Safranal padat nanopartikel lipid: evaluasi tabir surya dan

potensi pelembab untuk aplikasi topikal

Tujuan: Dalam penelitian saat ini, tabir surya dan sifat pelembab dari nanopartikel lipid padat (SLN) -
safranal dievaluasi.

Bahan dan Metode: Seri SLN dibuat dengan menggunakan glyceryl monostearate, Tween 80 dan
jumlah yang berbeda dari safranal dengan metode homogenisasi geser tinggi, dan metode USG
homogenisasi dan tekanan tinggi (HPH). Formulasi SLN dicirikan untuk ukuran, potensial zeta,
morfologi, sifat termal, dan kemanjuran enkapsulasi. Faktor Perlindungan Matahari (SPF) produk
ditentukan secara in vitro dengan menggunakan pita transpore. Aktivitas pelembab produk juga
dievaluasi dengan corneometer.

Hasil: SPF dari formulasi SLN-safranal meningkat bila jumlah safranal meningkat. Ukuran partikel
rata-rata untuk semua formula kira-kira 106 nm dengan sonication probe dan 233 nm menggunakan
metode HPH. Efisiensi enkapsulasi safranal sekitar 70% untuk semua formulasi SLN-safranal.

Kesimpulan: Hasilnya menyimpulkan bahwa formulasi SLN-safranal terbukti efektif untuk pengiriman
topikal safranal dan berhasil menyediakan sifat tabir surya yang sesuai.

pengantar

Mempersiapkan jenis baru produk tabir surya adalah sebuah pendekatan untuk mengurangi efek
buruk sinar matahari dan meningkatkan aktivitas anti-matahari (1). Senyawa alami seperti polifenol
menarik banyak perhatian dalam formulasi kosmetik karena dapat melindungi kulit dari bahan
perusak eksogen dan endogen seperti radiasi UVB dan UVA (2, 3). Produk yang paling umum
digunakan dalam sediaan tabir surya herbal meliputi lidah buaya, kemangi, teh hijau, almond, zaitun,
jojoba, dan mentimun (4). Safranal, sebagai zat alami, memiliki berbagai aktivitas farmakologis.
Baru-baru ini, sifat tabir surya dari turunan safranal dan sejenisnya telah diteliti, menunjukkan
bahwa zat ini dapat melakukan aktivitas tabir surya (5, 6).

Untuk molekul UV-blocker, penetrasi yang terbatas ke lapisan kulit dan kehadiran di lapisan atas
lapisan horny adalah dua sifat terpenting. Sudah mapan bahwa menggunakan pembawa baru
menawarkan kemampuan untuk memodifikasi fitur ini (7). Selama dekade terakhir, kelompok
peneliti telah berfokus pada formulasi padat partikel padat nanopartikel (SLN) sebagai sistem
pengiriman obat baru (8-10).

SLN telah mengumumkan keunggulan dibandingkan sistem pengiriman obat konvensional termasuk
bentuk sediaan baru seperti mikro / nanopartikel polimerik, emulsi lipid, dan liposom. SLN juga
dapat mengurangi keterbatasan sistem tersebut (11). SLN baru-baru ini digunakan sebagai pembawa
obat transdermal karena sifat meningkatkan permeabilitasnya (12); Ini meningkatkan kadar air kulit,
menghalangi sinar UV, dan menunjukkan sifat oklusif (13, 14). Berkat sifat spesifik ini, SLN bisa
digunakan sebagai tabir surya fisik potensial (14, 15). Karena karakteristik unik ini, SLN mungkin
merupakan kendaraan yang menjanjikan untuk merumuskan agen tabir surya dan meningkatkan
khasiatnya.
Penggabungan safranal ke SLN (SLN-safranal) bisa menjadi sarana yang diinginkan untuk
meningkatkan khasiat safranal. Dalam penelitian ini, hidrasi kulit disiapkan SLN-safranal dievaluasi
dengan menggunakan metode corneometer in vivo. Sifat perlindungan UV dari SLN-safranal juga
diselidiki dengan metode transpore tape 3M in vitro.

Bahan dan metode

Bahan

Glyceryl monostearate (GMS) diberikan oleh Gattefossé (Prancis). Tween 80 dan Safranal dibeli dari
Sigma Aldrich (Jerman). Semua sampel asli digunakan pada saat kedatangan. Hanya air suling ganda
yang digunakan di seluruh.

Metode

Persiapan SLN

Metode homogenisasi geser tinggi dan ultrasuara digunakan untuk mempersiapkan formulasi SLN.
GMS (10%) dilelehkan dengan pemanasan pada suhu 70 ° C, dan jumlah safranal (0%, 1%, 2%, dan
4% b / v) yang berbeda ditambahkan ke fase lipid pada akhir proses peleburan. . Fasa berair
disiapkan dengan melarutkan Tween 80 (5%) pada air suling ganda sampai 10 ml, kemudian
dipanaskan sampai suhu titik lebur fase lipid. Fase lipida berair panas dan cair dicampur bersama
dan dihomogenisasi dengan alat penghangat Diax 900 (Heidolph, Jerman) selama 2 menit pada
11.000 rpm. Suhu disimpan pada suhu 5 ° C di atas titik lebur lipid. Emulsi yang diperoleh
ultrasonicated oleh sonicator probe (Bransonic, USA). Sonication dilakukan pada 6 siklus dengan 30
detik sonication yang dipisahkan oleh interval 15 detik. Nanoemulsi yang diperoleh didinginkan
sampai suhu kamar. SLN-safranal juga disiapkan dengan metode homogenisasi bertekanan tinggi
(HPH). SLN diberikan dengan menggunakan GMS (10% b / v) sebagai fase lipida dan Tween 80 (5% b
/ v) sebagai surfaktan, dan jumlah safran yang berbeda (0%, 1%, 2% dan 4% b / v) ditambahkan ke
fase lipid pada akhir proses peleburan. Lipid yang meleleh ditambahkan ke air panas yang
mengandung Tween 80. Emulsi kemudian disiapkan menggunakan T 25 Ultra Turrax (Janke und
Kunkel GmbH dan Co KG Staufen, Jerman) selama 2 menit pada 20.500 rpm. Pra-emulsi diproses
pada 1.000 bar selama 3 siklus dengan menggunakan homogener bertekanan tinggi (EmulsiFlex-C5®
(Avestin Inc., Kanada). Sampel kemudian didinginkan sampai suhu kamar dan SLN diperoleh.

Karakterisasi SLN

Ukuran partikel dan potensi zeta

Ukuran partikel rata-rata, indeks polidispersitas dan potensial zeta dari formulasi SLN dinilai dengan
metoda hamburan cahaya dinamis (DLS) (ZetaSizer Nano-ZS; Malvern Instruments Ltd., Inggris).

Mikroskop elektron transmisi (TEM)

Sifat morfologi formulasi SLN ditandai dengan penilaian TEM seperti yang telah dijelaskan
sebelumnya (TEM; CEM 902A; Zeiss, Oberkochen, Jerman). Secara singkat, SLN diencerkan 50 kali
lipat dengan air dan ditempatkan pada kisi tembaga berlapis karbon selama 30 detik dan kelebihan
air diseka dengan kertas saring. Kemudian 20 μl 2% uranyl asetat dalam air ditempatkan pada SLN
dan setelah 30 detik diseka oleh kertas saring lain. Kotak dikeringkan pada suhu kamar dan dinilai
oleh TEM (16).
Kalorimetri pemindaian diferensial (DSC)

Penelitian DSC dilakukan dengan menggunakan Mettler DSC 821e (Mettler Toledo, Gießen, Jerman).
Panci aluminium yang kosong digunakan sebagai referensi. Sampel dipindai dari 25 ° C sampai 100 °
C pada tingkat 5 ° C / menit di bawah atmosfir nitrogen (20 ml / menit). Titik lebur formulasi SLN
dibandingkan dengan lipida bulk. Sebelum pengukuran DSC, lipid bulk dipanaskan sampai 75 ° C dan
didinginkan sampai suhu kamar untuk meniru kondisi produksi. Analisis dilakukan di bawah
pemurnian nitrogen.

Efisiensi pemberantasan (EE)

Efisiensi entrapment (%) ditentukan dengan mengukur konsentrasi safranal yang terperangkap
setelah pemurnian. Untuk memurnikan SLN-safranal, 500 μl dispersi SLN dipindahkan ke ruang atas
ultrafilter (Amicon Ultra-15, PLHK Ultracel-PL Membrane, 100 kDa, Millipore). Tabung amicon
disentrifugasi pada 10.000 rpm selama 30 menit. Filtrat dianalisis untuk ekstrak safranal pada 310
nm menggunakan metode spektrofotometri UV yang valid setelah pengenceran yang sesuai dengan
etanol (17). Kemudian persentase jebakan ditentukan dengan menggunakan rumus berikut:

Pengukuran kelembaban kulit menggunakan corneometer

Setelah penerapan formulasi SLN yang berbeda, tingkat hidrasi kulit ditentukan oleh corneometer
(Keberanian, Khazaka, Cologne, Jerman).

Setelah mendapat informed consent, enam sukarelawan Kaukasia sehat (rentang usia 20-35 tahun)
dengan kulit normal pada suhu kamar ikut serta dalam penelitian ini. Sebelum diujicobakan, peserta
diberi waktu untuk beradaptasi dengan kondisi kamar tanpa menghalangi area pengukuran. Pada
hari pemeriksaan, tidak ada zat lain yang dioleskan ke permukaan kulit, juga tidak dilakukan
pencucian. Subjek sadar bahwa mereka tidak dapat menerapkan persiapan apapun ke situs yang
akan diperiksa satu minggu sebelum penyelidikan. Tingkat kelembaban stratum korneum ditentukan
dengan korneometer CM 820 yang mengukur kapasitansi listrik. Setiap percobaan dilakukan secara
rangkap tiga. Pengukuran diuji persis di tempat yang sama. Tempat pengukur berada di tengah
lengan bawah. Pada saat pertama,
Gambar 1. A) Ukuran partikel dari formulasi SLN yang berbeda untuk keduanya probe sonication dan
metode HPH. B) Zeta berpotensi berbeda Formulasi SLN untuk sonication probe dan metode HPH

Tingkat kelembaban kulit diukur tanpa aplikasi apapun dari produk yang dinamakan sebagai

kontrol; Selanjutnya pengukurannya adalah dilakukan setelah 30 menit, 1, 3, dan 5 jam setelah
penerapan tabir surya (5, 6 dan 15).

Penentuan SPF formulasi menggunakan metode transpore tape in vitro

Prinsip metode ini didasarkan pada penilaian transmitansi spektral UVR melalui tape transpore
dengan dan tanpa tabir surya Diffey adalah orang pertama yang mengenalkan dan menerapkannya
jenis metode ini Menurut metode ini, formulasi dan standar tabir surya yang berbeda (Homosalate
8%) diaplikasikan pada permukaan pita TM transpore pada 2 mg / cm2. Setelah 15 menit, nilai
transmisi dicatat dari 290 nm ke 400 nm pada interval 5 nm pada lima titik yang berbeda. Nilai SPF
yang diprediksi diperoleh menurut persamaan berikut (Persamaan 1) (3, 5, 18).
Dalam persamaan ini menurut CIE (Commission Internationale de l'Eclairage): E (λ): Efektivitas
Spektrum Erythemal Relatif, S (λ): Radiasi Spektrum Surya

(Wm-2nm-1), T (λ): Spectral Transmittance dari sampel (yang diukur pada UV-1000S). Spektrum
spektrum matahari dan aksi eritema spektrometer pada kulit manusia yang digunakan untuk
menghitung Faktor Perlindungan Matahari telah disebutkan (18). Hasil disajikan sebagai SPF rata-rata
dan standar deviasi relatif sebagai persentase rata-rata SPF.

Analisis statistik

Semua tes dilakukan setidaknya dalam rangkap tiga. Analisis varians one-way (ANOVA) digunakan
untuk menganalisis perbedaan. Perbedaan antara mean dianggap signifikan secara statistik jika nilai P
kurang dari 0,05.

Hasil

Karakterisasi diameter rata-rata SLN dari formulasi SLN ditentukan oleh DLS untuk 2 metode preparasi
(Gambar 1A). Perbedaan antara ukuran signifikan berdasarkan metode preparasi (P <0,0001).
Diameter rata-rata formulasi SLN meningkat drastis saat menerapkan metode HPH, dan SLN terkecil
diperoleh dengan menggunakan safranal 4%. Tidak ada perbedaan yang diamati antara potensial zeta
formulasi (P> 0,05) (Gambar 1B). Ukuran SLN

formulasi setelah penyimpanan 1, 2, dan 3 bulan pada suhu 4 ° C tidak menunjukkan perbedaan yang
signifikan dibandingkan dengan ukuran SLN yang diukur pada hari persiapan (P> 0,05). Potensi zeta
nanopartikel kira-kira -50 mV. Efikasi enkapsulasi safranal untuk SLN-safranal 1%, 2%, dan 4% masing-
masing adalah 72,24%, 82,46%, dan 85,26%.

Mikroskop elektron transmisi (TEM)

Penelitian TEM dilakukan untuk mendapatkan informasi lebih lanjut tentang morfologi SLN.
Fotomikrograf TEM dari formulasi SLN-safranal (Gambar 2) mengungkapkan hampir bentuk bola
formulasi ini dengan ukuran dan bentuk yang sama. Itu

Ukuran partikel seperti yang diberikan oleh TEM ini sesuai dengan yang ditemukan menggunakan DLS.

Gambar 2. Pencitraan TEM formulasi SLN-Safranal 1% disiapkan dengan metode sonication probe
Gambar 3. Kurva DSC dari bulk GMS (A), SLN safranal safranal 1% formulasi disiapkan dengan metode
sonication probe (B) dan kosong SLN (C)

Gambar 4. Persentase peningkatan hidrasi kulit untuk formulasi SLN-Safranal, SLN telanjang dan
kelompok kontrol

Analisis DSC

Thermogram menunjukkan bahwa puncak peleburan inti lipid dari SLN adalah suhu yang lebih rendah
daripada lipida bulk (Gambar 3). Kurva DSC dari bulk GMS ditandai oleh puncak utama yang berpusat
pada sekitar 58 ° C, yang terkait dengan titik lebur senyawa. Namun, di semua formulasi SLN titik
lelehnya lebih rendah, sekitar 43 dan 44 ° C untuk sonication probe dan metode HPH.

Pengukuran hidrasi kulit

Pengukuran kadar kelembaban kulit dievaluasi dengan mengukur nilai hidrasi kulit menggunakan
corneometer. Hasil hidrasi kulit diilustrasikan pada Gambar 4. Hidrasi kulit meningkat setelah
penerapan SLN-safranl dan free-SLN.
formulasi. Formulasi SLN-safranal selanjutnya meningkatkan sifat hidrasi kulit seperti yang terlihat dari
sifat formulasi SLN bebas.

SPF penentuan formulasi

Gambar 5 (A) menunjukkan formulasi rujukan SPF SLN dan homosalate dengan metode in vitro.
Menurut analisis statistik, perbedaan yang signifikan diamati antara nilai SPF referensi homosalate
dan formulasi SLN-safranal. Di antara semua formulasi SLN, yang mengandung 4% safranal
menunjukkan nilai SPF yang lebih tinggi dibandingkan dengan formulasi lainnya. SPF SLN-safranal 1%
dan SLN kosong secara signifikan lebih rendah dari 8% referensi homosalate. Tidak ada perbedaan
yang signifikan antara referensi homosaate SLN-safranal 2% dan 8%. Menurut metode transmitansi,
SLN-safranal bisa menyerap sinar UV dan penyerapan UV meningkat dengan meningkatkan
kandungan safranal (Gambar 5B).

Diskusi

Perlindungan terhadap sinar UV merupakan isu penting sepanjang kehidupan manusia. Menerapkan
sediaan herbal dan sistem pengiriman obat baru adalah dua pendekatan utama untuk meningkatkan
perlindungan UV. Hasil penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa safranal dapat digunakan sebagai
agen penghambat UV alami (5). SLN juga dapat dianggap sebagai sistem pembawa yang menarik dan
menjanjikan untuk penghambat UV molekuler, seperti yang mereka miliki Perlindungan UV oleh UV
yang mencerminkan dan menghamburkan kemampuan seperti tabir surya fisik lainnya (12).

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui hidrasi kulit dan sifat perlindungan UV dari
formulasi SLN-safranal.

Partikel dengan diameter nano menunjukkan sifat occlusive dan hidrasi kulit yang cukup (19-21).
Menurut hasil DLS, ukuran partikel SLN terutama antara 50 dan 300 nm (Gambar 1A). Efek
penggabungan safranal pada ukuran partikel juga diselidiki. Formulasi yang mengandung safranal 4%
adalah yang terkecil
Gambar 5. A) Nilai SPF SLN-Safranal (1, 2 dan 4%) dan referensi homosalate ditentukan dengan
metode pita transpore. Nilai adalah mean ± SD, n = 3; ns P> 0,05, * 0,01 <P <0,05, ** P <0,01. B) Kurva
penyerapan dari formulasi 200 sampai 400 nm

dalam metode HPH. Dapat diasumsikan bahwa dengan meningkatkan kandungan safranal, ukuran
partikel menjadi lebih kecil karena kelarutan lebih banyak safranal dalam lipid padat menggunakan
metode persiapan ini.

SLN dengan potensi zeta lebih tinggi dari ± 30 mV biasanya dianggap stabil secara fisik (22). Potensi
zeta partikel untuk kedua sediaan itu negatif. Biaya permukaan SLN disiapkan adalah-40 mv (Gambar
1B). Ini mungkin karena kelompok OH dalam fase lipid. Dengan memperhitungkan potensi zeta dan
ukuran partikel, formulasi SLN yang dipersiapkan dengan baik adalah kandidat yang sesuai untuk
sistem pengiriman topikal.

Efikasi enkapsulasi safranal yang tinggi terlihat untuk semua formulasi disiapkan (lebih dari 70%).
Diketahui bahwa safranal adalah molekul larut dalam lemak yang bisa menyebar dalam campuran lipid
dengan mudah (23-24). Fitur safranal ini memainkan peran penting dalam efisiensi enkapsulasi yang
tinggi. Karena safranal sangat mudah menguap, setelah persiapan safranal SLN bebas akan diuapkan
dan dipisahkan selama pemberian sentrifugasi pada filter amicon.

Ukuran yang diperoleh dengan gambar mikroskopis elektron sejajar dengan hasil DLS (Gambar 2).
Bentuk bola SLN diamati pada gambar TEM.

Penelitian DSC dilakukan untuk menilai tingkat kristalinitas (Gambar 3). Seperti yang telah dilaporkan
sebelumnya dalam literatur, analisis DSC adalah metode yang berguna untuk menentukan sifat fisik
lipida inti pada SLN (25). Puncak endotermis meleleh yang tajam pada lipid bulk sekitar 58 ° C,
menunjukkan bahwa bahan awal itu berbentuk kristal. Konsisten dengan temuan sebelumnya, puncak
pelelehan inti lipid SLN diamati pada suhu yang lebih rendah daripada lipid dalam massa. Keadaan ini
mungkin disebabkan oleh ukuran nanocrystalline dari lipid di SLN, area permukaan spesifik tinggi dan
adanya surfaktan (23). Kurva DSC menunjukkan bahwa puncak pelelehan lipid di SLN adalah menurun
saat safran sudah dimuat di SLN. Juga diamati bahwa pemilihan DSC safranal tidak terlihat pada SLN-
safranal. Hasil ini, bersama dengan Tidak adanya pilihan flashing safranal, dapat menyarankan
penggabungan dan pembubaran obat ke matriks lipid. Nampaknya SLN-safranal mencegah penguapan
safranal. Hasil ini juga diamati pada penelitian Qian et al pada tahun 2012 (26). Memadukan tripalmitin
dengan titik lebur yang rendah menyebabkan perubahan yang cukup besar dalam perilaku dan
stabilitas fase SLN. Pengukuran DSC menunjukkan bahwa kehadiran minyak pembawa mengurangi
suhu kristalisasi, suhu leleh, dan entalpi lebur tripalmitin sebagai lipida padat.(27-28).

Berbagai metode telah dijelaskan oleh Fluhr dkk untuk mengukur hidrasi stratum korneum. Di antara
metode ini, alat corneometer lebih sering digunakan (29).

Sifat hidrasi kulit SLN telah ditunjukkan sebelumnya. Fitur ini mungkin dikaitkan dengan pembentukan
film setelah aplikasi ke kulit, dan akibatnya meningkatkan hidrasi stratum korneum (30). Menurut
Gambar 4, hidrasi kulit meningkat dengan aplikasi SLN ke kulit. Formulasi SLN-safranal sedikit lebih
baik daripada formulasi bebas untuk memperbaiki hidrasi kulit, namun tidak ada perbedaan yang
signifikan antara SLN yang dimuat dan yang tidak dibebani. Sesuai dengan

Hasil ini, sifat hidrasi kulit hanya terkait dengan SLN dan tidak terkait dengan safranal. Khususnya,
kurangnya efek hidrasi safranal terbukti sebelumnya (5). Fitur occlusive SLN terkait dengan
pembentukan film setelah aplikasi ke kulit (31). Sifat SLN ini bergantung pada berbagai faktor,
misalnya, ukuran partikel, lipid, dan konsentrasi lipid. Pada penelitian sebelumnya, efek dari ukuran
dan komposisi SLN diselidiki, menunjukkan bahwa ukuran indeks SLN dan kristalinitas lipid pada SLN
dapat mengubah faktor oklusi (5, 32). Hasil penelitian menunjukkan bahwa faktor kristalinitas dan
oklusi lipid padat selain faktor lainnya dapat mempengaruhi hidrasi kulit (5).

Aktivitas anti-matahari SLN-safranal dinilai dengan penentuan SPF. Karena hasil ini, nilai SPF dari
formulasi SLN meningkat pada saat meningkatkan jumlah safranal. Seperti yang dapat dilihat pada
Gambar 5A, di antara semua formulasi, SLN yang mengandung safranal 4% memiliki nilai SPF lebih
tinggi dan secara signifikan lebih tinggi dari 8% referensi homosalate. Ini menunjukkan bahwa tidak
ada perbedaan yang signifikan antara referensi homosalate SLN-safranal 2% dan 8%. Pada penelitian
sebelumnya, SPF liposom yang mengandung safranal 8% (Lip-safranal 8%) secara signifikan lebih tinggi
dari 8% referensi homosalate. Data ini menunjukkan bahwa safranal adalah agen anti-surya. Efek
pelepasan UV yang potensial dari safranal disarankan sebelumnya (5). Kemampuan SLN-safranal
dalam menghambat penyinaran UV dapat disimpulkan dari Gambar 5B. Temuan ini menunjukkan
bahwa formulasi SLN safranal memberikan sifat penghambatan UV yang lebih efisien daripada
liposom karena keadaan padat lipid di SLN.

Kesimpulan

Hasil ini menunjukkan bahwa formulasi SLN-safranal bisa menjadi pembawa yang menjanjikan untuk
pengiriman topikal safranal sebagai agen penghambat UV herbal. SLN yang mengandung 4% safranal
menunjukkan nilai SPF yang lebih tinggi dibandingkan dengan formulati SLN lainnya dan referensi
homosalate 8%. Tidak ada perbedaan yang signifikan antara referensi homosaate SLN-safranal 2% dan
8%. Formulasi SLN-safranal meningkatkan sifat hidrasi kulit karena sifat formulasi SLN bebas. Efek
formulasi SLNsafranal sebagai tabir surya membutuhkan penelitian lebih lanjut tentang kulit manusia.