Nama : Antania Hermada Aprilia

NIM : 1510714059

Judul : Alcohol and Apoptosis: Friends or Foes?

Volume :5

Issue :4

Alkohol dan Apoptosis: Teman atau Musuh?

Abstrak

Penyalahgunaan alkohol menyebabkan 79.000 kematian yang berasal dari kerusakan organ yang
parah di Amerika Serikat setiap tahun. Perwujudan klinis dari penyalahgunaan alkohol jangka
panjang pada otot jantung termasuk kontraktilitas yang rusak dengan perkembangan kardiomiopati
dilatasi dan gagal jantung rendah output; yang memiliki prognosis buruk dengan kelangsungan
hidup kurang dari 25% selama lebih dari tiga tahun. Sebaliknya, konsumsi alkohol yang rendah
telah dikaitkan dengan penurunan risiko penyakit kardiovaskular, namun mekanisme fenomena ini
tetap sulit dipahami. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menentukan signifikansi apoptosis
sebagai faktor mediasi dalam fungsi jantung setelah alkohol tinggi kronis dibandingkan paparan
alkohol rendah. tikus dewasa disediakan 5 mM (alkohol rendah), 100 mM (alkohol tinggi) atau
pasangan-makan kontrol non-alkohol selama 4-5 bulan. Hati yang dibedah, dipotong dan diwarnai
dengan cresyl violet atau imunohistokimia untuk caspase-3, penanda diduga untuk apoptosis.
Kardiomiosit diisolasi untuk menentukan dampak dari paparan alkohol pada kontraksi sel dan
relaksasi. Hewan dengan kadar alkohol tinggi menampilkan penipisan yang ditandai dinding
ventrikel kiri dikombinasikan dengan peningkatan caspase-3 aktivitas dan penurunan
kontraktilitas. Sebaliknya, alkohol rendah dikaitkan dengan peningkatan kontraktilitas dan
penurunan apoptosis menunjukkan mekanisme pelindung keseluruhan disebabkan oleh rendahnya
tingkat paparan alkohol.
1. Perkenalan

Penyalahgunaan alkohol adalah salah satu masalah yang paling relevan dan melumpuhkan kerja
organ tubuh pada masyarakat. Ini adalah penyebab kematian terbesar ketiga di Amerika Serikat
dengan rata-rata 79.000 korban setiap tahun. Hasil dari Survei Epidemiologi Nasional Alkohol
dilakukan pada tahun 2001-2002 menunjukkan bahwa 30,3% orang dewasa di Amerika Serikat
telah mengalami gangguan penggunaan alkohol di beberapa kondisi selama hidup mereka. Secara
keseluruhan, konsumsi alkohol yang berlebihan menelan biaya sekitar $ 223.500.000.000 pada
tahun 2006, proporsi yang signifikan dari pengeluaran keseluruhan kesehatan kita. Seorang
kontributor utama biaya perawatan kesehatan yang berhubungan dengan konsumsi alkohol
berlebih adalah asimtomatik beralkohol cardiomyopathy (ACM) yang dapat menyebabkan gagal
jantung progresif dengan atau tanpa mengurangi ketebalan dinding ventrikel dan curah jantung,
disertai dengan elektrokardiogram (EKG) kelainan.

Penelitian di bidang kesehatan jantung pada tingkat molekuler menunjukkan bahwa apoptosis
merupakan penyumbang utama penyebab penyakit kardiovaskular. Apoptosis adalah proses
pengaturan penghapusan sel yang ditandai dengan peristiwa yang mengakibatkan fragmentasi inti
sel dan seluler, serta penyusutan sel. Telah menunjukkan bahwa pembelahan proteolitik protein
kunci dengan protease diaktifkan tertentu yang dikenal sebagai caspases memainkan peran utama
dalam jalur apoptosis. Bukti menunjukkan bahwa paparan alkohol kronis menjadikan sel lebih
rentan terhadap apoptosis. Hal ini umumnya dianggap akibat dari peningkatan spesies oksigen
reaktif (ROS), yang merupakan mediator penting dalam transduksi sinyal selama apoptosis
kardiomiosit. Karena keterlibatan caspases di apoptosis telah menunjukkan bahwa berlebih dari
enzim ini menyebabkan kardiomiopati mematikan pada tikus transgenik.

Meskipun dengan adanya penemuan tersebut, studi terbaru menunjukkan bahwa konsumsi alkohol
moderat mungkin menyebabkan pengaktifkan jalur PI3K / AKT, sehingga memiliki efek
kardioprotektif. Mekanisme anti-apoptosis alkohol tetap sulit dipahami, tetapi Yuan et al
memaparkan bahwa salah satu penjelasan yang mungkin untuk efek ini adalah kemampuan dari
jalur PI3K / AKT untuk menghambat caspase-9 dan meniadakan fungsi apoptosis-nya. Selain itu,
kelompok kami baru-baru ini menunjukkan PI3K yang / AKT memainkan peran penting dalam
menengahi menguntungkan serta efek jantung merugikan akut rendah dan tinggi dosis alkohol,
masing-masing.
Kerusakan otot jantung merupakan faktor penentu penting morbiditas dan mortalitas, dan
membatasi tingkat cardiomyocyte apoptosis selama stres oksidatif memiliki implikasi yang
signifikan dalam terapi dan kesehatan jantung. Studi kami bertujuan untuk menyelidiki efek dari
paparan alkohol yang tinggi dan rendah pada caspase-3 kegiatan dan efeknya pada kontraktilitas
dalam hati tikus.

2. Hasil

Pengamatan histologis Gross menyarankan penipisan dinding ventrikel kiri subjek alcohol dengan
kadar tinggi dibandingkan dengan kontrol dan subjek alcohol berkadar rendah (Gambar 1).
Analisis imunohistokimia dari tingkat caspase-3 menunjukkan tidak ada perubahan yang
signifikan antara epikardium, endocardium, dan lapisan miokardium dalam berbagai kelompok
perlakuan (tinggi-alkohol F (2,9) = 0,9032; p = 0,439; rendah alkohol F (2,9) = 3,825; p = 0,0628;
control F (2,9) = 1,032; p = 0,3948). Oleh karena itu untuk menentukan efek keseluruhan
pengobatan terhadap tingkat caspase-3, data yang runtuh di seluruh lapisan. Secara keseluruhan,
terdapat perbedaan yang signifikan antara kelompok alkohol (F (3,36) = 8,391; p = 0,0002) dengan
kelompok alkohol berkadar tinggi menampilkan secara signifikan menandai positif dari caspase-3
dibandingkan kontrol (p = 0,014) dan alcohol berkadar rendah (p <0,0001) kelompok (Tabel 1).
Kelompok alkohol rendah juga memiliki perubahan signifikan kurang caspase-3 daripada
kelompok kontrol (p = 0,038; Gambar 2).

Gambar 1. kronis alkohol tinggi (G-I) hasil dalam penipisan

dinding ventrikel kiri disertai dengan pembesaran lumen
ventrikel dibandingkan dengan usia yang sama dan
pasangan-makan alkohol rendah kronis (D-F) dan subyek
kontrol (A -C). Perbesaran 1,25 (A, D & G) 10 (B, E &
H) dan 20 (C, F & I) yang ditampilkan di atas; skala bar
= 5 mm, 500 m, dan 200 m masing-masing.
Gambar 2. Ada perubahan secara signifikan meningkat dari caspase peristiwa positif dalam
kelompok alkohol tinggi (D-F) dibandingkan dengan kontrol (A-C) dan hewan alkohol rendah (G-
I) di epicardial (A, D, G), miokard (B, E , H), dan endokardium (C, F, I) lapisan. Rendah alkohol
(G-I) ditampilkan peristiwa caspase signifikan lebih rendah positif dibandingkan dengan kedua
alkohol tinggi (D-F) dan kontrol (A-C). profil ImageJ dihasilkan secara inset pada setiap gambar.
Perbesaran 20 ditampilkan di atas; skala bar = 200 m. * P <0,05 dibandingkan dengan kontrol
dan HA; # P <0,05 dibandingkan dengan kontrol dan LA.

Tabel 1. Subjek kronis dari alcohol kadar rendah ditampilkan secara signifikan caspase-3 disertai
dengan pemendekan kecepatan meningkat dan shortening seluler puncak dibandingkan dengan
kontrol mata pelajaran. Kronis pelajaran alkohol tinggi yang ditampilkan secara signifikan
meningkat caspase-3 peristiwa dibandingkan dengan kontrol dan subjek alkohol rendah kronis. *
P <0,05 dibandingkan dengan kontrol; # P <0,05 dibandingkan dengan LA dan kontrol.

Efek dari rendah dan tingginya kadar alkohol pada kontraksi seluler dapat diuji pada kardiomiosit
yang terisolasi. Alkohol dengan dosis rendah meningkatkan kecepatan pemendekan seluler dengan
83,7% 0,24% (p = 0,0003) dengan LA subyek menampilkan kecepatan pemendekan seluler,
164,6 17,1 pM / s dibandingkan dengan 89,6 5,6 m / s untuk subjek kontrol. Selain itu, LA
meningkat shortening selular puncak dengan 92,4% 0,26% (p = 0,0001) dengan LA subyek
menampilkan puncak pemendekan seluler sebesar 10,2% 1,2% dibandingkan dengan 5,3%
0,3% untuk subjek kontrol (Gambar 3). Di sisi lain, tidak ada pengaruh yang signifikan dari HA
pada kecepatan kontraksi dibandingkan dengan kontrol mata pelajaran, dengan kecepatan
kontraksi sebesar 99,65 9,3 m / s (p> 0,05) untuk mata pelajaran HA (Tabel 1). Juga, puncak
pemendekan seluler tidak berbeda secara signifikan antara HA dan kontrol mata pelajaran, dengan
HA subjek menampilkan kontraksi seluler puncak 6,2% 0,6% (p <0,05). Selain itu, tidak ada
pengaruh yang signifikan dari alkohol pada relaksasi seluler dengan dosis baik.

Gambar 3. Pengaruh alkohol pada parameter kontraksi

kardiomiosit, kecepatan maksimal kontraksi seluler dan
shortening seluler, serta pada relaksasi seluler. * P <0,05
dibandingkan dengan kontrol.

3. Diskusi

Literatur ilmiah yang sudah lama dikenal bagus memaparkan bahwa paparan alkohol tinggi kronis
mendorong apoptosis pada sel jantung, kadar alkohol namun tampaknya rendah untuk memberikan
efek protektif tertentu pada kardiomiosit. Dengan demikian, kami berangkat untuk memastikan
tingkat positif caspase-3 dalam hati tikus yang terkena alkohol kadar tinggi, alcohol kadar rendah,
dan tidak ada alkohol (control) dengan melakukan analisis kontraktilitas imunohistokimia dan
kardiomiosit.

Setelah pemeriksaan histologi kotor kami mengamati penipisan dinding ventrikel kiri tikus dengan
kadar alcohol tinggi dibandingkan dengan kontrol dan tikus berkadar alcohol rendah. Analisis
imunohistokimia menunjukkan bahwa apoptosis tinggi dapat menyebabkan menipisnya ventrikel
kiri yang berhubungan dengan paparan alkohol tinggi kronis. Sebaliknya, paparan alkohol rendah
menyarankan mekanisme pelindung dengan penurunan yang signifikan dalam peristiwa apoptosis
dan peningkatan kontraktilitas yang dibuktikan dengan peningkatan kecepatan dan puncak di
shortening seluler.
Tingginya kadar alkohol dapat sangat beracun untuk sel miokardium dan sangat merusak struktur
mereka. Alkohol tinggi kronis juga dapat menyebabkan disk diselingi menjadi rapuh karena
kerusakan elemen kontraktil. Selain itu, dapat menyebabkan retikulum sarkoplasma untuk menjadi
edema dan meningkatkan deposisi lemak dalam sel. Tetesan lemak ini dapat dikelilingi oleh
butiran glikogen dan biasanya ditemukan di bawah sarcolemma. Juga, mitokondria dalam sel-sel
ini cenderung terlihat bengkak dan nyata kurang padat dengan krista. Alkohol kronis juga telah
terbukti menurunkan miosit proliferasi oleh up-mengatur ekspresi myostatin, faktor pertumbuhan
yang biasanya menurunkan regulasi selama pengembangan jaringan. Oleh karena itu, tidak
mengherankan bahwa peningkatan kadar myostatin telah diamati dalam miokardium individu yang
menderita kardiomiopati beralkohol. Penelitian lain terkait konsumsi alkohol kronis penurunan
tajam dalam ekspresi miokard IGF-1 jika dibandingkan dengan kontrol yang sehat. IGF-1 juga
memainkan peran yang sangat penting dalam proliferasi dan diferensiasi miosit jantung.
Selanjutnya, IGF-1 dapat berfungsi sebagai faktor anti-apoptosis karena dapat menghambat
aktivasi Bax dan caspases, serta fragmentasi DNA. Karena ini kita dapat melihat bagaimana
alkohol diinduksi penurunan IGF-1 dapat berakibat negatif kardiomiosit.

Berdasarkan studi yang dilakukan pada kardiomiosit tikus kami telah belajar bahwa peningkatan
jumlah alkohol dapat menyebabkan pelepasan kalsium dari retikulum sarkoplasma, menyebabkan
deplesi dan dengan demikian mengurangi kemampuan miokardium untuk menghasilkan kontraksi
yang tepat. Selain efek merugikan pada organel intraseluler dan homeostasis kalsium, asupan
alkohol kronis juga dapat menyebabkan hilangnya miosit di hati. Kerugian ini sama dari jaringan
dapat menjadi alasan untuk berkurangnya fungsi miokardium yang memanifestasikan disfungsi
sebagai ventrikel pada pasien dengan ACM. Proses utama yang berada di pusat fenomena ini
adalah apoptosis. Selanjutnya, disfungsi seluler akan berdampak tambahan pada fungsi jantung
secara keseluruhan. Dengan demikian kami telah menemukan bahwa LA ditingkatkan fungsi
jantung, yang berhubungan dengan caspase-3 tingkat rendah. Namun, HA tidak menampilkan efek
fungsional yang signifikan pada tingkat sel. Hal ini sesuai dengan karya terbaru dari Bebarova
(2010) menunjukkan bahwa efek penghambatan etanol pada saluran sodium hanya hadir pada
tingkat beracun dari 500 mM atau lebih besar. Selain itu, beberapa sel apoptosis dari hati HA
mungkin tidak bertahan isolasi seluler sebagai orang non-apoptosis yang bisa menutupi, sampai
batas tertentu, efek merugikan dari HA pada inotropy seluler. Jadi, kita berhipotesis bahwa paparan
alkohol tinggi kronis akan menyebabkan efek yang merugikan bagi jantung melalui curah hujan
diferensial apoptosis, sedangkan paparan kronis alkohol rendah akan meningkatkan fungsi jantung
melalui pencegahan apoptosis.

Proses awal molekul yang terjadi dalam apoptosis adalah pembukaan saluran Bax / Bak, yang
menghasilkan pelepasan sitokrom c dari mitokondria. Sitokrom hasil c rilis di pembentukan Apaf-
1 / caspase-9 apoptosome. Ini akan mengaktifkan caspase-9 yang pada gilirannya memotong dan
mengaktifkan caspase-3 dan caspase-7. Caspase-3 kemudian mengaktifkan caspases hilir yang
memainkan peran utama dalam apoptosis. Sementara caspase-9 mengaktifkan kedua caspase-3
dan caspase-7, penelitian sebelumnya telah menemukan bahwa capsase-3 menunjukkan aktivasi
yang lebih besar dari substrat hilir dibandingkan dengan caspase-7. Sebagai contoh, telah
menunjukkan bahwa caspase-3 memecah molekul pro-apoptosis Bid dan RIP1 dalam cara yang
jauh lebih efisien daripada caspase-7. Selain itu, caspase-3 lebih efisien di menyebarkan cascade
aktivasi caspase. Kegiatan ini peningkatan caspase-3 menjadikannya caspase algojo utama selama
fase penghancuran sel apoptosis. Selain itu, beberapa jalur apoptosis sel berkumpul di caspase-3,
menunjukkan keterlibatan diandalkan caspase-3 di apoptosis. Karena temuan ini penelitian kami
menggunakan caspase-3 sebagai penanda untuk apoptosis menyebabkan hilangnya cardiomyocyte
terlihat di ACM.

Sebaliknya, caspase-3 juga dapat berpartisipasi dalam jalur pro-hidup dengan mengaktifkan kinase
anti-apoptosis Akt. Hal ini dilakukan dengan pembelahan protein RasGAP. Caspases juga
bertindak atas substrat lain seperti p27KIP1, Lyn, synphilin-1, dan Rb dalam kapasitas anti-
apoptosis. Pengaruh caspase-3 sebagai molekul anti-apoptosis terjadi ketika caspase-3 hadir dalam
sel pada tingkat rendah. Yang jauh lebih tinggi caspase-3 tingkat seperti yang ditemui dalam
percobaan kematian sel yang luas kami terjadi. Dalam percobaan kami, fungsi data dan tingkat
caspase-3 ekspresi menunjukkan bahwa ada gagal jantung di kardiomiosit tikus, yang sugestif dari
aktivitas pro-apoptosis caspase-3.

Percobaan oleh Hajnczky et al., Telah menunjukkan efek negatif pada apoptosis mediator yang
terdapat pada hati tikus transgenik. Sebaliknya, setelah memberikan inhibitor caspase untuk tikus
dengan gagal hati, kontraktilitas ruang jantung meningkat. Sebuah studi oleh Guan et al.
menunjukkan bahwa kardiomiosit terkena tingkat tinggi alkohol dipamerkan pola pemukulan yang
tidak teratur, serta kematian sel yang proporsional dengan konsentrasi etanol. Penelitian ini juga
menunjukkan kehadiran peningkatan ROS di kardiomiosit ini. Selain itu, tingkat caspase-3
meningkat dan sitokrom c ditemukan tersebar di sitoplasma bukan terbatas di dalam mitokondria
di kardiomiosit terkena alkohol tinggi. Studi lain mencatat tingkat Bax ditingkatkan dan penurunan
kadar faktor anti-apoptosis seperti Bcl-2 protein dalam kardiomiosit terkena lingkungan alkohol
tinggi. Sangat penting bahwa kami menunjukkan bahwa bahkan peningkatan kecil dalam tingkat
kematian sel dalam hati manusia merupakan ancaman yang signifikan karena sebagian besar
kardiomiosit tidak meniru mengingat mereka parah sel dibedakan. Sementara mekanisme yang
tepat dimana penggunaan alkohol kronis memicu apoptosis masih sedang dipelajari kita tahu
bahwa stres oksidatif mempromosikan aktivasi PTP, yang mengatakan, itu menjadi lebih sensitif
terhadap konsentrasi kalsium. Ini bisa sangat baik menjadi kontributor untuk permeabilitas
dikompromikan dari membran mitokondria selama langkah awal dari jalur pro-apoptosis.

Data yang kami peroleh menawarkan bukti lebih lanjut dari peran apoptosis sebagai mekanisme
potensi kehilangan jaringan di kardiomiopati beralkohol. Kami mampu mengukur perbedaan yang
signifikan dalam jumlah positif caspase-3 peristiwa dilihat dalam hati tikus yang terkena tingkat
alcohol rendah dibandingkan alkohol kadar tinggi. Berdasarkan hasil, dapat disimpulkan bahwa
tingginya jumlah positif caspase-3, penanda diduga untuk apoptosis, yang terlibat dalam
perubahan merugikan diamati dalam hati alkoholik kronik yang menunjukkan cardiomyopathy.
Hilangnya apoptosis diinduksi jaringan jantung yang tak tergantikan akan bertanggung jawab
untuk fraksi ejeksi rendah dan akhir diastolik volume yang lebih tinggi diamati pada peminum
berat. Lebih penting lagi, kehilangan apoptosis ini jaringan juga akan bertanggung jawab untuk
penipisan dinding dan pelebaran ventrikel yang pada akhirnya menyebabkan gagal jantung pada
pasien ini jika pantang tidak dimulai segera. Di sisi lain, temuan klinis terbaru telah menunjukkan
bahwa orang dengan paparan moderat alkohol memiliki lebih baik hidup pasca-stroke
dibandingkan mereka yang tidak minum alkohol sama sekali. Oleh karena itu, kami berangkat
untuk menentukan signifikansi apoptosis dalam memediasi efek kardioprotektif aneh paparan
alkohol rendah. Percobaan kami menunjukkan sejumlah kecil peristiwa apoptosis dalam hati tikus
yang diberi makan dengan alkohol rendah daripada mereka yang telah tertelan tidak ada alkohol
sama sekali (tikus kontrol). Oleh karena itu, kita membiarkan diri kita untuk menyimpulkan bahwa
paparan alkohol rendah kronis averts apoptosis dan mempertahankan arsitektur myofilament
jantung dan integritas struktural dari dinding ventrikel. Hal ini sepertinya meningkatkan kapasitas
sel untuk bertahan hidup, yang merupakan langkah kunci dalam mencegah perkembangan gagal
jantung. Mekanisme yang efek positif terjadi masih merupakan teka-teki. Kami baru-baru ini
menghindari keterlibatan jalur PI3K / AKT, dengan NRF2 fosforilasi berikutnya.

4. Metode

Kelompok tikus wistar dewasa yang berkelamin laki-laki dengan berat antara 150 g dan 200 g dari
Harlan Laboratories (Madison, WI, USA) yang digunakan dalam penelitian ini (n = 6 / kelompok).
Tikus diizinkan untuk menyesuaikan diri dengan lingkungan baru mereka selama satu minggu
setelah akuisisi karena mereka disimpan di bawah siklus h cahaya 6:00 h untuk 18:00 dan diberikan
makanan dan ad libitum air. Berikut aklimatisasi, subjek ditempatkan pada diet isocaloric Lieber
Decarli cair di mana littermates dibagi menjadi kelompok: kontrol non-alkohol, alkohol rendah (5
mM) atau alkohol yang tinggi (100 mM) kelompok minum untuk 4-5 bulan ke depan. Semua
prosedur dan disetujui oleh Komite Kelembagaan Perawatan Hewan dan Penggunaan Howard
University.

4.1. Histologi

Setelah periode 4-5 bulan paparan alkohol, binatang dikorbankan dan hati mereka dibedah dan
siap untuk analisis histologi. Secara singkat, subjek sangat dibius di bawah isoflurane (0,5%) hati
itu perfusi dengan solusi buffer fosfat (PBS; 0,1 M pH 7,4). Puncak (rendah 1/3 dari jantung) telah
dihapus untuk analisis Western blot dan jaringan jantung yang tersisa adalah pasca-tetap dalam
paraformaldehyde 4% selama 1 minggu pada suhu 4 C. Hati kemudian cryoprotected dalam
solusi sukrosa bertingkat untuk minggu tambahan (10% -30% sukrosa), kemudian dibekukan di
isopentan pada -65 C dan disimpan pada -80 C. sampel jantung beku yang serial dipotong pada
jarak 1/5 pada 50 pM dalam cryostat mikroM. Salah satu seri lengkap itu Nissl-diwarnai dengan
cresyl-violet untuk pengamatan histologis kotor dan seri lainnya membelok di antigen
melestarikan.

4.2. imunohistokimia

Serangkaian tunggal bagian mengambang bebas telah dihapus dari antigen melestarikan dan dicuci
tiga kali dengan PBS untuk imunohistokimia batch. Secara singkat, bagian diblokir selama tiga
puluh menit di 3% yang normal serum kuda (NHS) di PBS. Bagian kemudian diinkubasi semalam
pada suhu kamar dalam kelinci anti-caspase-3 (1: 500; Sel Signaling, Danvers, MA, USA) dalam
memblokir solusi. Hari berikutnya, bagian dicuci di PBS dan diinkubasi selama satu jam dan
setengah dalam larutan yang mengandung kuda anti-kelinci antibodi sekunder (1: 200; Vector
Laboratories, Burlingame, CA, USA). Berikut satu set mencuci PBS, bagian diinkubasi selama 1,5
jam dalam avidin-biotin (ABC Elite Kit; Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) dan
divisualisasikan dengan diaminobenzidin (DAB) sebagai chromogen (Tab DAB cepat, Sigma-
Aldrich , St. Louis, MO, USA). Bagian yang kemudian dipasang pada kaca gelatinized dan
dibiarkan kering dalam semalam, dehidrasi dalam solusi alkohol dinilai, dibersihkan di xilena dan
coverslipped dengan permount.

4.3. Analisis citra

Bagian yang cocok dicitrakan menggunakan mikroskop Olympus pada 20 x pembesaran dengan
minimal 3 bagian per hewan dan 6 gambar / bagian / daerah (epikardium, endocardium, dan
miokardium). caspase-3 positif acara pada setiap foto dianalisis menggunakan software ImageJ
(NIH, Bethesda, MD, USA, ImageJ 1,49 ,. Untuk analisis setiap gambar diubah menjadi 8-bit
gambar hitam dan putih dan sejumlah fitur yang berubah dalam untuk membuat caspase-3 positif
peristiwa lebih mudah untuk memvisualisasikan dan menghitung. kontras ditingkatkan ke tingkat
piksel jenuh dari 0,0%. Selanjutnya kita dikurangi latar belakang menggunakan jari-jari bola
menggelinding dari 20 piksel. ambang batas didirikan sehingga program akan mengecualikan
caspase-3 peristiwa yang terlalu ringan dalam warna. ambang batas yang digunakan adalah 0-237.
ambang batas ukuran juga disesuaikan sehingga hanya partikel berukuran di atas 250 piksel ^ 2
yang masuk dalam hitungan. Akhirnya, partikel yang tetap dihitung oleh perangkat lunak dan
dipetakan pada representasi skematik mana mereka disorot dalam warna merah. nilai-nilai analisis
disimpan seragam untuk semua gambar terlepas dari tingkat alkohol atau wilayah dalam hati.

4.4. Persiapan Tikus kardiomiosit

Persiapan kardiomiosit dewasa dilakukan seperti yang dijelaskan sebelumnya (48). Setelah
anestesi, jantung dengan cepat dihapus, cannulated dan retrogradely perfusi (8 mL / menit) melalui
aorta selama 5 menit (teknik Langendorff) dengan kalsium yang mengandung larutan standar
Tyrode untuk komposisi sebagai berikut (mM): NaCl (140), KCl (5.4), HEPES (10), MgCl2 (1),
CaCl2 (1), d-glukosa (10), 37 C, pH seimbang untuk 7,4 dengan NaOH atau HCl. hati itu perfusi
dengan Ca2 + -gratis solusi Tyrodes standar untuk 5 menit. Setelah itu hati itu dicerna dengan
kolagenase solusi yang sama yang mengandung (tipe II, 0,55 mg / mL, Sigma-Aldrich, St. Louis,
MO, USA) dan protease (tipe XIV, 0,05 mg / mL, Sigma-Aldrich, St. Louis , MO, USA) selama
8-9 menit. Selanjutnya, larutan enzim telah dihapus oleh perfusi dengan Ca2 + -gratis larutan
Tyrode ini. Miosit kemudian disaring melalui nilon mesh dan kembali ditangguhkan dalam larutan
Tyrode dengan tambahan Ca2 + untuk konsentrasi akhir 1 mM. Ca2 + sel -tolerant digunakan
segera untuk studi akut.

4.5. Kontraksi seluler dan Relaksasi

Baru kardiomiosit terisolasi dirangsang pada 1 kHz menggunakan stimulator eksternal (Grass
Instrumen, Warwick, RI, USA). Untuk menentukan kontraksi seluler dan relaksasi, sel-sel miokard
yang dicitrakan menggunakan kamera video CCD melekat pada mikroskop dan gerak sepanjang
segmen garis yang dipilih adalah kuantitatif menilai dengan sistem motion video detektor
(IONOPTIX, Westwood, MA, USA). Pengukuran ini direkam dan dianalisis menggunakan
Ionoptix IonWizard 6.3 software (IONOPTIX, Westwood, MA, USA). Akuisisi kontraksi selular
dari kardiomiosit yang dilakukan selama 1 menit periode yang rata-rata menjadi satu rata-kedutan
melalui proses rata-rata ensemble. Setelah pengaturan dasar dan asimtot eksponensial pada rata-
kedutan, seluler puncak shortening ditentukan oleh perbedaan antara panjang seluler sebelum dan
selama kardiomiosit shortening. The kecepatan kontraksi dan relaksasi ditentukan oleh alat
kelengkapan eksponensial terpisah dari peristiwa ini menggunakan iterasi kuadrat untuk
menghitung perubahan maksimal dan minimal panjangnya per satuan waktu (+ dL / dt dan -dL /
dt), masing-masing, dengan menggunakan software IonWizard.

4.6. Analisis statistik

Analisis kelompok (pengobatan dan area) dilakukan dengan menggunakan analisis varians
(ANOVA) diikuti oleh Mahasiswa T-test menggunakan program statistik InStat.

5. Kesimpulan

Data yang disajikan di sini menunjukkan bahwa paparan alkohol rendah kronis averts apoptosis
dan mempertahankan arsitektur myofilament jantung dan integritas struktural dari dinding
ventrikel menyebabkan peningkatan kontraktilitas. Sebaliknya konsumsi alkohol tinggi kronis
yang disebabkan efek jantung merugikan tampaknya diprakarsai oleh apoptosis menyebabkan
penipisan dinding ventrikel. Rupanya alcohol tidak selalu memiliki dampak negative. Terbukti
dari penelitian tersebut, memang benar alcohol memiliki dampak negative apabila dikonsumsi
dengan kadar alcohol yang tinggi. Namun, apabila dikonsumsi dalam kadar yang rendah dapat
bermanfaat juga bagi tubuh seperti dapat mengurangi penyakit kardiovaskular walau
mekanismenya masih belum dapat dipahami. Di sisi lain, temuan klinis terbaru juga menunjukkan
bahwa orang dengan paparan moderat alkohol memiliki hidup yang lebih baik pasca-stroke
dibandingkan mereka yang tidak minum alkohol sama sekali.

6. Manfaat Aplikasinya Bagi Indonesia

Alkohol yang konon diketahui berdampak negative bagi tubuh ternyata memiliki dampak positif
bagi kesehatan yang dimana sangat jarang diketahui oleh warga Indonesia itu sendiri, terlebih lagi
Indonesia merupakan Negara yang mayoritasnya beragama muslim yang tentunya dilarang untuk
mengkonsumsi alcohol. Namun, untuk beberapa orang yang tidak dilarang untuk meminumnya,
dapat menggunakan alcohol untuk pencegahan penyakit namun alcohol itu sendiri tidak boleh
diminum dalam kadar yang tinggi. Berikut adalah manfaat alcohol bagi kesehatan :

A. Mengurangi Tekanan Darah

Jika alkohol dikonsumsi dalam dosis yang cukup rendah diketahui sangat efektif membantu
mengurangi tekanan darah yang tinggi. Dalam hal ini alkohol akan bekerja membersihkan
timbunan lemak pada pembuluh arteri dan sekaligus mengurangi pembekuan darah yang terjadi.
Hal ini berarti risiko penyakit jantung dan juga serangan jantung bisa ditekan. Manfaat yang luar
biasa pastinya terlebih setelah mengetahui penyakit jantung menjadi salah satu jenis penyakit
mematikan yang patut dihindari. Ingat untuk tidak mengonsumsi alkohol secara berlebihan meski
ada manfaat untuk tubuh. Jika Anda mengkonsumsi alkohol dalam dosis berlebih efeknya malah
bisa mengundang sejumlah dampak negatif dan mengganggu reaksi obat yang dikonsumsi.

B. Meminimalisir Risiko Stroke

Manfaat alkohol selanjutnya yaitu dapat meminimalisir risiko penyakit stroke. Namun, tentu
manfaat ini bisa didapat selama pengonsumsian alkohol masih dalam batasan wajar. Adapun jenis
stroke iskemik menjadi salah satu jenis stroke yang paling umum menyerang. Jenis stroke yang
satu ini diketahui disebabkan karena adanya penyumbatan pada pembuluh darah yang menuju
organ otak. Sementara jenis stroke yang lain yaitu stroke hemoragik yang terjadi akibat darah
merembes atau bocor dan keluar dari pembuluh darah dalam otak. Tentu selama risiko stroke bisa
dicegah dan di minimalisir, upaya yang bisa dilakukan harus dicoba dan salah satunya dengan
mengambil alkohol. Sangat menarik bukan mengupas tentang khasiat alkohol dalam kehidupan
sehari-hari.

C. Membantu Memperbaiki Kualitas Tidur

Manfaat alkohol dalam kehidupan sehari-hari selanjutnya yaitu dapat membantu memperbaiki
kualitas tidur malam. Pastinya manfaat ini bisa membantu Anda yang sering mengalami gangguan
susah tidur atau insomnia. Hal ini tidak lain karena efek mengantuk yang diberikan alkohol pada
tubuh manusia. Untuk mendapatkan manfaat ini bisa dicoba dengan menonsumsi alkohol sesuai
dengan dosis yang dianjurkan oleh dokter. Diketahui dosis yang aman dan dianjurkan untuk
membantu memperbaiki kualitas tidur tidak lebih dari satu gelas.

D. Menjaga Kesehatan Kardiovaskular

The School of Public Health di Harvard University menemukan bahwa alkohol dalam jumlah
terkontrol dapat meningkatkan kadar HDL (high density lipoprotein) atau kolesterol baik dan
tingkat HDL yang lebih tinggi terkait dengan perlindungan yang lebih besar terhadap penyakit
jantung. Konsumsi alkohol dalam jumlah sedang juga telah dikaitkan dengan perubahan yang
bermanfaat mulai dari sensitivitas insulin yang lebih baik untuk perbaikan dalam faktor-faktor
yang mempengaruhi pembekuan darah. Proses ini sangat penting untuk mencegah pembentukan
gumpalan darah kecil yang dapat memblokir arteri di jantung, leher, dan otak, penyebab utama
banyak serangan jantung dan stroke.

E. Meningkatkan Kehangatan Tubuh

Sudah tentu manfaat ini akan anda peroleh otomatis ketika mengkonsumsi alkohol, tubuh akan
terasa hangat. Alkohol telah lama digunakan di berbagai negara eropa dengan intensitas musim
dingin yang tinggi untuk menghangatkan badannya.

F. Meningkatkan Libido
Terkait dengan libido, ternyata alkohol dapat mengurangi kemungkinan disfungsi ereksi sebesar
25-30%.

G. Mengurangi batu Ginjal

Studi yang dilakukan oleh peneliti dari University of East Anglia, menemukan bahwa konsumsi
alkohol dalam batas normal dapat menekan terjadinya batu ginjal. Itulah beberapa manfaat alkohol
dalam kehidupan sehari-hari. Tentu manfaat alkohol tersebut bisa diperoleh jika digunakan sesuai
dengan batasan dan porsi yang dianjurkan. Adapun jika dikonsumsi secara berlebihan hanya akan
menyebabkan sejumlah gangguan dan efek negatif. Salah satunya menyebabkan gangguan
dehidrasi. Seorang pemabuk berat cenderung mengalami dehidrasi karena sering merasa buang air
kecil. Hal ini tentu tidak lain disebabkan karena pengonsumsian alkohol yang berlebihan, dimana
alkohol memiliki sifat diuretik yang dapat mendorong keluarnya air dari dalam tubuh secara lebih
cepat. Jika alkohol diminum terus-menerus dampak diuetik yang dirasakan tubuh bisa semakin
berbahaya. Sekian ulasan tentang manfaat alkohol kali ini. Semoga bisa memberi tambahan
informasi yang bermanfaat dan berguna bagi Anda.