Satu koloni besar Escherichia coli
Campuran
strain DH 5 pada media cawan
diambil menggunakan tusuk gigi
dan dimasukkan ke dalam 500 L
TFB pada tabung ependorf.
Pelet ditambahkan TFB
sebanyak 250 L.
Campuran tersebut
disuspensikan secara
perlahan menggunakan
pipet.
Tabung ependorf disimpan
di dalam es selama 20
menit.
Campuran pada tabung
ependorf tersebut di-heat
shock pada suhu 420C
selama 45 detik.
Campuran pada tabung
ependorf tersebut
disebar pada media LA
yang ditambahkan
ampisilin 100 mg/L.
Media diinkubasi pada
suhu 370C overnight.
Tabung ependorf (berisi
campuran bakteri dan
tersebut
TFB) disimpan di dalam es
disuspensikan
selama 10 menit.
secara
perlahan.
Tabung ependorf
Supernatan hasil
disentrifugasi 10000 rpm
sentrifugasi dibuang .
selama 5 menit pada suhu
40 C.
Tabung ependorf Sebanyak 10 L DNA (10-
disimpan di dalam es 50 ng/ L) diambil dan
selama 10 menit. dimasukkan ke dalam
tabung ependorf.
Sebanyak 50 L sel
Campuran tersebut kompeten ditambahkan
disuspensikan secara ke dalam tabung
perlahan. ependorf.
Tabung ependorf disimpan Sebanyak 100 L media
di dalam es selama 5 LB ditambahkan ke dalam
menit. tabung ependorf.
Campuran pada tabung
Campuran pada tabung
ependorf beberapa
ependorf tersebut di-
kelompok ditambahkan
shaker pada suhu 200C
50 L x-gal dan 10 L
selama 20 menit pada
IPTG untuk seleksi biru
200 rpm.
putih.