Berdasarkan spektrum uv vis dari fraksi vial I dalam MeOH

dihasilkan satu pita serapan, yaitu pita II terletak pada panjang gelombang
200 nm. Dari spectrum yang diperoleh diduga fraksi ini belum
mengandung senyawa isoflavon, karena senyawa tersebut memberikan
rentang serapan pada pita II sebesar 250 nm- 280 nm. Setelah penambahan
pereaksi geser NaOH dan didiamkan selama 5 menit maka terjadi
pergeseran hipsokromik pada pita II sebesar -30 nm hal ini menunjukkan
bahwa fraksi pada cincin B mengandung gugus orto dihidroksi.
Penambahan pereaksi geser AlCl3 menyebabkan terjadinya
pergeseran batokromik sebesar +10 nm pada pita II. Hal ini menujukkan
bahwa fraksi mengandung senyawa isoflavon yang mengandung gugus
OH pada posisi 5. Penambahan pereaksi geser AlCl3-HCL terjadi
pergeseran batokromik pada pita II sebesar +15 nm yang menujukkan
adanya senyawa isoflavon dalam fraksi yang mengandung gugus orto
dihidroksi pada cincin A (6,7 dan 7,8). Pereaksi ini dapat membentuk
kompleks tahan asam antara gugus hidroksi dan keton yang bertetangga
dan membentuk kompleks tidak tahan asam dengan gugus orto – hidroksi,
pereaksi ini dapat digunakan untuk mendeteksi kedua gugus tersebut.
Adanya gugus 3’, 4’ – dihidroksil pada isoflavon atau flavanon dan
dihidroflavonol tidak dapat dideteksi dengan AlCl3 karena cincin B
mempunyai sedikit atau tidak ada konyugasi dengan kromofor utama. Pita
serapa II spektra UV dari semua 5 – OH isoflavon dapat dideteksi dengan
penambahan AlCl3 atau HCl, kecuali 2 – karboksil 5, 7 – dihidroksil
isoflavon. Adanya gugus tersebut ditandai dengan pergeseran batokromik
pada pita II 10 – 14 nm (relatif terhadap spektra metanol). Spektra
isoflavon yang tidak mempunyai gugus 5 – OH bebas tidak berefek setelah
penamabahan AlCl3 / HCl. Pada flavon dan flavonol, adanya gugus orto –
hidroksil pada cincin B dapat diketahui jika penambahan asam terhadap
spektra AlCl3menghasilkan pergeseran hipsokromik sebesar 30 – 40 nm
pada pita I (atau pita Ia jika terdiri dari dua puncak). Dengan adanya
pergeseran batokromik pada pita Ia (dalam AlCl3 / HCl) dibandingkan
dengan pita I (dalam metanol) sebesar 35 – 55 nm, menunjukkan adanya 5
– OH flavon atau flavonol 3 – OH tersubtitusi.
Penambahan pereaksi geser Natrium Asetat menyebabkan
pergeseran batokromik pada pita II sebesar +5 nm yang menunjukkan
adanya gugus 7-OH. Penambahan pereaksi geser Natrium Asetat dan
didiamkan selama 5 menit menunjukkan kekuatan bertambah dengan
bertambahnya waktu. Hal ini menunjukkan adanya gugus yang peka
terhadap basa seperti gugus OH pada posisi 3,4 dihidroksi. Pada
penambahan pereaksi geser Natrium Asetat –Asam borat terjadi
pergeseran barokromik pada piat II sebesar +10 nm yang menunjukkan
terdapat gugus orto dihidroksi pada cincin A (6,7 dan 7,8). Natrium asetat
merupakan basa lemah dan hanya akan mengionisasi gugus yang sifat
keasamannya tinggi, khususnya untuk mendeteksi adanya gugus 7 – OH
bebas. Natrium asetat hanya dapat mengionisasi isoflavon khusus pada
gugus 7 – OH. Gugus 3’ atau 4’ – OH pada flavonol. Oleh sebab itu
interpretasi terhadap pergeseran spektra isoflavon untuk penambahan
natrium asetat menjadi sederhana. Adanya 7 – OH isoflavon menyebabkan
pergeseran batokromik 6 – 20 nm pada pita II setelah penambahan natrium
asetat. Adanya natrium asetat dan asam borat akan membentuk kompleks
dengan gugus orto hidroksil paa cincin B menunjukkan pergeseran
batokromik pada pita serapan I sebesar 12 – 30 nm. Gugus orto hidroksil
pada cincin A juga dapat dideteksi dengan efek natrium asetat dan asam
borat.
Tabel 4.5. Pergeseran Pita dengan Pereaksi Geser

Pereaksi geser Pergeseran yang tampak

Pita I Pita II
Vial 1
MeOH - 210
NaOMe - 210
NaOMe setelah 5 menit - 210
AlCl3 - 210
AlCl/HCl - 210
NaOAc - 225
NaOAc setelah 5 menit - 225
NaOAc/H3BO3 - 225
Vial 2
MeOH - 210
NaOMe - 210
NaOMe setelah 5 menit - 210
AlCl3 - 210
AlCl/HCl - 210
NaOAc - 225
NaOAc setelah 5 menit - 225
NaOAc/H3BO3 - 230
Vial 3
MeOH - 210
NaOMe - 210
NaOMe setelah 5 menit - 210
AlCl3 - 210
AlCl/HCl - 210
NaOAc - 225
NaOAc setelah 5 menit - 225
NaOAc/H3BO3 - 230