SISTEM NANOPARTIKEL PADAT RETINIL PALMITAT PADAT: PENGARUH MODIFIKASI

PERMUKAAN DENGAN DICETYL PHOSPHATE PADA PERMEASI KULIT SECARA IN VITRO

DAN EFEK ANTI KERIPUT IN VIVO.
ABSTRAK

Nanopartikel lipid padat padat permukaan (SLNs) yang mengandung retinil palmitat (Rpal) dibuat
dengan metode lelehan panas dengan menggunakan Gelucire 50 / 13® dan Precirol ATO5®. Dicetyl
phosphate (DCP) ditambahkan untuk mengisi secara negatif permukaan SLN dan dengan demikian
meningkatkan sifat distribusi kulit sebesar Rpal. Perembesan kulit in vitro dan penelitian anti
penuaan in vivo dilakukan dengan menggunakan SLN yang terdispersi dalam hidrogel.

SLN berada di bawah ukuran 100 nm dengan Indeks Polydispersity (PDI), dan nilai zetapotensial
absolut yang tinggi cukup untuk mempertahankan stabilitas koloid SLN. SLN negatif yang
dimodifikasi DCP (DCPmod-SLNs) meningkatkan distribusi kulit sebesar Rpal 4,8 kali lipat dan
menghasilkan Rpal ke kedalaman yang lebih besar daripada SLN netral. Efek anti-kerut in vivo dari
formulasi DCPmod-SLN bergantung pada dosis dosis. Namun, efek anti keriput dari formulasi
DCPmod-SLN berbeda secara signifikan dari kontrol negatif dan secara efektif mencegah reduksi
elastin dan superoksida dismutase dengan penyinaran UV. Kesimpulannya, sistem DCPmod-SLN yang
disajikan adalah kandidat yang baik untuk pengiriman barang topikal.

pengantar

Penuaan kulit dikelompokkan menjadi penuaan intrinsik alami, yang disebut penuaan kronologis,
dan penuaan ekstrinsik yang disebabkan oleh sinar UV (Yaarand Gilchrest, 1998). Gambaran umum
keriput kulit aromatik foto-tua, pigmentasi berbintik-bintik, dan tekstur kasar; Thesechanges
diinduksi oleh perubahan pada jaringan ikat kulit seperti kolagen, elastin, fibrillin, dan proteoglikan
(Kang et al., 2001; Uitto dan Bernstein, 1998). Penuaan foto akibat sinar UV menyebabkan turunnya
sintesis pro kolagen dan induksi ekspresi protein metallo proteinase secara signifikan pada kulit
manusia, yang menyebabkan pembentukan keriput (Fisher et al., 1997, 2000).

Retinoid alami dan sintetis dengan aktivitas vitamin A telah digunakan secara topikal untuk
mencegah dan memperbaiki gejala penuaan kulit seperti jerawat dan psoriasis (Katsambas dan
Katoulis, 1999; Roos et al., 1998; Torras, 1996). Meskipun retinoid telah menunjukkan harapan yang
cukup besar untuk kondisi dermatologis, mereka juga terkait dengan respons iritasi lokal, termasuk
eritema, terbakar, gatal, penskalaan, dan pruritus, yang secara kolektif disebut retinoid dermati-tis
(Kim et al., 2005). Selain itu, ketidakstabilan retinoida terhadap oksidasi, panas, cahaya, kelembaban,
dan logam membatasi penggunaannya (Eskandar et al., 2009). Berbagai pendekatan enkapsulasi
menggunakan? -cyclodextrin (Anadolu et al., 2004; Ekaterina et al., 2002; Yap et al., 2005), lipo-
somes (Ioele et al., 2005), kristal cair multilamellar (Caboi et al. , 2001), niosom (Manconiet al.,
2002), dan nanopartikel lipid padat (SLNs) (Loveday andSingh, 2008; Trapasso et al., 2009) telah
diperkenalkan untuk mengurangi efek iritan. dan ketidakstabilan intrinsik retinoid.

SLN adalah salah satu sistem pengiriman obat yang telah digunakan sebagai acarrier untuk retinoid
(Castro et al., 2009; Jenning dan Gohla, 2001; Lim and Kim, 2002; Lim et al., 2004; Liu et al., 2007;
Mandawgadeand Patravale, 2008; Shah et al., 2007). SLNs mengatasi sejumlah kerugian dari sistem
pembawa partikulat lainnya seperti nanopartikel poli-merik, liposom, dan emulsi lemak (Pardeike et
al., 2009). Misalnya, mobilitas obat-obatan terlarang relatif lebih tinggi untuk emulsi lipid daripada
SLN karena emulsi lipid memiliki inti cairan. Namun, berbeda dengan inti cairan lipidemulsi dan
liposom, inti solid SLNs memiliki kemampuan untuk mengurangi mobilitas obat-obatan terlarang,
sehingga mencegah dan / atau mengendalikan kebocoran penyimpanan obat-obatan terlipat selama
penyimpanan (Dingler et al., 1999). ; Westesen et al., 1997). Selain itu, karena SLN dibuat dengan
menggunakan eksipien non-iritasi dan tidak beracun dari lipase GRAS (umumnya dianggap aman),
mereka tampaknya cocok untuk digunakan pada kulit yang rusak atau meradang (Jenning et al.,
2000).

Berbagai strategi modifikasi permukaan telah digunakan untuk meningkatkan permeasi kulit
pembawa obat berbasis lipid (Badiee et al., 2009; D'Souza et al., 2008; Shehata et al., 2008;
Venkateswarlu dan Manjunath, 2004). Di antara pengubah permukaan yang tersedia, stearylamine
(SA) dan dicetyl phosphate (DCP) sering diperkenalkan untuk memudahkan modulasi muatan
permukaan liposom (Badiee et al., 2009; Venkateswarlu dan Manjunath, 2004); SA dan DCP masing-
masing memberikan muatan positif dan negatif pada permukaan kapal induk, dan muatan tersebut
diketahui mempengaruhi efisiensi pengiriman pembawa yang dimodifikasi (El-Samaligy et al., 2006;
Fang et al., 2005; Hathout et al. ., 2007). Namun, sitotoksisitas SA membatasi penggunaan klinisnya
(Heydenreich et al., 2003; Hironaka et al., 2009; Weyenberg et al., 2007). DCP, sebaliknya, dianggap
sebagai eksipien kosmetik yang aman dan telah diterapkan di industri kosmetik
(http://www.cosmeticsdatabase.com). Dalam penelitian ini, kami menyiapkan sistem SLN seharga
Rp'-muat yang dimodifikasi permukaannya dengan DCP untuk meningkatkan distribusi kulit sebesar
Rpal. Sistem SLN yang telah disiapkan dicirikan dan kemudian perembesan kulitnya secara in vitro
dan efek anti keriput in vivo dievaluasi.

Bahan dan metode

2.1. Bahan

Precirol ATO5® (glyceryl palmitostearate) dan Gelucire 50 / 13® (PEG-32 glyceryl stearate) dibeli dari
Gattefossé (Saint-Priest, Prancis). Dicetyl phosphate (DCP) dan retinil palmitat (1.800.000 IU / g
sebagai vitamin aktif) diperoleh dari Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, AS), dan Carbomer 940P® (polimer
vinil karboksil) dibeli dari BASF (Ludwigshafen, Jerman). Senyawa optimal pemotongan suhu (OCT)
diperoleh dari Sakura Finetek (Torrance, CA, AS), dan semua bahan kimia lainnya diperoleh dari
Sigma-Aldrich.

2.2. Persiapan SLTP retinyl palmitate-loaded

SLN disiapkan dari Precirol ATO5®, Gelucire 50 / 13®, dan DCP dengan menggunakan metode hot-
melt. Secara singkat, lipid dilelehkan pada 80 ◦C (lebih tinggi dari titik lebur dari ketiga lipid), Rpal
ditambahkan ke campuran lipid lipida panas, dan ramuannya dicampur sebentar dengan homomixer
(IKA, RW20, Staufen, Jerman) pada 300 rpm selama 3 menit. Fase lipida yang meleleh ditambahkan
ke fase air pra-pemanasan sampai 50 ◦C dan campuran dihomogenisasi dengan mixer ULTRA
TURRAX (IKA, Labortechnik, Staufen, Jerman) selama 3 menit. Larutan lipida panas meleleh
didinginkan sampai suhu kamar dan disimpan dalam lemari es dan formulasi SLN digunakan setelah
mengukur kandungan retinil palmiat.

.3. Pengukuran ukuran partikel dan potensial zeta

Ukuran partikel rata-rata dan indeks polidispersitas (PDI) SLN ditentukan dengan menggunakan
hamburan cahaya dinamis (DLS; DLS-700, Otsuka, Jepang). Formulasi SLN diencerkan menjadi 1:
1000 dengan air suling dan hamburan cahaya diukur dengan segera. Semua pengukuran dilakukan
dalam rangkap tiga. Nilai potensial zeta dari formulasi ditentukan oleh hamburan cahaya dinamis
(DLS) dengan ELS-Z. Untuk mengukur potensi zeta, formulasi SLNs dilarutkan 1000 kali dengan air
suling. Percobaan dilakukan rangkap tiga dan data rata-rata dipaparkan.

2.4. Persiapan SLN bubar di hidrogel

Basis hidrogel dibuat dengan Carbomer 940P®. Secara singkat 2 g Carbomer 940P® ditambahkan ke
100,0 g air suling dan dicampur dengan homomixer (IKA, RW20, Jerman) pada 150 rpm selama 4
jam. Kelompok karboksil terminal Carbomer 940P® dinetralisir dengan penambahan 0,1 mL 10 N-
NaOH ke larutan Carbomer 940P® untuk membuat matriks gel (Edsman et al., 1996). Akhirnya,
larutan SLN yang mengandung Rp ditambahkan ke dasar hidrogel yang disiapkan dengan
pengadukan konstan. Konsentrasi akhir Rpal adalah 1000 IU / g dan 2500 IU / g sebagai vitamin A
aktif untuk formulasi dosis rendah dan tinggi. Konsentrasi akhir Carbomer 940P® adalah 1,0% (b / b).

2.5. Kalorimetri pemindaian diferensial (DSC)

Termogram SLN diperoleh dengan kalorimeter pemindaian diferensial (DSC-3200, MAC Science,
Japan). Dengan tepat ditimbang 2,0 mg aliquot hidrogel SLN ditempatkan pada panci aluminium
standar 40? L dan ditutup rapat. Pan kosong digunakan sebagai referensi. Pemindaian DSC dilakukan
di bawah atmosfir nitrogen dengan laju pemanasan 5 ◦C / menit.

2.6. Pengukuran efisiensi enkapsulasi

Efisiensi enkapsulasi (EE,%) sebesar Rpal pada SLN ditentukan dengan metode ultrasentrifugasi.
Larutan SLN disuspensikan dengan 250.000 x g pada suhu 4 ◦C selama 2 jam. Lapisan SLN yang
dipisahkan dengan hati-hati diperoleh dan diolah dengan aseton untuk mengekstrak Rp. Kandungan
Rpn SLN ditentukan dengan menggunakan HPLC fase normal, dan EE (%) diperoleh dengan
menggunakan persamaan berikut:

dimana QS adalah jumlah Rpal dalam SLNs dan QL adalah jumlah non-encapsulated Rpal dalam
lapisan cair setelah ultrasentrifugasi. Semua pengukuran dilakukan dalam rangkap tiga.

2.7. Studi permeasi kulit in vitro

Tikus Sprague-Dawley jantan (7-8 minggu, 220-240 g) diberi anestesi dengan dietil eter dengan
menghirup, rambut dikeluarkan dari dorsum mereka dengan gunting listrik, dan kulit dorsal
dikeluarkan dengan menggunakan gunting bedah. Jaringan adiposa dikeluarkan dari kulit dengan
pisau bedah, dan kulit segera digunakan setelahnya.

Sifat permeasi kulit in vitro dari hidrogel SLN yang terisi muatannya dievaluasi menggunakan sel
difusi Franz. Kulit tikus dorsal dipasang ke ruang difusi dengan sisi stratum korneum (SC) menghadap
kompartemen donor. Daerah difusi efektif adalah 2,0 cm2. Setiap kompartemen reseptor diisi
dengan 12,5 mL larutan buffer pH 7,4 fosfat (PBS), dan fasa reseptor diaduk dengan batang magnetik
pada 600 rpm. Setelah equilibrasi kulit tikus dengan pH 7,4 PBS pada suhu 37 ◦C, 1,0 g hidrogel SLN
(DCPmod-SLN) bermuatan netral atau DCP dipasang di masing-masing kompartemen donor. Aliquot
(100? L) sampel ditarik dari kompartemen reseptor pada interval waktu yang telah ditentukan dan
diganti dengan volume penyangga segar yang sama. Percobaan dilakukan dalam rangkap tiga, dan
perembesan Rpal dianalisis dengan HPLC fase normal. Semua pengukuran dilakukan dalam rangkap
tiga.

2.8. Ekstraksi Rpal dari jaringan kulit tikus

Setelah studi permeasi kulit, kulit tikus dikeluarkan dari sel difusi Franz dan dicuci secara menyeluruh
3 kali dengan pH 7,4 PBS. Area difusi 2,0 cm2 yang efektif pada kulit dipotong dengan gunting dan
ditimbang. Sampel kulit tikus diobati dengan senyawa OCT dan dibekukan pada suhu-70 ◦C. Kulit
tikus beku diiris dengan ketebalan 100 m dengan cryostat mikrotom (HM 505E, Microm
International GmbH, Walldorf, Jerman). Untuk mengekstrak Rpal dari jaringan kulit tikus yang diiris,
2,0 mL aseton ditambahkan ke masing-masing irisan dan dihomogenisasi dalam bak es dengan mixer
ULTRA TURRAX pada 10.000 rpm selama 5 menit. Setelah sentrifugasi, lapisan aseton bagian atas
dipindahkan ke mikrotube dan dipekatkan dengan konsentrator vakum kecepatan (Micro17TR,
Hanil, Korea). Untuk menganalisa Rp, sampel disuspensikan kembali dalam 0,1 mL aseton, disaring
melalui membran PVDF (Millipore, MA, AS), dan disuntikkan ke dalam sistem HPLC. Semua
pengukuran dilakukan dalam rangkap tiga.

2.9. Kondisi analisis HPLC

Sistem HPLC (TSP, detektor UV 1000, AS) dengan kolom Li-NH2? -Bondapak (3,9 mm × 300 mm,
Waters, AS) digunakan untuk mendeteksi Rp. Komposisi fase gerak yang digunakan adalah metanol:
air pada 90:10, dan laju alirnya adalah 1,0 mL / menit. Penyerapan UV dipantau pada suhu 380 nm,
dan volume injeksinya adalah 20 ° L. Kurva kalibrasi disiapkan pada kisaran 0,2-50 g / mL dan
menunjukkan linieritas yang baik (R2 = 0,9998). Semua pengukuran dilakukan dalam rangkap tiga.

2.10. In vivo anti keriput belajar

Tikus tanpa rambut wanita empat minggu (HR-1) dengan berat 17-24 g diperoleh dari Laboratorium
Pusat. Animal Inc. (Seoul, Korea). Tikus memiliki akses gratis ke makanan dan air dan menyesuaikan
diri dengan airconditioned room (kelembaban 23 ± 2 ◦C dan 50 ± 10% dengan siklus gelap 12 h / 12
h) selama 1 minggu sebelum studi anti-kerut in vivo. Sebanyak 50 tikus dibagi secara acak menjadi 5
kelompok: G1 (dosis tinggi 2500 IU / g sebagai vitamin aktif dalam hidrogel DCPmod-SLN dengan
iradiasi UV), G2 (dosis rendah 1000 IU / g sebagai vitamin aktif dalam DCPmod-SLN hidrogel dengan
iradiasi UV), G3 (kontrol positif, dosis tinggi 2500 IU / g sebagai vitamin A aktif di IOPETM (Amore-
Pacific, Seoul, Korea) dengan iradiasi UV), G4 (kontrol negatif, perawatan garam dengan iradiasi UV)
dan G5 (normal; pengobatan tanpa iradiasi UV). Hidrogel DCPmod-SLN (0,4 g) atau perlakuan lainnya
diaplikasikan pada kulit bagian dorsal, yang kemudian terpapar dengan total 14 J / cm2 UVA (365
nm); Pengobatan ini diulang 3 kali seminggu selama 38 hari. Semua protokol mengikuti panduan
untuk Perawatan dan Penggunaan Hewan Laboratorium KFDA dan dilakukan oleh Biotoxtech Co.,
Ltd., Korea.

2.11. Pengukuran skor keriput

Foto-foto kulit dorsal tikus diambil 2 kali seminggu, sebelum dan sesudah aplikasi topikal setiap
formulasi. Tingkat keriput kulit ditentukan dengan menggunakan skala keriput mulut Bissett (Bissett
et al., 1987). Skala penilaian dibagi menjadi 5 kelas berdasarkan tekstur kerut dan keratosis kasar
atau kasar: lebih buruk (-2), sedikit lebih buruk (-1), tidak ada perubahan (0), sedikit meningkat (+1)
dan ditingkatkan (+2).

2.12. Evaluasi histologis

Sampel kulit tetap di formalin dan disematkan pada parafin. Spesimen kulit dipasang pada slide kaca
dan diwarnai oleh metode pewarnaan oriadin Pinkus 'Giemsa. Serabut elastis yang bernoda diamati
dengan mikroskopi, dan ekspresi serat elastis secara visual dinilai buruk (+), bagus (++), atau sangat
baik (+++).

Gambar 1. Perubahan ukuran partikel dan polidispersitas (PDI) SLN bergantung pada rasio Gelucire
50 / 13® terhadap Precirol ATO5®. Ukuran partikel dan nilai PDI meningkat dengan penambahan
Gelucire 50 / 13®. Dua nilai dimaksimalkan pada rasio Gelucire 50 / 13®: Precirol ATO5® = 80:20 dan
menurun setelah rasio ini. Ukuran partikel dan nilai PDI dipertahankan di bawah 100 nm dan 0,3,
masing-masing, di bawah Gelucire 50 / 13®: Precirol ATO5® = 40:60.

2.13. Aktivitas Superoksida dismutase (SOD)

Sampel Punch-biopsy (0,2 g) dicuci dengan larutan NaCl 0,9% yang mengandung heparin 0,16 mg /
mL dan dihomogenisasi dalam buffer lisis yang mengandung 50 mM Tris-HCl. Untuk mengukur
aktivitas Cu / Zn-SOD (U / mL), sampel kulit yang dihomogenisasi diekstraksi dengan menggunakan
etanol-kloroform 62,5: 37,5 (v / v). Aktivitas SOD ditentukan dengan modifikasi metode Hiroyuki
Ukeda (38). Secara singkat, 1,25 mL buffer 50 mM sodium fosfat (pH 7.0, 7.5, atau 8.0) dicampur
dengan 50? L 3.0 mM EDTA, 3,0 mM xanthine, dan 0,75 mM XTT (2,3-bis (2-methoxy- 4-nitro-5-
sulfofenil) -2H-tetrazolium-5-karboksilat)) dan sampel ditambahkan ke dalam campuran. Akhirnya,
larutan xanthine oxidase (50? L) ditambahkan ke dalam campuran dan diinkubasi pada suhu 37 ◦C
selama 5 menit, dan absorbansi pada 470 nm diukur dengan spektrofotometer UV (V-550, Jasco,
Jepang).

2.14. Statistik

Signifikansi statistik dievaluasi dengan menggunakan tes satu arah ANOVA atau Dunnett's t-test,
sesuai dengan tes Levene; Perbedaan lainnya dianalisis dengan menggunakan uji ANOVA non
parametrik.

3. Hasil
3.1. Perbedaan ukuran partikel tergantung pada rasio Gelucire 50 / 13® terhadap Precirol ATO5®

Ukuran partikel SLN diukur dengan rasio yang berbeda dari Gelucire 50 / 13® sampai Precirol ATO5®.
Seperti ditunjukkan pada Gambar 1, semua SLN berukuran submikron, kecuali untuk formulasi yang
tidak mengandung Gelucire 50 / 13® (yang digabungkan). Ukuran partikel dipertahankan di bawah
100 nm sampai rasio Gelucire 50 / 13®: Precirol ATO5® mencapai 40:60, dan penambahan lanjutan
ukuran partikel meningkat 50% dari Gelucire 50 / 13®, yang dimaksimalkan pada rasio 80:20. Nilai
PDI juga meningkat tergantung pada proporsi Gelucire 50 / 13® namun tetap di bawah 0,3, nilai yang
konsisten dengan menjaga stabilitas koloid yang baik, sampai kandungan Gelucire 50/13 mencapai
40%. Modifikasi permukaan dengan DCP dilakukan dengan menggunakan rasio Gelucire 50 / 13®
terhadap Precirol ATO5® 20:80 berdasarkan hasil ukuran partikel dan pengukuran PDI.

Gambar 2. Diameter rata-rata dan indeks polidispersitas (a) dan potensial zeta (b)

DCPmod-SLNs. Bila 2,5% dari DCP ditambahkan, ukuran partikel dan PDI adalah

Nilai potensi terkecil dan zeta cukup untuk menjaga kestabilan fisik

SLNs.

3.2. Sifat-sifat DCPmod-SLNs: ukuran partikel, potensi zeta dan efisiensi enkapsulasi

DCP digunakan untuk mengisi secara negatif permukaan SLN. Semua persiapan DCPmod-SLN
memiliki ukuran partikel yang lebih kecil dari 100 nm dan nilai PDI sekitar 0,3 (Gambar 2a). Besarnya
potensi zeta meningkat sampai jumlah DCP ditambahkan mencapai 2,5%, menunjukkan stabilitas
koloid yang sangat baik pada 2,5% DCP (Gambar 2b). SLN berbentuk bulat (data tidak ditunjukkan),
dan efisiensi enkapsulasi netral dan DCPmod-SLN masing-masing 99,5% dan 99,1%. Dari pengukuran
efisiensi enkapsulasi, kami menemukan bahwa Rpal stabil sebelum dan sesudah persiapan SLN.
3.3. Hasil penelitian DSC

Integritas fisik dari SLN dalam matriks hidrogel dipelajari menggunakan diferensial scanning
kalorimetri (DSC). Titik leleh dari Gelucire 53 / 10®, Precirol ATO5®, dan DCP masing-masing sekitar
49 ◦C, 56 ◦C, dan 66 ◦C (Gambar 3a). Seperti ditunjukkan pada Gambar 3b, termogram DSC tidak
menunjukkan puncak pada kontrol hidrogel (tanpa SLNs) namun menunjukkan puncak endotermik
kecil sekitar 55 ◦C dalam formulasi hidrogel DCPmod-SLN. Kami percaya bahwa puncak endotermik
terutama disebabkan oleh komponen utama, Precirol ATO5®, yang menunjukkan bahwa SLN yang
dipersiapkan dipadatkan dalam bentuk stabil secara fisik oleh Precirol ATO5®.

Gambar 3. Termometer DSC dari lempeng hidrogel yang terdispersi. Puncak endotermik yang
diinduksi oleh Precirol ATO5® menunjukkan bahwa netral dan DCPmod-SLN yang terdispersi dalam
matriks hidrogel ada sebagai keadaan padat

3.4. Karakteristik distribusi kulit formulasi SLN seharga Rp

Sifat distribusi kulit sebesar Rpal ditentukan setelah 12 jam studi permeasi kulit dengan mengiris
horizontal spesimen kulit beku. Menurut pengamatan mikroskopik ringan kulit tikus, 20-40 m atas
terdiri dari stratum korneum dan lapisan atas epidermis yang layak, lapisan berikutnya sampai 220-
270? M pada dasarnya dari epidermis, dan lapisan lebih dalam dari 400? M dermis dan sejumlah
kecil lemak subkutan (foto tidak diperlihatkan). Gambar 4 menunjukkan distribusi kulit tikus pada
kulit tikus setelah aplikasi hidrogel SLN selama 12 jam. Dari studi permeasi kulit in vitro, sebagian
besar yang diserap Rpal dari netral dan DCPmod-SLNs didistribusikan di kulit bagian atas 200 (kulit
epidermis). Namun, pengiriman Rpal oleh DCPmod-SLN terasa lebih dalam dari pada formulasi SLN
netral. Selain itu, jumlah total distribusi sebesar Rpal yang disampaikan oleh hidrogel DCPmod-SLN
sekitar 4,8 kali lebih besar dari yang disampaikan oleh formulasi netral. Karena langkah pencucian
untuk menghilangkan sisa partikel SLN atau molekul bebas Rp dilakukan dengan hati-hati dan
divalidasi (data tidak ditunjukkan), ada kemungkinan sangat kecil bahwa SLN atau molekul bebas
kosong tetap berada di permukaan kulit.

3.5. Efek anti keriput hidrogel SLN

Nilai anti keriput diperoleh setelah 20 hari pengobatan dengan sediaan topikal. Skor anti keriput G4
(kontrol negatif, garam dengan iradiasi UV) menurun setelah hari ke 25. Sebaliknya, G1 (dosis tinggi
vitamin A aktif dalam hidrogel DCPmod-SLN dengan iradiasi UV), G2 (dosis rendah vitamin aktif A
dalam hidrogel DCPmod-SLN dengan iradiasi UV) dan G3 (kontrol positif, IOPETM dengan iradiasi UV)
menunjukkan skor anti keriput yang jauh lebih baik daripada G4. Efek anti keriput dari formulasi
hidrogel DCPmod-SLN bergantung pada dosis, dan efek yang diamati pada kelompok hidrogel
DCPmod-SLN dosis tinggi (G1) adalah sebanding dengan hasil pada kelompok kontrol positif (G3),
yaitu diolah dengan produk komersial (Gambar 5). Seperti ditunjukkan pada Gambar 6, keriput tebal
dan dalam diamati pada G4 (Gambar 6d), sedangkan kelompok lainnya (G1-3) menunjukkan
permukaan kulit yang sangat halus dan membaik (Gambar 6a-c).

Gambar 4. Distribusi kulit in vitro sebesar Rpal setelah 12 jam (bar hitam: SLN netral disoersed
hidrogel; bar abu-abu: DCPmod-SLNs bubur hidrogel). Sebagian besar Rpal didistribusikan di lapisan
epidermis bagian atas oleh SLN netral. Namun formulasi DCPmod-SLNs menghasilkan Rpal lebih
efisien dibandingkan dengan formulasi SLN netral. Formulasi DCPmod-SLNs menghasilkan 4,00 kali
lipat dibandingkan dengan formulasi SLN netral
3.6. Evaluasi histologis kulit tikus

Hasil evaluasi histologis dirangkum dalam Tabel 1. Pada kelompok normal, 90% hewan menunjukkan
pembentukan serat elastis pada tingkat yang baik atau sangat baik. Sebaliknya, proporsi yang
mengekspresikan tingkat baik atau sangat baik dikurangi menjadi

Gambar 5. Hasil pengukuran skor anti keriput. Formulasi DCPmod-SLN menunjukkan efek anti
keriput yang berbeda secara statistik dibandingkan kelompok kontrol negatif. Efek anti keriput
formulasi DCPmod-SLN adalah kelompok dosis DCPmod-SLN dosis tinggi dan dosis tinggi (G1)
menunjukkan efek anti keriput yang sebanding dengan kontrol positif (G3). * P <0,05, ** P <0,01 dan
** P <0,001 menunjukkan perbedaan yang signifikan dari G4.
Gambar 6. Foto-foto kulit tikus yang tidak berambut. Keriput tebal dan dalam diamati

Pada G4 sedangkan G1, G2 dan G3 menunjukkan permukaan kulit yang sangat halus. (a) gel
DCPmod-SLNs dosis tinggi dengan iradiasi UV (G1); (b) gel DCPmod-SLNs dosis rendah dengan
iradiasi UV (G2); (c) kontrol positif dengan iradiasi UV (G3) dan (d) perlakuan garam dengan iradiasi
UV (G4).

sekitar 50% dengan iradiasi UV (kelompok kontrol negatif). Pengobatan dengan formulasi hidrogel
DCPmod-SLN atau IOPETM menunjukkan efek perlindungan terhadap penyinaran UV. Dengan
pengamatan mikroskopis, kami juga menemukan bahwa serat elastis pasti mengalami penurunan
dengan iradiasi UV dibandingkan dengan G5, kelompok normal yang tidak mendapat pengobatan
(Gambar 7e). Hasil untuk kelompok hidrogel DCPmod-SLN tinggi (G1) dan rendah (G2) sebanding
dengan kelompok kontrol positif (G3). Semua perawatan retinoid (G1-3) menunjukkan efek
pencegahan terhadap degradasi serat elastis dengan iradiasi UV.

3.7. Penentuan konsentrasi superoksida dismutase (SOD) pada jaringan kulit tikus

Hasil pengukuran superoksida dismutase (SOD) dari jaringan kulit tikus dirangkum dalam Tabel 1.
Untuk mengetahui pengaruh perlakuan terhadap aktivitas SOD, nilai aktivitas SOD kelompok
perlakuan normal dan retinoid dibandingkan dengan G4 (negatif kontrol). Tingkat normal aktivitas
SOD adalah diukur sebagai 14,71 ± 1,58 U / mL, 181,4% lebih tinggi dari pada kontrol negatif (8,11 ±
0,83 U / mL), yang berarti bahwa aktivitas SOD dari kontrol negatif diturunkan dengan iradiasi UV.
Aktivitas SOD G1, G2, dan G3 masing-masing adalah 122,8%, 116,8%, dan 103,6% dari kontrol
negatif, yang mengindikasikan bahwa aktivitas SOD entah bagaimana dilindungi oleh perawatan
retinoid. Meskipun tidak ada perbedaan statistik dalam aktivitas SOD yang ditemukan di antara
kelompok perlakuan (G1, G2, dan G3), efek perlindungan dari formulasi DCPmod-SLN (G1 dan G2)
terhadap pengurangan SOD dengan iradiasi UV tampaknya lebih tinggi dari pada perlakuan produk
komersial (G3).
Gambar 7. Observasi histologis setelah penerapan formulasi hidrogel DCPmod-SLN. Serat elastis
pasti mengalami penurunan dengan iradiasi UV di G4. Hasil untuk dosis tinggi (G1) dan kelompok
dosis rendah (G2) sebanding dengan kelompok kontrol positif (G3) dan semua kelompok perlakuan
retinoid (G1-3) menunjukkan efek pencegahan terhadap degradasi serat elastis. (a) dosis tinggi; (b)
dosis rendah; (c) kontrol positif; (d dan e) kontrol negatif. Panah mewakili serat elastis. Serat elastis
diamati pada 200 × megah.

4. Diskusi

Secara umum, surfaktan mempengaruhi ukuran partikel koloid sebagai a fungsi konsentrasinya.
Gelucire 50 / 13® adalah amphiphilic molekul dengan nilai HLB tinggi (nilai lipofilik hidrofilik) 13 yang
telah digunakan sebagai pengemulsi untuk pembuatan mikroemulsifikasi sendiri sistem pengiriman
obat (Chambin dan Jannin, 2005). Oleh karena itu, ukuran partikel SLN yang dipersiapkan dengan
Precirol ATO 5® diharapkan terjadi menurun dengan penambahan Gelucire 50 / 13®. Tanpa diduga,
bagaimanapun, Ukuran partikel meningkat dengan meningkatnya Gelucire 50 / 13® konten. Precirol
ATO5® (Gambar 8a) terdiri dari mono-, di-, dan trigliserida asam palmitosteatat (C16 atau C18), dan
diester fraksi menyumbang 40-60% dari total massa. Gelucire 50 / 13® (Gambar 8b) adalah substansi
multi-penyusun yang terdiri dari mono-, di-, dan trigliserida dan ester mono- dan di-PEG-32 dari
palmitostearic asam (C16 atau C18). Mengingat struktur molekul dan komposisi dari dua eksipien,
perakitan molekul antara Precirol ATO5® dan Gelucire 50 / 13® selama pembentukan SLN diusulkan
untuk menjadi seperti yang ditunjukkan pada Gambar 9. Awalnya, ketika Gelucire Rasio 50 / 13®
terhadap Precirol ATO5® rendah, molekul Gelucire 50 / 13® mungkin terletak di atas permukaan
molekul Precirol ATO5®. Pada tahap ini, Precirol ATO5® adalah unsur utama dari Dinding membran
SLN (Gambar 9a), dan bagian lipofilik Gelucire 50/13® intercalates antara molekul Precirol ATO5®
yang membentuk inti lipofilik (Gambar 9b). Bila proporsinya Peningkatan Gelucire 50/13®, molekul-
molekul Gelucire 50/13® dimasukkan antara molekul 50/13 Gelucire yang sudah berlabuh pada
permukaan inti Precirol ATO5® (Gambar 9c). Di awal interpolasi molekul Gelucire 50/13® antara
Precirol ATO5®, kedua zat tersebut berkumpul secara spontan melalui van der Waals memaksa
antara rantai hidrokarbon panjang lipofilik mereka. Dengan terus menambahkan Gelucire 50 / 13®,
bagaimanapun, Gelucire 50 / 13® sepertinya berinteraksi dengan molekul Gelucire 50 / 13® lainnya
melalui ikatan hidrogen dari kelompok terminal COOH dan OH molekul Gelucire 50 / 13® satu sama
lain atau dengan C O atau O dari Precirol ATO5®, atau melalui interaksi van der Waals antara rantai
karbon panjang lipofilik palmitostearil. Ini Interaksi self-assembling seakan terus berlanjut sampai
Gelucire Rasio 50 / 13® terhadap Precirol ATO5® mencapai 80:20. Rasio optimal dari Gelucire 50 /
13® sampai Precirol ATO5® untuk ukuran nano homogen SLN di bawah 100 nm tampak 40:60.
Dengan rasio ini, PDI Nilai SLN ditemukan di bawah 0,3, yang mengindikasikan bagus keseragaman
formulasi koloid (Verma et al., 2003a, 2003b).

DCP dan SA biasanya digunakan untuk memodifikasi muatan permukaan liposom. Namun,
penggunaan praktis SA dalam aplikasi kosmetik dan farmasi dibatasi oleh sitotoksisitasnya
(Weyenberg et al., 2007). DCP dikenal sebagai bahan kosmetik yang aman dan telah digunakan
untuk pelembab wajah, rambut

Gambar 8. Struktur molekul Precirol ATO5® (a) dan Gelucire 50 / 13® (b). Precirol ATO5® terdiri dari
mono-, di- dan trigliserida dari asam palmito-stearic (C16 dan C18) dan Gelucire 50 / 13® adalah zat
multi-penyusun yang terdiri dari mono, di dan trigliserida dan ester mono dan di-PEG-32 dari asam
palmito-stearat (C16 dan C18).

agen pemutih warna, tabir surya pelembab, dan krim tangan (http://www.cosmeticsdatabase.com).
SLN dimodifikasi permukaannya dengan DCP menunjukkan bioavailabilitas yang lebih besar dan
efisiensi penargetan otak (Kaur et al., 2008). Namun, potensi DCP untuk SLN topikal pengiriman
belum dilaporkan sampai saat ini. Secara umum, DCP rendah permeabilitas kulit dibandingkan
dengan SA, pemasok muatan positif. Karena kulit mamalia bermuatan negatif karena anionik
molekul seperti kolesterol sulfat, membran kulit memiliki permselektivitas untuk kation (Katahira et
al., 1999; Lee et al., 2007). Hasil permselektivitas ini dihasilkan dari adsorpsi pembawa Permukaan
kulit melalui interaksi elektrostatik antara yang negatif permukaan kulit yang dibebankan dan
pembawa bermuatan positif komponen. Meskipun permselektivitas kulit mengurangi permeabilitas
pembawa bermuatan negatif, pembawa yang dimodifikasi DCP adalah cocok untuk penggunaan
topikal jika diperlukan efek sistemik yang sedikit. Menurut ke Biruss dan Valenta, liposom yang
dimodifikasi DCP meningkatkan permeasi kulit progesteron, dimana mekanisme ditingkatkan
Liposom bermuatan negatif adalah karena kemampuan DCP untuk meningkatkan hidrasi kulit (Biruss
dan Valenta, 2007). Kulit Mekanisme hidrasi liposom yang dimodifikasi DCP telah baik dijelaskan
(Sinico et al., 2005). Oleh karena itu, dalam penelitian ini, Kemungkinan mekanisme penyaluran kulit
yang disempurnakan seharga Rp ke DCPmod-SLNs bisa dijelaskan sebagai berikut. Netral dan
DCPmod-SLN menempel pada permukaan kulit dan memperbaiki waktu tinggal SLN, memungkinkan
pertukaran material antara SLN dan lipida interselular pada kulit. Hal ini memungkinkan difusi Rp
molekul serta fragmen membran kecil ke dalam SC, yang dihasilkan dalam perturbasi lipid dan
modifikasi SC antar sel dan modifikasi dari entalpi transisi lipid SC, yang mungkin meningkatkan
permeabilitas membran SLNs. Selama proses ini, SLNs Bentuk film lipid pada kulit dan simpan air
untuk melembabkan kulit.

Berdasarkan ekspresi serat elastis dan hasil aktivitas SOD, Formulasi DCPmod-SLN dapat
dipertimbangkan untuk mencegah secara efektif formasi keriput. Meski efek anti keriput di
kelompok hidrogel DCPmod-SLN dosis rendah lebih rendah dari pada kelompok hidrogel DCPmod-
SLN dosis tinggi, keduanya formulasi SLN secara signifikan efektif dibandingkan dengan kontrol
positif untuk Pencegahan pembentukan kerut, terutama dari hari ke 28 aplikasi di Efek pencegahan
dari formulasi SLN melawan Formasi kerut bergantung pada dosis Rpal (Gambar 5 dan 6). Formulasi
DCPmod-SLN mencegah penurunan serat elastis dengan iradiasi UV, dan efeknya pada dosis tinggi
dan rendah DCPmod- Kelompok hidrogel SLN sebanding dengan yang positif kelompok kontrol Hasil
evaluasi histologis untuk level serat elastis di dalam jaringan kulit (Gambar 7a-c) bersamaan dengan
data foto (Gambar 6). Secara umum, saat kulit terkena UV, Spesies oksigen reaktif (ROS) diinduksi
dan merusak DNA atau sel membran (Kulms et al., 2002). Secara khusus, ROS mengoksidasi
selularlipid, mengakibatkan timbulnya kerutan akibat penuaan kulit hilangnya elastisitas (Fisher et
al., 2002). Superoksida dismutase (SOD) menghilangkan ROS, namun aktivitas enzim ini mengalami
penurunan Paparan sinar UV (Okada et al., 1994; Punnonen et al., 1991). Ketika kita
membandingkan efek pelindung SOD-formulasi DCPmod-SLN versus G4 (kontrol negatif), formulasi
SLN dosis tinggi dan rendah masing menunjukkan 122,8% dan 116,8% aktivitas SOD terlihat di G4.
Meski tidak ada perbedaan signifikan dalam aktivitas SOD ditemukan di antara G1-4, kami melihat
kecenderungan untuk ditingkatkan Perlindungan SOD dengan formulasi hidrogel SLN yang terisi.
Semua kelompok menunjukkan aktivitas SOD menurun dibandingkan dengan G5 (normal kelompok).
Namun, kedua formulasi DCPmod-SLN menunjukkan keunggulan SOD-efek pelindung dibandingkan
dengan G4 (kontrol negatif), dan proteksi itu dengan urutan sebagai berikut: G1> G2> G3 dan G4.

Mekanisme kemungkinan efek anti keriput dari formulasi DCPmod-SLN dihipotesiskan sebagai
berikut. DCPmod-SLNs nanosized dikirim ke lapisan dermal yang memungkinkan di mana antioksidan
harus dikirim (Shindo et al., 1993, 1994), dan pengiriman Rpal dipromosikan oleh efek hidrasi DCP
yang berlabuh di permukaan SLN. Namun, karena sifat hidrofobik SLNs dan Rpal, DCPmod-SLNs yang
dikirim dan Rpal diendapkan terutama ke lapisan dermal yang layak. Hal ini didukung oleh
pengamatan bahwa tidak ada Rpal yang ditemukan di ruang reseptor sel difusi Franz setelah studi
ketuban 12 jam (data tidak ditunjukkan), dan sebagian besar Rpal terdeteksi di dekat lapisan dermal
bagian atas. The Rpal dilepaskan dari SLNs memberikan efek anti-oksidatif dengan melindungi SOD
dari radiasi UV, yang melindungi terhadap hilangnya elastin, yang pada akhirnya mengakibatkan efek
anti keriput.
Gambar 9. Skema yang diusulkan untuk perakitan sendiri Gelucire 50 / 13® ke permukaan Precirol
ATO5®. Bila rasio Gelucire 50 / 13® terhadap Precirol ATO5® rendah, molekul Gelucire 50 / 13®
mungkin berada di atas permukaan molekul Precirol ATO5®. Pada tahap ini, Precirol ATO5® secara
dominan menyusun dinding membran SLN dan bagian lipofilik dari Gelucire 50 / 13® mengintervitasi
antara inti hidrofobik Precirol ATO5® (a dan b). Meningkatkan isi Gelucire 50 / 13®, molekul Gelucire
50/13® memasukkan molekul Gelucire 50/13® yang telah berlabuh pada permukaan Precirol ATO5®
(c).

5. Kesimpulan

Nano berukuran DCPmod-SLNs yang berisi Rpal berhasil disiapkan sebagai nanopartikel berukuran
seragam seragam yang berukuran lebih kecil dari 100 nm dengan mengoptimalkan rasio Gelucire 50
/ 13® terhadap Precirol ATO5®. Kandungan DCP optimal adalah 2,5% dari berat total matriks padat,
dan semua SLN menunjukkan efisiensi enkapsulasi yang tinggi lebih dari 99%. Formulasi sekarang
mudah diproduksi. Partikel berukuran nano berhasil dikirim ke lapisan epidermis dan dermis yang
semestinya, dan pelokalan kulit sebesar Rpal ditingkatkan dengan modifikasi permukaan SLN dengan
DCP. Ekspresi serat elastis dan hasil aktivitas SOD menunjukkan bahwa formulasi DCPmod-SLN
efektif mencegah pembentukan kerut. Kesimpulannya, formulasi DCPmod-SLN yang mengandung
Rpal mungkin berguna untuk pengembangan preparat anti keriput.