TUGAS INDIVIDU

FARMASI KELAUTAN

OLEH :

MUH.ISRAWAN AZIS

NIM. O1A1 14 028

JURUSAN FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS HALU OLEO

KENDARI

2017
TUGAS
Effects of Melophlins on Colony Formation of Chinese Hamster V79 Cells and IL-8
Production in PMA-stimulated HL-60 Cells

a. Pendahuluan
Spons (porifera) adalah hewan yang sangat primitif dan diperkirakan telah
ada sejak 700-800 juta tahun lalu dan sekitar 15.000 spesies terdapat di laut
[Belarbi, dkk, 2003). Spons memperoleh makanan dengan cara filter feeder
sehingga besar kemungkinan mikroorganisme dapat hidup bersimbiosis dalam
tubuhnya (Ralph, 1998). Spons juga memproduksi senyawa toksik dan
senyawa-senyawa lain untuk mencegah serangan predator (Pawlik dkk, 2002).
Lebih dari 10 % spesies spons laut juga menunjukkan aktivitas sitotoksik
(Zhang dkk, 2003).
Halichondrin B yang pertama kali diisolasi dari spons Halichondria idai
Jepang juga menunjukkan aktivitas sitotoksik terhadap sel Leukemia P-388,
B-16 lllltanoma dan sel leukemia L-1210 in vivo. Senyawa tersebut dalam
percobaan praklinik di NCI (Faulkner, 2000). Senyawa lain dari golongan
asetilenik alkaloid baru yaitu Lembehyne dari spons Leucetta sp. sangat
aktif sitotoksik dengan nilai Cso 2.5 µg/mL terhadap sel NBT-T2 (Hermawan,
et.al. 2011). Senyaw terpen Chromodorolide A, 8, dan C terpenoid yang diisolasi
dari spons Aplysilla suph signifikan juga menunjukkan aktivitas sitotoksik
terhadap sel leukemia P388 (Run 2004). Senyawa alkaloid indol seperti 5-
bromo-L-triptofan yang diisolasi. Smenosponsia sp asal Philipina juga
memberikan aktivitas sitotoksik. (Tasdemir), Pada spons genus Melophlus asal
Palau telah diisolasi 4 senyawa baru turunan a dengan nama Melophlins P, Q,
R, dan S bersama dengan 7 senyawa Melophlins diketahui yaitu A, D, E,G,
H, I dan O dengan struktur molekul seperti pada Gambar l (Jinzhong,
et.al., 2006).
b. Klasifikasi sponge

Kingdom: Animalia
Subkingdom: Parazoa
Filum: Porifera
Kelas: Demospongiae
Ordo: Astrophorida
Famili: Ancorinidae
Genus: Melophlus
Melophlus
Spesies:
sarasinorum
(WoRMS Porifera: World Porifera Database. Soest R. van (ed), 22 Oktober 2008)
c. Senyawa kimia

spons genus Melophlus telah diisolasi 4 senyawa baru turunan a dengan

nama Melophlins P, Q, R, dan S bersama dengan 7 senyawa Melophlins
diketahui yaitu A, D, E,G, H, I dan O dengan struktur molekul seperti
pada Gambar l (Jinzhong, et.al., 2006). Hasil uji spesifik dan identifikasi
dengan FTIR menunjukkan bahwa spons Melophlus sarasinontm mengandung
kelompok metabolit sekunder steroid, alkaloid dan fenolik. (firdaus, 2013)

d. Efek farmakologi
Senyawa 1-11, kecuali 8, menunjukkan aktivitas penghambatan pertumbuhan sederhana
terhadap sel leukemia murine L1210 [Xu, 2006]. Melophlins A (5) dan B (memiliki rantai
alkil C11 dan dua gugus metil pada C-5α dan C-9) dilaporkan memiliki sitotoksisitas sedang
terhadap HL-60 dan menangkap fibroblas NIH3T3 pada fase G1 dari siklus sel, Melophlins A
(1) dan B (2) menunjukkan aktivitas sitotoksik [Aoki,2006].

e. Mekanisme kerja
Melophlins A (1) dan B (2) menunjukkan aktivitas sitotoksik moderat terhadap sel
HL60, masing-masing dari kedua senyawa tersebut membalikkan morfologi H-ras yang
mengubah NIH3T3 fibroblas kembali menjadi normal. Selanjutnya, melophlins A (1) dan B
(2) ditemukan menangkap sel NIH3T3 pada fase G1 dari siklus sel pada konsentrasi.
Melophlins A (1) dan B (2) dapat bekerja pada komponen jalur transduksi sinyal ras-
mediated. Sejauh ini, FR90122813 (penghambat deasetotelase histone) dan lovastatin14
(HMG-CoA reduktase dan penghambat protein geranylgeranylation) telah ditemukan untuk
membalikkan fenotipe transformasi ras-transforman menjadi normal dan juga menyebabkan
penangkapan G1 dalam siklus sel. (aoki,2000). Hubungan aktivitas struktur ini terdeteksi
terhadap sel V79 dan L1210 kecuali untuk senyawa tipe iso dengan gugus metil C-5
(senyawa 2) (wang, 2003).
f. Prosedur kerja
1. Isolasi senyawa melophlin ( aoki,2000 )
Astrophorida, keluarga: Ancorinidae) (4 kg) yang dikumpulkan pada bulan Agustus
1997 di Kepulauan Spermonde, Ujung Pandang, Indonesia, diekstraksi dengan MeOH (10
L) pada suhu kamar 3 kali selama 12 jam. Residu yang diperoleh dengan penguapan
pelarut di bawah tekanan tereduksi dan dipartisi menjadi campuran air AcOEt (1: 1), dan
lapisan AcOEt diuapkan untuk memberi bagian yang dapat larut dalam AcOE (101 g).
Sisa air selanjutnya dipartisi dengan volume yang sama n-BuOH, dan lapisan n-BuOH
diuapkan untuk memberi bagian yang larut dalam n-BuOH (114 g). Bagian yang larut
dalam AcOEt (31 g) dikenai kolom SiO2 (dielusi dengan n-heksana-AcOEt à 1: 1!
CHCl3 -MeOH à 10: 1! MeOH) untuk memberi tiga fraksi [fr. A (11 g), fr. B (10 g), fr. C
(6 g)]. Fr. B selanjutnya dipisahkan oleh kolom fase terbalik (Cosmosil 75C18-OPN,
MeOH-H2O 3: 2! 4: 1! MeOH) untuk membeli fr.B-1 (1,9 g) dan fr. B-2 (6,1 g).
Kemudian, fr. B-1 (387 mg) dipisahkan oleh HPLC (Cosmosil 5C18-AR, MeOH yang
mengandung 0,1% TFA) untuk memberi melophlin A (1,19 mg, 1,0% dari bagian yang
dapat larut dalam AcOEt). Fr. B-2 (96 mg) dimurnikan dengan HPLC (Cosmosil 5C18-
AR, CH3CN-H2Oà10: 1 mengandung 0,1% TFA; Cosmosil5SL, n-heksana-AcOEtà3: 1)
untuk memberi melophlin B (2, 37 mg, 2,4%) . Bagian yang larut dalam n-BuOH (51 g)
dikenai kolom SiO2 (dielusi dengan n-heksana-AcOEtà 40 1: 10: 1! 5: 1! 2: 1! AcOEt!
acetone) dan HPLC (Cosmosil 5C8-AR, MeOH-H2Oà4: 1) untuk melengkapi
sarasinosida A1 (2,3 g, 4,5% dari ekstrak BuOH) dan produk hidrolisisnya (sarasinoside
A1 -pro-2, 1,8 g, 3,5%)

2. Sel dan kondisi kultur ( Oda,2007)

Sel hamster Cina V79 tumbuh sebagai Kultur monolayer di Eagle's MEM (Nissui
Seiyaku Co., Ltd., Tokyo, Jepang) dengan 10% FBS yang tidak aktif dengan panas. Sel
HL-60 diperoleh dari Japanese Cancer Research Resources Bank (JCRB, Kamiyoga,
Tokyo, Jepang) dan dipelihara dalam kultur jaringan di media RPMI 1640 (Nissui
Seiyaku, Tokyo, Jepang) ditambah dengan FBS yang tidak aktif dengan panas 10% , 2
mM glutamin, 100 U / ml penisilin G, dan 100 μg / ml streptomisin.

3. Efisiensi penyepuhan relatif ( Oda,2007)

Efisiensi plating relatif terhadap sel V79 ditentukan sebagai rasio jumlah koloni
dalam berbagai konsentrasi sampel dengan sampel bebas, seperti yang dijelaskan pada
makalah sebelumnya [4,5]. Dua ratus sel diunggulkan ke piring plastik 60/15 mm dengan
media kultur 4 ml dan diinkubasi semalaman pada suhu 37 ° C. Setelah setiap sampel di
DMSO (4 μl) ditambahkan ke media kultur, sel selanjutnya dibudidayakan selama empat
hari. Jumlah koloni di piring sampel dihitung dan dibandingkan dengan yang ada pada
kultur kontrol.
4. Deteksi IL-8 manusia dengan metode ELISA ( Oda,2007)
Konsentrasi supernatan budaya IL-8 di bawah kontrol dan berbagai kondisi uji
diukur dengan ELISA menggunakan kombinasi antibodi monoklonal dan poliklonal [6].
Semua sampel diuji setidaknya dalam rangkap dua. Data dianalisis sebagai mean ± SE
dari tiga percobaan independen.
 DAFTAR PUSTAKA

Aoki, S.; Higuchi, K.; Ye, Y.; Satari, R.; Kobayashi, M. Melophlins A and B, novel tetramic
acids reversing the phenotype of ras-transformed cells, from the marine sponge
Melophlus sarasinorum. Tetrahedron 2000, 56, 1833-1836. 3. April 1998. Queensland
Museum. Australia.

Belarbi, E.H., Gomez, A.C., Chisti, Y., Camacho, F.G., Grima, E.M.. 2003.
Producing drugs from marine sponges. Biotechnol. Adv. 21, 585-598.

Faulkner, D. J., 2000. Marine Pharmacology. Antonie van Leeuwenhoek. 77: 135-
145.
Hermawan 1, Nicole J. de Voogd, and Junichi Tanaka, 2011. An Acetylenic
Alkaloid from

Jinzhong X, Masateru Hasegawa, Ken-ichi Harada, Hisayoshi Kobayashi,

Hiroshi Nagai, and Michio Namikoshi, 2006. Melophlins P, Q, R, and
S: Four New Tetramic Acid Derivatives, from Two Palauan Marine Sponges
of the Genus Melophlus. Chem. Pharm: Bull

Oda Taiko,*, Ayako Fujita 2, Jinzhong Xu 2,3, Masataka Mochizuki 1, Kazuyo Ukai 3 and
Michio Namikoshi, 2007, Effects of Melophlins on Colony Formation of Chinese
Hamster V79 Cells and IL-8 Production in PMA-stimulated HL-60 Cells, Mar. Drugs
2007, 5, 1-5

Ralph, D. F., 1998. What Are Sponss ?. Adapted From: Hooper, JNA.
Sponsuide, version

Rungprom, W, Chavasiri, W, Kokpol, U, Kotze, A and Garson, M.J, 2004,

Bioactiue Chromodorolide Diterpenes from an Aplysilid Spons, Marine Drugs, 2;
101-107

Soekanmto, Firdaus, Nursiah, Studi Pendahuluan Bioaktivitas Dan Identifikasi Kelompok Metabolit
Sekunder Pada Spons Melophlus Sarasinorum Thiele Asal Pulau Kapoposang, Spermonde,
Dipresentasikan Pada Seminar Nasional Kimia Dan Pendidikan Kimia, Universitas
Negeri Padang, 7 Desember 2013.

Tasdemir, D, Bugni, T.S, Mangalindan, G.C, Concepcion, G.P, Harper, M.K and
Ireland, C.M, 2002, Cytotoxic Bromoindole Derivatives and Terpenes from
the Philippine Marine Spons Smenosponsia sp., Z. Naturforsch, 57c the
Calcareous Spons Leucetta sp. Mar. Drugs 2011, 9, 382-386

Wang, C.-Y.; Wang, B.-G.; Wiryowidagdo, S.; Wray, V.; van Soest, R.; Steube, K. G.; Guan,
H.-S.; Proksch, P.; Ebel, R. Melophlins C–O, thirteen novel tetramic acids from the
marine sponge Melophlus sarasinorum. J. Nat. Prod. 2003, 66, 51-56.

WoRMS Porifera: World Porifera Database. Soest R. van (ed), 22 Oktober 2008
Xu, J.; Hasegawa, M.; Harada, K.-I.; Kobayashi, H.; Nagai, H.; Namikoshi, M. Melophlins P,
Q, R, and S: four new tetramic acid derivatives, from two Palauan marine sponges of the
genus Melophlus. Chem. Pharm. Bull. 2006, 54, 852-854. 2.

Zhang, X. W., Zhang, Cao, X., Xu, J., Zhao, Q., and Yu, X., 2003. Optimizing the
formation of in vitro sports primmorphs from the Chinese spons Stylotella
agminata (Ridley). J. Biotechnology, 100:161-168 54(6) 852-854