Extended-Spectrum Beta-Lactamase dan AmpC Beta-lactamase Mediated Resistance di Escherichia coli

Abstrak

Perkembangan resistensi antibiotik pada bakteri berikut pengenalan zat antimikroba telah muncul sebagai masalah medis penting
di seluruh dunia. Resistensi antibiotik telah membuat pengobatan penyakit menular merupakan tantangan global. Penelitian
dilakukan untuk mendeteksi Extended Spectrum Beta-Lactamase (ESBL) dan Amp C Beta-laktamase dimediasi resistansi
Escherichia coli . Dua belas isolat dikumpulkan dari Universitas Port Harcourt, departemen Mikrobiologi; sembilan dari 12
diidentifikasi sebagai E. coli setelah seri uji biokimia. Uji kepekaan antimikroba dilakukan pada semua isolat yang menggunakan
metode difusi cakram. Resistansi antimikroba tingkat tinggi diamati pada organisme uji melawan Augmentin dan Ampicillin.
Skrining awal ESBL, uji konfirmasi fenotip ESBL dan uji sinergi disk ganda dilakukan pada semua isolat untuk mendeteksi
produsen ESBL. Hasil yang diperoleh dari penelitian ini menunjukkan bahwa 5 (55,5%) dari sembilan isolat E. coli dipastikan
menjadi produsen ESBL. Produksi AmpC terdeteksi hanya pada satu isolat E. coli yang dari usapan luka. Studi ini
mengungkapkan tingkat tinggi ESBL- memproduksi E. coli dari spesimen klinis. Studi lebih lanjut harus dilakukan dengan
menggunakan metode molekuler untuk mendeteksi gen ESBL dan rentang E.coli yang lebih luas dari sumber yang berbeda yang
digunakan

1. Pendahuluan

Antibiotik selalu dianggap salah satu keajaiban penemuan abad ke-20. Pentingnya dan nilai antibiotik tidak bisa terlalu
ditekankan; antibiotik digunakan untuk mengobati penyakit menular yang disebabkan oleh mikroorganisme. Saat ini ada
peningkatan resistensi antibiotik di rumah sakit, masyarakat, dan lingkungan disebabkan karena penggunaannya. Berdasarkan
kenaikan resistensi antibiotik penyakit menular sangat sulit untuk diobati. Baru-baru ini WHO menyatakan resistensi antibiotik
adalah masalah kesehatan di seluruh dunia, sekitar 70% dari bakteri yang menyebabkan infeksi resisten terhadap antibiotik.
Setidaknya salah satu obat yang paling sering digunakan untuk pengobatan termasuk Escherichia coli yang telah muncul sebagai
salah satu penyebab paling signifikan dari kedua nosokomial dan infeksi yang didapat oleh masyarakat. -laktam, terutama
sefalosporin spektrum luas, karbapenem dan antibiotik flouroquinolones merupakan terapi utama pilihan untuk mengobati infeksi
yang disebabkan oleh patogen ini. Extended spectrum -lactamases (ESBLs) adalah kelas enzim A yang memiliki kemampuan
menghidrolisis generasi ketiga sefalosporin (ceftriaxone, sefotaksim, dan ceftazidime) namun dihambat oleh asam klavulanat.
Sebagian besar produsen ESBL rentan terhadap cefoxitin dan cefotetan tapi mereka tidak aktif melawan cephamycins.
Kemampuan E. coli untuk menghasilkan ESBL dan AmpC miliki telah ditunjuk sebagai salah satu alasan munculnya
resistensi obat terhadap Escherichia coli . Laktamase beta adalah enzim yang memiliki kemampuan untuk menghancurkan cincin
laktam beta dari kebanyakan antibiotik beta laktam. Beta-laktamase laktam spektrum lambung hidrolet kecil, luas atau panjang
antibiotik. Extended spectrum beta-laktam (ESBL) memiliki resistensi terhadap kebanyakan antibiotik beta laktam, termasuk
penisilin, sefalosprins, dan monobaktam aztereonam meninggalkan karbapenem sebagai agen antimikroba terbaik untuk infeksi
yang disebabkan enzim ESBL. Penggunaan ekstensif dari antibiotik baik obat manusia maupun untuk tujuan pertanian, terutama
dalam pencegahan dan pertumbuhan penyakit. Promosi dalam produksi hewan adalah penyebab yang cukup besar dari seleksi
dan prevalensi resistensi antibiotik E.coli.
Spesies Escherichia sangat adaptif, enterik Bakteri berbentuk batang gram negatif yang termasuk dalam keluarga
Enterobacteriaceae Mereka berbentuk batang dan tidak membentuk spora. Ada enam spesies, yang mana empat yaitu:
Escherichia coli , Escherichia fergusoni, Escherichia hermanii, dan kerentanan Escherichia diketahui menyebabkan penyakit.
Penghasil Enfield Energenobacteraceae ESBL telah bertanggung jawab atas banyak wabah infeksi di seluruh dunia dan
menimbulkan masalah pengendalian infeksi yang menantang. Data hasil klinis menunjukkan bahwa ESBL secara klinis
signifikan dan bila terdeteksi mereka menunjukkan kebutuhan akan penggunaan agen antimikroba yang sesuai. Sayangnya,
deteksi laboratorium ESBL bisa rumit dan pada kali, menyesatkan ESBL dan AmpC -laktamase adalah pertama kali dijelaskan
pada tahun 1983 (Jerman) dan 1988 (India), masing-masing . Pilihan antibakteri sering dipersulit oleh multi tahan Banyak
organisme penghasil ESBL juga mengekspresikan AmpC beta-laktamases dan dapat ditransfer bersama resistensi aminoglikosida
dimediasi plasmid. AmpC beta-laktamase tipe adalah kelompok enzim lainnya yang umumnya terisolasi dari spektrum yang
diperluas bakteri gram negatif sefalosporin. AmpC beta-laktamase biasanya dikodekan pada kromosom dari banyak bakteri Gram
negatif termasuk Escherichia coli, Citrobacter freundii dan Enterobacter spp , tapi bisa terlihat pada plasmid. AmpC beta-
laktamase, sebaliknya untuk ESBL, spektrum hidrolis luas dan diperpanjang sefalosporin namun tidak dihambat oleh asam
klavulanat atau penghambat beta-laktamase. Dalam beberapa tahun terakhir, bakteri resisten terhadap beta-laktam antibiotik telah
meningkat drastis . Kontribusi Untuk peningkatan ini telah terjadi penyebaran enzim ESBL itu Menghidrolisa spektrum luas
sefalosporin, seperti ceftazidim dan sefotaksim . Laktamase AmpC beta pertama terdeteksi pada
1940, meskipun pada saat itu disebut penisilinase Bakteri penghasil AmpC memiliki spektrum yang lebih luas resistensi dari
bakteri penghasil ESBL. Lanjut ke hidroksilasi penisilin, sefalosporin spektrum luas dan sefalosporin spektrum diperpanjang ke-3
generasi sefalosporin (tapi bukan generasi ke 4 sefalosporin). Sintesis beta- laktamase adalah baik kromosom yang ditunjuk
sebagai konstitutif, (seperti pada Pseudomonas aeruginosa ) atau plasmid inducible dimediasi seperti pada Aeromonas
hydrophila , Enterobacteriaceae dan Staphylococcus aureus . Pada bakteri Gram positif, beta-laktamase disekresikan sebagai
exo-enzymes ke lingkungan membran luar. Namun, di Gram bakteri negatif mereka menetap di ruang periplasmik dan Serang
antibiotik sebelum bisa mencapai targetnya. Plasmid adalah penyebab utama penyebaran bakteri perlawanan. Ini karena bisa
ditransfer antar Bakteri gram negatif melalui konjugasi dan antara Gram bakteri positif oleh virus bakteri yang disebut
transducing fag Konsekuensi dari transferability ini meliputi banyak wabah perlawanan yang diperparah kemana
Tindakanpengendalian infeksi yang tidak tepat telah diikat. Munculnya resistensi antibiotik pada Escherichia coli telah dikaitkan
dengan kemampuannya untuk menghasilkan Beta Enzim laktamsa termasuk ESBL dan AmpC Beta Resistensi yang dimediasi
laktamase meningkat secara klinis keprihatinan global. Coudron melakukan penelitian di kejadian dan deteksi beta laktamase
AmpC di antara E. coli, Klebsiella pneumonia dan Proteus mirabilis di pusat medis veteran. Sebanyak 1.286 isolat diuji 683 E.
coli , 371 K. pneumonia dan 232 P. mirabilis isolat. 13 (1,9%), 28 (7,6%) dan 4 (1,7%), masing-masing, band AmpC
menunjukkan. Resistensi Cefoxitin adalah dipindahkan dari semua kecuali 8 ( E. coli ) dari 16 AmpC produsen. Penelitian ini
dilakukan untuk mendeteksi ESBL dan AmpC Beta-laktamase yang dimediasi resistansi Isolat Escherichia coli berasal dari
klinis.

2. Bahan-bahan dan metode-metode

2.1. Sampel Koleksi dan isolasi E.coli

Sebanyak 12 isolat dikumpulkan dari Mikrobiologi laboratorium Universitas Port Harcourt. Semua Isolat di kultur pada Eosin
methylene blue Agar sesuai spesifikasi pabrik; piring itu diinkubasi pada suhu 37 C selama 24 jam. Setelah itu dilakukan
pengujian biokimia untuk mengetahui strain Escherichia coli.

2.1.1. Identifikasi Karakterisasi Escherichia coli dan Identifikasi Escherichia coli

Isolat bakteri ditanam pada Eosin Metylene Agar Biru (LAB M), kemudian dikultur menjadi nutrisi Agar (LAB M). E. coli
ditandai dan diidentifikasi berdasarkan motilitasnya, morfologi mikroskopik, kolonial morfologi dan karakterisasi biokimia
seperti yang dijelaskan dalam manual laboratorium medis untuk negara-negara tropis dan mengacu pada manual Bergey
bakteriologi sistemik .

2.2. Uji Resistensi Antibiotik

Resistensi ditentukan oleh metode difusi cakram Kirby Bauer seperti yang dijelaskan oleh Komite Nasional untuk Standar Klinis
dan Laboratorium. Bakteri itu tumbuh pada kaldu nutrisi pada suhu 37 C semalam. Suspensi secara visual disesuaikan dengan
kadar garam normal yang sama dengan 0,5 standar kekeruhan Mac Farland. Inokulum itu mengusap seluruh permukaan agar
Mueller Hinton piring (Biotech) menggunakan tongkat steril dan piringnya diputar sekitar 60 C antara melesat untuk
memastikan sebuah distribusi yang merata. Piring yang diinokulasi dibiarkan berdiri minimal 3 menit, tapi tidak lebih dari 15
menit sebelum disk diterapkan. Antibiotik komersial Disk yang digunakan meliputi: Ceftazidime (30ug), Cefuroxime (30ug),
Gentamisin (10ug), Ciprofloxacin (5ug), Ofloksasin (5ug), Amoksisilin / Clavulanate (30ug), Nitrofurantoin (300ug), ampisilin
(10ug), (TOKU-E, USA). Piring diinkubasi dalam waktu 15 menit setelah penerapan disk pada suhu 37 C selama 18 sampai 24
jam. Diameter zona penghambatan sekitar disk diukur dan ditafsirkan sesuai ke dalam panduan NCCLS . Isolat dipertimbangkan
sebagai multidrug resistance (MDR), saat itu menunjukkan resistansi untuk 3 agen antimikroba .

2.3. Deteksi Extended Spectrum Beta Laktamase

Untuk deteksi ESBL, tiga metode: CLSI metode penyaringan, metode konfirmasi fenotip CLSI dan metode sinergis difusi disk
ganda digunakan.

2.3.1. Tes skrining untuk ESBL

Cakram Ceftazidim, ceftriaxone dan sefotaksim dimasukkan dalam media agar Mueller Hinton sesuai jarak. Pelat diinkubasi
aerobik dalam semalam (18-24 jam / 35 C). Isolat menunjukkan zona penghambatan ukuran 22 mm dengan ceftazidime (30
g), 25 mm dengan cefriaxone (30 g) dan 27 mm dengan sefotaksim (30 g) diidentifikasi sebagai produsen ESBL potensial
tercantum pendek untuk konfirmasi produksi ESBL .

2.3.2. Phenotypic Confirmatory Test untuk ESBL

Strain yang diduga merupakan penghasil ESBL oleh Metode penyaringan dikonfirmasi untuk produksi enzim dengan metode
diffuseusion diskriptif fenotipik. Ceftazidime disk tanpa asam klavulanat dan ceftazidime dengan disk kombinasi asam klavulanat
ditempatkan pada piring yang sama Pelat dengan disk diinkubasi aerobik semalam (18-24 jam / 35 C). Isolat menunjukkan
peningkatan ukuran zona 5mm atau lebih sekitar ceftazidime dengan asam klavulanat dibandingkan dengan ceftazidime saja
dipastikan menjadi produser ESBL. Tidak ada peningkatan zona yang mengindikasikan ESBL non-producer isolat .

2.3.3. Tes Sinergi Double Disc (DDST)

Metode uji sinergi disk ganda (DDST) dijelaskan oleh CLSI (2013) dipekerjakan. Inokulum standar organisme uji diinokulasi
pada Mueller Hinton Agar (MHA) (BIOTECH, Inggris) menggunakan stik steril. Amoxicillin / clavulanic acid disc (20 / 10g,
TOKU-E, USA) ditempatkan di pusat MHA yang diinokulasi. Ceftazidime (30ug, TOKU-E, USA) dan Cefotaxime (30ug,
TOKU-E, USA) ditempatkan 15mm ke pusat pusat dari cakram asam amoksisilin / klavulanat. Itu Pelat diinkubasi pada suhu 37
C selama 24 jam. Setelah inkubasi, peningkatan zona penghambatan salah satu atau baik cakram Ceftazidime dan Cefotaxime
terhadap Amoksisilin / piringan asam Clavulanic menunjukkan adanya ESBL produksi.

2.4. Deteksi AmpC Beta-laktamase Produksi

2.4.1. Metode Difusi Disk

Tes Double Disk Synergy dilakukan dengan menggunakan CLSI Metode 2013 Plat Mueller Hilton Agar diinokulasi dengan
suspensi inokulum standar uji organisme, dibiarkan selama 15 menit sebelum cakram mengandung 30ug cefoxitin dan 400ug
asam boronik ditempatkan pada masing pelat inokulasi 20mm-25mm terpisah. Itu piring diinokulasi pada suhu 37 C selama 18
jam. Organisme itu yang menunjukkan 5 mm atau lebih besar zona 5mm di sekitar disk yang mengandung asam cefoxitin dan
boronic dibandingkan dengan disk yang mengandung cefoxitin dianggap sebagai AmpC produsen.

3. Hasil dan Pembahasan

3.1. Dua belas isolat diperoleh dari Universitas rumah sakit Port Harcourt Teaching. Sembilan dari isolat diidentifikasi sebagai
Escherichia coli setelah rangkaian Uji biokimia yang meliputi dindol, sitrat, motilitas, TSIA, tes Metil Merah dan tes Voges
Proskauer. Tabel 1 menunjukkan hasil rinci uji biokimia untuk sembilan isolat.

Tabel 1. Hasil Uji Biokimia

3.2. Distribusi Resistensi Antibiotik di antara E. coli Isolat

Semua isolat diperiksa untuk ketahanan terhadap enam antibiotik. Berbagai tingkat resistensi diperhatikan dengan beragamnya
kelompok agen antimikroba yang digunakan seperti ditunjukkan pada Grafik 1 . Semua isolat menunjukkan kerentanan terhadap
Ceftazidime (30ug),
Cefuroxime (30ug), Gentamicin (10ug), Ciprofloxacin (5ug), Ofloxacin (5ug), Amoksisilin /Clavulanat (30ug), Nitrofurantoin
(300ug), Ampisilin (10ug). Resistansi tinggi ditemukan di Amoxicillin / clavulanate dan Ampicillin. Persentase hasil
suseptibilitas ditunjukkan pada Grafik 1 .

3.3. Prevalensi Extended Spectrum Beta-laktamase dan AmpC di antara Escherichia coli
Isolat Extended spectrum dan AmpC beta-lactamase ini terdeteksi selama analisis isolat. Di antara isolat 7 (77,8%) positif untuk
ESBL dan 1 (11,1%) positif untuk AmpC seperti yang ditunjukkan pada Table 2 . Prevalensi itu ditampilkan di ESBL lebih dari
AmpC ( Grafik 2 ) .
Tabel 2. Distribusi beta-laktamase spektrum diperluas dan AmpC diantara isolat Escherichia coli

Grafik 1. Persentase kerentanan isolat Escherichia coli terhadap antibiotik uji

Grafik 2. Persentase Produksi ESBL dan AmpC di antara isolat Escherichia coli

Pelat 1. Perbandingan produksi Beta-laktamase Escherichia coli isolat

Plate 2. Uji sinergi diskrit positif dan negatif

Pelat 3. Uji difusi disk Amp Amp positif dan negatif Escherichia coli mengisolasi

Munculnya strain bakteri multi-drug resistant di rumah sakit dimana penggunaan antibiotik sering terjadi dan Pasien dalam
kondisi kritis adalah kekhawatiran yang terus meningkat . Beberapa penelitian telah dilakukan untuk menilai kerentanan patogen
bakteri terhadap antibiotik yang berbeda. Sebuah penelitian surveilans in vitro dilakukan di Saudi Arab untuk menilai
polakepekaan antibiotik di antara E. coli isolat. Intimen isolat lebih mungkin tahan antibiotik dibanding isolat rawat jalan, seperti
yang diamati pada pola resistensi terhadap ampisilin (63% pada pasien rawat inap, 50% pada pasien rawat jalan),
sulfamethoxazol (44% pada pasien rawat inap, 30% pada pasien rawat jalan), dan ciprofloxacin (33% pada pasien rawat inap,
14% pada pasien rawat jalan). Temuan ini mengungkapkan bahwa ada resistansi luas terhadap sebagian besar antibiotik yang
tersedia . Juga studi kerentanan dilakukan di California Universitas secara prospektif mengumpulkan 255 isolat E. coli
menunjukkan 22% ketahanan terhadap trimetoprim-sulfametoksazol. ESBL secara klinis penting karena mereka menghancurkan
sefalosporin, diberikan sebagai agen lini pertama ke banyak orang pasien sakit . Pilihan terapeutik untuk infeksi yang disebabkan
oleh produsen ESBL juga menjadi semakin terbatas . Resistansi spektrum luas meningkat keprihatinan dan mengharuskan
penggunaan terbatas diperpanjang-spektrum sefalosporin, dan percobaan lain yang sesuai alternatif . Dalam penelitian ini, 77,8%
isolat E. coli positif untuk skrining ESBL menggunakan sefotaksim, ceftazidime dan ceftriaxone 30 g setiap cakram sebagai
agen screening awal yang kemudian dikenai tes konfirmasi. Faktor yang bisa mengganggu hasil tes termasuk penempatan disk,
benar penyimpanan cakram clavulanic dan kinerja yang sesuai tes kontrol karena sangat penting untuk sensitivitas DDST Tes
double disk bisa kurang sensitif karena masalah jarak cakram yang optimal dan benar penyimpanan asam klavulanat yang
mengandung cakram melakukan penelitian di rumah sakit umum 900+ bed, dari Mei sampai September 2007, di Iran, untuk
menentukan prevalensi ESBL memproduksi E. coli dan K. pneumonia dan pola antimikroba mereka. Hasil yang diperoleh dari
penelitian mereka menunjukkan 100 K. pneumonia dan 106 E. coli isolat rentan terhadap imipenem. Dari Wanita isolat (136),
59,5% dan (70) 58,6% merupakan produksi ESBL kelompok. Produksi AmpC tingkat tinggi biasanya terkait dengan resistansi
in-vitro terhadap sefalosporin generasi ketiga dan cephamycins. Sehubungan dengan ini, klinis tinggi kegagalan pengobatan
dengan sefalosporin spektrum luas telah didokumentasikan . Dalam studi ini AmpC Produksi -laktamase dikonfirmasi dalam 1
(11,1%) dari 9 isolat dan 8 sisanya tidak terdeteksi dan ini sesuai dengan hasil Shayan dan Bokaeian di studi mereka tentang
Deteksi ESBL dan AmpC-producing E. coli dari infeksi saluran kemih di Irak .

4. Kesimpulan

Enzim ESBL dan AmpC -laktamase telah dilakukan meningkatkan kepentingan berdasarkan kemampuan mereka untuk
menengahi resistensi pada kebanyakan bakteri. Ada kebutuhan untuk benardan uji fenotipik yang andal untuk mengidentifikasi
AmpC - laktamase dan untuk membedakan antara AmpC dan ESBL produsen. Juga, produksi ESBL dan AmpC pemantauan
dianjurkan untuk menghindari kegagalan pengobatan dan untuk pengendalian infeksi yang sesuai. Beberapa ESBL dapat
mencapai a tingkat yang dapat dideteksi dengan tes difusi disk yang bisa mengakibatkan kegagalan pengobatan pada pasien yang
terinfeksi.