximum 231.7
Range 147.6
Skewness 1.730 1.014
Kurtosis 2.964 2.619
50 Mean 127.300 32.3125
ug/mL Lower
Bound
Interval for
Upper
Mean 230.133
Bound
Median 124.700
Variance 4176.387
Minimum 69.4
Maximum 190.4
Range 121.0
Skewness .041 1.014
Kurtosis -5.717 2.619
Mean 144.300 61.6240
Lower
Bound
Interval for
Upper
Mean 340.415
Bound
Median 113.650
75
Variance 15190.047
ug/mL
Minimum 39.9
Maximum 310.0
Range 270.1
Kurtosis -.228 2.619
Mean 50.900 11.7226
Lower
Bound
100 Interval for
Upper
ug/mL Mean 88.206
Bound
Median 50.150
Variance 549.673
Minimum 28.0
Maximum 75.3
Range 47.3
Skewness .069 1.014
Kurtosis -4.997 2.619
a. persentase viabilitas is constant when dosis curcumin =

kontrol media. It has been omitted.
Lampiran 13. Data deskriptif kelompok dengan waktu inkubasi 32

jam
Descriptives
dosis curcumin Statist Std.
ic Error
Mean 44.025 14.3045
Lower
Bound
Interval for
Upper
Mean 89.548
Bound
Median 40.400
12,5 Variance 818.476
ug/mL
persentase Minimum 17.5
viabilitas Maximum 77.8
Range 60.3
Skewness .382 1.014
Kurtosis -3.480 2.619
Mean 37.800 1.9870
Lower
25 95% Confidence 31.476
Bound
ug/mL Interval for
Upper
Mean 44.124
Bound
Median 39.250
Variance 15.793
Minimum 32.0
Maximum 40.7
Range 8.7
Skewness -1.697 1.014
Kurtosis 2.885 2.619
Mean 52.525 16.1581
Lower
Bound
Interval for
Upper
Mean 103.947
Bound
Median 42.500
50 1044.33
Variance
ug/mL 6
Minimum 27.6
Maximum 97.5
Range 69.9
Kurtosis .904 2.619
Mean 89.075 21.0001
Lower
Bound
Interval for
Upper
Mean 155.907
75 Bound
ug/mL 5% Trimmed Mean 88.067
Median 80.000
1764.02
Variance
3
Minimum 54.5
Maximum 141.8
Range 87.3
Skewness .651 1.014
Kurtosis -2.356 2.619
Mean 72.575 4.1189
Lower
Bound
Interval for
Upper
Mean 85.683
Bound
Median 72.750
100
Variance 67.862
ug/mL
Minimum 63.3
Maximum 81.5
Range 18.2
Skewness -.080 1.014
Kurtosis -3.028 2.619
a. persentase viabilitas is constant when dosis curcumin =
kontrol media. It has been omitted.
Hasil tes t sampel tidak berpasangan untuk menguji signifikansi
pengaruh pelarut dibandingkan berbagai konsentrasi kurkumin
terhadap viabilitas sel pada kelompok lama inkubasi 24 jam
Group Statistics
dosis curcumin N Mean Std. Deviation Std. Error Mean

12,5 ug/mL 4 224.725 149.0206 74.5103
pelarut 4 112.900 86.4952 43.2476
Independent Samples Test
Levene's Test t-test for Equality of Means

for Equality of
Variances
F Sig. t df Sig. Mean Std. Error 95% Confidence

(2- Difference Difference Interval of the
tailed) Difference
Lower Upper
Equal
variances 5.340 .060 1.298 6 .242 111.8250 86.1518 -98.9810 322.6310
persentase assumed
viabilitas Equal
-
variances not 1.298 4.815 .253 111.8250 86.1518 335.8646
112.2146
assumed
Group Statistics

25 ug/mL 4 131.550 68.4240 34.2120
pelarut 4 112.900 86.4952 43.2476

for Equality of
Variances
tailed) Difference
Lower Upper
Equal
-
variances .193 .676 .338 6 .747 18.6500 55.1436 153.5815
116.2815
persentase assumed
viabilitas Equal
-
variances not .338 5.698 .747 18.6500 55.1436 155.3333
118.0333
assumed
Group Statistics

50 ug/mL 4 127.300 64.6250 32.3125
pelarut 4 112.900 86.4952 43.2476

for Equality of
Variances
tailed) Difference
Lower Upper
Equal
-
variances .099 .764 .267 6 .799 14.4000 53.9856 146.4981
117.6981
persentase assumed
viabilitas Equal
-
variances not .267 5.554 .799 14.4000 53.9856 149.1150
120.3150
assumed
Group Statistics

75 ug/mL 4 144.300 123.2479 61.6240
pelarut 4 112.900 86.4952 43.2476

for Equality of
Variances
tailed) Difference
Lower Upper
Equal
-
variances .637 .455 .417 6 .691 31.4000 75.2852 215.6163
152.8163
persentase assumed
viabilitas Equal
-
variances not .417 5.378 .693 31.4000 75.2852 220.9041
158.1041
assumed
Group Statistics

100 ug/mL 4 50.900 23.4451 11.7226
pelarut 4 112.900 86.4952 43.2476

for Equality of
Variances
tailed) Difference
Lower Upper
Equal
- -
variances 3.398 .115 6 .216 -62.0000 44.8082 47.6416
1.384 171.6416
persentase assumed
viabilitas Equal
- -
variances not 3.438 .249 -62.0000 44.8082 70.8446
1.384 194.8446
assumed
Hasil tes t sampel tidak berpasangan untuk menguji signifikansi
pengaruh pelarut dibandingkan berbagai konsentrasi kurkumin
terhadap viabilitas sel pada kelompok lama inkubasi 32 jam
Group Statistics
12,5 ug/mL 4 44.025 28.6090 14.3045

pelarut 4 136.900 86.1773 43.0886

for Equality of
Variances

tailed) Difference
Lower Upper
Equal
- -
variances 3.444 .113 6 .087 -92.8750 45.4010 18.2172
2.046 203.9672
persentase assumed
viabilitas Equal
- -
variances not 3.653 .117 -92.8750 45.4010 38.0389
2.046 223.7889
assumed
Group Statistics
25 ug/mL 4 37.800 3.9741 1.9870

pelarut 4 136.900 86.1773 43.0886

for Equality of
Variances

tailed) Difference
Lower Upper
Equal
- -
variances 8.106 .029 6 .061 -99.1000 43.1344 6.4462
2.297 204.6462
persentase assumed
viabilitas Equal
- -
variances not 3.013 .105 -99.1000 43.1344 37.8447
2.297 236.0447
assumed
Group Statistics
50 ug/mL 4 52.525 32.3162 16.1581

pelarut 4 136.900 86.1773 43.0886

for Equality of
Variances
tailed) Difference
Lower Upper
Equal
- -
variances 3.095 .129 6 .116 -84.3750 46.0186 28.2286
1.833 196.9786
persentase assumed
viabilitas Equal
- -
variances not 3.827 .144 -84.3750 46.0186 45.6984
1.833 214.4484
assumed
Group Statistics

75 ug/mL 4 89.075 42.0003 21.0001
pelarut 4 136.900 86.1773 43.0886
Levene's Test for t-test for Equality of Means

Equality of
Variances
F Sig. t df Sig. (2- Mean Std. Error 95% Confidence
tailed) Difference Difference Interval of the
Difference
Lower Upper
Equal
- -
variances 1.790 .229 6 .357 -47.8250 47.9337 69.4645
.998 165.1145
persentase assumed
viabilitas Equal
- -
variances not 4.349 .371 -47.8250 47.9337 81.1516
.998 176.8016
assumed
Group Statistics

100 ug/mL 4 72.575 8.2379 4.1189
pelarut 4 136.900 86.1773 43.0886

for Equality of
Variances
tailed) Difference
Lower Upper
Equal
- -
variances 7.120 .037 6 .188 -64.3250 43.2851 41.5898
1.486 170.2398
persentase assumed
viabilitas Equal
- -
variances not 3.055 .232 -64.3250 43.2851 72.0394
1.486 200.6894
assumed
FOTO SEL GRANULOSA BABI FOLIKEL BESAR
Kontrol Media inkubasi 24 jam Trypan Blue Kontrol DMSO 0,2% inkubasi 24 jam Trypan
Blue
Kurkumin inkubasi 24 jam 12,5 uM Trypan Blue

Kurkumin inkubasi 24 jam 25 uM Trypan Blue

Kurkumin inkubasi 24 jam 75 uM TrYpan Blue
Kontrol Media inkubasi 32 jam Trypan Blue Kontrol DMSO 0,2% inkubasi 24 jam Trypan
Blue
Kurkumin inkubasi 32 jam 12,5 uM Trypan Blue


Kurkumin inkubasi 32 jam75 uM Trypan Blue
Kurkumin inkubasi 32 jam100 uM Trypan Blue

Kultur Sel

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Deskripsi Asli:

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Kultur Sel

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

EFEK KURKUMIN TERHADAP VIABILITAS KULTUR SEL GRANULOSA

Untuk Memenuhi Sebagian Syarat

Puji dan syukur penulis haturkan kepada Tuhan Yang Maha

Penulis menyadari masih banyak kekurangan dalam skripsi

DMEM : Dulbeccos Modified Eagles Medium

Latar belakang : Kurkumin adalah senyawa hasil

Kata kunci : kurkumin, viabilitas sel, sel

Background : Curcumin is a compound isolated from

Objective : To understand the effect of several

Methods : The type of this experiment was post test

Results : Groups of curcumin-treated cells incubated

Conclusions : The increasing of curcumin

Keywords : curcumin, cell viability, granulosa cells,

I.A. Latar Belakang

Kurkumin adalah senyawa hasil isolasi dari

Curcuma longa L. yang berpotensi sebagai

antifertilitas. Sebagai kontrasepsi, serbuk C.

longa L. diminum pada 8 hari pertama masa

menstruasi (Bhate, 2003). Pada masa menstruasi,

terjadi penurunan kadar progesteron di dalam tubuh

yang menandakan berhentinya supresi folikulogenesis

(pemasakan folikel di dalam ovarium), sehingga

proses folikulogenesis dapat berlangsung kembali

dan peristiwa ovulasi dapat terjadi kembali.

Semakin matang folikel, semakin tinggi sekresi

estrogen yang dihasilkan. Kadar estrogen yang

semakin tinggi akan menghambat produksi FSH namun

akan memicu umpan balik positif terhadap sekresi LH

sehingga pada folikel matur akan terjadi

peningkatan yang dramatis (surge) estrogen, lalu

diikuti oleh surge LH dan sedikit surge FSH.

Meningkatnya kadar FSH meskipun sedikit akan memicu

penambahan jumlah reseptor LH (Nurcahyo, 2003).

Peningkatan kadar LH juga akan memicu dihasilkannya

prostaglandin lokal sehingga terjadilah proses

ovulasi (Duffy and Stouffer, 2001).

Penelitian kurkumin secara in vitro yang

dilakukan pada sel granulosa babi didapatkan bahwa

kurkumin menghambat aktivitas steroidogenesis dan

proliferasi (Nurcahyo and Soejono, 2006). Sel

granulosa adalah sel penghasil estrogen pada

folikel ovarium. Sebelumnya, telah diketahui peran

estrogen dalam proses ovulasi. Namun, masih belum

diketahui apakah penghambatan steroidogenesis yang

dilakukan oleh kurkumin ini disebabkan karena

adanya penurunan jumlah sel granulosa setelah

diberi kurkumin atau tidak. Selain itu, masih belum

diketahui apakah perbedaan waktu pajanan kurkumin

terhadap sel granulosa akan menyebabkan perubahan

jumlah sel granulosa yang tersedia sehingga akan

menyebabkan perubahan aktivitas steroidogenesis.

Masih diperlukan uji viabilitas sel granulosa

terhadap kurkumin sehingga ke depannya dapat

diketahui kadar kurkumin yang tepat untuk

menimbulkan efek yang diinginkan pada sel

I.B. Perumusan Masalah

Rumusan masalah dalam penelitian ini adalah :

1. Apakah kenaikan kadar kurkumin menurunkan

viabilitas sel granulosa?

2. Apakah lama pajanan kurkumin menurunkan

viabilitas sel granulosa ovarium?

I.C. Tujuan Penelitian