World Journal of Microbiology & Biotechnology 10,320-324
produksi protease oleh Rhizopus
oligosporus di solid-state fermentasi
L. Ikasari dan DA Mitchell *
Bekatul lebih unggul substrat protein lainnya untuk produksi protease oleh
solid-state. protease hasil maksimum setelah 72 jam. Kadar air awal yang optimal adalah 47% (aw = 0,97). Dikeringkan, tanah
dan beras fermentasi disuspensi adalah persiapan inokulum yang paling praktis dan efektif, meskipun, di laboratorium, suspensi
spora disiapkan langsung dari agar miring yang lebih nyaman. density inokulum (102-107 spora / g substrat) dan usia (3, 5, 7
dan 9 hari) memiliki sedikit efek pada protease hasil.
Kata kunci: Protease, Rhizopus, solid-state fermentasi.
protease jamur ini sangat penting dalam industri makanan (Kalisz
1988) Aspergillus dan Mucor telah pejantan-ied intensif sebagai
produsen protease (Klapper et al 1973;. Narahara et al 1982;.
Fukushima et al 1989;.. Thakur et al 1990 ;. Battaglino et al
1991), meskipun Rhizopus oligosporus juga pro-duces protease,
memiliki aktivitas proteolitik yang tinggi dalam fermentasi tempe
(Yokotsuka 1991) dan, lebih jauh lagi, tidak menghasilkan racun
(Gumbira-Sa'idet al 1991).. Thakur et al. (1990) melaporkan
bahwa R. oligosporus menghasilkan pengganti rennet anak sapi
yang memuaskan pada skala laboratorium. Namun, industri
produksi-tion dari protease oleh jamur ini belum diteliti.
sistem budidaya solid-state (Wang et al 1974;. Thakur et al
1990;. Battaglino et al 1991;. Malathi & Chakraborty 1991).
dan sistem budidaya cair terendam (Klapper et al 1973;
Nakadai & Nasuno 1988; Fukushima et al. 1989) telah
digunakan untuk produksi protease, meskipun sebagian besar
penelitian yang digunakan kultur cair, yang memungkinkan
kontrol yang lebih besar dari tempera-mendatang, pH dll
Namun, fermentasi solid-state memiliki poten-esensial untuk
hasil protease yang lebih tinggi (Wang et al. 1974 ; Lonsane &
Ghildya11992) dan karena itu layak penyelidikan lebih lanjut.
Selain itu, fermentasi solid-state memiliki kelebihan untuk
aplikasi-teknologi rendah, seperti kesederhanaan teknologi-
tehnik dan kadar air rendah, yang dapat mencegah
kontaminasi bac-terial selama fermentasi.
Tidak ada proses produksi enzim komersial di Indonesia
dan impor enzim terus meningkat (Capricorn Indonesia
Consult 1989). Penelitian ini mengeksplorasi potensi
Penulis dengan Departemen Teknik Kimia, University of Queensland,
Brisbane, Queensland, 4072, Australia; fax: 61-7-3654199, * penulis
Sesuai,
© 1994 Cepat Communications of Oxford Ltd
320 World Journal of Microbiology & Biotechnology, Vol 10, 1994
Rhizopus oligosporusACM 145F di fermentasi
a Proses-teknologi rendah untuk produksi protease, yang
melibatkan budidaya solid-state dari Rhizopus oligosporus.
Beberapa substrat padat dibandingkan, termasuk dedak padi,
yang melimpah-dant di Indonesia sebagai produk sampingan
dari penggilingan padi. Efek dari kadar air awal dan persiapan
inokulum juga diselidiki.
Bahan dan metode
Mikroorganisme dan Pemeliharaan
Rhizopus oligosporus ACM 145F (dari Koleksi Budaya,
Departemen Mikrobiologi, University of Queensland, Australia)
dipertahankan pada tanaman kentang / dextrose / agar (PDA). Sus-
pensiun yang mengandung 107 spora / ml disusun oleh
penambahan air steril untuk miring PDA 3-hari-tua.
Perbandingan Substrat
media padat untuk produksi protease disiapkan dengan
mencampur 10 g substrat protein (lihat Tabel 1) dengan 6 ml
0,01% (b / v) pupuk Hortico trace element (HTEF). Media di
labu Erlenmeyer 250 mL autoclave pada suhu 121 ° C selama
15 hujan, dan masing-masing lampu kilat diinokulasi dengan 1
ml suspensi spora (seperti yang disiapkan di atas). Kultur
diinkubasi pada 37 ° C dan dipanen pada 72 h. Setiap
percobaan dilakukan dua kali.
fermentasi Profil
Beras dedak dan media dedak gandum [6,25 g dedak kering dan
3,75 ml 0,01% (w / v) HTEF] di 250-ml labu Erlenmeyer
diinokulasi dengan I ml suspensi spora per botol, dan diinkubasi
selama 120 jam pada 37 ° C. termos duplikat telah dihapus untuk
pengambilan sampel.
Perbandingan Konten Moisture Awal
Sebagai perbandingan kadar air awal, 2, 4, 6, 8 atau 12 ml 0,01%
(b / v) HTEF ditambahkan ke 10 g dedak padi kering. Media ini
 produksi protease oleh R hizopus

Perbandingan Jenis Fermentor

Tabel 1. Protease hasil R oligosporus ACM 145F di beberapa
Termos, dikemas tidur (Gumbira Sa'id- et al.1991), nampan dan
substrat protein.
rolling-drum kecil fermentor yang digunakan. fermentor ini terdapat
10 g, 100 g, 150 g dan 1 kg beras bra n Media (dengan komposisi 6,25
substrat * yield protease
g beras bra n per 3,75 ml 0,01% HTEF), masing-masing. Suspensi
(105 PU / g awal substrat segar)
spora disiapkan dengan penambahan 10 ml air steril per 0,05 g dari 5-
hari-tua beras berjamur kering. Solusi ini diinokulasi ke dalam media
Dedak gandum 2.3
Dedak gandum + tepung kedelai (7: 3, w /
dedak padi (1 ml per 10 g media). Kultur diinkubasi pada 37 ° C.
w) 2.1 Untuk mengurangi hilangnya kelembaban selama inkubasi, nampan
Dedak gandum + tepung terigu (7: 3, w / ditempatkan dalam kotak kedap udara 9-1. Dikemas tidur fermentor itu
w) 2,5 aerasi dengan 0,7-0,8 1 udara / menit. Rolling - Drum memiliki
Dedak gandum + minyak kedelai (9: 1, w /
v) 2.1 kapasitas 20 1. Hal itu diputar di 15 putaran / menit dan disertakan
dengan 2,5 1 udara kering / min. Sampel diuji pada 0, 45 dan 72 h.
Soy bean 0,2 termos duplikat telah dihapus pada setiap waktu sampling untuk
kedelai + tepung beras (7: 3, w / w) 0,3 budaya labu, sedangkan sampel duplikat dari tempat tidur dikemas dan
kedelai + tepung terigu (7: 3, w / w) 0,2 nampan, masing-masing sekitar 10 g, dikumpulkan dari daerah rando
m dalam massa substrat. Untuk bergulir-d rum fermentor,
Nasi 0,2 menduplikasi sampel sekitar 10 g diambil dari duplikat drum.
Beras + dedak padi (7: 3, w / w) 2.6
Percobaan menggunakan termos, dikemas-tempat tidur dan fermentor
Nasi + Tepung kedelai (7: 3, w / w) 1,5 tray diulang.

dedak padi 3.9

Crude Enzim Persiapan
Bekatul + tepung terigu (7: 3, w / w) 1,9
protease kasar pulih dengan penambahan 100 ml 0,1 M buffer fosfat
Nasi dedak + singkong pati (7: 3, w / w) 1.4
(pH 7,0) pada substrat berjamur. Campuran homogen dengan
homogenizer VirTis. Protease diekstraksi dengan gemetar homogenat
* Tepung beras itu dari Golden Australia P / L, tepung kedelai dari Lowan
ini (70 hingga 80 osilasi / min) untuk I h. Padatan dipisahkan oleh
Whole Foods Pty Ltd, dedak beras dari padi Growers'Co-operative Ltd,
mensentrifugasi dan ekstrak yang jelas digunakan untuk protease
tepung terigu dari Rumah Brand-Woolworths dan pati singkong dari Thai
assay.
World Ekspor Impor Co Ltd

protease Assay
aktivitas protease diukur dengan menggunakan metode Anson
diinokulasi d diinkubasi seperti sebelumnya. termos duplikat telah
dimodifikasi, seperti yang dijelaskan oleh Adler-Nisson (1986). Setiap
dihapus pada setiap pengambilan sampel dan percobaan diulang.
inkubasi (465 ~ tl) berisi 10 mg BSA / ml (dilarutkan dalam 0,1 M
sitrat penyangga, pH 3.0) dan persiapan enzim kasar. Reaksi
Perbandingan Jenis lnoculum
proteolitik dilakukan pada 40 ° C dan berhenti setelah 45 menit dengan
Beras dan dedak (6,25 g substrat kering dan 3,75 ml air) diinokulasi
menambahkan
dengan 0.1ml spora suspensi per labu dan diinkubasi selama 3 hari
300 ~ Asam trikloroasetat tl (10%, w / v). Endapan kembali
pada 37 ° C. Tiga metode penyusunan inokulum dari beras ini d n
dipindahkan dengan sentrifugasi d jumlah tryosine dalam produk
budaya bra padi dibandingkan dengan inokulum dari PDA slants:
hidrolisis asam-larut ditentukan dengan metode Folin-reaksi, seperti
yang dijelaskan oleh Hanson & Phillips (1981) kecuali bahwa
(1) substrat fermentasi telah dihapus dari labu, ditempatkan dalam
CuSO4.5H20 dilarutkan dalam air suling . Sebuah kosong adalah pra-
cawan petri, dikeringkan selama 4 hari pada suhu 37 ° C dan
dikupas menggunakan langkah-langkah yang sama, kecuali bahwa
kemudian ditumbuk dengan mortar d alu. Ini digunakan
asam trikloroasetat adalah
sebagai inokulum pada 0,1 g per 10 g menengah.
ditambahkan sebelum penambahan enzim, Satu unit aktivitas protease
(2) substrat fermentasi dikeringkan dan tanah seperti dalam (1),
(PU) didefinisikan sebagai saya nmol tirosin setara dirilis per 45
disuspensi dalam air (1 g / 1 0 ml) dan saya ml ini suspen-sion
diinokulasi di 10 g media. hujan.
(3) substrat fermentasi segar tanah dan 0,1 g langsung diinokulasi
di 10 g media. Moisture Content dan Kegiatan Air Penentuan
Bekatul mediu m (6,25 g beras bra n dan 3,75 ml 0,01% HTEF)
kadar air ditentukan dengan mengeringkan sampel pada suhu 110 ° C
ditempatkan di setiap 250 mL labu Erlenmeyer, diinokulasi sebagai
selama 24 jam. aktivitas air ditentukan dengan Novasina Humidat IC-
de-jelaskan dalam (1), (2) atau (3) di atas, atau dengan saya ml larutan 1 hygrometer.
spora dari
a 3-hari-tua PDA miring. Kultur diinkubasi pada 37 ° C. termos
Dupli-cate dipanen.
Hasil dan Diskusi
Perbandingan lnoculum Density
solusi Spore mengandung 103 untuk 10s spora / ml dibuat dari substrat Choice
fermentasi beras (fermentasi 3 hari) dan miring PDA 3-hari-tua. Satu protease productionby Rhizopus oligosporusACM 145F onarange
ml masing-masing inokulum diinokulasi di 10 g beras bra n m mediu substrat padat swascompared (Tabel 1). T proteas hehighest e yield (3,9 x
(6,25 g beras bra n dan 3,75 ml 0,01% HTEF). Kultur diinkubasi pada
105 PU / g substrat padat) adalah obtaine dwith bekatul. washigherthan ini
37 ° C. termos duplikat dipanen.
th e protease hasil pro - ducedbyR. oligosporus di wheatbran (1,5 x 105
Perbandingan inokulum Umur PU / g substrat padat) dihitung fro m th hasil e W ang et al.(1974). H
Beras inokulum diinkubasi sampai 9 hari dan dibuat seperti pada
owever, hasil Poores t occurre beras dwith. Sangat miskin hasil juga
(2). Gandakan termos yang berisi 10 g bra padi n media yang sedang
obtaine don substrat sbasedon kacang kedelai. Secara umum, dedak
inocu-lated dengan 1 ml inokulum dan diinkubasi pada 37 ° C selama
72 jam. gandum, kacang kedelai,
WorldJournalof Mikrobiologi & Bioteknologi, Vo110,1994
321
L. Ikasari dan D. A. Mitchell
nasi atau bekatul dengan tepung, pati dan minyak memiliki
pengaruh yang kecil benefi-resmi dan sering menurun
protease hasil.
Dalam studi saat ini, dedak gandum termasuk karena telah
banyak digunakan untuk produksi protease (Wang et al 1974;.
Thakur et al 1990;. Battaglino et al 1991;. Malathi &
Chakraborty 1991). Beras, bekatul dan kacang kedelai yang
tersedia di Indonesia tetapi dedak gandum tidak.
Rhizopus oligosporus menghasilkan enzim proteolitik
selama fermentasi tempe kedelai (Hesseltine et al 1967;. Wang
et di 1974;. Nout & Rombouts 1990; Yokotsuka 1991).
Pemanfaatan beras sebagai substrat tunggal dan kombinasinya
dengan kacang kedelai untuk produksi tempe-jenis produk
telah dieksplorasi oleh Hesseltine et a l. (1967). Bekatul
mendukung pertumbuhan Aspergillus flavus tetapi tidak
protease produksi (Malathi & Chakraborty 1991) meskipun
dedak gandum dilengkapi dengan dedak padi digunakan untuk
produksi protease dengan Aspergillus oryzae (Battaglino et al.
1991). Bekatul dipilih sebagai substrat untuk penyelidikan
lebih lanjut karena memberikan imbal hasil protease tinggi dan
sudah tersedia di Indonesia.
fermentasi Profil
Profil produksi protease di bekatul diikuti untuk menentukan
waktu panen yang optimal (Gambar 1). profil dedak gandum
dimasukkan untuk perbandingan karena, seperti disebutkan di
atas, dedak gandum telah banyak digunakan untuk produksi
protease.
Produksi protease oleh R. oligosporus mulai dalam waktu
10 jam dalam dedak padi, sedangkan di kulit gandum produksi
dimulai setelah 10 jam. Protease hasil maksimum terjadi pada
72 jam dengan dedak padi, dan 58 jam dengan dedak gandum.
Setelah hasil protease maksimum tercapai, maka menurun
dengan cepat. Profil protease serupa diamati dengan Bacillus
subtilis dalam cairan
saya saya saya
o~
.HAI
o~
L~s
"HAI
Oq
20 40 60 80 100 120
Waktu (h)
Gambar 1. P roteas roduction ep R.
oligosporus di bekatul (0)
whea t dedak (e). budaya e th wer e diinkubasi pada 37 ° G. Gandakan
termos wer e dihapus pada sampling.
budaya oleh Chu et al. (1992), yang dianggap berasal dari
penurunan untuk penonaktifan oleh diri pencernaan (sebagai
faktor dominan), protease kedua dirilis selama fase stasioner
pertumbuhan dan denaturasi. Namun, Wang et al. (1974)
menyatakan inaktivasi cepat protease yang dihasilkan oleh R.
oligosporus di kulit gandum setelah 3 hari inkubasi pada 32 °
C mungkin disebabkan karena pergeseran basa pH daripada
diri pencernaan.
Awal Moistur e Konten dan Aktivitas air
kadar air awal secara signifikan mempengaruhi produksi
enzim hidrolitik dalam fermentasi solid-state (Nishio et al
1979;. Narahara et al 1982;. Battaglino et al 1991.). Efek
kelembaban terkait dengan aktivitas air (aw) yang menyatakan
ketersediaan air di media.
Protease hasil maksimum terjadi dengan konten mois-
mendatang awal 47% (aw = 0,97) (Gambar 2). Kualitatif,
kadar air ini menyebabkan pertumbuhan yang baik dan
sporulasi. Pada 51% kelembaban (a = 0,98) pertumbuhan
muncul lebih baik tapi sporulasi adalah miskin dan hasil
protease lebih rendah. Baik pertumbuhan dan sporulasi yang
sangat miskin dan produksi protease terhambat pada kadar
terendah awal kelembaban diuji (31%, aw = 0,94); Rhizopus
oligosporus tumbuh buruk pada kegiatan air ini (Glenn &
Rogers 1988).
Pada kadar air awal tertinggi (60%), pertumbuhan hanya
terjadi pada permukaan substrat, dan hasil protease sangat
rendah. Hal ini mungkin karena pengisian ruang interparticle
dalam massa substrat dengan air, yang membatasi difusi 02
(Battaglino et al. 1991).
Wang et al. (1974) diperoleh hasil yang sama untuk
pertumbuhan R. oligosporus pada media dedak gandum.
pertumbuhan yang buruk dan hasil protease yang rendah
terjadi pada 35% kelembaban. Pada 63% pertumbuhan
kelembaban lebih cepat dari pada 50% kelembaban tapi hasil
protease lebih rendah.
5 saya . IO 0
v
>~ 0.96 i ~
0.92
0 saya saya
30 40 50 60
1 40
kadar air awal (%)
Angka 2. Th e pengaruh kadar air awal pada air awal Kegiatan (e) dan
protease hasil R. oligosporusAC M 145F (O). budaya e th diinkubasi pada
dan
37 ° C. T wo set percobaan dilakukan dan duplikat sampel diambil pada setiap
sampling.
322 World Journal of Microbiology & Biotechnology, Vol 10, 1994

Pengaruh inokulum
Dalam produksi protease oleh jamur, baik spora atau miselia
dapat digunakan sebagai inokulum. Spora lebih disukai karena
kemudahan persiapan, stabilitas mereka selama penyimpanan
dan toleransi penganiayaan selama panen (Mitchell 1992).
metode yang berbeda dari persiapan spora inokulum yang
inves-tigated untuk mengidentifikasi metode yang paling
praktis dan efektif untuk produksi skala besar.
Selain fermentasi diinokulasi dengan spora suspen-sion
dibuat dari miring agar, yang terbaik protease hasil yang
diperoleh dengan menggunakan inokulum yang disiapkan oleh
pengeringan dan penggilingan substrat fer-kegiatan tersebut
didokumentasikan dan menangguhkan bahan dasar air sebelum
inokulasi (Gambar 3). Metode ini menyebabkan pertumbuhan
baik didistribusikan. Pada skala yang lebih besar, ini akan
menjadi metode yang paling prac-vertikal dan efektif persiapan
inokulum dan lebih murah daripada penggunaan miring agar.
Namun, untuk fermentasi skala kecil, suspensi dibuat dari
miring agar tetap yang paling nyaman (Hesseltineet al. 1976).
Ketika substrat fermentasi dikeringkan dan tanah dan
kemudian digunakan secara langsung untuk inokulasi, protease
hasil berikutnya yang relatif miskin (Gambar 3). Protease hasil
termiskin diperoleh di fermentasi diinokulasi langsung dengan
substrat fermentasi segar. Inokulum segar dikumpulkan dalam
rumpun dan tidak dapat didistribusikan secara merata di
seluruh substrat.
- /V
j l©
.r"
0 20 40 60 80
waktu inkubasi (h)
Angka 3. influenceofinoculumpreparationmethods
di
produksi protease dari R. oligosporusACM 145F. budaya adalah
diinkubasi pada 37 ° C. termos duplikat dipanen untuk
protease pengujian kadar logam. V - kering, tanahdan
ditangguhkan beras;O - PDA miring; m - kering, tanahdan beras
ditangguhkandedak; e ~ Ried dan tanahNasi; [3 ~ Ried dan
dedak padi tanah; A - dedak padi yang baru digiling; V - digiling
Nasi.
produksi protease oleh Rhizopu s
Beras adalah substrat yang lebih baik dari dedak beras untuk
sporulasi dari R. oligosporus. Hal ini mungkin karena lebih
baik 02 difusi ke dalam void antara butir beras. Beras Oleh karena
itu lebih baik dari dedak padi untuk produksi inokulum, meskipun
inokulum dihasilkan dari dedak padi dan yang dihasilkan dari padi
memberikan hampir hasil protease yang sama.
Untuk kepadatan inokulum dari 102 ke 107spora / g substrat
hasil protease tetap antara 5 x 10 dan 7 x 105 PU / g awal
substrat kering. Hal ini terjadi untuk inokulum disiapkan baik
dari PDA miring atau kering, tanah dan beras disuspensi.
Meskipun sulit untuk menghasilkan kerapatan terdiri-ent
inokulum, harus ada sedikit variasi dalam kinerja proses.
Karena biaya dan kesederhanaan persiapan mereka, kepadatan
spora yang lebih rendah akan lebih baik untuk produksi
protease pada skala yang lebih besar. Sebuah kepadatan spora
dari 106 ke107 spora / g substrat dipilih untuk percobaan
berikutnya.
hasil protease serupa dicapai oleh R. oligosporusACM
145F media dedak dicampur dengan 3-, 5-, inokulum spora 7-
atau 9-hari-tua disiapkan dari PDA slants atau beras yang
difermentasi. Malathi & Chakraborty (1991) melaporkan
bahwa inokulum 5 sampai 7-hari-tua memberikan hasil
protease tinggi denganA. oryzea.Namun, waktu persiapan
yang dibutuhkan lagi untuk inokulum yang lebih tua tidak
nyaman. Untuk percobaan berikutnya, inokulum spora 5-hari-
tua dipilih.
Jenis fermentor
Gambar 4 menunjukkan produksi protease di beberapa jenis
fermentor Pene-ratory-besaran. Protease yield tertinggi dicapai
di termos. Protease yield di tempat tidur dikemas adalah
o~
"10
~_
..
13- // /v /
, ¢ .-
20 40 60 80
waktu inkubasi (h)
Angka produksi 4. Protease di beberapa jenis fermentor. Itu
budaya diinkubasi pada37 ° C. Dimasing-masing sampling,
duplikat termos dihilangkan dan duplikat sampel (10g) yang
diambil dari daerah acak dalam dikemas tidur, nampan dan drum. O
- Flask;£ - dikemas tidur; e - tray;V - rollin g gendang.
World Journal of Microbiology & Biotechnology, Vol 10, 1994 323
L. Ikasari dan DA Mitchell
sedikit lebih rendah dari itu di termos, meskipun, secara kualitatif,
pertumbuhan mirip. Dalam nampan, cetakan tumbuh buruk dan
menghasilkan kurang protease. Hal ini mungkin karena
penguapan, yang cenderung kering media dan menyebabkan
hambatan pertumbuhan. Protease tidak diproduksi di fermentor
bergulir drum. Dalam fermentor ini, dedak padi diaglomerasikan
ke benjolan besar (kira-kira 3 sampai 5 cm). Efek geser pada
permukaan benjolan dan tidak memadainya 02 transfer dalam
benjolan dicegah pertumbuhan dan protease produksi. Termos
dipilih untuk penelitian laboratorium lanjutan karena hasil dan
convenienceof persiapan mereka. Selanjutnya advan-tages
menggunakan termos adalah bahwa masing-masing labu identik,
yang berarti sampel representatif, dan bahwa sampel dapat dihapus
tanpa mengganggu sampel masa depan. Dalam bioreaktor yang
lebih besar,
Pada skala yang lebih besar, penggunaan termos yang lebih
besar serta nampan mungkin padat karya dan menyebabkan
kesulitan dalam mengendalikan lingkungan untuk pertumbuhan
dan protease produksi. fermentor bergulir drum untuk produksi
protease menggunakan bekatul sebagai substrat mungkin tidak
disebabkan oleh substrat karakter-istics. Oleh karena itu dikemas
tidur fermentor dengan suhu, kelembaban dan kontrol aerasi
adalah fermentor paling menjanjikan untuk operasi skala besar.
budidaya solid-state memiliki potensi untuk produksi protease-
teknologi rendah di Indonesia karena kesederhanaannya. Sebuah
sistem laboratorium untuk mempelajari fermentasi ini sekarang
telah dikembangkan. Namun, optimalisasi produksi protease
olehR. oligosporus menggunakan media dedak padi, baik di
laboratorium skala atau skala yang lebih besar, masih diperlukan.
Ucapan Terima Kasih
Kami ingin mengucapkan terima kasih kepada Biro Bantuan
Australia InternationalDevelopment untuk menyediakan beasiswa
bagi L. Ikasari bawah Ekuitas dan Merit Skema Scholar-kapal
(EMSS) dan Petani Padi" Co-operative, NSW, untuk
menyediakan dedak padi untuk percobaan.
Referensi
Adler-Nissen, J.1986 enzimatik Hidrolisis
Protein Food.
London: Elsevier Sains Terapan.
Battaglino, RA, Huergo, M., Pilosuf, AMR & Bartholomai,
GB 1991 persyaratan Budaya untuk produksi protease oleh
Aspergillus oryzea di fermentasi solid-state. Terapan
Mikrobiologi dan Bioteknologi 35, 292-296.
Capricorn Indonesia Consult 1989 konsumsi Enzim ulang dijalin
dgn tali di 500 ton. Indochemical 34, 52-54.
Chu, I., Lee, C. & Li, T. 1992 Produksi dan degradasi protease
alkali dalam budaya batch Bacillus subtilis ATCC 14416.
Enzim dan mikroba Teknologi 14, 755-761.
Fukushima, Y., Itoh, H., Fukase, T. & Motai, H. produksi 1989
dilanju-ous protease dalam karbon terbatas chemostat cul
324 World Journal of Microbiology & Biotechnology, Vol 10, 1994
mendatang oleh toleran garam Aspergillus oryzea.
Mikrobiologi Terapan bioteknologi 30, 604-608.
Glenn, DR dan Rogers, PL 1988 A substrat padat proses
fermenta-tion untuk produk pakan ternak: studi tentang
peningkatan ketegangan jamur. Australia Journal of
Biotechnology 2, 50-57
Gumbira-Sa'id, E. Doelle, HW, Greenfield, PF & Mitchell, DA
1991 pengayaan Protein dari pati sagu dengan solid-state
fermentasi dengan Rhizopus spp. WorldJournal
Mikrobiologi dan Bioteknologi 7, 419-427.
Hanson, RS dan Phillips, JA 1981 Komposisi kimia. Di Manual
Metode untuk Umum Bakteriologi, eds Gerhardt, P.,
Murray, RGE, Costilow, RN, Nester, EW, Wood, WA, Krieg,
NR & Phillips, GB pp. 328-364. Washington DC: American
Society for Microbiology.
Hesseltine, CW, Smith, M. & Wang, HL 1967 produk sereal New
fer-mented. Perkembangan Industri
Mikrobiologi 8, 1979-1986.
Hesseltine, CW, Swain, EW & Wang, HL 1976 Produksi spora
jamur sebagai inokulum untuk makanan fermentasi oriental.
Perkembangan Mikrobiologi Industri 17, 101-115.
Kalisz, HM1988 Microbialproteinases.
kemajuan di
Teknik biokimia / Bioteknologi 36, 1-65.
Klapper, BF, Jameson, DM & Mayer, RM 1973 Faktor-faktor
yang mempengaruhi sintesis dan pelepasan protease
ekstraseluler dari Aspergillus oryzea NRRL 2160.
Biochimica et
Biophysica Acta 304, 513-519.
Lonsane, BK & Ghildyal, NP 1992 Exoenzymes. DiPadat
Substrat Budidaya, eds DoeUe, HW, Mitchell, DA & Rolz,
CE pp. 191-209. London: Elsevier Sains Terapan.
Malathi, S. & Chakraborty, R. 1991 Produksi protease alkali oleh
baru Aspergillus flavus mengisolasi bawah kondisi substrat
fermentasi padat untuk digunakan sebagai agen pencabutan.
Mikrobiologi Terapan dan Lingkungan 57, 712-716.
Mitchell, DA 1992 Mikroba dasar proses. Di padat Substrat
Penanaman, eds Doelle, HW, Mitchell, DA & Rolz, CE pp.
17-28. London: Elsevier Sains Terapan.
Nakadai, T. & Nasuno, S. 1988 kondisi Budaya Aspergillus
oryzae untuk produksi persiapan enzim. Jurnal Fermentasi
Teknologi 66, 525-533.
Narahara, H., Koyama, Y., Yoshida, T., Pichangkura, S., Ueda, R.
& Taguchi, H. 1982 Pertumbuhan dan produksi enzim dalam
budaya solid-state dari Aspergillus oryzae. Jurnal
Fermentasi Teknologi 60, 311-319.
Nishio, N., Tai, K. & Nagai, S. 1979 Hydrolase produksi Aspergillus
niger di budidaya solid-state. European Journal of Applied
Mikrobiologi dan Bioteknologi 8, 263-270.
Nout, MJR & FM Rombouts. 1990 Perkembangan terkini
dalamtempe penelitian (Ulasan). Journal of Applied
Bacteriology 69, 609-633.
Thakur, MS, Karanth, NG & Nand, K. 1990 Produksi rennet jamur
oleh Mucor miehei menggunakan solid-state fermenta-tion.
Terapan Mikrobiologi dan Bioteknologi 32, 409-413.
Wang, HL, Vespa, JB & Hesseltine, CW 1974 Asam protease
produksi oleh jamur yang digunakan dalam fermentasi
makanan kedelai. Mikrobiologi Terapan 27, 906--911.
Yokotsuka, T. 1991. protein makanan hasil fermentasi dan con-
diments siap dengan cetakan koji. DiHandbook of Applied
Ilmu jamur, eds Arora, DK, Mukerji, KG & Marth, EH pp.
329-373. New York: Marcel Dekker.
(Diterima dalam bentuk direvisi 7 Desember
1993: diterima Desember 1993 7)