PENGEMBANGAN METODE REFLUKS

UNTUK EKSTRAKSI ANDROGRAFOLID

DARI HERBA SAMBILOTO

(Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees)

Skripsi

ANAK AGUNG MADE ISTRI RISMAYANTI

1108505048

JURUSAN FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS UDAYANA

2015

i
 Lembar Pengesahan
PENGEMBANGAN METODE REFLUKS
UNTUK EKSTRAKSI ANDROGRAFOLID
DARI HERBA SAMBILOTO
(Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees)

Skripsi

Skripsi ini diajukan sebagai syarat untuk memperoleh gelar sarjana farmasi (S.Farm)
di Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Udayana

Oleh
ANAK AGUNG MADE ISTRI RISMAYANTI
1108505048

Menyetujui:
Pembimbing I Pembimbing II

Ni Putu Linda Laksmiani, S.Farm., M.Sc., Apt. Drs. I Nyoman Kadjeng Widjaja, M.Si., Apt.
NIP. 198509012008122003 NIP. 195111141978031002

Mengesahkan:
Ketua Jurusan Farmasi
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Dr. rer. nat., I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt.

NIP. 196804201994021001
ii
 KATA PENGANTAR

Segala puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa

karena atas berkat dan rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang

berjudul ”Pengembangan Metode Refluks untuk Ekstraksi Andrografolid

dari Herba Sambiloto (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees)”.

Penyusunan skripsi ini tentunya tidak terlepas dari dukungan dan bimbingan

dari berbagai pihak. Oleh karena itu, dengan segala kerendahan hati pada

kesempatan ini penulis ingin menyampaikan terima kasih kepada semua pihak

yang telah memberikan bantuan baik secara langsung maupun tidak langsung,

yaitu kepada:

1. Ir.A.A.Gde Raka Dalem, M.Sc. (Hons) selaku Dekan Fakultas Matematika

dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.

2. Bapak Dr.rer.nat I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt. selaku Ketua

Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Udayana.

3. Ibu Ni Putu Linda Laksmiani, S.Farm., M.Si., Apt. selaku pembimbing I

yang telah membantu dengan segenap tenaga, pikiran, motivasi, dorongan,

nasihat, saran dan waktu dari awal penyusunan skripsi ini.

4. Bapak Drs. I Nyoman Kadjeng Widjaja, M.Si., Apt. selaku pembimbing

II yang telah membantu dengan segenap tenaga, pikiran, motivasi,

dorongan, nasihat, saran dan waktu dari awal penyusunan skripsi ini.

iii
5. Seluruh dosen pengajar beserta staf pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas

MIPA Universitas Udayana yang telah banyak membantu penulis.

6. I Gusti Made Rai Windu dan I Gusti Made Suwitari, S.E. selaku ayah dan

ibu tercinta, kakak tersayang A.A. Putu Lanang Wikantara, S.Kep. dan

keluarga besar Jero Taman Sari yang selalu memberikan doa, semangat,

dukungan dan motivasi kepada penulis sehingga penulis akhirnya dapat

menyelesaikan skripsi ini.

7. Yang terkasih, Putu Yudha Ugrasena, S.Farm., Apt. atas senyuman, segala

bentuk perhatian, pengertian, doa, bantuan, semangat, dan dukungan

sehingga penulis akhirnya dapat menyelesaikan skripsi ini.

8. Teman-teman seperjuangan, Analisis 2011 (Rapid Isocratic) Evi, Yuni,

Eka, Butet, West, Ratu, Buntil, Dayu Chandra, Yogi, Ibu Nova beserta

laboran Mbok Dwik, Kak Anggi dan Kak Pasek atas semua kekompakan,

bantuan, semangat, dan doa selama penyusunan skripsi ini.

9. Sahabat terbaik Unik, Sera, Intan, Merlina, Ode, Narita, Yuni, Tria, Jeffry,

Ade Wedantha, Gung Sinta dan Putri atas segala bentuk dukungan,

bantuan, motivasi dan semangat selama penyusunan skripsi ini.

10. Seluruh mahasiswa Jurusan Farmasi Fakultas MIPA Universitas Udayana,

khususnya angkatan 2011 (Lumiere Onze Vauquelin) dan seluruh sahabat

penulis yang telah memberikan dukungan dalam penulisan skripsi ini.

11. Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam penyusunan

skripsi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.

iv
 Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih jauh dari

sempurna. Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak

yang bersifat membangun sehingga di masa yang akan datang dapat menjadi lebih

baik. Penulis berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak.

Bukit Jimbaran, Juni 2015

Penulis

v
 DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL .................................................................................... i

LEMBAR PENGESAHAN ......................................................................... ii

KATA PENGANTAR ................................................................................. iii

DAFTAR ISI ................................................................................................ vi

DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH ................................................... x

DAFTAR TABEL ........................................................................................ xi

DAFTAR GAMBAR ................................................................................... xii

DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................ xiv

ABSTRAK ................................................................................................... xv

ABSTRACT ................................................................................................. xvi

BAB I PENDAHULUAN ........................................................................ 1

1.1 Latar Belakang ....................................................................... 1

1.2 Rumusan Masalah .................................................................. 4

1.3 Tujuan Penelitian ................................................................... 4

1.4 Manfaat Penelitian ................................................................. 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ............................................................... 5

2.1 Tanaman Sambiloto (Andrographis paniculata

(Burm.F.) Nees) ...................................................................... 5

2.1.1 Klasifikasi tanaman ...................................................... 5

2.1.2 Morfologi tanaman ....................................................... 5

2.1.3 Habitat tanaman ............................................................. 6

vi
 2.1.4 Kandungan kimia tanaman ........................................... 7

2.2 Andrografolid .......................................................................... 7

2.3 Ekstraksi Senyawa Bahan Alam .............................................. 9

2.3.1 Maserasi ........................................................................ 11

2.3.2 Refluks .......................................................................... 12

2.4 Identifikasi Andrografolid dengan Metode KLT-

Spektrofotodensitometri........................................................... 14

2.5 Validasi Metode....................................................................... 16

2.5.1 Ketepatan (Akurasi) ..................................................... 17

2.5.2 Keseksamaan (Presisi) ................................................. 18

2.5.3 Linearitas dan Rentang................................................. 19

2.5.4 Spesifisitas/Selektifitas ................................................ 19

2.5.5 LOD dan LOQ.............................................................. 20

BAB III METODE PENELITIAN ............................................................ 21

3.1 Rancangan Penelitian ............................................................. 21

3.2 Tempat dan Waktu Penelitian ................................................. 22

3.3 Bahan dan Peralatan Penelitian .............................................. 22

3.3.1 Bahan penelitian ........................................................... 22

3.3.2 Alat penelitian ............................................................... 22

3.4 Prosedur Penelitian ................................................................. 23

3.4.1 Determinasi sambiloto .................................................. 23

3.4.2 Penetapan kadar air ........................................................ 23

3.4.3 Ekstraksi andrografolid dengan metode maserasi ......... 24

vii
 3.4.4 Pemilihan jumlah pelarut dalam ekstraksi andrografolid

dengan metode refluks ................................................. 24

3.4.5 Pemilihan waktu ekstraksi andrografolid dengan metode

refluks .......................................................................... 24

3.4.6 Validasi metode penetapan kadar andrografolid dengan

metode KLT-Spektrofotodensitometri ......................... 25

3.4.7 Penetapan kadar andrografolid dengan metode KLT-

Spektrofotodensitometri ............................................... 27

3.5 Analisis Data ........................................................................... 28

3.5.1 Penentuan jumlah pelarut dan waktu ekstraksi

optimum ....................................................................... 28

3.5.2 Penentuan rendemen ..................................................... 28

3.6 Skema Kerja Penelitian .......................................................... 29

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................... 30

4.1 Determinasi Tanaman ............................................................. 30

4.2 Penetapan Kadar Air Serbuk Simplisia Herba Andrographis

paniculata (Burm. f.) Nees .................................................... 30

4.3 Validasi Metode Penetapan Kadar Andrografolid dengan KLT-

Spektrofotodensitometri ........................................................ 31

4.3.1 Rentang dan Linearitas ................................................. 31

4.3.2 Akurasi .......................................................................... 32

4.3.3 LOD & LOQ .................................................................. 33

4.3.4 Presisi ............................................................................ 34

viii
 4.3.5 Spesifisitas/Selektivitas ................................................ 34

4.4 Penetapan Kadar Andrografolid dengan Metode KLT-

Spektrofotodensitometri ........................................................ 36

4.4.1 Jumlah pelarut optimum dalam ekstraksi andrografolid dengan

metode refluks ............................................................ 39

4.4.2 Waktu ekstraksi andrografolid optimum dengan metode

refluks ......................................................................... 41

4.4. 3 Perolehan rendemen andrografolid dengan metode maserasi

dan refluks ................................................................... 43

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN .................................................... 46

5.1 Kesimpulan ............................................................................. 46

5.2 Saran ....................................................................................... 46

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................... 47

LAMPIRAN ................................................................................................. 53

ix
 DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH

AUC : Area Under Curve

AU : Absorbance Unit

FHI : Farmakope Herbal Indonesia

HPTLC : High Performance Thin Layer Chromatography

ICH : International Conference on Harmonization

Inert : Tidak mudah bereaksi

KLT : Kromatografi Lapis Tipis

KV : Koefisien Variasi

LOD : Limit of Detection

LOQ : Limit of Quantitation

Nisbah : Rasio atau perbandingan

Rf : Retardation of Factor

RSD : relative standard deviation

Recovery : perolehan kembali

Rendemen : Perbandingan antara ekstrak yang diperoleh dengan simplisia awal

Scan : Pindai

SD : Standar Deviasi

TLC : Thin Layer Chromatography

USP : United States Pharmacopeia

UV : Ultraviolet

WHO : World Health Organization

x
 DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 4.1 Penetapan kadar air serbuk simplisia herba sambiloto (Andrographis

paniculata (Burm. f.) Nees) .............................................................. 31

Tabel 4.2 Data %recovery dengan metode standar adisi menggunakan larutan

standar andrografolid ....................................................................... 33

Tabel 4.3 Data %KV pada standar andrografolid ............................................. 34

Tabel 4.4 Data nilai resolusi standar andrografolid .......................................... 35

Tabel 4.5 Data nilai resolusi sampel ................................................................. 35

xi
 DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 2.1 Herba sambiloto ............................................................................. 5

Gambar 2.2 Struktur andrografolid.................................................................... 6

Gambar 2.3 Spektrum KLT-Spektrofotodensitometri dari andrografolid pada

panjang gelombang 235 nm .......................................................... 7

Gambar 2.4 Alat refluks .................................................................................... 11

Gambar 2.5 Spektrofotodensitometer yang dihubungkan ke PC....................... 14

Gambar 2.6 Hasil KLT herba Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees pada

pengamatan di bawah lampu UV 366 nm dan 254 nm ................. 15

Gambar 3.1 Skema kerja penelitian .................................................................. 29

Gambar 4.1 Kurva kalibrasi andrografolid dalam penentuan linearitas ........... 32

Gambar 4.2 Kromatogram standar andrografolid dan sampel ......................... 35

Gambar 4.3 Hasil pemisahan standar dan sampel pada UV 366 dan 254 nm .. 37

Gambar 4.4 Perbandingan spektrum standar andrografolid dan spektrum

sampel pada panjang gelombang 230 nm ...................................... 38

Gambar 4.5 Grafik hubungan antara perbandingan jumlah pelarut dan kadar

andrografolid ................................................................................. 40

Gambar 4.6 Kromatogram ekstrak etanol herba sambiloto (Andrographis

paniculata (Burm. f.) Nees pada variasi jumlah pelarut ............... 41

Gambar 4.7 Grafik hubungan antara waktu ekstraksi dan kadar

andrografolid .................................................................................. 42

xii
 Halaman

Gambar 4.8 Kromatogram ekstrak etanol herba sambiloto (Andrographis

paniculata (Burm. f.) Nees pada variasi waktu ekstraksi ............. 42

xiii
 DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1. Determinasi Andrographis paniculata (Burm. F.) Nees ............... 53

Lampiran 2. Kromatogram Standar Andrografolid, Sampel Maserasi dan

Refluks pada Panjang Gelombang 200 nm - 400 nm .................... 55

Lampiran 3. Penetapan Kadar Air Serbuk Simplisia Herba Sambiloto

(Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees ................................... 56

Lampiran 4. Perhitungan Perolehan Kembali Andrografolid dengan Metode

Standar Adisi ................................................................................. 57

Lampiran 5. Perhitungan LOD & LOQ ............................................................. 60

Lampiran 6. Penentuan Presisi Penotolan Larutan Standar Andrografolid ....... 61

Lampiran 7. Penetapan Kadar Andrografolid dengan Variasi Jumlah Pelarut .. 62

Lampiran 8. Penetapan Kadar Andrografolid dengan Variasi Waktu Ekstraksi 63

Lampiran 9. Perhitungan Rendemen Andrografolid dengan Metode Maserasi

dan Refluks ................................................................................... 64

xiv
 ABSTRAK

Refluks merupakan metode ekstraksi dengan bantuan pemanasan dan

mampu mengekstraksi andrografolid yang merupakan senyawa tahan panas.
Faktor yang dapat mempengaruhi proses ekstraksi diantaranya jumlah pelarut dan
waktu ekstraksi. Untuk mengetahui keberhasilan metode refluks, dilakukan pula
ekstraksi dengan maserasi. Penelitian ini bertujuan mengetahui jumlah pelarut dan
waktu ekstraksi yang optimum dalam ekstraksi andrografolid menggunakan
metode refluks dan mengetahui rendemen andrografolid yang diperoleh dari
ekstraksi menggunakan metode maserasi dan refluks.
Optimasi jumlah pelarut dalam ekstraksi andrografolid menggunakan
metode refluks dengan perbandingan jumlah pelarut etanol 96% berturut-turut
sebanyak 1:2, 1:3, 1:4, 1:5 dan 1:6. Optimasi waktu ekstraksi menggunakan
volume optimum dengan variasi waktu 3, 6, 9 dan 12 jam. Penentuan jumlah
pelarut dan waktu ekstraksi optimum dilakukan dengan perhitungan kadar
andrografolid dengan metode KLT-spektrofotodensitometri yang tervalidasi. Fase
diam silika gel 60 GF254 kemudian dielusi dengan campuran pelarut kloroform
dan metanol (9:1) v/v. Plat dipindai dengan TLC Scanner 3 (CAMAG) pada
panjang gelombang 230 nm.
Seluruh parameter validasi telah memenuhi persyaratan validasi yaitu rata-
rata perolehan kembali 85,68% (80-110 %); rentang linieritas dengan r = 0,9938 (r
> 0,95); nilai LOD 133,273 ng/µL; nilai LOQ 444,122 ng/µL; presisi < 2%;
spesifisitas dengan kemurnian puncak >0,99 dan nilai Rs >1,5. Jumlah pelarut
optimum yaitu pada perbandingan 1:3 dan waktu ekstraksi optimum yaitu 6 jam.
Rendemen yang diperoleh dengan metode refluks sebesar 0,72%b/b dan rendemen
menggunakan metode maserasi sebesar 0,62%b/b.

Kata kunci: refluks, andrografolid, jumlah pelarut, waktu ekstraksi, KLT-

Spektrofotodensitometri

xv
 ABSTRACT

Reflux is an extraction method with heat and able to extract andrographolide

which is heat-resistant compounds. Factors may affect the extraction process
including the amount of solvent and extraction time. To determine the success of
reflux extraction method, also conducted extraction with maceration. The aim of
this study are to determine the optimum amount of solvent and extraction time for
extraction of andrographolide using reflux method and determine the yield
obtained from extraction of andrographolide using maceration and reflux method.
Optimization amount of solvent in the andrographolide extraction using
reflux method with a ratio ethanol 96% respectively as much as 1:2, 1:3, 1:4, 1:5
and 1:6. Optimization of the extraction time using the optimum volume variation
for 3, 6, 9 and 12 hours. Determination of the amount of solvent and the optimum
extraction time by calculating the concentration andrographolide with TLC-
Spectrophotodensitometry method which has been validated. Stationary phase
silica gel 60 GF254 then eluted with a mixed solvent chloroform and methanol (9:
1) v/v. The plates were scanned with TLC Scanner 3 (CAMAG) at wavelength of
230 nm.
All parameter validation had appropriate the requirements of the validity of
which is an average recovery of 85,68% (80-110%); range of linearity with r =
0,9938 (r>0,95); LOD value of 133,273 ng/mL; LOQ value 444,122 ng/mL;
precision <2%; specificity with peak purity >0,99 and Rs values >1,5. The
optimum amount of solvent in the solvent ratio of 1:3 and the optimum extraction
time is 6 hours. The yield obtained by methods reflux 0,72% w/w and method of
maceration of 0,62% w/w.

Keywords: reflux, andrographolide, amount of solvent, extraction time, TLC

Spectrophotodensitometry

xvi