Karakterisasi Kolagen Asam-Soluble dari Kulit Smelt Surf (Hypomesus pretiosus japonicus

Brevoort)

ABSTRAK
Kolagen yang larut dalam asam diekstraksi dari kulit yang berbau surf dan bercirikan.
Hasil kolagen tinggi sekitar 24,0% berat kering. Dengan elektroforesis gel SDS-poliakrilamid
dan kromatografi kolom CM-Toyopearl 650 M, kolagen ini adalah heterotrimer dengan
komposisi rantai α1α2α3. Suhu denaturasi adalah 32,5 ℃, sekitar 4,5 ℃ lebih rendah dari pada
kulit babi. Analisis inframerah refleksi pantulan-fourier yang dipadukan menunjukkan bahwa
persentase komponen struktural sekunder pada kolagen ini adalah 11% α-heliks, 34% β-sheet,
19% β-turn, dan 21% lainnya. Ini menunjukkan bahwa struktur heliks triple hadir dalam kolagen
yang larut dalam asam dari kulit ombak yang berbau dibandingkan dengan kulit babi.

1. Pendahuluan
Kolagen telah diekstrak dari kulit spesies vertebrata seperti babi dan betis sapi untuk
aplikasi industri sebagai makanan fungsional, kosmetik, dan bahan biomedis. Namun, bahan-
bahan ini tidak dapat digunakan untuk ekstraksi kolagen, karena wabah ensefalopati bongkah
spongiform (BSE), ensefalofilia spongimular transmissible (TSE), penyakit kaki dan mulut
(PMD) [1], dan avian influenza yang mengakibatkan kecemasan di kalangan pengguna produk
kolagen dan kolagen dari hewan darat ini. Saat ini, alternatif untuk hewan darat sebagai sumber
kolagen sangat diinginkan. Dalam beberapa tahun terakhir, kami mencoba untuk mengekstrak
dan mengkarakterisasi kolagen dari organisme air karena mereka telah dilaporkan tidak mungkin
terkait dengan infeksi seperti BSE, TSE, dan PMK, sehingga sampel kolagen yang aman dapat
diperoleh dari organisme air. Hasil kolagen yang tinggi dapat diperoleh dari organisme air,
walaupun sifat fisik dan kimia kolagen ini berbeda dari hewan darat [2-14]. Hasil ini
menunjukkan bahwa kolagen dari perairan atau
ganisme berpotensi menjadi sumber kolagen penting untuk digunakan di bidang makanan,
kosmetik, dan medis.
Surf smelt milik Osmeridae yang merupakan anggota keluarga Hypomesus. Ukuran
selancar smelt (sekitar 20 cm: ukuran tubuh, sekitar 4%: rasio kulit terhadap berat badan) sangat
berbeda dengan aroma Jepang (sekitar 15 cm) yang berhubungan erat dengan aroma berselancar.
Surf smelt tidak bisa hidup di air tawar, bagaimanapun, smelt Jepang bisa hidup baik di air tawar
dan air laut. Surf smelt tinggal tidak hanya di sekitar Hokkaido, Jepang, tapi juga di Kepulauan
Kuril dan di Semenanjung Kamchatka. Hasil tangkapan ombak sekitar 11.000 ton per tahun oleh
perikanan darat dari Kota Abashiri, Hokkaido, Jepang. Orang Jepang mengkonsumsi berbagai
jenis ikan yang meliputi tuna, udang, kerang, octopi, dan cumi-cumi. Secara khusus, ikan goreng
banyak dimakan sebagai tempura di Jepang. Surf smelt adalah salah satu ikan yang dimakan
sebagai tempura.
Dalam penelitian ini, kami menggambarkan sifat isolasi dan sifat fisikokimia kolagen
yang larut dalam asam dari kulit bersayap karena digunakan sebagai alternatif kolagen mamalia
dalam bahan makanan, kosmetik, dan biomedis.

2. Bahan dan Metode

2.1. Sample
Fresh surf smelt (Hypomesus pretiosus japonicus Bre- voort) (50-65 g berat badan dan
panjang tubuh 15-18 cm) tertangkap di pelabuhan Abashiri, kota Abashiri, Hokkaido, Jepang,
dan kemudian diangkut es ke laboratorium kami. . Ini disimpan pada -85 ℃ sampai digunakan.
2.2. Persiapan Kolagen dari Skins dari Smelt Surf
Semua prosedur preparatif dilakukan pada suhu 4 ℃ dan dilakukan seperti yang
dijelaskan oleh Miller [15,16]. Ikan beku dicairkan dan kulitnya dilepas, dipangkas dari sisa
daging ikan, dan dipotong kecil-kecil menggunakan pisau bedah. Potongannya (0,5 x 0,5 cm)
dihomogenisasi selama 3 hari dengan 10 volume etanol 10% untuk menghilangkan lemak
dengan mengubah larutan dua kali sehari. Homogenate kemudian diperas menggunakan kain
katun tipis untuk menghilangkan etanol yang berlebihan, dan residunya dicuci dengan air suling
selama 1 hari dengan mengubah larutan dua kali sehari. Masalah ini diekstraksi selama 2 hari
dengan NaOH 0,1 M untuk menghilangkan protein nonkolin dengan mengubah larutan dua kali
sehari. Masalahnya diperas menggunakan kain katun tipis dan kemudian dicuci dengan air suling
selama 2 hari dengan mengubah larutan dua kali sehari. Setelah liofilisasi, bahan kering
digunakan untuk ekstraksi kolagen yang larut dalam asam. Masalah ini diobati selama 2 hari
dengan 10 volume asam asetat 0,5 M bersamaan dengan pengadukan yang lembut. Ekstrak
disentrifugasi pada 50.000 x g selama 1 jam. Supernatan disatukan dan diasamkan untuk
mengisolasi dan memurnikan kolagen dengan presipitasi garam selektif; kolagen diisolasi
dengan penambahan NaCl padat sampai konsentrasi akhir 0,7 M NaCl dalam 0,5 M asam asetat,
diikuti oleh presipitasi dengan 2,2 M NaCl pada buffer Tris-HCl 0,05 M, pH 7,5. Kolagen
dimurnikan diperoleh dengan sentrifugasi pada 50.000 xg selama 1 jam, dan endapan dilarutkan
dalam volume minimum 0,5 M asam asetat, dialisis dengan asam 0,1 M asetat selama 2 hari
dengan mengubah larutan sekali sehari, air suling selama 3 hari dengan mengubah larutan dua
kali sehari, dan kemudian lyophilized (acid-soluble collagen).
Sebelum ekstraksi kolagen dari tulang, tulang (sekitar 0,5 x 0,5 cm2) dipecah oleh palu,
kemudian diekstraksi dengan NaOH 0,1 M selama 3 hari untuk menghilangkan protein tanpa
protein dengan mengubah larutan dua kali sehari. Residu dicuci dengan air suling didinginkan
dan diliofilisasi. Kolagen dari bahan kering juga dilarutkan seperti yang dijelaskan di atas.
2.3. Elektroforesis Gel SDS-Polyacrylamide (SDS-PAGE) Kolagen Asam-Soluble dari Skins of
the Smelt
SDS-PAGE dilakukan seperti yang telah dijelaskan sebelumnya [8]. Kolagen (50 mg
protein) dilarutkan dalam 0,5 M Tris-HCl, pH 6,8, mengandung 2% SDS, gliserol 25% dengan
2-mercaptoethanol. Setelah elektroforesis pada 50 mA menggunakan gel 7,5%, gel tersebut
diwarnai dengan 0,25% Coomassie biru cemerlang R-250 (Fluka Fine Chemical Co. Ltd.,
Tokyo, Jepang) yang mengandung etanol 25% dan asam asetat 10% dan dikelompokkan dengan
5% metanol dan asam asetat 7,5%. Penanda berat molekuler [myosin (205 kDa), β-galaktosidase
(116 kDa), fosforilase B (97 kDa), albumin serum sapi (66 kDa), ovalbumin (45 kDa), karbonat
anhidrase (29 kDa)] berasal dari Sigma -Aldrich Co. (USA) dan digunakan sebagai protein
penanda.
2.4. Pemetaan Peptida Kolagen Asam-Soluble dari Kulit Smelt Perona
Sampel kolagen dilarutkan dalam buffer natrium fosfat 0,1 M (pH 7,2) yang
mengandung 0,5% SDS untuk dengan mudah melarutkan kolagen dan mengikatnya pada 100 ℃
selama 5 menit. Setelah didinginkan dalam es, sampel didenaturasi dicerna pada suhu 37 ℃
selama 30 menit dengan menggunakan lysyl endopeptidase (0,24 amidase activity) dari
Achromobacter lyticus M497-1 (EC 3.4.21.50; Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Osaka,
Japan). Untuk menghentikan pencernaan, campuran reaksi ditambahkan SDS ke konsentrasi
akhir 2%, kemudian direbus selama 5 menit. Produk disentrifugasi pada 30.000 x g selama 5
menit, supernatan disatukan dan digunakan sebagai larutan sampel untuk SDS-PAGE dengan
menggunakan gel 10%. Penanda berat molekul [myosin (205 kDa), β-galaktosidase (116 kDa),
fosforilase B (97 kDa), albumin serum sapi (66 kDa), ovalbumin (45 kDa), gliseraldehida-3-
fosfat dehidrogenase (36 kDa) , karbonat anhidrase (29 kDa), tripsin pankreas tripsinogen (24
kDa), dan inbibitor trypsin kacang kedelai (20,1 kDa)] berasal dari Sigma-Aldrich Co. (AS) dan
digunakan sebagai standar.
2.5. Komposisi Subunit Kolagen Asam-Larut dari Kulit Smelt Perona
Dua puluh miligram sampel kolagen dilarutkan dalam 20 mM sodium asetat buffer (pH
4,8) yang mengandung 6 M urea pada suhu 4 ℃ selama 1 hari dengan pengadukan terus
menerus. Larutan kental didenaturasi pada 45 ℃ selama 30 menit, kemudian disentrifugasi pada
50.000 x g pada 20 ℃ selama 1 jam. Supernatan disatukan dan diaplikasikan pada kolom CM-
Toyopearl 650 M (1,0 × 6,0 cm) yang sebelumnya diseimbangkan dengan penyangga yang sama.
Elusi dilakukan dengan gradien linier NaCl 0-0,15 M dalam buffer yang sama pada laju alir 0,8
ml / menit. Komponen subunit terdeteksi pada 230 nm dan fraksi yang ditunjukkan oleh angka
diperiksa oleh SDS-PAGE menggunakan gel 7.5%.
2.6. Suhu Denaturasi Kolagen Asam-Larut dari Kulit Smelt Perona
Sebuah viskometer tipe Canon-Fenske dengan gradien geser rata-rata 400 detik-1 yang
mengandung 5 mililiter 0,03% kolagen dalam asam asetat 0,1 M direndam dalam pemandian air
pada suhu 20-50 ℃. Setelah inkubasi pada setiap suhu selama 30 menit, viskositas larutan
kolagen diukur dan perubahan fraksional dihitung sebagai berikut:
Viskositas relatif = ηr = waktu aliran larutan sampel / waktu aliran asam asetat 0,1 M
Viskositas spesifik = ηsp = (η -η0) / η0 = ηr – 1
Suhu denaturasi ditentukan sebagai suhu yang menyebabkan penurunan viskositas
50%. Setiap titik adalah mean dari penentuan rangkap tiga.
2.7. Analisis Asam Amino Kolagen Asam-Larut dari Kulit Smelt Perona
Analisis asam amino dilakukan untuk mengklarifikasi hubungan antara kandungan
asam imino dan suhu denaturasi sampel kolagen. Kolagen dihidrolisis dengan tekanan tereduksi
dalam 6 M HCl pada 110 ℃ selama 24 jam, dan hidrolisat dianalisis dengan menggunakan
sistem kromatografi cair JASCO dengan derivatisasi prakolongan on-line dengan o-
phthalaldehyde. Sistem ini terdiri dari JASCO PU-2080 plus pompa HPLC cerdas, JASCO FP-
2020 plus detektor fluoresensi cerdas, JASCO CO-2060 plus termostat kolom cerdas, Degasser
3-line JASCO DG-2083-53, LG JASCO -2080-02 unit gradien terner, JASCO AS-2057
ditambah sampler cerdas, dan kolom fase terbalik JASCO CrestPak C18S (φ4.6 × 150 mm).
Panjang gelombang eksitasi dan emisi masing-masing ditetapkan pada 345 dan 455 nm.
2.8. Spektroskopi Transflasi Total Reflectance-Fourier Transform Infrared (ATR-FTIR) Kolagen
Asam-Soluble dari Skins dari Smelt Surfing
Spektrum ATR-FTIR dikumpulkan pada 20 ℃ dan kelembaban relatif 40% dengan
menggabungkan aksesori ATR (ATR PRO410-S: JASCO Co., Tokyo, Jepang) ke instrumen FT /
IR-4100 tipe JASCO (Tokyo, Jepang) . Bangku spektrometer IR dilengkapi dengan sumber
globar, splitter kacang KBr, dan detektor triglisin sulfat. Perangkat sampling ATR menggunakan
elemen refleksi internal berlian yang disematkan di elemen pendukung / pemuatan ZnSe dalam
satu konfigurasi pantulan tunggal. Spektra diperoleh pada rentang 4000-650 cm-1 dengan
resolusi 4 cm-1. Spektrum yang dihasilkan dianalisis dengan menggunakan program analisis
struktur sekunder protein IR (JASCO Co., Tokyo, Jepang).

3. Hasil dan Pembahasan

3.1. Persiapan Kolagen Asam-Larut dari Kulit Smelt Perona
Kulit dari sengatan ombak diolah dengan etanol dan diikuti dengan pengangkatan zat
penyusun nonkolin dengan NaOH. Akibatnya, hasil bahan terliofilisasi sekitar 8,6% berat basah.
Selanjutnya, hal itu diekstraksi dengan asam asetat. Akibatnya, kolagen berhasil dilarutkan dan
hasilnya sekitar 24,0% berat kering (sekitar 2,1% berdasarkan berat baku). Dalam beberapa
tahun terakhir, percobaan telah dilakukan secara agresif untuk mengekstrak kolagen dari
organisme air untuk memanfaatkannya di industri dan kolagen yang diperoleh dari organisme ini
telah digunakan di bidang makanan, kosmetik, dan medis. Faktanya, kelompok kami telah
melaporkan hasil kolagen dari organisme laut sebagai berikut: kulit ikan (bass laut Jepang,
51,4%, chub mackerel, 49,8%, hiu banteng, 50,1%, dan ikan puffer ocellate, 44,7%) [7, 10], uji
landak ungu putih (35,0%) [11], tulang ikan (bass laut Jepang, 40,7%, trobi kuda, 43,5%, dan
ayu, 53,6%) [12], ubur-ubur ubur-ubur yang dapat dimakan (46,4%) [4 ], ubur-ubur
rhizostomous mesogloea (35,2%) [5], lengan callistoctopus arakawai (62,9%) [8], kulit luar
kertas nautilus (50,0%) [13], kulit luar sotong (35,0%) [6], dan minke umum paus unesu [14],
masing-masing. Recetly, beberapa peneliti melaporkan hasil kolagen kulit ikan sebagai berikut:
saluran ikan tuna asam larut (25,8%) dan kolagen pepsin (38,4%) [17], ikan redfish asam dalam
dilarutkan (47,5%) dan pepsin- kolagen yang dilarutkan (92,2%) [18], dan kolagen rumput
karbohidrat yang dapat larut dalam pepsin (46,6%) [19]. Di sisi lain, kolagen yang larut dalam
asam dari tulang berselancar hanya sedikit diekstraksi dan hasilnya hanya 0,8% berdasarkan
berat kering.
3.2. Pola SDS-PAGE Kolagen Asam-Soluble dari Kulit Smelt Perona
Kolagen yang larut dalam asam dari kulit smelt surf diukur dengan SDS-PAGE
menggunakan gel 7.5%. Dua ikatan yang berbeda ditunjukkan pada gel bernoda dalam mobilitas
di daerah α; Kolagen ini ada sebagai trimer yang terdiri dari dua rantai α yang berbeda, seperti
α1 dan α2, walaupun keberadaan rantai α3 tidak diidentifikasi pada kondisi elektroforesis ini.
Gambar 1. Selain itu, sejumlah kecil rantai β terdeteksi pada kolagen ini. Hasil yang sama
didapat di kolagen dari tulang berselancar. Posisi rantai kolagen dari kulit dan tulang dari
sengatan ombak sama dengan kulit babi. Gambar 1. Hasil ini menunjukkan bahwa kolagen yang
dapat larut dalam asam dari kulit dan tulang dari bau jamur mungkin memiliki komposisi rantai
(α1) 2α2 heterotrimer adalah kolagen tipe I sebagai komponen utama kolagen mamalia, seperti
babi.
3.3. Pemetaan Peptida Kolagen Asam-Soluble dari Kulit Smelt Perona
Kolagen yang dicerna oleh lysyl endopeptidase (yang awalnya diisolasi dari
Achromobacter lyticus M497-1 secara khusus memotong peptida pada sisi terminal karboksibin
dari residu lisin) diaplikasikan pada SDS-PAGE menggunakan gel 10% untuk membandingkan
pola fragmen peptida dengan kulit babi dan tulang berselancar. Akibatnya, kolagen dari kulit dan
tulang dari aroma ombak dihidrolisis sampai batas tertentu oleh enzim dengan hampir
menampilkan fragmen peptida dengan berat molekul di bawah sekitar 80 kDa: ini
mengindikasikan pencernaan komponen subunit yang memiliki berat molekul. sekitar 110-130
kDa oleh lysyl endopeptidase Gambar 2. Di sisi lain, kolagen dari kulit babi tidak sepenuhnya
dicerna dalam kondisi ini; pita protein yang menunjukkan rantai α dan β terdeteksi, walaupun
ada beberapa pita protein yang dihasilkan oleh pencernaan dengan menggunakan endopeptidase
lysyl.
3.4. Komposisi Subunit Kolagen Asam-Larut dari Kulit Smelt Perona
Kolagen didenaturasi dan kemudian dioleskan ke kolom CM-Toyopearl 650M untuk
memisahkan komponen subunit dari kolagen yang larut dalam asam dari kulit sengatan ombak.
Hal ini diselesaikan dengan kromatografi kolom menjadi dua puncak, satu besar dan satu kecil.
Gambar 3. Untuk mengidentifikasi setiap rantai α, beberapa fraksi kromatografi seperti yang
ditunjukkan oleh angka dianalisis dengan SDS-PAGE. Hasil ini menunjukkan bahwa kolagen ini
terdiri dari tiga rantai α. Rantai α1 ditemukan pada pecahan 5-8 seperti yang ditunjukkan oleh
angka. Rantai α2 ditemukan pada fraksi 16-21 dan rantai α3 pada fraksi 13-19 Gambar 3. Ini
menunjukkan bahwa kolagen ini adalah heterotrimer dengan komposisi rantai α1α2α3. Kimura
dkk. [20] memeriksa kolagen kulit ikan dan melaporkan bahwa rantai α3 didistribusikan secara
luas di teleosts seperti belut, sarden, salmon chum, ikan rainbow, ikan mas, kemarahan, pollack
Alaska, cod, halfbeak, makarel umum, nila, barakuda merah, lapisan utara, dan file ikan. Dalam
makalah sebelumnya [20, 21], dilaporkan bahwa rantai α3 terdeteksi pada 14 spesies ikan dari 17
teleost. Di sisi lain, Nagai et al. melaporkan komposisi subunit kolagen dari organisme air
menggunakan teknik yang sama. Hasilnya adalah sebagai berikut: ocellate puffer fish skin [(α1)
2α2] [7], tulang ikan [bass laut Jepang: (α1) 2α2; kudapan kuda: (α1) 3; ayu: α1α2α3] [12], skala
ikan dari sarden, ikan laut merah laut, dan ikan bass laut Jepang [(α1) 2α2] [9], sirip cauki dari
ikan bass laut Jepang [(α1) 3] [2], landak laut ungu uji [(α1) 2α2] [11], sotong [(α1) 2α2] [6],
cumi berlianback (α1α2α3) [3], kulit luar kertas nautilus dan lengan C. arakawai (α1α2α3) [8];
ubur-ubur ubur-ubur yang dapat dimakan (α1α2α3) [4], ubur-ubur rhizostomous mesogloea
(α1α2α3α4) [5], dan paus minke unesu [(α1) 2α2] [14]. Artinya, jelas bahwa rantai α3 hadir
secara signifikan pada kulit dari organisme air seperti ubur-ubur, sotong, dan octopi.
3.5. Suhu Denaturasi Kolagen Asam-Larut dari Kulit Smelt Perona
Suhu denaturasi kolagen yang larut dalam asam dari kulit sengatan surf dihitung dari
kurva denaturasi termal. Sebagai perbandingan, de
Suhu naturasi kolagen dari kulit babi juga diukur. Diperkirakan bahwa suhu denaturasi kolagen
yang larut dalam asam dari kulit smelt surf adalah sekitar 32,5 ℃ Gambar 4. Ini adalah sekitar
4,5 ℃ lebih rendah dari pada kolagen dari kulit babi (37,0 ℃). Nilai ini cukup tinggi
dibandingkan dengan organisme air lainnya yang dilaporkan oleh Nagai et al. sebagai berikut:
kulit ikan puffer ocellate (28,0 ℃) [7], skala ikan dari sarden (28,5 ℃), ikan laut merah (28,0
℃), ikan bass Jepang (28,0 ℃) [9], sirip cauki dari ikan bass laut Jepang 28,0 ℃) [2], uji landak
ungu putih (28,0 ℃) [11], sotong (27,0 ℃) [6], cumi berlian (27,5 ℃) [3], kulit luar kertas
nautilus (27,0 ℃) [13] C. lengan arakawai (28,0 ℃) [8], exumbrella ubur-ubur dimakan (26,0
℃) [4], ubur-ubur rhizostomous mesogloea (28,8 ℃) [5], dan ikan paus minke unesu (31,5 ℃)
[14]. Sudah diketahui bahwa suhu denaturasi dapat dikorelasikan dengan suhu lingkungan dan
tubuh [22]. Namun, hasil ini tidak berlaku untuk teori yang telah ditetapkan tersebut. Alasan
tingginya suhu denaturasi kolagen dari sengatan ombak adalah karena perbedaan rasio
hidroksilasi prolin, yang sangat berkorelasi dengan stabilitas termal [23].
3.6. Komposisi Asam Amino dari Kolagen Asam-Larut dari Kulit Smelt Perona
Komposisi asam amino yang dinyatakan sebagai residu per 1000 residu total,
ditunjukkan pada Tabel 1. Ini menunjukkan bahwa glisin adalah asam amino paling banyak
dalam kolagen yang larut dalam asam dari kulit ombak yang menyerap dan menyumbang lebih
dari sepertiga ( 343 residu) di antara total asam amino dalam kolagen ini. Ada kandungan alanin
yang relatif lebih tinggi (123 residu), prolin (108 residu), dan asam glutamat (74 residu),
menurun dalam urutan tersebut. Tirosin (3 residu), histidin (6 residu), hidroksilis (7 residu),
isoleusin (10 residu), metionin (14 residu), dan fenilalanin (15 residu) rendah. Asam imino,
seperti prolin dan hydroxyproine, juga terdeteksi, 172 residu: total kandungan asam imino dalam
kolagen ini adalah 17,2%. Dalam makalah sebelumnya, kami melaporkan total kandungan asam
imino dalam sampel kolagen dari organisme akuatik. Akibatnya, isinya adalah sebagai berikut:
skala ikan (17,0-19,7%) [7,9], sirip ikan (19,3%) [2], gurita dan kulit sotong (17,8-18,8%) [3,6,8
], uji landak laut (17,9%) [11], ubur-ubur exumbrella (12,2%) [4], dan paus minke unesu (19,9%)
[14]. Dalam beberapa tahun terakhir, periset lain melaporkan total kandungan asam imino pada
kolagen kulit ikan sekitar 16,0-19,3% [17,19,24,25]. Derajat hidroksilasi residu prolin dalam
kolagen yang larut dalam asam dari kulit sengatan ombak dihitung. Telah diketahui dengan pasti
bahwa hidroksiprolin diturunkan dari prolin melalui hidroksilasi post-translasi yang dimediasi
oleh prolylhydroxylase, dan kadar hidroksilasi diasosiasikan dengan suhu denaturasi tinggi
sampel kolagen. Derajat hidroksilasi residu prolin dalam kolagen ini dihitung menjadi sekitar
37,2%. Makalah sebelumnya menunjukkan derajat hidroksilasi residu prolin dalam kolagen dari
organisme akuatik. Akibatnya, derajat hidroksilasi dalam kolagen dari skala ikan [9] dan sirip
[2], gurita [8] dan sotong [3,6] kulit, uji landak laut [11], dan paus minke biasa unesu [14] tinggi,
tapi derajat hidroksilasi pada kolagen dari kulit ikan rendah [18,19,24,25]. Disarankan bahwa
alasan tidak hanya suhu denaturasi yang lebih rendah dalam sampel kolagen dari organisme
akuatik adalah tingkat hidroksilasi asam imino, tetapi juga kandungan asam imino yang lebih
rendah.
3.7. Analisis Spektroskopi ATR-FTIR Kolagen Asam-Larut dari Kulit Smelt Perona
Spektrum ATR-FTIR dari kolagen dari kulit kecambah berselancar ditunjukkan pada
Gambar 5. Posisi amida A band terdeteksi pada 3306 cm-1, dan ini terkait dengan getaran
peregangan N-H. Hal ini mengindikasikan adanya ikatan hidrogen dalam sampel kolagen.
Diketahui bahwa getaran peregangan N-H bebas terjadi pada kisaran 3400 sampai 3440 cm-1,
dan bila gugus NH dari peptida terlibat dalam ikatan hidrogen, posisi tersebut dialihkan ke
frekuensi yang lebih rendah [26]. Dengan kata lain, disarankan agar lebih banyak gugus NH dari
kolagen yang larut dalam asam dari kulit sengatan surf terlibat dalam ikatan hidrogen.
Selanjutnya, pita amida B, yang terkait dengan bentangan asimetris CH2, ditemukan pada 2964
cm-1 di kolagen ini. Kelompok amida I kolagen ini terdeteksi pada 1640 cm-1. Band amida I
dengan frekuensi karakteristiknya (1600-1700 cm-1), terutama terkait dengan getaran
peregangan kelompok karbonil di sepanjang tulang punggung polipeptida [27], adalah penanda
sensitif dari struktur sekunder peptida [28]. Band amida II dan III masing-masing ditemukan
pada 1541 dan 1235 cm-1. Ini menunjukkan getaran lentur N-H dan peregangan C-H [27]. Ini
menyarankan pengaturan heliks dalam kolagen asam yang larut dari kulit sengatan ombak.
Sarver dan Krueger [29] menyelidiki struktur protein kedua menggunakan FTIR dan
menganalisis spektrum yang dihasilkan untuk membangun database. Untuk memastikan bahwa
kolagen yang diekstraksi masih dalam bentuk asli menggunakan data struktur sekunder, nilai
teoritis dari α-helix, β-sheet, dan β-turn pada kolagen asli harus disediakan dan perbandingan
harus dilakukan. Akibatnya, persentase komponen ini dalam kolagen yang larut dalam asam dari
kulit smelt surf adalah 11% α-helix, 34% β-sheet, 19% β-turn, dan 21% lainnya.
Sebagai perbandingan, kolagen dari kulit babi juga dihitung sebagai berikut: 9% α-
helix, 51% β-sheet, 13% β-turn, dan 15% lainnya. Selain itu, kolagen dari ikan paus minke unesu
adalah sebagai berikut: 8% α-helix, 50% β-sheet, 15% β-turn, dan 17% lainnya [14]. Ini
menunjukkan bahwa struktur triple helical hadir dalam kolagen yang larut dalam asam dari kulit
smelt.

4. Kesimpulan
Kolagen yang larut dalam asam diekstraksi dari kulit yang berselancar dan bercahaya.
Suhu denaturasi kolagen ini tinggi dibandingkan dengan organisme air lainnya. Dengan analisis
ATR-FTIR menggunakan program analisis struktur sekunder protein IR yang dikembangkan
oleh JASCO Co. (Tokyo, Jepang), persentase komponen struktural sekunder dari sampel kolagen
ditentukan. Menerapkan teknik ini akan memiliki potensi untuk mendapatkan pengetahuan baru
tentang banyak spesies kolagen.