Uji MPN Sesuai SNI PDF

9/1/2015 Mikrobiologi Praktik » Blog Archive » Most Probable Number (MPN) / Angka Paling Mungkin (APM)
Mikrobiologi Praktik
SITUS PEMBELAJARAN PERHITUNGAN MIKROORGANISME
Most Probable Number (MPN) / Angka Paling Mungkin (APM)
January 26, 2014 Posted by indra pradhika
1. Sejarah perkembangan MPN
2. Prinsip metode MPN
3. Cara kerja metode MPN
3.1. Uji pendugaan
3.2. Uji penegasan untuk Coliform
3.3. Uji penegasan untuk Fecal Coliform
3.4. Uji pelengkap untuk E.coli
4. Pemilihan jumlah seri tabung MPN
5. Peluang dalam metode MPN
6. Persyaratan pemilihan kombinasi tabung positif dan pelaporannya
7. Batasbatas perhitungan nilai MPN
8. Menghitung MPN tanpa tabel
9. Aplikasi lain MPN dalam perhitungan bakteri
10. Perhitungan MPN secara otomatis
11. Hubungan MPN dan CFU
11.1. Perbandingan antara MPN dan CFU
11.2. Perbedaan antara MPN dan CFU
11.3. Pengkonversian satuan MPN ke CFU
12. Kesalahan umum MPN
12.1. Kombinasi seri tabung diluar tabel
12.2. Tabung negatif palsu dan positif palsu
13. Tabel MPN
Referensi
Bab ini membahas secara dalam bagaimana metode MPN/APM tersebut bekerja sehingga dapat menghitung mikroorganisme dari data positif atau
negatif tanpa menghitung koloni yang tumbuh. Metode Angka Paling Mungkin (APM) disebut sebagai metode Most Probable Number (MPN)
dalam penamaan selanjutnya tanpa mengabaikan kaidah penyerapan dalam bahasa Indonesia.
1. Sejarah perkembangan MPN
Metode MPN muncul sekitar awal abad 20 sehingga dikenal sudah sangat lama di dalam ilmu mikrobiologi. Estimasi akurat dari tabel MPN di
publikasikan oleh Mc Crady pada tahun 1915 kemudian dasar statistik dari metode MPN dikemukakan oleh Halvorson dan Ziegler (1933),
Eisenhart dan Wilson (1943) dan Cochran (1950). Pada tahun 1957 Woodward menyarankan tentang pengabaian hasil positif (banyak tabung positif
pada pengenceran tinggi dan sebaliknya) yang dapat meningkatkan kesalahan laboratorium dalam tabel MPN. Kemudian De Mann pada tahun 1983
mempublikasikan tentang metode perhitungan tingkat kepercayaan (convidence interval) dalam tabel MPN. Sampai sekarang metode MPN telah
menjadi salah satu metode standard untuk menghitung jenis Coliform, Fecal Coliform, Escherichia coli, dan S. aureus.
2. Prinsip metode MPN
MPN adalah suatu metode perhitungan mikroorganisme berdasarkan data kualitatif hasil pertumbuhan mikroorganisme pada medium cair spesifik
dalam seri tabung untuk memperoleh kisaran data kuantitatif jumlah mikroorganisme tersebut (MPN/ml (g)). MPN merupakan suatu metode uji
pengenceran bertingkat (serial dilution) untuk mengukur konsentrasi mikroorganisme target dengan perkiraan. SNI 012332.1 (2006:7)
mendeskripsikan MPN sebagai metode untuk menghitung jumlah mikroba dengan menggunakan medium cair pada tabung reaksi yang pada
umumnya setiap pengenceran menggunakan 3 atau 5 seri tabung dan perhitungan yang dilakukan merupakan tahap pendekatan secara statistik.
Prinsip utama metode ini adalah mengencerkan sampel sampai tingkat tertentu sehingga didapatkan konsentrasi mikroorganisme yang pas/sesuai

http://mikrobiologipraktik.com/mostprobablenumbermpnangkapalingmungkinapm/ 1/18
dan jika ditanam dalam tabung menghasilkaan frekensi pertumbuhan tabung positif “kadangkadang tetapi tidak selalu”. Semakin besar jumlah
sampel yang dimasukkan (semakin rendah pengenceran yang dilakukan) maka semakin “sering” tabung positif yang muncul. Semakin kecil jumlah
sampel yang dimasukkan (semakin tinggi pengenceran yang dilakukan) maka semakin “jarang” tabung positif yang muncul. Semua tabung positif
yang dihasilkan sangat tergantung dengan probabilitas sel yang terambil oleh pipet saat memasukkannya ke dalam media. Oleh karena itu,
homogenisasi sangat mempengaruhi metode ini. Kombinasi kemunculan positif (ya) atau negatif (tidak) ini menggambarkan perkiraan konsentrasi
mikroorganisme pada sampel sebelum diencerkan. Perubahan dari data positif atau negatif sampai menghasilkan angka dilakukan dengan proses
perhitungan statistik. Jadi nilai MPN adalah suatu angka yang menggambarkan jumlah mikroorganisme yang memiliki kemungkinan paling tinggi.
Gambar 1. Kombinasi tabung positif yang didapat adalah 3 tabung positif dari pengenceran 1/10, 2 tabung positif dari pengenceran 1/100 dan 1
tabung positif dari pengenceran 1/1000. Angka MPN yang dihasilkan setelah dicocokkan dengan tabel adalah 150 MPN/g.
Asumsi yang diterapkan dalam metode MPN adalah :
Bakteri terdistribusi sempurna dalam homogenat sampel.
Sel bakteri terpisahpisah secara individual, tidak dalam bentuk rantai atau kumpulan (bakteri Coliform termasuk E. coli terpisah sempurna tiap
selnya dan tidak membentuk rantai).
Media yang dipilih telah sesuai untuk pertumbuhan bakteri target dalam suhu dan waktu inkubasi tertentu sehingga minimal satu sel hidup mampu
menghasilkan tabung positif selama masa inkubasi pada media tersebut.
Jumlah yang didapatkan menggambarkan bakteri yang hidup (viable) saja. Sel yang terluka dan tidak mampu menghasilkan tabung positif tidak
akan terdeteksi.
Setiap individu tabung memiliki data yang berdiri sendiri (independen).
Metode MPN dinilai berdasarkan perkiraan unit tumbuh (Growth Unit / GU) seperti CFU, bukan dari sel individu. Meskipun begitu baik nilai CFU
atau MPN dapat menggambarkan seberapa banyak sel individu yang tersebar dalam sampel. FDA BAM appendix 2 (2001) menyatakan bahwa jika
dalam MPN menggunakan target mikroorganisme yang dalam preparasi sampel dan pengencerannya tetap menunjukkan sel yang tidak terpisah dan
berkelompok, maka nilai MPN sebaiknya dapat dinyatakan dalam perkiraan GU (Growth Units) atau CFU (Colony Forming Units). Namun
sebagian besar metode MPN digunakan untuk menghitung mikroorganisme target yang benarbenar terpisah individunya seperti Coliform dan E.
coli.
Pemilihan media sangat berpengaruh terhadap metode MPN yang dilakukan. Umumnya media yang digunakan mengandung bahan nutrisi khusus
untuk pertumbuhan bakteri tertentu. Misalnya dalam mendeteksi kelompok Coliform dapat menggunakan media Brilliant Green Lactose 2% Bile
(BGLB) broth. Di dalam media ini mengandung lactose dan garam empedu (bile salt) yang hanya mengizinkan untuk tumbuh. Jika terdapat
ketidaksesuaian jenis media dan bakteri yang diinginkan maka metode ini akan menghitung bukan bakteri yang dituju. Untuk menghitung Coliform
pada tahap pendugaan umumnya menggunakan Lauryl Sulphate Tryptose (LST) broth, sedangkan untuk menghitung E.coli pada tahap konfirmasi
diperlukan media EC (Escherichia coli) broth.
USDA/FSIS (2008:1) menyebutkan bahwa nilai MPN sangat berguna untuk menentukan jumlah mikroorganisme dengan konsentrasi rendah
(<100/g). Metode ini umumnya dipakai untuk menganalisa susu, pangan, air atau tanah yang dimana pada jenis sampel ini terdapat kemungkinan
bahan partikulat sampel mampu mengganggu pertumbuhan koloni pada agar.
Beberapa kelebihan metode MPN yang diambil berdasarkan Oblinger dan Korburger (1975:541) adalah (1) Akurasi dapat ditingkatkan dengan
memperbanyak tabung yang digunakan setiap pengencerannya. (2) Ukuran (volume) sampel yang cukup besar (dibanding plate count). (3)
Sensitivitas umumnya cenderung lebih baik pada konsentrasi mikroorganisme yang sedikit daripada plate count. (4) Recovery umumnya lebih baik
karena menggunakan media cair, tetapi tetap tergantung partikel sampel yang mungkin dapat mengganggu. (5) Jika medium spesifik yang sesuai
dengan pertumbuhan bakteri target dapat dibuat maka perkiraan perhitungan MPN dapat dilakukan berdasarkan medium tersebut.
3. Cara kerja metode MPN
MPN umumnya dilakukan tidak hanya sampai menghasilkan tabungtabung positif saja, melainkan dilanjutkan dengan berbagai macam uji untuk
mengkonfirmasi tabung positif. Prosedur konfirmasi tersebut bertujuan untuk meyakinkan bahwa data positif tersebut memang ditimbulkan oleh
mikroorganisme target. Meskipun media awal yang dipakai di dalam tabung sudah berfungsi sebagai media selektif. Terdapat tiga tahap dalam
prosedur lengkap metode MPN yaitu uji penduga (presumptive test), uji penegasan (confirmed test) dan uji pelengkap (completed test). Uji penduga
dilakukan untuk memperoleh kombinasi tabung positif awal, kemudian uji penegasan digunakan untuk memastikannya. Nilai akhir yang diambil
adalah dari hasil uji penegasan dan pelengkap sehingga dimungkinkan mengubah kombinasi tabung yang diperoleh pada uji penduga. Umumnya
hanya uji E.coli saja yang sampai tahap uji pelengkap. Uji E.coli yang sesuai standar harus dilakukan sampai tahap akhir yang memerlukan waktu
berharihari. Jika analisa tidak dilakukan sampai akhir maka belum dapat dinyatakan pasti bahwa tabung positif tersebut mengandung E. coli.
Berikut adalah Metode MPN Coliform, Fecal Coliform dan E. coli untuk analisa sampel pangan yang diinterpretasikan berdasarkan FDA BAM
Ch.4 (2002).
3.1. Uji penduga
§ Buat pelarut Butterfield’s buffered phosphate dengan melarutkan 34.0 g KH2PO4 dalam 500 ml H2O lalu atur pH 7.2 dengan 1 M NaOH.
§ Larutkan dengan akuades sampai 1L, stok pelarut simpan dalam refrigerator. Larutkan 1,25 ml dari stok pelarut ke dalam 1L H2O lalu sterilisasi
menggunakan autoklaf.
§ Cairkan sampel beku pada suhu 25°C selama ≤18 jam atau suhu 45°C selama 15 menit pada waterbath dengan agitasi. Timbang secara aseptis
sebanyak 50g.
§ Masukkan sampel ke dalam kontainer blender yang telah disterilisasi. Tambahkan 450 ml butterfield phosphate diluent (dihitung pengenceran
pertama ; 50:450 atau 1:9). Kemudian hancurkan selama 2 menit. Volume total yang terdapat pada wadah blender harus menutupi pisau blender.
Jika sampel tersedia kurang dari 50g (x) maka pengenceran pertamanya adalah x.9 ml.
§ Ambil 1 ml homogenat sampel (pengenceran 1/10) dari preparasi sampel lalu masukkan ke 9 ml diluent (pengenceran 1/100). Ambil 1 ml dari
tabung pengenceran 1/100 untuk dimasukkan ke 9 ml diluent (pengenceran 1/1000). Pada setiap transfer sampel yang dilakukan, tabung dikocok
berayun 25 kali dengan ketinggian ayunan pengocokan 30 cm atau vorteks selama 7 detik.
§ Siapkan 3 seri tabung MPN berisi masingmasing 10 ml Lauryl Sulphate Tryptose (LST) broth dengan tabung durham didalamnya (total 9 tabung
yang dibagi menjadi 3 seri).
§ Masukkan 1 ml dari pengenceran 1/10 ke 3 tabung pertama, masukkan 1 ml dari pengenceran 1/100 ke 3 tabung kedua, dan masukkan 1 ml dari
pengenceran 1/1000 ke 3 tabung ketiga.
§ Inkubasi semua tabung pada suhu 35±0,5 oC selama 24±2 jam. Amati terbentuknya gas pada tabung durham lalu catat hasilnya. Inkubasi lagi
menjadi 48±3 jam tabung yang tidak terbentuk gas.
§ Interpretasi hasil positif jika media keruh dan terbentuk gas (harus keduaduanya) pada inkubasi 24±2 jam atau 48±3 jam. Interpretasi hasil negatif
jika tidak terdapat pertumbuhan dan tidak terbentuk gas. Gas yang diproduksi dapat terjebak dalam tabung durham ataupun berbentuk buih
(effervescence) yang timbul saat dikocok.
§ Perkiraan konsentrasi berdasarkan tabel yang didapat adalah nilai dugaan adanya Coliform, Fecal Coliform atau E.coli.
3.2. Uji penegasan untuk Coliform
§ Siapkan tabung berisi 10 ml Brilliant Green Lactose Bile (BGLB) broth dengan tabung durham didalamnya.
§ Masukkan satu ulasan inokulum dari tiap tabung LST broth yang menghasilkan uji positif ke dalam tiap tabung BGLB broth.
§ Inkubasi semua tabung pada suhu 35±0,5 oC selama 48±3 jam.
§ Interpretasi hasil positif jika media keruh dan terbentuk gas (harus keduaduanya). Interpretasi hasil negatif jika tidak terdapat pertumbuhan dan
tidak terbentuk gas.
§ Tentukan jumlah Coliform (MPN/g atau ml) dengan menghitung tabung positif kemudian cocokkan dengan tabel MPN (tabel 10) berdasarkan
dari perhitungan uji dugaan. Perkiraan konsentrasi berdasarkan tabel yang didapat adalah nilai penegasan adanya Coliform.
3.3. Uji penegasan untuk Fecal Coliform dan E.coli
§ Siapkan berisi masingmasing 10 ml EC broth dengan tabung durham didalamnya
§ Masukkan satu ulasan inokulum dari tiap tabung LST broth yang menghasilkan uji positif ke dalam tiap tabung EC broth.
§ Inkubasi semua tabung pada suhu 45,5 oC (Fecal Coliform untuk pangan dilakukan pada 45,5±0,2 oC, uji air, kerangkerangan 44,5±0,2 oC)
selama 24±2 jam. Amati terbentuknya gas pada tabung durham lalu catat hasilnya. Inkubasi lagi menjadi 48±2 jam tabung yang tidak terbentuk gas.
§ Interpretasi hasil positif jika media keruh dan terbentuk gas (harus keduaduanya). Interpretasi hasil negatif jika tidak terdapat pertumbuhan dan
tidak terbentuk gas.
§ Tentukan jumlah Fecal Coliform (MPN/g atau ml) dengan menghitung tabung positif kemudian cocokkan dengan tabel MPN (tabel 10)
berdasarkan dari perhitungan uji dugaan. Perkiraan konsentrasi yang didapat berdasarkan tabel adalah nilai penegasan adanya Fecal Coliform dan E.
coli. Untuk mengetahui apakah pada tabung EC broth adalah Fecal Coliform atau E. coli maka dilanjutkan uji penegasan untuk E. coli.
3.4. Uji pelengkap untuk E.coli
§ Tabung positif yang mengandung gas dari EC broth dikocok kemudian inokulasikan ke dalam cawan LEMB agar dan inkubasi pada 35±0,5 oC
selama 1824 jam.
§ Interpretasikan sebagai dugaan E.coli jika memiliki ciriciri koloni datar, berwarna hitam di tengah koloni dengan atau tanpa warna kilat logam
(metallic sheen). Inokulasikan sampai 5 koloni tersangka ke PCA dan inkubasi pada 35±0,5 oC selama 1824 jam untuk kultur uji penegasan
selanjutnya.
§ Satu dari lima koloni yang teridentifikasi positif E. coli cukup untuk menyatakan bahwa tabung EC broth tersebut terkonfirmasi positif E. coli.
§ Uji kultur dugaan dengan uji pewarnaan gram dan morfologi sel. Semua kultur yang mencirikan gram negatif dan sel berbentuk batang pendek
selanjutnya diuji dengan tahap selanjutnya. Inokulasikan kembali kultur dugaan tersebut ke media LST lalu inkubasi pada 35±0,5 oC selama 48±2
jam untuk mengkonfirmasi ulang terbentuknya gas. Kemudian kultur sangkaan yang sama dilakukan uji IMViC.
§ Uji IMViC (uji produksi indole, uji Methyl Red, uji VogesProskauer, uji penggunaan Citrate).
o Uji produksi indole; uji ini akan membedakan bakteri yang mampu atau tidak mampu memproduksi indole dari Tryptone.
Inokulasikan kultur sangkaan ke Tryptone broth lalu inkubasi pada 35±0,5 oC selama 24±2 jam. Tambahkan 0,20,3 ml reagen Kovac’s. Jika
terbentuk cincin merah pada bagian atas tabung maka bakteri dapat memproduksi indol (indol positif) dan bila terbentuk cincin kuning maka
disimpulkan sebagai indol negatif. Jika kultur dugaan adalah E. coli maka seharusnya menunjukkan hasil positif dan sel berbentuk batang pendek.
o Uji VogesProskauer; uji ini dapat membedakan bakteri yang mampu memproduksi acetylmethylcarbinol atau tidak. Senyawa tersebut dideteksi
dengan penambahan potassium hydroxide yang akan membentuk diacetyl yang bereaksi dengan peptone menghasilkan warna merah.
Inokulasikan kultur sangkaan ke MRVP broth lalu inkubasi pada 35±0,5 oC selama 48±2 jam. Setelah waktu 24 jam pindahkan 1 ml ke dalam
tabung kosong (13×100 mm) lalu tambahkan 0,6 ml larutan larutan αnaphthol dan 0.2 ml 40% KOH. Tambahkan beberapa kristal creatine. Kocok
kemudian biarkan selama 2 jam. Uji VP dinyatakan positif bila warna berubah menjadi merah. Jika kultur dugaan adalah E. coli maka seharusnya
menunjukkan hasil tidak ada perubahan warna / negatif.
o Uji Methyl Red; uji ini akan membedakan bakteri yang mampu memproduksi asam dari glukosa dan Methyl Red sebagai indikator penurunan pH .
Inkubasi kembali tabung MRVP pada 35±0,5 oC selama 48±2 jam. Tambahkan 5 tetes larutan Methyl Red ke dalam tabung MRVP broth.
Terbentuknya warna merah menandakan hasil uji positif, sedangkang berwarna kuning menunjukkan hasil negatif. Jika kultur dugaan adalah E. coli
maka seharusnya menunjukkan hasil positif.
o Uji penggunaan Citrate ; uji ini akan membedakan bakteri yang mampu menggunakan Citrate sebagai sumber nutrisinya.
Inokulasikan kultur sangkaan ke medium Koser’s Citrate broth lalu inkubasi pada 35±0,5 oC selama 96 jam. Reaksi positif jika terdapat
pertumbuhan media yang berwarna hijau berubah menjadi biru, reaksi negatif jika tidak ada pertumbuhan dan media tetap hijau. Jika kultur dugaan
adalah E. coli maka seharusnya menunjukkan hasil tidak ada perubahan warna / negatif.
Interpretasikan hasil uji IMViC dengan tabel berikut.
Kriteria Biotipe 1 Biotipe 2

Morfologi dan gram Batang pendek tidak Batang pendek tidak
berspora berspora
Sifat gram Gram negatiif Gram negatif
Gas pada tabung LST + +
Uji indole +
Uji MR + +
Uji VP
Uji Citrate
Tabel 1. Karakteristik E. coli pada uji morfologi sel, gram, produksi gas dan IMViC untuk biotipe 1 dan 2.
Hasil yang mencirikan biotipe 1 dan biotipe 2 disimpulkan sebagai E.coli (positif). Tentukan jumlah E. coli (MPN/g atau ml) berdasarkan
tabung EC positif yang terkonfirmasi dari uji penegasan berdasarkan tabel MPN (tabel 10).
Uji IMViC juga dapat dilakukan menggunakan test kit seperti API20E.
Uji MPN untuk Coliform dan E.coli selengkapnya dapat mengacu langsung ke BAM dengan alamat :
(http://www.fda.gov/Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm064948.htm)
4. Pemilihan jumlah seri tabung MPN
Telah diketahui bahwa MPN memiliki beberapa pilihan cara dalam perhitungannya berdasarkan jumlah tabung setiap serinya sesuai tabel yang
tersedia yaitu 3, 5, 8 dan 10 seri tabung. Inti dari metode MPN adalah mendapatkan tingkat pengenceran yang kadangkadang tapi tidak selalu
mengandung mikroorganisme hidup. Alasan inilah yang sangat mempengaruhi pemilihan jumlah seri tabung pada metode MPN tersebut. Menurut
ISO 7218 (2007:45) pemilihan konfigurasi seri tabung ini juga dipengaruhi oleh jumlah mikroorganisme yang diperkiraan, persyaratan peraturan
yang berlaku, presisi yang dibutuhkan dan pertimbangan praktik lainnya.
Sistem metode MPN yang paling banyak digunakan adalah Symmetric dilution system yaitu metode MPN yang menggunakan banyak tabung secara
paralel setiap pengencerannya. Semakin banyak jumah tabung yang digunakan setiap serinya maka semakin presisi nilai yang dihasilkan.
Disarankan untuk menggunakan 5 atau lebih tabung setiap serinya jika menginginkan presisi yang lebih baik (ISO 7218, 2007:45). FDA BAM Ch.4
(2002) menyatakan bahwa 3 seri tabung umumnya digunakan untuk sampel pangan, 5 seri tabung untuk sampel air dan kerang, sedangkan 10 seri
tabung dipakai untuk menguji air dalam kemasan (bottled water) atau sampel lain yang diperkirakan jarang terkontaminasi (mengandung sedikit
mikroorganisme).
Untuk pengujian air dalam kemasan (bottled water) digunakan metode 10 tabung. Diambil 100 ml sampel air dan inokulasikan masingmasing 10
ml sampel yang tidak diencerkan ke dalam 10 tabung 2x LST (double strength) dan tiap tabung berisi 10 ml media. Tabung diinkubasi pada 35°C.
selama 24±2 jam. Jika hasil negatif maka tabung diinkubasi lagi selama 24 jam. Semua tabung positif diuji dengan tahap konfirmasi yaitu dengan
menanamkannya pada BGLB menggunakan jarum inokulasi. Kemudian tabung diinkubasi pada 35°C. selama 48±2 jam. Hasil MPN diketahui
menggunakan tabel MPN 10 tabung (tabel 14) (FDA BAM Ch.4, 2002).
UNEP/WHO (1996:7) menyarankan jumlah sampel yang diinokulasikan dan jumlah seri tabung yang dipakai untuk analisa berbagai jenis sampel
air pada tabel berikut.
0,1 0,01
Jenis sampel 50 ml 10 ml 1 ml
ml ml
Air minum olahan (treated dinking water) 1 5
Air minum olahan sebagian (partially treated dinking
5 5 5
water)
Air yang dimungkinkan terjadinya kontak langsung
5 5 5
(Recreational water)
Sumber air yang dilindungi (Protectedsource water) 5 5 5
Air permukaan (Surface water) 5 5 5
Tabel 2. Tabel seri tabung dan volume sampel yang digunakan untuk analisa MPN berbagai jenis sampel air (UNEP/WHO, 1996:7)
Menurut USDA/FSIS (2008:3) untuk mengantisipasi jika jumlah mikroorganisme dalam sampel >10 Growth Unit/g (ml) maka disarankan menanam
sampel 10 ml pada 3 seri tabung, 1 ml pada 3 seri tabung lalu selanjutnya dilakukan pengenceran sampai 1/104 dan tiap pengenceran ditanam 1 ml
pada 3 seri tabung.
Gambar 2. Skema penanaman metode MPN yang disarankan oleh USDA/FSIS (2008:3). Jika mengikuti petunjuk ini maka kemungkinan
memperoleh tabung positif yang “kadangkadang tapi tidak selalu” semakin besar.
Banyak metode lain yang dapat diacu untuk analisa MPN Coliform dan atau E.coli. Umumnya terdiri dari beberapa tahap pengujian. Berikut tabel
perbandingan metode analisa MPN.
AOAC OM APHA, AWWA,
Referensi metode ISO 4831:2006 ISO 7251:2005
966.24 WEF 9221
Coliform dan Coliform dan
Uji Coliform E.coli
E.coli E.coli
Matriks Pangan dan pakan Pangan dan pakan Pangan Air
Padat : Padat :
Air minum :
3×3 seri tabung : 3×3 seri tabung :
1×10 seri tabung :
10 ml dari 1/10 10 ml dari 1/10 @ 10 ml
3×3 seri tabung :
pada 3 seri tabung pada 3 seri tabung
DS DS 1×5 seri tabung :
1 ml dari 1/10
@ 20 ml
1 ml dari 1/10 1 ml dari 1/10 pada 3 seri tabung
Inokulasi dan jumlah seri tabung pada 3 seri tabung pada 3 seri tabung 1 ml dari 1/100 1×1 seri botol : @

SS SS 100 ml
pada 3 seri tabung
1 ml dari 1/100 1 ml dari 1/100 Bukan air minum
1 ml dari 1/1000
pada 3 seri tabung pada 3 seri tabung pada 3 seri tabung :
SS SS
Sampel
Cair : Cair : diencerkan
terlebih dahulu.
Dari 1,1/10,1/100 Dari 1,1/10,1/100
LST (DS);
30/37oC ; 24±2
jam LST (DS);
LST (DS+SS);
LST; 35±0,5oC ; 35±0,5oC ;
Uji penduga Coliform dan E.coli
LST (SS); 37oC ; 24+24±2
24+24±2 jam (24±2)+(24±3)
jam
30/37oC ; jam
24+24±2 jam
BGLB; 35±0,5oC
; 48±3 jam
atau
BGLB; 30/37oC ; BGLB; 35±0,5oC LES Endo Agar

Uji penegasan Coliform 24+24±2 jam () ; 48±2 jam
Mc Conkey
Pewarnaan gram
LST
EC broth; EC broth;
EC broth; 44oC ;
Uji penegasan Fecal Coliform () 45,5±0,02oC ; 45,5±0,2oC ; 24±2
24+24±2 jam
48±2 jam jam
Pewarnaan
Gram ECMUG;
o
Penanaman LST 45,5±0,2 C ; 24±2
jam
Uji indol
Uji indol : atau
Uji pelengkap E.coli () peptone water; Uji methyl red
Uji GAD
44oC ;48±2 jam
Uji Voges (glutamate
Proskauer decarboxylase)
Uji penggunaan Uji Indol
citrate
Tabel MPN 10
tabung dengan
Tabel MPN 3 seri Tabel MPN 3 seri
Tabel MPN 3 seri inokulum 10 ml;
tabung dengan tabung dengan
tabung dengan
inokulum 0,1 g, inokulum 0,1 g,
Tabel yang digunakan inokulum 0,1 g, Tabel MPN 5
0,01 g, dan 0,001 0,01 g, dan 0,001
0,01 g, dan 0,001 tabung dengan
g. atau 1 g, 0,1 g g. atau 1 g, 0,1 g inokulum 20 ml;
g.
dan 0,01 g. dan 0,01 g.
Interpretasi P/A.
Catatan :
SS : single strength
DS : double strength
P/A : presence / absence
Tabel 3. Tabel perbandingan metode MPN untuk Coliform dan atau E.coli berdasarkan beberapa standard internasional (ISO 4831 (2006), ISO 7251
(2005), AOAC OM 966.24 (2005) dan APHA, AWWA, WEF 9221 (2006)).
Jika pengujian Coliform dan E.coli dilakukan sesuai standar baku maka memang diperlukan tahap konfirmasi yang bertingkat dan seringkali
membutuhkan waktu yang panjang. Çakir et al. (2002:1049) membuktikan bahwa tidak perlunya dilakukan beberapa uji konfirmasi saat
perhitungan Coliform dan E.coli. Konfirmasi yang dapat diabaikan adalah uji pada BGLB untuk mengkonfirmasi Coliform setelah uji LST dan uji
indol untuk mengkonfirmasi E.coli setelah uji MUG. Uji konfirmasi ini tidak memberikan dampak yang signifikan terhadap hasil akhir hitungan.
5. Peluang dalam metode MPN
Brown (2001:224) memberi permisalan pembacaan tabung positif untuk kombinasi 310. Kombinasi ini menghasilkan indeks MPN sebesar 4,3.
Angka ini menunjukkan sampel memiliki perkiraan 4,3 ‘organisme’ per gram dengan 95% kemungkinan keberadaannya dengan rentang 0,9 sampai
18,1 ‘organisme’ dengan menggunakan tabel MPN 3 seri. Angka 4,3 hanyalah nilai kemungkinan secara statistik.
Gambar 3. Bagan distribusi normal salah satu nilai MPN.
FDA BAM appendiks 2 (2001) memberikan informasi bahwa hasil dari metode MPN memiliki derajat kepercayaan karena proses perhitungannya
merupakan hasil dari peluang. Arti dari 95% confidence intervals dalam tabel MPN adalah kemungkinan paling tidak 95% rentang derajat
kepercayaan dari hasil akhir adalah sesuai dengan konsentrasi yang sebenarnya. Di dalam tabel MPN terdapat kolom derajat kepercayaan
(confidence interval) 95% dengan batas bawah (lower limit) dan batas atas (upper limit). Angka ini menunjukkan batas derajat kepercayaan tersebut.
Nilai indeks MPN dan derajat kepercayaan dalam tabel dinyatakan dalam dua digit signifikan, misalnya nilai 400 adalah hasil pembulatan antara
395 dan 405. Tidak diberikannya batas nilai MPN untuk semua tabung positif (333) yang ditandai dengan tanda “>” adalah menggambarkan
konsentrasi lebih dari nilai MPN untuk kombinasi paling tidak ada satu tabung negatif pada pengenceran tertinggi (332). Ketidakpastian ini juga
dijumpai pada indeks MPN untuk semua kombinasi tabung negatif.
(+) (+) (+) Conf. limit Conf. limit

0,1 0,01 0,001 MPN/ml Batas bawah Batas atas
5 3 0 79 22 220
5 3 1 110 34 250
5 3 2 140 52 400
5 3 3 180 70 400
5 3 4 210 70 400
Tabel 4. Contoh potongan tabel MPN 5 seri tabung dengan inokulum 0,1g (ml), 0,01 g (ml) dan 0,001 g (ml).
Untuk memahami peranan peluang dalam mendistribusikan sel sehingga menghasilkan tabung positif maka jumlah tabung positif (531) pada tabel
dicoba untuk dirunut dan diilustrasikan kembali dalam proses penanamannya pada gambar berikut (dianggap bahwa nilai MPN/ml sama dengan
‘sel’/ml (GU/ml)). Namun perlu diingat, jumlah sel yang terambil tidak selalu seperti itu, semuanya adalah peluang dan angka yang didapat adalah
angka yang kemungkinannya paling besar.
Gambar 4. Ilustrasi peluang saat penanaman dan pengenceran pada metode MPN. Satu titik menggambarkan satu ‘sel’ atau growth unit.
6. Persyaratan pemilihan kombinasi tabung positif dan pelaporannya
Seperti metode hitungan cawan, di dalam MPN juga memiliki konsep pemilihan jumlah yang masuk dalam ‘kisaran hitung’ yaitu berdasarkan
frekuensi kemunculan tabung positif yang sebaiknya kadangkadang tapi tidak selalu. Kombinasi tersebut dipilih dari tiga tingkat pengenceran
tertentu yang disebut tiga tingkat pengenceran yang signifikan. Syarat umum yang dipakai dalam pemilihan tabung positif adalah :
Pilih pengenceran yang memiliki kombinasi tabung kategori 1, jika tidak ada maka pilih kombinasi dari kategori berikutnya yang lebih rendah
berturutturut (2 dan 3) (tabel 9).
Atau dengan ketentuan :
Pilih pengenceran terendah yang tidak semua tabung menghasilkan tabung positif.
Pilih pengenceran tertinggi yang paling tidak memiliki satu tabung positif.
Pilih semua pengenceran diantaranya.
Kalikan setiap seri tabung yang dipilih dengan pengenceran yang diambil.
Misalnya : dari inokulum 1, 0,1, 0,01, 0,001 dan 0,0001 menghasilkan kombinasi tabung positif 54310 maka dipilih 54310 bukan 54310
atau bukan 54310 sehingga didapat nilai MPN 33/g.
Kombinasi tabung
1 g 0,1 g 0,01 g 0,001 g 0,0001 g Nilai MPN/g
positif
5 4 3 1 0 431 33
Tabel 5. Tabel contoh pemilihan tabung positif berdasarkan syarat yang berlaku.
Gambar 5. Bagan pemilihan tabung untuk kombinasi tabung 54310.
Tidak semua keadaan menggambarkan kondisi seperti diatas. Dimungkinkan juga mendapatkan semua seri tabung menghasilkan tabung positif dan
tidak semua pengenceran menghasilkan tabung positif.
Berikut contoh penentuan tabung positif pada beberapa kasus tertentu berdasarkan interpretasi peraturan SNI 012332.1 (2006:8) dan ISO 7218
(2007:48).
Gambar 6. Bagan pemilihan tabung untuk contoh A. Dipilih kombinasi tabung 5(1/10)1(1/100)0(1/1000).
Jika terdapat lebih dari satu seri pengenceran yang memiliki seluruhnya tabung positif, maka pilih pengenceran tertinggi yang menghasilkan seluruh
tabung positif dan dua pengenceran berikutnya.
Contoh A: 55100.
Jika pada pengenceran tertentu memiliki tabung positif seluruhnya dan pengenceran sebelumnya tidak memiliki seluruh tabung positif, maka dipilih
pengenceran yang memiliki semua tabung positif dan dua pengenceran berikutnya.
Contoh B: 45100. Bukan diambil 451 karena pada pengenceran 1/1 tidak semua tabung positif.
Jika pada tingkat pengenceran yang lebih tinggi (dari dua pengenceran berikutnya setelah pengenceran yang memiliki semua tabung positif) masih
menghasilkan tabung positif maka yang dijadikan pengenceran paling tinggi yang diambil adalah tingkat pengenceran tertinggi tersebut dan dua
pengenceran sebelumnya.
Contoh C: 54410. Bukan dipilih 410 karena pada 1/101 tidak seluruh tabung positif. Bukan dipilih 544 karena pada 1/103 masih terdapat satu
tabung positif.
Jika pada tingkat pengenceran tertentu semua menghasilkan tabung negatif tetapi pengenceran selanjutnya masih terdapat tabung positif, maka yang
dinyatakan tabung positif (dari pengenceran selanjutnya tersebut) adalah tingkat pengenceran sebelumnya (tabung positif bergeser ke pengenceran
sebelumnya).
Contoh D. 54401.
Jika pada tingkat pengenceran tertinggi yang dilakukan masih terdapat tabung positif, maka pilih pengenceran tersebut dan dua tingkat pengenceran
sebelumnya.
Contoh E. 55552.
Jika tingkat pengenceran tertentu menghasilkan tabung positif sedangkan pengenceran sebelumnya tidak, maka pilih dua tingkat pengenceran
sebelumnya dari pengenceran yang memiliki tabung positif tersebut.
Contoh F. 00100.
Jika pada pengenceran yang lebih tinggi dari pengenceran tertinggi yang ditentukan masih menghasilkan tabung positif, maka tambahkan tabung
positif tersebut ke tingkat pengenceran sebelumnya (bergeser menambahkan jumlah tabung positif pengenceran sebelumnya).
Contoh G. 44110 dipilih menjadi 442.
Pelaporan MPN/g didapat dari angka indeks MPN yang harus disesuaikan dengan seri tabung dari mana tingkat pengenceran tersebut diambil.
Misalnya pada contoh E angka indeks MPN untuk kombinasi 552 (inokulum 0,1, 0,01 dan 0,001) adalah 540 tetapi karena diambil pengenceran
signifikan 0,01, 0,001 dan 0,0001 maka nilai harus dikalikan 10. Begitu pula sebaliknya untuk contoh G yang diambil dari pengenceran signifikan 1,
0,1 dan 0,01 maka nilai 47 harus dibagi 10 menjadi 4,7.
Kombinasi Angka Nilai

contoh 1 g 0,1 g 0,01 g 0,001 g 0,0001 g
tabung positif indeks MPN MPN/g
A 5 5 1 0 0 510 33 33
B 4 5 1 0 0 510 33 33
C 5 4 4 1 0 441 40 40
D 5 4 4 0 1 441 40 40
E 5 5 5 5 2 552 540 5400
F 0 0 1 0 0 001 1,8 0,18
G 4 4 1 1 0 442 47 4,7
Tabel 6. Tabel contoh pemilihan tabung positif pada beberapa kasus berdasarkan syarat yang berlaku. Angka indeks MPN diambil dari tabel MPN 5
seri tabung dengan inokulum 0,1 g, 0,01 g, dan 0,001 g (SNI 012332.1, 2006:8).
Sedangkan contoh pemilihan tabung positif untuk 3 seri tabung dapat dilihat pada tabel berikut.
Kombinasi Angka Nilai

contoh 1 g 0,1 g 0,01 g 0,001 g 0,0001 g
tabung positif indeks MPN MPN/g
A 3 3 2 1 0 332 110 110
B 3 3 3 0 330 24 240
C 2 2 1 1 0 110 0,74 74
D 3 3 0 0 0 330 24 24
E 2 2 0 1 0 220 2,1 2,1
Tabel 7. Tabel contoh pemilihan tabung positif pada beberapa kasus berdasarkan syarat yang berlaku. Angka indeks MPN diambil dari tabel MPN 3
seri tabung dengan inokulum 1 g, 0,1 g, dan 0,01 g (ISO 7218, 2007:49).
7. Batasbatas perhitungan nilai MPN
Batas batas perhitungan MPN ditentukan untuk menghasilkan data yang dapat dipercaya dan presisi. Presisi dari metode MPN dipengaruhi oleh
jumlah tabung paralel tiap pengenceran dan koefisien pengencerannya.
Batas praktik bawah dan atas dari prosedur MPN adalah jika hanya satu tabung dalam set deteksi (jumlah seri tabung, jumlah tabung,
pengencerannya dll.) adalah positif atau negatif. Kisaran nyata dari 3 x 5 seri tabung adalah 1,8 sampai 1600 partikel / unit volume (dengan
inokulum 0,1 g, 0,01 g, dan 0,001 g; tabel 11). Pada konsentrasi partikel yang sangat rendah suatu metode kuantitatif akan menjadi seperti metode
presence/absence yang menghasilkan data ya atau tidak saja ISO 1348 (2011:25).
Batas atas metode MPN dilampaui jika semua tabung dari semua pengenceran, misalnya 333 menghasilkan >1100. Namun ini tidak
menggambarkan batas atas dari metode itu sendiri karena hanya kesalahan tingkat pengenceran yang dilakukan. Pengenceran yang cocok dapat
disesuaikan (digeser). Oleh karena itu tidak ada batas atas yang dapat diatur karena alasan statistik sebab presisi tidak tergantung pada jumlah
partikel (sel) yang dimasukkan ke dalam set deteksi. Hal ini merupakan karakteristik prosedur MPN yaitu presisinya dapat ditingkatkan dengan
mengubah konfigurasi set deteksi (ISO 13483, 2011:20).
8. Menghitung MPN tanpa tabel
Metode yang telah dijelaskan sebelumnya adalah metode penentuan nilai MPN berdasarkan tabel. Selain menggunakan tabel, FDA BAM apendiks 2
(2010) dan ISO 7218 (2007:46) menyatakan bahwa nilai MPN dapat dicari dengan rumus berikut (Thomas formula) :
MPN/g = (∑ gj) / (∑ tjmj ∑ (tjgj)mj) (½)
∑ gj : jumlah tabung positif pada pengenceran yang dipilih
∑ tjmj : jumlah (g/ml) dari sampel dalam semua tabung pada pengenceran yang dipilih
∑ (tjgj)mj : jumlah (g/ml) dari sampel dalam tabung negatif pada pengenceran yang dipilih
Contoh 1 :
Didapatkan hasil kombinasi tabung (10/10, 10/10, 4/10, 2/10, 0/10) dari 10 seri tabung dengan inkokulum 0,1, 0,01, dan 0,001.
Jika digunakan tabel maka dipilih (10/10, 10/10, 4/10, 2/10, 0/10) yaitu kombinasi 1042 = 70 MPN/g.
Namun dalam perhitungan hanya gunakan (10/10, 10/10, 4/10, 2/10, 0/10).
Gambar 7. Bagan tabung positif dan negatif 10 seri tabung untuk contoh 1.
∑ gj = 6
6 didapatkan dari 4 tabung positif +2 tabung positif
∑ tjmj = (10 x 0,01) + (10 x 0,001) = 0,11
10 adalah jumlah seri tabung
0,01 dan 0,001 adalah sampel yang dimasukkan (g)
∑ (tjgj)mj = (6 x 0,01) + (8 x 0,001) = 0,068
6 adalah jumlah tabung negatif pada pengenceran 0,01
8 adalah jumlah tabung negatif pada pengenceran 0,001
MPN/g = 6/(0,068 x 0,11) ½
= 6/0,086
= 70/g
Contoh 2 :
Didapatkan hasil kombinasi tabung (5/5, 3/5, 1/5, 0/5) dari 5 seri tabung dengan inkokulum 0,1, 0,01, dan 0,001.
Jika digunakan tabel maka dipilih (5/5, 3/5, 1/5, 0/5) yaitu kombinasi 531 = 110/g.
Namun dalam perhitungan hanya gunakan (5/5, 3/5, 1/5, 0/5).
Dengan cara yang sama maka MPN/g.
= 4 / (0,024 x 0,055)1/2
= 4 / 0,0363
= 110/g
9. Aplikasi lain MPN dalam perhitungan bakteri
Prinsip MPN umumnya dikenal di berbagai metode standar adalah sebagai metode fermentasi tabung seri bertingkat. Selain yang telah disebutkan
diatas konsep MPN juga diterapkan dalam perhitungan bakteri dengan nama Simplate® (BioControl Systems). Metode Simplate® menggunakan
binary detection technology untuk menghitung mikroorganisme berdasarkan pertumbuhannya pada sumuran (wells) pada permukaan cawan plastik
khusus yang telah disediakan. Kisaran perhitungan normal menggunakan 84 sumuran. Sebagian volume sampel (10 ml) yang disebarkan pada
cawan akan mengisi sumuran sedangkan sisa volume sampel dapat disingkirkan di kapas penyerap yang terletak di bagian pinggir cawan.
Pertumbuhan yang terdapat di sumuran yang diindikasikan perubahan warna (tergantung media spesifik yang digunakan) akan menggambarkan
jumlah mikroorganisme pada sampel. Hasil yang diperoleh adalah adanya sumur positif atau negatif. Jumlah angka positif kemudian dibandingkan
dengan tabel sehingga diperoleh nilai CFU/g(ml) sampel. Pada prinsipnya metode ini tetap mengadopsi perhitungan kemungkinan dari metode MPN
yaitu positif atau negatifnya setiap unit fermentasi. Peningkatan jumlah unit (sumuran) tersebut tentu dapat mempertinggi akurasi dan presisi metode
ini. Data akhir juga bukan dilaporkan sebagai MPN/ml(g) tapi diubah menjadi CFU/ml(g) walaupun dalam praktiknya tidak akan dijumpai
perhitungan koloni pada cawan. Penggunaan metode ini telah divalidasi, contoh salah satunya tedapat di AOAC OM 2005.03 (AOAC,2005 Ch.17,
p.36) Detection and Confirmed Quantitation of Coliform and E.coli in Foods. SimPlate Coliform and E.coli Color Indicator.
Selain itu, TEMPO® (bioMérieux) juga menggunakan MPN dalam memperoleh hasil perhitungannya. MPN terotomatisasi ini terdiri dari vial yang
mengandung medium pada sebuah kartu. Kartu mengandung tiga seri (set) sumuran (wells/vial) yaitu kecil, menengah dan besar masingmasing 16
sumuran dan semua berjumlah total 48 sumuran. Setiap seri diinokulasikan sampel dengan perbedaan setiap setnya 1/10, seperti halnya metode 3
seri tabung. Artinya metode ini menggunakan seri ‘tabung’ lebih banyak yaitu 161616 yang tentunya dapat meningkatkan akurasi dan presisi hasil
perhitungannya.
10. Perhitungan MPN secara otomatis
Nilai MPN jika dihitung secara manual akan sangat merepotkan. Oleh karena itu dibangun suatu perhitungan MPN yang telah diprogram pada suatu
perangkat lunak. Food and Drug Administration (FDA) menyediakan file perhitungan MPN yang dapat diunduh di:
(http://www.fda.gov/Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm109656.htm). Beberapa pehitungan otomatis lainnya dengan nama MPN
Calculator juga dapat di temui di alamat : (http://www.i2workout.com/mcuriale/mpn/). Environmental Protection Agency (EPA) juga membangun
software untuk perhitungan MPN (MPN Calculator Version 3.0) dengan mempelajari manual pengoperasian dan instalasinya di alamat :
(http://www.epa.gov/microbes/MPN_User_Manualvs3.pdf) .
Perhitungan MPN otomatis ini tentu dapat meniadakan penggunaan tabel dan kombinasi tabung yang tidak terdapat pada tabel (kombinasi jarang,
misalnya 103) juga dapat diketahui melalui perhitungan ini. Namun perlu diketahui bahwa sebagian besar metode standar umum MPN (misalnya,
FDA BAM, AOAC, ISO, SNI) sampai sekarang masih menggunakan tabel MPN dalam tahap prosedurnya.
Gambar 8. Tampilan perhitungan MPN secara otomatis Spreadsheet MPN FDA BAM, Spreadsheet MPN Calculator, dan software MPN Calculator
(VB6 version). Contoh perhitungan 3 seri tabung (inokulum 0,1, 0,01 dan 0,001) dengan kombinasi 321.
11. Hubungan MPN dan CFU
CFU dan MPN adalah satuan yang asalnya perhitungannya terpisah walaupun menggambarkan tujuan yang sama yaitu memperkirakan jumlah sel
sebenarnya. Kedua satuan ini tidak berhubungan langsung, yang artinya tidak selalu x CFU/ml adalah x MPN/ml walaupun data antara CFU/ml dan
MPN/ml menunjukkan korelasi positif.
11.1. Perbandingan antara MPN dan CFU
Berikut adalah beberapa hasil perbandingan antara metode hitungan cawan (spread/pour plate pada media agar selektif atau membran filtrasi) dan
metode fermentasi tabung berseri/MPN yang diambil dari beberapa publikasi penelitian sebelumnya.
Hildebrandt dan Schott (2001:453) melaporkan bahwa metode MPN menghasilkan data positif Listeria spp. dan L.monocytgenes lebih banyak
dibandingkan dengan metode hitungan cawan sehingga dapat disimpulkan bahwa MPN lebih sensitif dibanding CFU dalam uji Listeria. Namun
metode hitungan cawan lebih dipilih digunakan secara rutin karena memiliki produktivitas yang sedikit lebih baik dan variasi hasil lebih kecil.
meskipun begitu metode MPN dapat dipilih untuk studi epidemiologi karena memiliki detection limit (LOD) yang jauh lebih rendah dibanding
hitungan cawan yaitu sekitar 66% dari batas deteksi hitungan cawan.
Paulsen et al. (2008:376) menyatakan bahwa metode MPN (terotomatisasi) menghasilkan data ratarata lebih rendah dibandingkan hitungan cawan
dengan metode yang bersumber dari ISO dan hitungan cawan dengan petrifilm untuk menghitung kelompok Enterobacteiaceae. Jadi dapat
disimpulkan bahwa metode hitungan cawan lebih banyak mendeteksi Enterobacteiaceae (lebih sensitif) daripada MPN.
Cho et al. (2010:846) menyebutkan bahwa hasil perhitungan E.coli dalam menentukan kualitas air menggunakan metode MPN menghasilkan
konsentrasi lebih besar dibanding hitungan cawan. Namun berbeda dengan perhitungan Enterococci yang menghasilkan metode MPN lebih rendah
daripada hitungan cawan.
Kodaka et al. (2006:115) telah membuktikan bahwa metode hitungan cawan dengan penanaman pada dry rehydratable film media (Compact Dry)
tidak memiliki variasi/perbedaan yang signifikan jika dibandingkan dengan metode MPN yang bersumber dari AOAC untuk menguji bakteri
Coliform pada daging mentah.
Curiale et al. (1991:635) menyatakan bahwa metode penanaman pada dry rehydratable film mempunyai tingkat reprodusibilitas dan repeatabilitas
yang sama atau lebih baik jika dibandingkan dengan metode MPN yang bersumber dari AOAC untuk menghitung Coliform dan E.coli. Penelitian
ini dilakukan pada berbagai sampel pangan yang diuji oleh 14 laboratorium dalam rangka studi kolaboratif untuk mengadopsi metode ini menjadi
metode resmi AOAC.
Prosedur MPN mempunyai tingkat keberagaman (variable) data lebih besar dibandingkan dengan hitungan cawan menggunakan membran filtrasi
untuk menganalisa jumlah Coliform sehingga metode MPN menghasilkan jumlah ratarata Coliform lebih besar daripada metode hitungan cawan.
Keberagaman tersebut tidak ditentukan oleh kesalahan analis (human error) tetapi lebih dipengaruhi oleh dasar perhitungan metode MPN yaitu
probabilitas (Gronewold dan Wolpert, 2010:3327).
Pada analisa perhitungan bakteri rumen didapatkan data ratarata jumlah bakteri rumen (pemfermentasi xylane, starch dan pectin) cenderung sama
antara metode CFU maupun MPN. Namun metode hitungan cawan memberikan variabel yang lebih kecil yaitu antara 45 kali dari metode MPN
sehingga nilai CFU memberikan presisi data yang lebih baik (Kajikawa et al. 1990:810).
Wohlsen et al. (2006:350) telah melakukan perbandingan berbagai metode resmi untuk mengevaluasi setiap metodenya. Metodemetode yang diuji
adalah spread dan pour plate (standard plate count), filtrasi membran, MPN, dan petrifilm untuk menghitung E.coli dan Coliform lain. Dari studi
tersebut dihasilkan metode yang paling baik dan konsisten adalah metode pour plate dan metode petrifilm. Metode lainnya mengindikasikan
tingginya keberagaman data antar perulangan dan rendahnya recovery.
Beberapa literatur diatas menyebutkan hitungan cawan (CFU) menghasilkan data yang lebih presisi (Kajikawa et al. (1990:810), Wohlsen et al.
(2006:350) dan Gronewold dan Wolpert (2010:3327)). Kemungkinan kurangnya presisi pada MPN ini disebabkan oleh terkumpulnya hasil pada
tabel MPN dengan pembulatan (dua angka signifikan) yang cukup besar dibandingkan perhitungan koloni. Variabilitas data metode MPN yang
lebih besar dapat diperparah jika kehomogenan sampel tidak diperhatikan dengan baik (sel target masih menggerombol dalam partikel besar sampel)
atau adanya tabung positif palsu.
Gambar 9. Grafik diatas dapat menjelaskan bahwa metode MPN memiliki keberagaman data yang lebih besar dan hasil ratarata MPN lebih tinggi
dibanding CFU sehingga menjadikan presisi metode MPN lebih rendah. Grafik A adalah data hasil metode MPN (MPN/100ml) yang dibandingkan
dengan data jumlah mikroorganisme target yang sebenarnya sedangkan grafik B adalah untuk metode filtrasi membran (CFU/100 ml) (Gronewold
dan Wolpert, 2008:3329).
11.2 Perbedaan antara MPN dan CFU
Perbedaan antara CFU dan MPN dapat diringkas pada tabel berikut.
Pembeda MPN CFU (hitungan cawan)

Objek yang dihitung Tabung positif Setiap koloni
Jenis metode Semi kuantitatif Kuantitatif
Metode yang dilingkupi Metode MPN : 3 seri, 5 seri, 8 Spread/pour plate pada
seri, atau 10 seri tabung. Metode media agar, membran
MPN terotomatisasi. filtrasi, penanaman pada
dry rehydratable film,
spiral plate count.
Dasar perhitungan Teori probabilitas berdasarkan Satu koloni
positifnegatif. menggambarkan satu “sel”
(unit tumbuh).
Presisi kurang.
Lebih presisi.
Dasar pemilihan Frekuensi tabung positif yang Kisaran jumlah koloni yang

pengenceran kadangkadang tetapi tidak memenuhi syarat statistik
selalu. (25250, 30300, <150 dll.)
Media pertumbuhan Broth/cair pada tabung. Agar/padat pada cawan.
lebih banyak membutuhkan lebih sedikit membutuhkan
media. media.
Mikroorganisme target Sel bersifat terpisah seperti Semua jenis

Coliform, E.coli, enterococci, mikroorganisme tergantung
S.aureus dan Listeria. media selektif yang
dipakai.
Mikroorganisme target yang
terluka dapat lebih terrecovery
Penyebab kesalahan atau Bakteri non target yang memiliki Koloni tidak terhitung atau

positif palsu ciri metabolisme yang sama. terhitung ganda,
antagonisme, kompetisi.
Inokulum 10 ml (double strength), 1 ml (pour plate),
1 ml (single strength) 0,1 ml (spread plate)
100 ml (membrane filter)
Pengaruh waktu inkubasi Tidak mengubah hasil jika Koloni dapat terus tumbuh

diinkubasi melebihi waktu yang jika terlalu lama diinkubasi.
ditentukan.
Tabel 8. Ringkasan perbedaan MPN dan hitungan cawan (CFU).
11.3 Pengkonversian satuan MPN ke CFU
Apakah nilai MPN dapat diubah menjadi CFU? Cukup sulit untuk menjawab pertanyaan tersebut karena terbatasnya sumber. Berikut adalah
penjelasan yang diperoleh dari beberapa referensi.
Cho et al. (2010:846) telah mempelajari dan mengevaluasi mengenai korelasi metode MPN (colilert dan enterolert) dan CFU (mE agar dan mTEC
agar) untuk analisa E.coli dan Enterococci yang diukur pada setiap musim yang berbeda dengan membuat persamaan regresi linier. Hasil uji
perhitungan kemudian dianalisa dan dikelompokkan berdasarkan musim pengambilan sampel. Bentuk persamaan dasar tersebut adalah
MPNestimates = a + b x CFUestimates, atau bentuk persamaan lainnya yaitu MPNestimates = a + CFUbestimates dimana a dan b adalah koefisien regresi.
Hasil pengolahan data menunjukkan bahwa MPN dan CFU mempunyai korelasi positif dengan nilai a dan b berbedabeda di setiap musimnya.
Begitu pula dengan nilai r2 masingmasing persamaan di setiap musimnya. Namun studi ini tidak menjelaskan mengenai suatu rumus universal
untuk mengubah satuan MPN ke CFU.
Pada metode AOAC 983.25 (2005:40) untuk uji total Coliform, Fecal Coliform dan E. coli di pangan menggunakan metode filtrasi membran
(Hydrophobic Grid Membrane Filter) disebutkan bahwa hasil akhir jumlah transek membran filter yang ditumbuhi koloni target dapat diubah
menjadi MPN dengan rumus MPN = {N loge [N/(Nx)]}, dimana N adalah jumah total transek (kotak) pada membran filter dan x adalah jumlah
transek yang terdapat koloni bakteri target (transek positif). Cara ini mengindikasikan bahwa dari sebaran koloni pada transek membran yang
seharusnya dinyatakan sebagai CFU/ml dapat diubah ke MPN/ml. Namun rumus ini hanya telah tervalidasi untuk metode HGMF sesuai rujukan
referensi tersebut. Selain itu ditemukan juga rumus yang sama dengan diatas dan dilengkapi tabel pengkonversinya pada apendiks C untuk metode
penghitungan Coliform menggunakan metode HGMF (MFHPB17) yang diterbitkan badan kesehatan dan pangan kanada (Health Product and Food
Branch, Canada).
3M (2004) merilis tabel dan rumus konversi untuk data yang diperoleh menggunakan petrifilm EC plate dalam analisa E.coli dan Coliform.
Disebutkan bahwa satuan MPN dapat diubah ke CFU atau sebaliknya dengan rumus (log CFU) = 0,37 + 0,9 x (log MPN). Namun rumus ini juga
tidak dapat merepresentasikan semua keadaan dan jenis sampel, dan diperlukan verifikasi lebih lanjut untuk aplikasi yang lebih spesifik. Rumus ini
diperoleh saat studi prekolaboratif AOAC dengan menggunakan sampel pangan. Sedangkan metode penggunaan petrifilm (CFU) ini sendiri telah
tervalidasi oleh AOAC (AOAC, OM 991.14) yang digunakan sebagai rujukan pengenalan metode dalam rumus tersebut. Namun sama sekali tidak
dicantumkan rumus konversi ini dalam metode resmi AOAC 991.14 yang telah diterbitkan, begitu pula dengan jurnal sumber metode tersebut
(J.AOAC vol.74, p.635). Jadi rumus konversi diatas tidak valid jika digunakan untuk semua sampel dan semua kondisi.
Jadi disarankan untuk tidak mengubah satuan dari CFU ke MPN jika tidak menemukan metode resmi internasional yang mengatur mengenai
perubahan itu dengan suatu rumus yang telah tervalidasi. Jika memang antara CFU dan MPN dapat diubah dengan hasil yang pasti, maka akan dapat
ditemukan rumus pengkonversinya dengan mudah di referensi metode resmi internasional. Baik MPN atau CFU sebaiknya diperoleh secara terpisah
sesuai metodenya masingmasing. Seperti analogi menembak dengan busur panah tidak dapat disamakan dan diubah seperti menembak dengan
pistol mengenai tingkat akurasi dan presisinya, karena setiap cara memiliki kelebihan dan kekurangannya sendiri.
12. Kesalahan umum MPN
12.1. Kombinasi seri tabung diluar tabel
Berdasarkan prinsip pengenceran pada MPN maka seharusnya atau sebaiknya jumlah tabung positif pada pengenceran lebih pekat akan semakin
banyak (1/10>1/100>1/1000), misalnya 531. Hal ini dikarenakan setiap pengenceraan mengurangi jumlah mikroorgansime target dan akibatnya
semakin kecil kesempatannya untuk membuat tabung menjadi positif. Namun seringkali hasil yang didapat tidak sesuai dengan logika peluang,
seperti kombinasi 534 yang menghasilkan nilai 210. Bisa saja banyak sel tidak sengaja terambil dan memperbanyak tabung positif di pengenceran
selanjutnya atau homogenisasi tidak berlangsung sempurna. USDA/FSIS (2008:2) menyarankan untuk mengulangi analisa jika diperoleh kombinasi
tabung yang tidak terdapat dalam tabel (misalnya untuk 3 seri tabung : 023, 123, 213 dll.). Diasumsikan bahwa hasil tersebut mencurigakan
karena kontaminasi atau kesalahan praktik lainnya.
Dalam tabel MPN dalam metode MPN yang diterbitkan AOAC (AOAC OM 966.24, 2005:Ch.17,p5) mengenai kombinasi tabung seperti ini
diberikan catatan khusus. Misalnya untuk kombinasi 012, 132, 203 dll. Catatan ini menyarankan bahwa terdapat aspek ketidakemungkinan
yang tinggi jika mendapatkan kombinasi ini yang mengindikasikan bahwa nilai MPN yang diperoleh dapat lebih rendah dibandingkan konsentrasi
sebenarnya.
ISO 7218 (2007:61) menjabarkan tentang pembagian kategori kemungkinan nilai MPN berdasarkan kombinasi tabung positif dari tabel MPN. Nilai
MPN yang diperoleh dibagi menjadi empat kategori yaitu kategori 1, kategori 2, kategori 3 dan kategori 0. Kategori 1 memiliki kemungkinan paling
tinggi untuk diperoleh, berturutturut menurun sampai kategori 0. Disarankan untuk ditentukan terlebih dahulu kategori mana yang dinyatakan
diterima (acceptable), misalnya hanya kategori 1, 1 dan 2 atau 1,2,dan 3. Jika hasil MPN digunakan untuk menentukan keputusan yang lebih
penting maka sebaiknya dipakai kategori 1 atau 1 dan 2 saja sebagai batas keberterimaan. Sedangkan kategori 0 dapat dipertimbangkan sebagai nilai
yang mencurigakan. Tedapat pola mengenai kombinasi tabung dan pengelompokan kategorinya. Semakin baik kategori nilai MPN maka kombinasi
tabung positif yang terjadi akan semakin logis (mendekati kenyataan).
12.2. Tabung negatif palsu dan positif palsu
Tabung negatif palsu mungkin terjadi jika mikroorganisme target yang terdapat pada tabung gagal menghasilkan indikasi yang disyaratkan metode
untuk dinyatakan sebagai tabung positif. Beberapa sebab yang dapat diidentifikasi diantaranya adalah : (1) Terdapat bahan yang dapat mematikan
dan menghambat mikroorganisme atau berinterferensi dengan media, misalnya Chlorine pada air. (2) Gagalnya uji penegas dan pelengkap dalam
mengidentifikasi mikroorganisme terkait karena tidak semua (100%) strain mampu dideteksi metabolismenya dengan prosedur tertentu sehingga
tabung penduga yang semula positif dinyatakan menjadi negatif, misalnya pada metode ISO 7251: 2005 terdapat catatan bahwa strain patogen
E.coli tidak mampu tumbuh pada suhu 44°C saat dikonfirmasi dengan pada EC broth. (3) Tabung durham dilingkupi atau tenggelam oleh substrat
sampel padat dari homogenat sampel sehingga gas tidak mampu terperangkap. Disarankan tetap melihat pembentukan gas dengan menggoyang
tabung sehingga timbul buih (effervescence).
Sedangkan tabung positif palsu dapat disebabkan oleh (1) Terjadinya tabung positif oleh mikroorganisme non target, misalnya menurut Hussong et
al. (1981:35) beberapa strain Bacillus spp. dan Aeromonas spp. mampu pada membentuk gas pada tahap penduga. Oleh karena itu pellicle
(substansi lengket bakteri; film) tidak boleh terambil saat diinokulasikan lagi pada tahap penegas dan Coliform umumnya tidak membentuk pellicle.
(2) Kontaminasi oleh bakteri lain termasuk oleh isolat kontrol uji, sehingga disarankan penanaman isolat kontrol dilakukan setelah analisa. (3)
Kontaminasi silang dari tabung yang lain. Oleh karena itu lebih tepat menggunakan inoculation stick sekali buang saat uji penegas jika pembakaran
jarum inokulum berkalikali dirasa kurang menjamin sterilisasi. (4) Masih terdapatnya udara pada tabung durham karena kesalahan preparasi media.
Jika terdapat udara pada durham dan tidak timbul buih maka umumnya adalah reaksi negatif.
13. Tabel MPN
Tabel MPN berbagai seri tabung dapat dilihat pada tautan berikut : http://mikrobiologipraktik.com/tabelmpn/
Disusun oleh : Indra Pradhika, 2014
Referensi :
AOAC (Asociation of Official Analytical Chemistry). 2005. AOAC OM 966.24. Coliform Group and Escherichia coli Microbiological (MPN)
Method. AOAC Official Method of Analysis Microbiological Methods Ch.17:5.
AOAC. 2005. AOAC OM 983.25. Total Coliforms, Fecal Coliforms and E. coli in Foods, Hydrophobic Grid Membrane Filter Method. AOAC
Official Method of Analysis Microbiological Methods Ch.17:40.
AOAC. 2005. AOAC OM 991.14. Coliform and Escherichia coli Count in Food, Dry Rehydratable Film (PetrifilmTM E.coli/Coliform Count Plate
TM and PetrifilmTM Coliform Count Plate TM) Methods. AOAC Official Method of Analysis Microbiological Methods Ch.17:32.
AOAC. 2005. AOAC OM 2005.03. Detection and Confirmed Quantitation of Coliform and E.coli in Foods. SimPlate Coliform and E.coli Color
Indicator. AOAC Official Method of Analysis Microbiological Methods Ch.17:36.
APHA (American Public Health Association), AWWA (American Water Works Association) dan WEF (Water Environtment Federation). 2006.
Standard Method for Examination of Water and Wastewater 9221 : Multipletube fermentation technique for members of the Coliform group.
Brown, AE, 2001. Benson : Microbiological Application, Laboratory Manual in General Microbiology, Ed ke8. New York: Mc Graw Hill
Companies.
BSN (Badan Standardisasi Nasional), 2006. SNI 012332.12006, Cara uji mikrobiologi bagian 1: penentuan Coliform dan Escherichia coli pada
produk perikanan.
Çakir, I, HB Doğan, E Başpinar, F Kiven, dan AK Halkman. 2002. The need for confirmation in Coliform and E.coli enumeration in food. Turk J
Vet & Ani Sci 26:10491053.
Cho, KH, Han D, Park Y, Lee SW, Cha SM, Kang JH, dan Kim JH. 2010. Evaluation of the relationship between two different methods for
enumeration fecal indicator bacteria: colonyforming unit and most probable number. J Env Sci (China) 22(6):846850.
Curiale, MS, T Sons, D McIver, JS McCallister, B Hasley, D Roblee, dan TC Fox. 1991. Dry rehydratable film for enumeration total Coliform and
Escherichia coli in foods : collaborative study. JAOAC Intl 74(4):635648.
FDA (Food and Drug Administration). 2001. Bacteriological Analytical Manual Appendix 2: Most probable number from serial dilution.
FDA. 2002. Bacteriological Analytical Manual Chapter 4: Enumeration of Escherichia coli and the Coliform bacteria.
Hildebrandt, G dan W Schott. 2001. Comparison of direct colony count methods and the MPNmethod for quantitative detection of Listeria in
model and field conditions. Berliner und Münchener tierärztliche Wochenschrift 114(1112):45364.
Hussong, D, JM Damaré, RM Weiner, dan RR Colwell. 1981. Bacteria associated with falsepositive mostprobablenumber Coliform test results
for shellfish and estuaries. Appl Environ Microbiol 41(1): 35–45.
ISO (International Standard Organization). 2001. ISO/TR 13843:2001. Water quality – guidance on validation of microbiological methods.
ISO. 2005. ISO 7251:2005. Microbiology of food and animal feeding stuffs – horizontal methods for the detection and enumeration of presumptive
Escherichia coli – most probable number techniques.
ISO. 2006. ISO 4831:2006. Microbiology of food and animal feeding stuffs – horizontal methods for the detection and enumeration of Coliforms –
most probable number techniques.
ISO. 2007. ISO 7218:2007(E) Microbiology of food and animal feeding stuffs – general requirements and guidance for microbiological
examinations.
Gronewold, AD dan RL Wolpert. 2008. Modeling the relationship between most probable number (MPN) and colonyforming unit (CFU) estimates
of fecal coliform concentration. Water Res 42(13): 33273334.
Kajikawa, H, Y Nagasaki dan A Abe. 1990. Comparison between colony counting method and most probable number method in enumeration of
rumen bacteria fermenting specific substrates. Jpn. Journal Zootech. Sci 61(9): 810814.
Kodaka, H, H Teramura, T Nirazuka, S Mizuochi. 2006. Comparison of the compact dry CF with the most probable number method (AOAC
Official Method 966.24) for enumeration of Coliform bacteria in raw meats. J AOAC Intl 89(1): 115126.
Oblinger JL dan JA Koburger. 1975. Understanding and teaching the most probable number technique. J Milk Food Technol 38(9): 540545.
Paulsen, P, C Borgetti, E Schopf, dan FJM Smulders. 2008. Enumeration of Enterobacteriaceae in various foods with a new automated most
probablenumber method compared with petrifilm and international organization for standardization procedures. J Food Prot 71(2): 376.
Sutton, Scott. 2006. Counting Colonies. Pharmaceutical Microbiology Forum Newsletter. 12(9).
http://www.microbiol.org/white.papers/WP.count.colony.htm. [2 Oktober 2009].
UNEP (United Nations Environment Programme) / WHO (World Health Organization).1996 Water quality monitoring – a practical guide to the
design and implementation of freshwater quality studies and monitoring programmes, Chapter 10 – Microbiological analyses.
USDA (United States Departement of Agriculture) / FSIS (Food Safety and Inspection Service). 2008. Most probable number procedure and tables.
Wohlsen, T, J Bates, G Vesey, WA Robinson dan M Katouli. 2006. Evaluation of the methods for enumerating coliform bacteria from water
samples using precise reference standards. J compilation 2006 The Society for App Microbiol, Letters in App Microbiol 42: 350–356.
3M. 2004. 3M petrifilm E. coli count plate results from most probable number (MPN) results conversion table™.
http://www.microlabscr.com/resources/MPN+to+PEC+Conversion+Table+Dec03.pdf. [3 Januari 2013].
About indra pradhika
beginner microbiologist
View all posts by indra pradhika
Tags: No tags
Categories: Most Probable Number
You can leave a response, or trackback from your own site.
Leave a Reply
Your email address will not be published.
Name
Email
Website
Uji Turing Publik Terotomatisasi Penuh untuk membedakan Komputer dan Manusia *
two × = 2
Comment
You may use these HTML tags and attributes: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite>
<code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <strike> <strong>
Post Comment
Mesin Pencari
Untuk Pembaca
Situs ini didedikasikan untuk mempermudah pendidikan di Indonesia dalam bidang ilmu mikrobiologi dan ditujukan untuk mahasiswa, analis
dan profesi terkait lainnya.
Situs ini dibangun secara profesional dan berisi materi yang lengkap dan valid sehingga dapat meningkatkan kepercayaan pembaca terhadap
konten yang disuguhkan.
Jika terdapat pertanyaan, dapat diajukan di kolom komentar.
Diharapkan untuk para ahli dapat memberi saran jika menemukan kesalahan pada web ini.
Semoga bermanfaat.
email:pradhikaindra86@gmail.com
Daftar Isi Situs
Kata Pengantar
Tentang Penulis
Sterilisasi
Media Pertumbuhan Mikroorganisme
Most Probable Number (MPN)
Tabel MPN
Komentar Terbaru
indra pradhika on Tabel MPN
ade on Tabel MPN
puspa on Sterilisasi
indra pradhika on Tabel MPN
geo on Tabel MPN
survey
Apakah latar belakang Anda ?
Biologi umum
Bakteriologi
Bioteknologi / Genetika
Farmasi
Pertanian
Peternakan
Teknologi pangan
Kedokteran / Kesehatan
kimia
lainnya
Vote
View Results
Apakah profesi Anda ?
pelajar
mahasiswa sarjana
mahasiswa pascasarjana
guru / dosen
peneliti / asisten peneliti
analis / laboran
QA / QC operator
lainnya
Vote
View Results
tautan Metode Standard Mikrobiologi
FDA BAM microbiology methods
ISO/TC 147/SC 4 – Microbiological methods
ISO/TC 34/SC 9 – Microbiology
Official Methods of Analysis of AOAC INTERNATIONAL
Standard Methods APHA AWWA WEF
tautan situs bidang ilmu lain
chemistry.org
sicencebiotech.net
histat
kami mengucapkan :
atas kunjungan anda
Mikrobiologi Praktik
Theme by W3blog
Copyright © 2015 mikrobiologipraktik.com. All Rights Reserved. Premium WP Plugins

Uji MPN Sesuai SNI PDF

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Uji MPN Sesuai SNI PDF

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

9/1/2015 Mikrobiologi Praktik » Blog Archive » Most Probable Number (MPN) / Angka Paling Mungkin (APM)

Prinsip utama metode ini adalah mengencerkan sampel sampai tingkat tertentu sehingga didapatkan konsentrasi mikroorganisme yang pas/sesuai

Kriteria Biotipe 1 Biotipe 2

Inokulasi dan jumlah seri tabung pada 3 seri tabung pada 3 seri tabung 1 ml dari 1/100 1×1 seri botol : @

BGLB; 30/37oC ; BGLB; 35±0,5oC LES Endo Agar

(+) (+) (+) Conf. limit Conf. limit

Kombinasi Angka Nilai

Kombinasi Angka Nilai

Pembeda MPN CFU (hitungan cawan)

Dasar pemilihan Frekuensi tabung positif yang Kisaran jumlah koloni yang

Mikroorganisme target Sel bersifat terpisah seperti Semua jenis

Penyebab kesalahan atau Bakteri non target yang memiliki Koloni tidak terhitung atau

Pengaruh waktu inkubasi Tidak mengubah hasil jika Koloni dapat terus tumbuh

Anda mungkin juga menyukai

Uji MPN Sesuai SNI PDF

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Uji MPN Sesuai SNI PDF

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

9/1/2015 Mikrobiologi Praktik » Blog Archive » Most Probable Number (MPN) / Angka Paling Mungkin (APM)

Prinsip utama metode ini adalah mengencerkan sampel sampai tingkat tertentu sehingga didapatkan konsentrasi mikroorganisme yang pas/sesuai

Kriteria Biotipe 1 Biotipe 2

Inokulasi dan jumlah seri tabung pada 3 seri tabung pada 3 seri tabung 1 ml dari 1/100 1×1 seri botol : @

BGLB; 30/37oC ; BGLB; 35±0,5oC ­ LES Endo Agar

(+) (+) (+) Conf. limit Conf. limit

Kombinasi Angka Nilai

Kombinasi Angka Nilai

Pembeda MPN CFU (hitungan cawan)

Dasar pemilihan Frekuensi tabung positif yang Kisaran jumlah koloni yang

Mikroorganisme target Sel bersifat terpisah seperti Semua jenis

Penyebab kesalahan atau Bakteri non target yang memiliki Koloni tidak terhitung atau

Pengaruh waktu inkubasi Tidak mengubah hasil jika Koloni dapat terus tumbuh

Anda mungkin juga menyukai

BGLB; 30/37oC ; BGLB; 35±0,5oC LES Endo Agar