Isolasi, Pemurnian, Enumerasi, Karakterisasi dan Resistensi Bakteri dari

Sampel Kuah Mie Ayam

Atim Febry Masula (15030244021)
Erra Ericha Safani (15030244023)
Nuril Fitriana (15030244024)
M. Musthofa Mubarrak (15030244026)
Nurul Hidayah (15030244041)

Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Negeri Surabaya

ABSTRAK
Makanan memiliki arti penting dalam kehidupan manusia selain menyediakan zat-zat yang
diperlukan untuk sumber tenaga, pertumbuhan, dan mendukung kehidupan tubuh yang sehat. Mie
ayam merupakan makanan rakyat yang sangat disukai oleh semua lapisan masyarakat. Mie ayam yang
merupakan racikan dari mie telur, daging ayam, sayur sawi dan sambal cabe serta saos tomat, , dari cara
penyiapan sampai dengan penyajian mie ayam ini sangat rentan terhadap kemungkinan terjadinya
cemaran bakteriologis. Praktikum yang dilakukan bertujuan untuk mengetahui bakteri yang tumbuh
dari sampel kuah mie ayam yang dibiarkan selama satu hari dengan melakukan isolasi, pemurnian,
enumerasi, karakterisasi yang meliputi pewarnaan, uji katalase dan uji motilitas serta uji resistensi
bakteri. Semua proses dilakukan dengan teknik aseptis, sampel kuah mie ayam didiamkan selama satu
hari kemudian dilakukan isolasi dan pemurnian yang menghasilkan delapan isolat bakteri dengan
karakterisasi koloni kemudian dipilih lima isolat bakteri MA1, MA2, MA5, MA8 dan L6 yang kemudian
dilakukan karakterisasi morfologi sel, uji katalase dan uji motilitas. Isolat bakteri MA8 dilakukan uji
resistensi menggunakan antibiotik Ciprofloxacin. Hasil isolat bakteri yang telah diisolasi dan pemurnian
diketahui karkteristik morfologi koloni yang meliputi karakteristik optik, permukaan, pigmentasi,
bentuk, elevasi dan tepian. 5 isolat bakteri MA1, MA2, MA5, MA8 dan L6 yang dilakukan karakterisasi
diketahui karakteristik sel meliputi bentuk sel, susunan sel dan jenis Gram positif dan Gram negatif.
Selain itu terdapat enzim katalase pada semua bakteri dan empat bakteri dari lima bakteri termasuk
bakteri motil (bergerak). Isolat bakteri MA8 Gram negatif menghasilkan zona hambat yang menunjukkan
bahwa antibiotik Ciprofloxacin sangat efektif terhadap bakteri tersebut.

Kata kunci: mie ayam; karakterisasi; resistensi; isolat bakteri; ciprofloxacin

.

PENDAHULUAN penyiapan sampai dengan penyajian mie ayam

Makanan memiliki arti penting dalam
kehidupan manusia. Selain menyediakan zat-zat
yang diperlukan untuk sumber tenaga dan
pertumbuhan, makanan juga menyediakan zat-
zat yang diperlukan untuk mendukung
kehidupan tubuh yang sehat. Dari segi kualitas
selain mengandung semua zat yang diperlukan
oleh tubuh. Mie ayam merupakan makanan
rakyat yang sangat disukai oleh semua lapisan
masyarakat dan berbagai golongan umur. Selain
harganya murah, mie ayam ini mudah didapat.
Mie ayam ini sangat banyak dikonsumsi oleh
anakanak sekolah, karena harganya yang
terjangkau sesuai dengan uang saku yang
mereka miliki . Mie ayam yang merupakan
racikan dari mie telur, daging ayam, sayur sawi
dan sambal cabe serta saos tomat, dari cara
ini sangat rentan terhadap kemungkinan
terjadinya cemaran bakteriologis (Rahayu,2007).
Dalam hal ini praktikum yang dilakukan
bertujuan untuk mengetahui bakteri yang
tumbuh dari sampel kuah mie ayam yang
dibiarkan selama satu hari dengan melakukan
isolasi, pemurnian, enumerasi, karakterisasi
yang meliputi pewarnaan, uji katalase dan uji
motilitas serta uji resistensi bakteri.
Dalam penelitiannya Muhammad
mengatakan bahwa jasad hidup atau organisme
sangat bergantung pada suplay zat – zat ekogen
(yang berasal dari luar tubuhnya) untuk
tumbuh, berkembang dan mempertahankan
hidup, maka nutrien harus mengandung unsur
sumber energi, karbon, nitrogen dan unsur
anorganik lainnya, molekul organik, kompleks,
asam – asam lemak, asam – asam amino, dan
vitamin – vitamin. Makanan (nutrien) yang
diperlukan oleh jasad dapat berfungsi sebagai
sumber energi, bahan pembangun sel, juga
sebagai aseptor dan donor elektron.
Pembuatan media pertumbuhan bakteri
dilakukan untuk mengetahui kebutuhan dasar
yang harus dipenuhi dan mengetahui macam-
macam media pertumbuhan. Terdapat beberapa
macam media pertumbuhan bakteri seperti
Nutrien Agar dan Potato Dextrose Agar (PDA).
Pada pembuatan medium NA ini ditambahkan
pepton agar mikroba cepat tumbuh, karena
mengandung banyak N2 (Dwidjoseputro, 1994).
Agar yang digunakan dalam proses ini untuk
mengentalkan medium sama halnya dengan
yang digunakan pada medium PDA yang juga
berperan sebagai media tumbuh yang ideal bagi
mikroba (Schegel, 1993). NA merupakan salah
satu media yang umum digunakan dalam
prosedur bakteriologi seperti uji biasa dari air,
sewage, produk pangan, untuk membawa stok
kultur, untuk pertumbuhan sampel pada uji
bakteri, dan untuk mengisolasi organisme
dalam kultur murni (Dwidjoseputro, 1994).
Mikroorganisme yang terdapat di
lingkungan kita ini sangat melimpah sehingga
dilakukan isolasi mikroorganisme untuk
mempelajari jenis dan sifat mokriirganisme
tertentu. Selain itu isolasi dilakukan jika
mikroorganisme akan dilakukan karakterisasi
untuk mengetahui morfologi koloni, morfologi
sel, dan keadaan biokimia sel.
Menurut Dewi (dalam Fitri dan Yasmin,
2011), isolasi bakteri merupakan pengambilan
atau memindahkan mikroba dari
lingkungannya di alam dan menumbuhkannya
sebagai biakan murni dalam medium buatan.
Menurut Tjay (2002) Antibiotik adalah zat
kimia yang dihasilkan oleh fungi dan bakteri
yang memiliki khasiat mematikan atau
menghambat pertumbuhan bakteri sedangkan
toksisitasnya bagi manusia relatif kecil. Setiap
antibiotik memiliki efektivitas yang berbeda-
beda terhadap mikroorganisme. Beberapa jenis
antibiotik bekerja lebih efektif pada bakteri
gram positif, sedangkan beberapa jenis yang
lain lebih efektif pada bakteri Gram negatif (Asri,
Trimulyono dan Lisdiana 2016).
Menurut penelitian yang telah dilakukan
sebelumnya dalam Uji Resistensi Bakteri
Escherichia coli yang Diisolasi Dari Plak Gigi
terhadap Merkuri dan Antibiotik Ciproflpxacin,
penentuan Kadar Hambat Minimum (KMH)
menggunakan cara pengenceran antibiotik,
didapatkan bahwa KHM rata-rata antara 21-42
mg/ml terhadap bakteri Gram negatif E.coli. Uji
resistensi ini dilakukan untuk mengetahui
efektivitas suatu antibiotik terhadap bakteri.
BAHAN DAN METODE
Praktikum dilakukan pada bulan
September – Oktober 2016 dan merupakan
penelitian eksperimental. Praktikum yang
dilakukan antara lain mengenai SPC ( Standar
Plate Count ) / enumerasi, morfologi koloni,
morfologi sel, dan uji resistensi bakteri.
Praktikum tersebut dilakukan di Laboratorium
Mikrobiologi Jurusan Biologi FMIPA
Universitas Negeri Surabaya.
Bahan yang digunakan pada pembuatan
media taoge cair adalah taoge 250 g, 1 L aquades,
gula 60 g. Sedangkan bahan yang digunakan
pada pembuatan media taoge agar ( TA ) adalah
taoge 250 g, 1 L aquades, gula 60 g, agar 15 g,
kapas, alumunium foil,tali. Alat yang digunakan
pada pembuatan media taoge cair dan media
taoge agar adalah panci, kompor, saringan,
pengaduk, erlenmeyer, tabung reaksi, autoklaf.
Pada praktikum penanaman sampel
mikroorganisme dari sampel uji diperlukan
bahan antar lain sampel uji 1 g ( jika sampel
yang digunakan adalah sampel padat ), sampel
uji 1 ml ( jika sampel yang digunakan adalah
sampel cair ), 9 ml aquades steril, dan taoge agar.
Alat yang digunakan pada penanaman bakteri
adalah tabung reaksi, rak tabung reaksi, lampu
spiritus, spet, cawan petri serta spidol untuk
membuat kuadran pada caan petri. Bahan yang
digunakan pada pemurnian mikroorganisme
adalah koloni yang akan dimurnikan dan media
agar. Alat yang digunakan pada pemurnian
mikroorganisme antara lain jarum ose, cawan
petri, inkubasi, tabung reaksi, dan kulkas.
Sedangkan pada enumerasi , bahan yang
diperlukan hanya koloni bakteri pada cawan
petri. Alat yang digunakan adalah spidol untuk
menandai dan menghitung koloni bakteri pada
bakteri.
Pada praktikum karakterisasi mikrobia
dapat dilakukan melalui pewarnaan. Pewarnaan
yang dilakukan antara lain pewarnaan
sederhana, pewarnaan negatif, dan pewarnaan
gram. Bahan dan alat yang diperlukan dalam
pewarnaan sederhana adalah Methylene blue,
biakan murni bakteri pada cawan petri, aquades,
alkohol 95%, lampu spiritus, jarum inokulasi
(ose), nampan untuk pewarnaan, mikroskop,
pipet, dan kaca benda. Pada pewarnaan negatif
memerlukan bahan dan alat antara lain tinta bak,
biakan murni bakteri pada cawan petri, aquades,
alkohol 95%, mikroskop, kaca benda, lampu
spiritus, pipet, jarum inokulasi / ose.
Sedangkan pada pewarnaan gram, bahan dan
alat yang digunakan antara lain kristal violet,
safranin, iodin, alkohol 95%, biakan murni,
lampu spiritus, jarum ose, botol untuk zat
warna, kaca benda, mikroskop.
Selain menggunakan pewarnaan,
karakterisasi juga dapat dilakukan dengan uji
katalase dan uji motilitas. Bahan dan alat yang
diperlukan pada uji katalase antara lain H202
3% , biakan bakteri dalam agar miring, kaca
benda, lampu spiritus, pipet tetes, dan
mikroskop. Sedangkan bahan dan alat yang
diperlukan pada uji motilitas antara lain biakan
bakteri, aquades steril, mikroskop, kaca benda
(cekung), kaca penutup, dan pipet steril.
Pada praktikum uji resistensi, bahan dan
alat yang diperlukan antara lain bakteri uji pada
media taoge cair, taoge agar, antibiotik
(ciprofloxacin), inkubator, cawan petri steril,
gunting, dan kertas hisap.
Pada penanaman sampel mikroorganisme
diawali dengan menimbang sampel uji
sebanyak 1 g (jika sampel uji yang digunakan
adalah sampel padat) atau sebanyak 1 mL (jika
sampel uji yang digunakan adalah sampel cair),
kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi
berisi 9 ml aquades steril. Suspensi tersebut
merupakan pengenceran 10 -1 . Selanjutnya
diambil 1 ml dari susupensi pengenceran 10 -1
( sebelum pengambilan terlebih dahulu
dilakukan homogenasi ) dan dimasukkan ke
dalam ke dalam tabung reaksi berisi 9 ml
akuades steril. Suspensi tersebut merupakan
pengenceran 10 -2. Diulangi langkah tersebut
sampai mendapatkan suspensi dengan faktor
pengenceran 10-7. Selanjutnya secara aseptis,
diambil 1ml dari pengenceran 10-5, 10-6, 10-7,
kemudian dimasukkan ke dalam cawan petri
steril secara terpisah. Dilakukan secara duplo
( satu sampel dari setiap pengenceran ditanam
pada dua cawan petri masing-masing sebanyak
1 ml ). Lalu dituangkan media taoge agar yang
telah dicairkan terlebih dahulu dan suhu media
krang lebih 45˚C ke setiap cawan petri yang
telah berisi sampel. Lalu disuspensikan secara
homogen campuran sampel dengan media
tersebut. Selanjutnya inkubasi biakan tersebut
dengan posisi cawan petri terbalik, pada suhu
antara 28-30˚C selama 24-48 jam. Kemudian
diamati dan dicatat karakteristik koloni-koloni
yang terbentuk.
Pada pemurnian mikroorganisme diawali
dengan menandai koloni yang akan dimurnikan.
Secara aseptis,diamati kloni tersebut dengan
menggunakan jarum ose kemudian digoreskan
dengan metode cawan gores secara kuadran
pada media pada cawan petri baru. Selanjutnya
diinkubasi pada suhu 28-30˚C selama 24 jam
dengan posisi cawan petri terbalik. Diamati satu
koloni terpisah, koloni tersebut merupakan
koloni yang telah murni dan dapat disebut
sebagai biakan murni. Selanjutnya koloni
tersebut diambil dan ditanam pada media agar
yang baru di tabung reaksi (media agar miring).
Kemudian diinkubasi biakan tersebut pada
suhu 28-30˚C selama 24 jam, kemudian diamati
koloni yang tumbuh. Lalu koloni yang sudah
tumbuh tersebut disimpan di dalam kulkas.
Proses pewarnaan sederhana diawali
dengan membersihkan kaca benda dengan
menggunakan alkohol. Lalu kaca benda ditetesi
dengan setetes akuades steril, lalu denganteknik
aseptis diambil satu ose biakan bakteri umur 24
jam dan disuspensikan dalam akuades steril
pada gelas benda. Selanjutnya dikering
anginkan dan setelah kering dilakukan fiksasi
(melewatkan bagian bwah kaca benda di atas
lampu spiritus). Setelah dingin, preparat
dituangi dengan methylene blue 1 atau 2 tetes
dan dibiarkan 1-2 menit. Dicuci dengan air
mengalir menggunakan pipet, air dialirkan
tidak boleh terkena preparat langsung.
Kemudian dikering anginkan. Selanjutnya
diamati preparat di bawah mikroskop.
Pada proses pewarnaan negatif diawali
dengan membersihkan kaca benda dengan
menggunakan alkohol. Lalu diambil biakan
bakteri dengan ose secara aseptik dan
diletakkan diatas kaca benda dekat ujung kanan
kaca benda. Kemudian tinta bak diteteskan di
atas biakan murni, kemudian disuspensikan.
Lalu kaca benda yang satunya diletakkan
terhadap kaca yang ada suspensi zat warna dan
biakan sehingga cairan menyebar pada ujung
kaca benda tersebut, kaca benda kedua
didorong menuju ke ujung kiri kaca benda yang
satunya sehingga diperoleh lapisan yang tipis
sekali. Selanjutnya preparat di kering anginkan.
Kemudian diamati preparat di bawah
mikroskop.
Pada pewarnaan gram, langkah petama
yang harus dilakukan adalah membersihkan
kaca benda dengan alkohol. Lalu kaca benda
tersebut ditetesi dengan 1 tetes akuades,
selanjutnya disuspensikan biakan bakteri
dengan ose pada tetesan akuades tersebut.
Selanjutnya dilakukan fiksasi. Kemudian
preparat tersebut ditetesi dengan larutan crystal
violet dan dibiarkan selama 1 menit. Kemudian
 dicuci dengan air mengalir. Selanjutnya
preparat ditetesi dengan larutan iodin dan
dibiarkan selama 1 menit. Kemudian dicuci
dengan air mengalir. Dekolorisasi dengan
Ethyl Alcohol 95%. Selanjutnya dicuci dengan
air mengalir. Kemudian ditetesi dengan
pewarna penutup dan dibiarkan selama 1
menit. Selanjutnya dicuci dengan air mengalir
lalu kering anginkan. Kemudian preparat
diamati di bawah mikroskop.
Pada uji katalase tahap pertama yang
dilakukan adalah dengan membersihkan kaca
benda dengan menggunakan alkohol.
Selanjutnya diambil biakan dari agar miring
dan diletakkan ditengah kaca benda kemudian
ditetesi dengan H2CO2 3%. Selanjutnya
diamati dengan mikroskop dan diperhatikan
terbentuknya gelembung O2. Terbentuknya
gas O2 menunjukkan bahwa bakteri tersebut
mampu menghasilkan enzim katalase
(katalase +) dan sebaliknya.
Untuk mengetahui bakteri tersebut
bergerak atau tidak, dilakukan uji motilitas.
Uji motilitas diawali dengan membersihkan
kaca benda cekung dan kaca penutup dengan
alkohol. Selanjutnya dibuatlah preparat basah
tetes gantung dengan cara meneteskan setetes
air pada gelas penutup (sangat sedikit) dan
ditambahkan bakteri yang akan diamati pada
tetesan tersebut dengan needle dan
diusahakan tetesan tidak melebar. Kemudian
HASIL
Berdasarkan praktikum yang telah
dilakukan, diperoleh data mengenai bakteri
yang di isolasi dari sampel kuah Mie Ayam
dan menghasilkan 8 isolat dari pengenceran
10-5, 10-6, 10-7 yang diketahui Standart Plate
Count (Tabel 1). Isolat-isolat tersebut
Tabel 1. Hasil Enumerasi Koloni
Jumlah koloni per pengenceran
10-5 10-6
495 442
403 298
gelas penutup diletakkan di atas gelas
benda cekung dengan posisi cairan ada di
bawah, cairan harus dalam keadaan
menggantung. Selanjutnya mikroba dapat
diamati di bawah mikroskop sehingga dapat
diketahui bakteri tersebut motil atau non motil.
Uji resistensi dilakukan untuk
mengetahui keefektifan antibiotik tersebut
terhadap suatu bakteri. Langkah pertama
yang dilakukan adalah dengan melakukan
peremajaan bakteri uji yang akan digunakan
pada media taoge cair. Tahap selanjutnya
adalah melakukan inkubasi pada suhu 28-30˚C
selama 24 jam. Lalu diambil 1 ml kultur
bakteri, kemudian dimasukkan ke dalam
cawan petri steril. Lalu media taoge agar
dituangkan ke dalam cawan petri tersebut dan
dihomogenkan. Tahap selanjutnya kertas
hisap digunting berbentuk lingkaran dengan
diameter kurang lebih 1 cm, kemudian
direndam dalam antibiotik dengan
konsentrasi 50 mg/ml, 25 mg/ml, dan 5
mg/ml (tiap konsentrasi dua paper disc).
Selanjutnya kertas hisap yang telah direndam
dalam antibiotik diletakkan di atas media
taoge agar yang telah ditanami bakteri uji.
Selanjutnya diinkubasi selama 24-48 jam pada
suhu 28-30˚C. Kemudian diamati zona bening
/ zona hambat yang terbentuk dan diukur
diameternya.
kemudian diketahui karakteristik koloni
(Tabel 2). Berdasarkan karakteristik koloni,
diambil 5 isolat, kemudian dikarakterisasi
secara morfologi sel, susunan sel, warna sel
(Tabel 3) dan dilakukan uji katalase serta uji
motilitas (Tabel 4). Isolat MA8 sebagai Gram
negatif dilakukan uji resistensi (Tabel 5).
Standart Plate
Keterangan
10-7 Count
57 Rata-rata dari
pengenceran 10-5
5,5 x 108
52 dan 10-7 adalah
6,0 x 10
Tabel 2. Hasil Pengamatan Morfologi Koloni

Cawan Kode Karakteristik Karakteristik Pigmentasi Bentuk Elevasi Bentuk

Koloni Optik Permukaan Tepian

10-7B, 10- MA1 Opaque Halus Putih Circular Pulvinate Entire

6 , 10-5 , mengkilap
A B
10-5A, 10-
6 , 10-7
B A
10-6A, 10- MA2 Transparant Halus Tidak Circular Pulvinate Entire
5 , 10-7 , mengkilap berpigmen
A A
10-5B, 10- / bening
6
B
10-6A, 10- MA3 Translucent Halus Putih Irreguler Pulvinate Entire
5 , 10-5 , mengkilap
A B
10-7A, 10-
7 , 10-6
B B
10-6A, 10- MA4 Opaque Halus Putih Spindle Convex Entire
6 , 10-5 , mengkilap
B A
10-5B, 10-
7 , 10-7
A B
10-6A, 10- MA5 Translucent Halus Putih Irreguler Umbonate Undulate
6 , 10-5 mengkilap
B A
10 A, 10-
-5 MA6 Transparant Halus Tidak Irreguler Umbonate Undulate
5
B mengkilap berpigmen
10-7A, 10- MA7 Translucent Berkerut Putih Circular Flat Filamentous
7 , 10-6
B A
10-5A MA8 Translucent Halus Putih Irreguler Umbonate Lobate
mengkilap

Dapat diketahui bahwa koloni bakteri MA1, MA3, dan MA4 terdapat pada setiap cawan,
sedangkan koloni bakteri MA8 hanya terdapat pada satu cawan petri.

Tabel 3. Pewarnaan Bakteri dan Karakterisasi Bakteri

Sederhana Negatif Gram

Gambar bakteri
MA1

Mikroorganisme Bakteri Bakteri Bakteri

Bentuk sel Bacil Bacil Bacil
Susunan sel Monobacilus Monobacilus Monobacilus
Warna sel Biru Putih Merah
Tabel 3. Lanjutan

Gambar bakteri
MA2

Mikroorganisme Bakteri Bakteri Bakteri

Bentuk sel Coccus Coccus Coccus
Susunan sel Monococcus Monococcus Monococcus
Warna sel Biru Putih Merah
Gambar bakteri
MA5

Mikroorganisme Bakteri Bakteri Bakteri

Bentuk sel Coccus Coccus Coccus
Susunan sel Monococcus Monococcus Monococcus
Warna sel Biru Biru Merah
Gambar bakteri
MA8

Mikroorganisme Bakteri Bakteri Bakteri

Bentuk sel Coccus Coccus Coccus
Susunan sel Monococcus Monococcus Monococcus
Warna sel Biru Biru Merah

Gambar bakteri L

Mikroorganisme Bakteri Bakteri Bakteri

Bentuk sel Bacil Bacil Bacil
Susunan sel Monobacilus Monobacilus Monobacilus
Warna sel Biru Biru Biru

Pada pewarnaaan sederhana semua dan pewarnaan gram semua sel bakteri
sel bakeri berwarna biru, pewarnaan negatif berwarna merah yang berarti termasuk bakteri
semua sel bakteri berwarna putih karena yang Gram negatif.
diberikan warna adalah latar belakangnya,
Tabel 4. Uji Katalase dan Uji Motilitas

No. Bakteri Uji Katalase Uji Motilitas

1. MA1 + +
2. MA2 + +
3. MA5 + -
4. MA8 + +
5. L6 + +
Keterangan: (+) = positif

(-) = negatif

Gambar 1. Uji katalase MA1. Gambar 2. Uji katalase MA2. Gambar 3. Uji katalase MA5.

Gambar 4. Uji katalase MA8. Gambar 5. Uji katalase L6.

Berdasarkan tabel dan gamabar di atas
dapat diketahui bahwa semua jenis bakteri uji
positif pada uji katalase dapat diartikan bahwa
semua jenis bakteri uji menghasilkan
gelembung oksigen saat terkena hidrogen
peroksida. Terdapat empat jenis bakteri uji
yang positif pada uji motilitas, yaitu bakteri
MA1, MA2, MA8, dan L6. Dapat diartikan
bahwa bakteri tersebut dapat bergerak (motil).
Dan hanya terdapat satu jenis bakteri yang
negatif, yaitu , MA5 dapat diartikan bahwa
bakteri tersebut tidak dapat bergerak
(nonmotil).

Tabel 5. Uji Resistensi

No. Bakteri Diameter Zona Hambat

0 mg/ml 5 mg/ml 25 50 mg/ml
mg/ml
1. MA8A - 5 mm 10 mm 15 mm
2. MA8B - 10 mm 13 mm 15 mm
Gambar 6. Hasil uji resistensi MA8 cawan A
PEMBAHASAN
Menurut penelitian yang telah dilakukan
sebelumnya dalam Environmental Sanitation
and Hygyene of Stale and Chicken Noodles
Processing Practice in Relation with
Microorganism Number, Mie ayam yang
merupakan racikan dari mie telur, daging
ayam, sayur sawi dan sambal cabe serta saos
tomat, dari cara penyiapan sampai dengan
penyajian mie ayam ini sangat rentan
terhadap kemungkinan terjadinya cemaran
bakteriologis.
Pembuatan media pertumbuhan bakteri
dilakukan untuk mengetahui kebutuhan dasar
yang harus dipenuhi dan mengetahui macam-
macam media pertumbuhan. Terdapat
beberapa macam media pertumbuhan bakteri
seperti Nutrien Agar dan Potato Dextrose Agar
(PDA). Pada pembuatan medium NA ini
ditambahkan pepton agar mikroba cepat
tumbuh, karena mengandung banyak N2
(Dwidjoseputro, 1994). Agar yang digunakan
dalam proses ini untuk mengentalkan
medium sama halnya dengan yang digunakan
pada medium PDA yang juga berperan
sebagai media tumbuh yang ideal bagi
mikroba (Schegel, 1993). NA merupakan salah
satu media yang umum digunakan dalam
prosedur bakteriologi seperti uji biasa dari air,
sewage, produk pangan, untuk membawa
stok kultur, untuk pertumbuhan sampel pada
uji bakteri, dan untuk mengisolasi organisme
dalam kultur murni (Dwidjoseputro, 1994).
Peremajaan bakteri atau pembuatan kultur
murni dilakukan dengan memindahkan
sejumlah kecil biakan murninya ke medium
TEA yang berbentuk agar miring. Medium ini
digunakan sebab medium TEA mengandung
Gambar 7. Hasil uji resistensi MA8 cawan B
senyawa-senyawa yang diperlukan untuk
pertumbuhannya. Senyawa-senyawa tersebut
adalah glukosa sebagai sumber karbon dan
sumber energi, juga ekstrak kecambah sebagai
sumber nitrogen, karbon serta unsur-unsur
kelumit seperti garam-garam mineral
(Wuriyanti, 2008).
Enumerasi dilakukan untuk menghitung
jumlah mikroorganisme dengan
menggunakan metode hitung cawan dengan
memilih cawan yang mengandung 30 sampai
300 koloni. Isolasi dan pemurnian
mikroorganisme dilakukan untuk mengetahui
karakteristik morfologi koloni bakteri.
Menurut Dewi (dalam Fitri dan Yasmin, 2011),
isolasi bakteri merupakan pengambilan atau
memindahkan mikroba dari lingkungannya di
alam dan menumbuhkannya sebagai biakan
murni dalam medium buatan. Metode yang
digunakan untuk penanaman mikroorganisme
yaitu streak plate (cawan gores). Karakter
morfologi koloni pada isolat bakteri MA1
yang dapat ditemukan pada cawan 10-5A, 10-
5B, 10-6A, 10-6B, 10-7A, 10-7B yang memiliki
karakteristik optik opaque, permukaan halus
mengkilap, warna putih, bentuk circular,
elevasi pulvinate, dan bentuk tepian entire.
Isolat bakteri MA2 dapat ditemukan pada
cawan 10-5A, 10-5B, 10-6A, 10-6B 10-7A yang
memiliki karakteristik optik transparant,
permukaan halus mengkilap, tidak berpigmen,
bentuk circular, elevasi pulvinate, dan bentuk
tepian entire. Isolat bakteri MA3 dapat
ditemukan pada cawan 10-5A, 10-5B, 10-6A,
10-6B, 10-7A, 10-7B yang memiliki
karakteristik optik translucent dengan
permukaan halus mengkilap, warna putih,
bentuk irreguler, elevasi pulvinate, dan bentuk
tepian entire. Isolat bakteri MA4 dapat
ditemukan pada cawan 10-5A, 10-5B, 10-6A,
10-6B, 10-7A, 10-7B yang memiliki
karakteristik optik opaque, permukaan halus
mengkilap, warna putih, bentuk spindle,
elevasi convex, dan bentuk tepian entire. Isolat
bakteri MA5 dapat ditemukan pada cawan 10-
5A, 10-6A, 10-6B yang memiliki karakteristik
optik translucent, permukaan halus mengkilap,
warna putih, bentuk irreguler, elevasi
umbonate, dan bentuk tepian undulate. Isolat
bakteri MA6 dapat ditemukan pada cawan 10-
5A dan 10-5B yang memiliki karakteristik
optik transparant, permukaan halus
mengkilap, tidak berpigmen, bentuk irreguler,
elevasi umbonate, dan bentuk tepian undulate.
Isolat bakteri MA7 dapat ditemukan pada
cawan 10-6A, 10-7A, 10-7B yang memiliki
karakteristik optik translucent, permukaan
berkerut, warna putih, bentuk circular,
berelevasi flat, dan bentuk tepian filamentous.
Isolat bakteri MA8 dapat ditemukan hanya
pada cawan 10-5A yang memiliki karakteristik
optik translucent, permukaan halus mengkilap,
berwarna putih, bentuk irreguler, elevasi
umbonate, dan bentuk tepian lobate.
Pengamatan tentang karakteristik morfologi
koloni bakteri perlu dilakukan, agar
mempermudah dalam proses identifikasi jenis
bakteri. Hal ini sesuai dengan pernyataan Lay
(dalam Fitri dan Yasmin, 2011), bahwa
berdasarkan ciri morfologi koloni bakteri dan
biakan murni maka dapat dilakukan proses
identifikasi jenis-jenis mikroorganisme,
namun untuk memperoleh hasil identifikasi
yang sempurna maka harus dilanjutkan
dengan uji biokimia.
Karakterisasi mikrobia yang meliputi
pewarnaan dan morfologi bakteri dilakukan
dengan berbagai macam pewarnaan yaitu
pewarnaan sederhana dan pewarnaan negatif
yang bertujuan untuk mengamati bentuk sel
serta pewarnaan gram yang bertujuan untuk
membedakan kelompok bakteri Gram positif
dan bakteri Gram negatif. Pewarnaan
sederhana ini digunakan untuk melihat
bentuk sel bakteri karena sel bakteri memiliki
ukuran yang sangat kecil dan selnya
transparan, zat warna yang digunakan adalah
Methylen blue. Terdapat dua bakteri yang
berbentuk bacil, yaitu bakteri MA1 dan L6,
kedua bakteri tersebut memiliki susunan sel
monobacilus. Pada pewarnaan negatif cara
pewarnaan tidak langsung karena yang
diwarnai adalah latar belakangnya yang
menjadi hitam dan gelap. Zat warna yang
digunakan adalah tinta bak. Terdapat tiga
bakteri yang berbentuk coccus, yaitu bakteri
MA2, MA5, dan MA8, ketiga bakteri tersebut
memiliki susunan sel monococcus. Pewarnaan
gram menghasilkan perbedaan klasifikasi
antara kedua jenis bakteri ini terutama
didasarkan pada perbedaan struktur dinding
sel bakteri (Aditya dalam Lestari, 2013).
Bakteri gram negatif memiliki 3 lapisan
dinding sel. Lapisan terluar yaitu
lipoposakarida (lipid) kemungkinan tercuci
oleh alkohol, sehingga pada saat diwarnai
dengan safranin akan berwarna merah. Bakteri
gram positif memiliki selapis dinding sel
berupa peptidoglikan yang tebal. Setelah
pewarnaan dengan kristal violet, pori-
Pewarnaan Bakteri 12 pori dinding sel
menyempit akibat dekolorisasi oleh alkohol
sehingga dinding sel tetap menahan warna
biru (Fitria dalam Lestari, 2013). Dari isolat
bakteri yang terpilih semuanya termasuk
dalam bakteri Gram negatif.
Uji katalase pada isolat bakteri
menunjukkan bahwa isolat bakteri yang
diperoleh mampu atau tidak mampu
menghasilkan enzim katalase. Pada isolat
bakteri yang terpilih semuanya termasuk
bakteri katalase positif yang menunjukkan
bahwa bakteri mampu menghasilkan enzim
katalase. Enzim katalase adalah enzim yang
dapat menguraikan H2O2 menjadi H2O dan O2.
Pada umumnya enzim ini dihasilkan oleh
organisme yang bersifat aerob (Lay,1994).
Pada uji motilitas isolat bakteri semuanya
bersifat motil kecuali pada bakteri MA5 yang
bersifat nonmotil. Adanya pergerakkan
bakteri atau motilitas ini dikarenakan adanya
sifat fisiologi bakteri tersebut dalam
menanggapi rangsangan yang berasal dari
lingkungan sekitarnya. Rangsangan yang
dimaksud adalah kondisi nutrisi pada media,
bakteri akan menuju kearah media dengan
kandungan nutrisi yang mencukupi.
Rangsangan lainnya dapat berupa suplai
oksigen dan cahaya yang dapat menyebabkan
rotasi flagel (Schaechter dan Moselio, 2004)
Uji resistensi dilakukan dengan tujuan
untuk menguji tingkat resistensi suatu bakteri
terhadap antibiotik Ciprofloxacin dan
mengetahui efektivitas antibiotik
Ciprofloxacin. Menurut Tjay (2002) Antibiotik
adalah zat kimia yang dihasilkan oleh fungsi
dan bakteri yang memiliki khasiat mematikan
atau menghambat pertumbuhan bakteri
sedangkan toksisitasnya bagi manusia relatif
kecil. Setiap antibiotik memiliki efektivitas
yang berbeda-beda terhadap mikroorganisme.
Beberapa jenis antibiotik bekerja lebih efektif
pada bakteri gram positif, sedangkan
beberapa jenis yang lain lebih efektif pada
bakteri Gram negatif (Asri, Trimulyono dan
Lisdiana 2016).
Menurut Siswandono (2008)
Ciprofloxacin digunakan untuk pengobatan
infeksi yang disebabkan oleh bakteri Gram
negatif, seperti E.coli, P. Mirabilis, Klebsiella
sp, Shigella sp, Enterobacter serta bakteri
Gram positif tertentu seperti Staphylococcus
sp dan Streptococcus sp. Menurut Tjay (2002)
secara insidental dapat menimbulkan
kristaluria dan hematuria.
Menurut Mycek (2001) Mekanisme kerja
pada antibiotik ciprofloxacin dengan
menghambat simtesis asam nukleat dimana
antibiotik golongan ini dapat masuk ke dalam
sel dengan cara difusi pasif melalui kanal
protein terisi air (porins) pada membran luar
bakteri secara intraseluler, secara unik obat-
obat ini menghambat replikasi DNA bakteri
dengan cara mengganggu kerja DNA girase
(topoisomerase II) selama pertumbuhan dan
reproduks bakteri. Menurut Pratiwi (2008)
mekanisme resistensi Ciprofloxacin yang
termasuk golongan fluoroquinolones yang
terikat pada subunit β enzim DNA dan
penting dalam proses replikasi DNA. Mutasi
gen pengkode DNA girase menyebabkan
diproduksinya enzim yang aktif namun tidak
dapat diikat oleh fluoroquinolones.
Isolat bakteri MA8 Gram negatif
dilakukan uji resistensi dengan menggunakan
dua cawan petri yaitu cawan A dan cawan B,
bakteri MA8 pada cawan A pada konsentrasi
antibiotik 0mg/ml tidak memiliki zona
hambat, pada konsentrasi antibiotik 5 mg/ml
terbentuk zona hambat sebesar 5 mm,
konsentrasi antibiotik 25 mg/ml terbentuk
zona hambat sebesar 10 mm, dan konsentrasi
antibiotik 50 mg/ml terbentuk zona hambat
sebesar 15 mm. Pada cawan petri B dengan
konsentrasi antibiotik 0 mg/ml tidak
terbentuk zona hambat atau zona bening,
konsentrasi antibiotik 5 mg/ml terbentuk zona
hambat sebesar 10 mm, konsentrasi antibiotik
25 mg/ml terbentuk zona hambat sebesar 13
mm, dan konsentrasi antibiotik 50 mg/ml
terbentuk zona hambat sebesar 15 mm.
Menurut penelitian yang telah dilakukan
sebelumnya dalam Uji Resistensi Bakteri
Escherichia coli yang Diisolasi Dari Plak Gigi
terhadap Merkuri dan Antibiotik Ciproflpxacin,
penentuan Kadar Hambat Minimum (KMH)
menggunakan cara pengenceran antibiotik,
didapatkan bahwa KHM rata-rata antara 21-42
mg/ml terhadap bakteri Gram negatif E.coli.
SIMPULAN
Sampel kuah mie ayam yang digunakan,
menghasilkan 8 isolat bakteri yang telah
dilakukan isolasi dan pemurnian. Sehingga
diketahui karakteristik morfologi koloni yang
meliputi karakteristik optik, permukaan,
pigmentasi, bentuk, elevasi dan tepian.
Kemudian terpilih 5 isolat bakteri MA1, MA2,
MA5, MA8 dan L6 yang dilakukan
karakterisasi, diketahui karakteristik sel
meliputi bentuk sel, susunan sel dan jenis
Gram positif dan Gram negatif. Selain itu
terdapat enzim katalase pada semua bakteri
yang menunjukkan bahwa semua isolat
bakteri tersebut adalah bakteri aerob dan
empat isolat bakteri (MA1, MA2, MA5 dan L6)
termasuk bakteri motil (bergerak), sedangkan
isolat bakteri MA5 nonmotil (tidak bergerak).
Pada uji resitensi isolat bakteri MA8 (Gram
negatif) menghasilkan zona hambat yang
menunjukkan bahwa antibiotik Ciprofloxacin
sangat efektif terhadap bakteri tersebut.
DAFTAR PUSTAKA
Asri, Mahanani Tri Et. Al,. (2016). Petunjuk
Praktikum Mikrobiologi Dasar. Surabaya:
Universitas Negeri Surabaya.
Dwidjoseputro, D. (1994). Dasar-Dasar
Mikrobiologi. Jakarta: Djambatan.
Fitri, Lenni Dan Yasmi, Yekki. (2011). “Isolation
And Observation Of Morphology Of
Chitinolytic Bacteria Colony” Jurnal Ilmiah
Pendidikan Biologi, (Online), Jilid.02, Vol.03,
(Http://Jurnal.Unsyiah.Ac.Id/Jbe/Article/
View/465 Diakses Pada Sabtu, 22 Oktober
2016).
Kepel, Lisa Et. Al,.(2015). “Uji Resistensi Bakteri
Escherichia Coli Yang Diisolasi Dari Plak
Gigi Terhadap Merkuri Danantibiotik
Siprofloksasin” Jurnal Biomedik, (Online),
Jilid 01, Vol.03,
(Http://Ejournal.Unsrat.Ac.Id/Index.Php/
Ebiomedik/Article/View/6604 Diakses
Pada Sabtu, 22 Oktober 2016).
Lay, W. B. (1994). Analisis Mikroba Di Laboratorium.
Pt Raja Grafindo Persada, Jakarta.
Lestari, Rina. (2013). Pewarnaan Sederhana,
Negatif, Kapsul Dan Gram, Academia.com,
(online),
(Http://Www.Academia.Edu/10414811/Pe
warnaan_Bakteri_1_Makalah_Pewarnaan_S
 ederhana_Negatif_Kapsul_Dan_Gram
Diakses Pada Sabtu, 22 Oktober 2016).

Muhammad. (tanpa tahun). Nutrisi Bakteri,

(online),
(digilib.unimus.ac.id/download.php?id=11

506 Diakses Pada Sabtu, 22 Oktober 2016).

Mycek. (2001). Farmakologi Ulasan Bergambar.
Jakarta: Widiya Medika.
Pratiwi, St. (2008). Microbilogy Farmasi.
Yogyakarta: Erlangga.
Rahayu, Ni Putu Sri. (2007). “Environmental
Sanitation And Hygyene Of Stale And
Chicken Noodles Processing Practice In
Relation With Microorganism Number”
Jurnal Microbiology, (Online),
(Http://Eprints.Undip.Ac.Id/18389/1/Ni_
Putu_Sri_Rahayu.Pdf Diakses Pada Sabtu,
22 Oktober 2016).
Schaechter, Moselio.(2004). The Desk Encyclopedia
Of Microbiology. Elsevier Ltd. Uk.
Siswandono Dan Soekarjo, Bambang. 2008. Kimia
Medisinal Jilid I. Surabaya: Airlangga
University Press.
Wuryanti. (2008). “Pengaruh Penambahan Biotin
Pada Media Pertumbuhan Terhadap
Produksi Sel Aspergillus Niger” Bioma,
(Online), Jilid.02, Vol.10
(Http://Ejournal.Undip.Ac.Id/Index.Php/
Bioma/Article/View/3375 Diakses Pada
Sabtu, 22 Oktober 2016).