Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia 2016 / 2017

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI ASAM LAKTAT (BAL)

PADA VCO (Virgin Coconut Oil) DARI HASIL FERMENTASI
SANTAN KELAPA (Cocos nucifera L.)
Dedi Nofiandi1, M. Husni Mukhtar1, Melona Siska1
Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia Yayasan Perintis Padang

ABSTRACT
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengisolasi dan mengidentifikasi Bakteri
Asam Laktat (BAL) yang terdapat pada VCO hasil fermentasi santan kelapa. Isolasi
BAL pada VCO hasil fermentasi santan kelapa dilakukan dengan menggunakan media
selektif MRSA + CaCO3 yang ditandai dengan terbentuknya zona bening disekitar
koloni BAL. Isolat BAL yang didapat diidentifikasi secara konvensional dan molekular.
Identifikasi konvensional isolat BAL meliputi uji morfologi, uji fisiologis dan uji
biokimia sedangkan identifikasi molekular menggunakan metode polymerase chain
reaction (PCR). Penelitian menunjukkan bahwa VCO hasil fermentasi santan kelapa
mengandung 4 isolat BAL. Karakteristik ke 4 isolat BAL menunjukkan isolat 1 besifat
gram positif (coccus), uji katalase positif dan uji motilitas positif sedangkan isolat 2,3
dan 4 mempunyai kemiripan yang sama yaitu bersifat gram positif (basil) uji katalase
positif dan uji motilitas positif. Hasil elektroforesis ke 4 isolat berukuran 200 bp dan
identifikasi molekular ke 4 isolat yaitu isolat 1 tidak teridentifikasi, dua isolat sama (2
dan 3) yaitu Lactobacillus plantarum sedangkan isolat 4 adalah Lactobacillus
paracasei.
Keywords : Isolasi; Identifikasi; BAL; PCR

1. PENDAHULUAN serta beberapa asam. Santan dan bahan

Indonesia merupakan negara tropis yang
memiliki sumber daya alam yang sangat
melimpah, termasuk kekayaan alam
berupa keanekaragaman mikroba
diantaranya Bakteri Asam Laktat
(BAL). BAL terdapat pada fermentasi
bahan yang banyak mengandung
karbohidrat (Mozzi F., 2010) seperti
pada buah busuk, sayur busuk, susu
terkontaminasi dan santan yang
difermentasi (VCO) dimana menurut
(Suryani, 2014) (Suryani, 2016) dan
(Luz, 2010) santan termasuk salah satu
bahan yang mengandung protein dan
karbohidrat yang tinggi sehingga
terdapat BAL didalamnya bila
difermentasi.
Fermentasi secara teknik menurut
Muchtadi dkk.,(2010) adalah suatu
proses oksidasi aerob atau anaerob
karbohidrat yang menghasilkan alkohol
lain yang banyak mengandung
karbohidrat ketika difermentasi dalam
kondisi aerob atau anaerob akan
menghasilkan etanol, asam laktat, asam
butirat, aseton, dan hydrogen. Proses
fermentasi ini akan mengakibatkan
terjadinya perubahan kondisi asam atau
penurunan pH (Karthikeyan dkk.,
2009). Terjadinya penurunan pH
mengindikasikan terjadinya aktifitas
mikroba dalam menguraikan
karbohidrat. Mikroba yang umum
ditemukan dalam fermentasi adalah
bakteri, khamir, dan kapang (Abegaz,
2007)
BAL merupakan salah satu bakteri yang
terdapat pada proses fermentasi
karbohidrat. Bakteri ini dapat
memproduksi asam laktat, asam asetat,
etanol, CO2 dan bakteriosin. Aktifitas
bakteri ini dapat menyebabkan

Page 1
 Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia 2016 / 2017
penurunan pH dimana bakteri patogen
tidak dapat tumbuh pada pH yang
rendah dan meningkatkan nilai sehat
terhadap makanan atau minuman yang
difermentasi. Selain itu saat ini BAL
digunakan untuk pengawetan,
fermentasi, memberikan tekstur, dan
menambah cita rasa makanan atau
minuman (Sumaryati dkk., 2013).
Secara umum BAL didefinisikan
sebagai kelompok mikroorganisme
yang heterogen, dimana BAL termasuk
bakteri Gram positif, tidak
menghasilkan spora, berbentuk bulat
atau batang, dan katalase negatif.
Spesies BAL antara lain: Lactobacillus,
Lactococcus, Leuconostoc,
Streptococcus, Pediococcus,
Oenococcus, dan Enterococcus. BAL
adalah non patogen dan diakui sebagai
bakteri yang berstatus safe yaitu aman
untuk di konsumsi. (Mozzi F., 2010).
Suryani (2014) telah melakukan isolasi
dan karakterisasi BAL pada VCO, dia
mendapatkan 5 macam spesies yaitu
Lactobacillus plantarum, Lactobacillus
thermobacterium, Corineaebacterium
bovis, Corineaebacterium xerosis, dan
Microccus luteus, sehingga masih
banyak lagi BAL yang belum terisolasi
dan teridentifikasi.
Karena masih banyak lagi jenis BAL
yang belum terisolasi dan teridentifikasi
maka peneliti tertarik untuk melakukan
penelitian lebih lanjut tentang “Isolasi
dan Identifikasi Bakteri Asam Laktat
pada VCO (Virgin Coconut Oil) dari
Hasil Fermentasi Santan Kelapa (Cocos
nucifera L).
2. METODOLOGI
Alat Dan Bahan
Alat-alat yang digunakan dalam
penelitian adalah juicer, botol,
timbangan analitik, vial, pipet tetes,
pipet volume, gelas ukur, media
Page 2
pembiakan Artemia salina Leach,
aerator, lampu penerangan, aluminium
foil, kertas saring, spatel.
Bahan-bahan yang digunakan
adalah jahe merah, bawang putih, apel
merah, madu, air laut, telur udang
Artemia salina Leach.
Pengambilan Sampel
Jahe merah diperoleh dari kebun
daerah Alahan Panjang, Sumatera Barat.
Bawang putih diperoleh dari kebun
daerah Alahan Panjang, Sumatera Barat.
Sampel apel merah dibeli di pasar
Lubuk Buaya, Padang, Sumatera Barat.
Madu didapat dari hutan daerah
Pasaman Barat, Sumatera Barat. Telur
udang Artemia salina Leach dibeli di
toko ikan daerah Bukittinggi, Sumatera
Barat. Telur Artemia salina Leach dibeli
di toko ikan di daerah Bukittinggi. Air
laut diambil di pantai Padang.
Identifikasi Tanaman
Identifikasi tanaman jahe merah
(Zingiber officinale var. rubrum
Theilade), umbi bawang putih (Allium
sativum L.) dan buah apel merah (Malus
domestica Borkh) dilakukan di
Herbarium Laboratorium Jurusan
FMIPA Universitas Andalas (UNAND),
Padang, Sumatera Barat.
Penetasan Telur Udang Artemia
salina Leach
Penetasan telur udang Artemia
salina Leach dilakukan dalam media
tabung 1,5 liter yang dipotong menjadi
2 bagian. Ambil bagian atas tabung
yang bertutup lalu pasang aerator.
Masukkan air laut secukupnya ke dalam
tabung kemudian masukkan telur
Artemia. Setelah itu beri penerangan
selama 48 jam. 24 jam pertama wadah
penetasan ditutup sekelilingnya dengan
aluminium foil, sedangkan bagian
 Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia 2016 / 2017
atasnya dibiarkan terbuka. Untuk 24
jam berikutnya aluminium foil dibuka.
Pada saat ini telur Artemia mulai
menetas dan akan berubah menjadi
larva. 48 jam setelah proses perendaman
telur, larva siap digunakan.
Persiapan Larutan Uji
Sebelum pembuatan larutan uji,
dibuat larutan induk dari sari bahan
herbal dengan konsetrasi 10.000 ppm.
Dari larutan induk tersebut dibuat
larutan uji dengan seri konsentrasi 10,
100 dan 1.000 ppm.
Prosedur Skrining Aktivitas Sitotok-
sik dengan Metode BSLT
Sebanyak 10 ekor larva udang
dimasukkan ke dalam masing-masing
vial yang telah diisi dengan larutan uji
(10, 100 dan 1.000 ppm). Untuk kontrol
dibuat dengan cara yang sama tetapi
tanpa penambahan ekstrak. Campuran
didiamkan pada suhu ruangan selama
24 jam. Setelah itu hitung jumlah larva
yang mati lalu hitung LC50 dengan
analisa probit. Pengujian dilakukan
dengan 3 kali pengulangan.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Setelah dilakukan analisa data
dengan metode probit, diperoleh nilai
LC50 dari campuran sari bahan herbal
(jahe merah, bawang putih, apel merah)
dan madu sebesar 351,56 ppm. Dimana,
nilai LC50 yang <1.000 ppm
dikategorikan toksik. Artinya, campuran
ini memiliki aktivitas sitotoksik
terhadap larva udang Artemia salina
Leach.
Selain dilakukan pada campuran
sari bahan herbal dan madu, skrining
aktivitas sitotoksik juga dilakukan pada
masing-masing sari bahan herbal yang
Page 3
ditambah madu. Hal ini bertujuan untuk
mengetahui apakah masing-masing sari
bahan herbal yang ditambah madu juga
memiliki aktivitas sitotoksik terhadap
larva atau tidak. Sesuai dengan dosis
yang digunakan, ternyata sari jahe
merah dan sari apel merah memiliki
aktiivitas sitotoksik terhadap larva
dengan nilai LC50 <1.000 ppm.
Sedangkan sari bawang putih tidak
memiliki aktivitas sitotoksik terhadap
larva dengan nilai LC50 >1.000 ppm.
Dari nilai LC50 yang diperoleh baik
untuk campuran ataupun masing-
masingnya, maka dapat dilihat bahwa
sari jahe merah memiliki nilai LC50
yang paling kecil. Dimana, semakin
kecil nilai LC50 maka semakin kuat
aktivitas sitotoksiknya terhadap larva.
Bila dibandingkan dengan nilai LC50
campuran, maka terjadi peningkatan
nilai LC50 dari sari jahe merah atau
dengan kata lain terjadi penurunan
aktivitas sitotoksik dari sari jahe merah
pada campuran. Hal ini dapat terjadi
karena adanya interaksi yang tidak
sinergis atau antagonis antar senyawa
yang ada pada campuran. Artinya,
senyawa lain yang ada pada campuran
dapat menghinhibisi aktivitas sitotoksik
dari senyawa yang dimiliki sari jahe
merah sehingga aktivitas sitotoksik dari
sari jahe merah menurun ketika
dicampurkan dengan sari bahan herbal
yang lain.
Jika dibandingkan antar masing-
masing sari bahan herbal, maka sari
jahe merah juga yang memiliki nilai
LC50 yang paling kecil atau memiliki
aktivitas sitotoksik yang terkuat,
 Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia 2016 / 2017

kemudian diikuti dengan sari apel herbal (jahe merah, bawang putih, apel
merah. Sedangkan sari bawang putih merah) dan madu, sari jehe merah yang
tidak memiliki aktivitas sitotoksik ditambah madu serta sari apel merah
terhadap larva. Hal ini mungkin yang ditambah madu dapat
dikarenakan dosis bawang putih yang dikembangkan menjadi obat antikanker.
digunakan sangat kecil. Dimana, dosis
bawang putih yang paling kecil diantara Tabel 1. Hasil pemeriksaan
dosis semua bahan yang digunakan. skrining aktivitas sitotoksik
Oleh karena itu, tidak dapat dikatakan campuran sari bahan herbal dan
secara mutlak bahwa sari bawang putih madu
tidak memiliki aktivitas sitotoksik
terhadap larva. Hanya saja, pada Jumlah Kematian Larva
penelitian ini, bawang putih tidak Udang tiap Konsentrasi LC50
Sampel (ppm) (ppm)
menunjukkan aktivitas sitotoksik
terhadap larva karena dosisnya yang 1000 100 10
sangat kecil. Campuran 6 2 1
Tingkat kematian larva tidak hanya sari
bahan 6 5 1
dipengaruhi oleh senyawa kimia yang
herbal dan 7 4 0
terdapat pada larutan uji, tapi juga Madu 351,56
dipengaruhi oleh konsentrasi larutan uji Rata-rata 6,333 3,666 0,666
yang digunakan terhadap larva. Bisa %
dilihat pada tabel, tingkat kematian 63,33 36,66 6,66
Kematian
larva berbanding lurus dengan Sari jahe 9 7 4
konsentrasi larutan uji. Dimana, merah 10 3 2
semaikin tinggi konsentrasi larutan uji tambah
madu 5 5 2 79,61
yang digunakan, maka semakin tinggi
Rata-rata 8 5 2,666
pula tingkat kematian larva.
%
Kematian larva yang disebabkan Kematian
80 50 26,66
karena adanya senyawa toksik disebut Sari 5 3 1
juga dengan sitotoksik. Yang mana, bawang
5 3 2
kematian larva ini dianalogikan dengan putih
tambah 1.640,
kematian sel dalam organisme. Apabila 4 2 2
Madu 58
suatu senyawa tumbuhan bersifat toksik
terhadap larva menurut nilai LC50 Rata-rata 4,666 2,666 1,666
dengan metode BSLT, maka senyawa %
46,66 26,66 16,66
Kematian
pada tumbuhan tersebut memiliki
Sari apel 6 5 1
aktivitas sitotoksik dan dapat merah
dikembangkan menjadi obat antikanker 5 3 1
Tambah 398,1
(Meyer et all., 1982). Oleh karena itu, madu 6 4 3 0
dapat dikatakan campuran sari bahan Rata-rata 5,666 4 1,666

Page 4
 Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia 2016 / 2017
% Effects of Aged Garlic Extract.
56,66 40 16,66
Kematian
3. SIMPULAN
Berdasarkan hasil uji skrining
aktivitas sitotoksik dengan metode
BSLT dapat disimpulkan bahwa
campuran sari bahan herbal (jahe
merah, bawang putih, apel merah) dan
madu, campuran sari jahe merah dan
madu serta campuran sari apel merah
dan madu menunjukkan aktivitas
sitotoksik terhadap larva udang Artemia
salina Leach dengan nilai LC50 masing-
masing sebesar 351,56 ppm, 79,61 ppm,
398,10 ppm.
Daftar Pustaka
Abubakar, M. B., Abdullah, W, Z.,
Sulaiman, S. A., and Suen, A. B.
(2012). A Review of Molecular
Mechanisms of the Anti-Leukemic
Effects of Phenolic Compounds in
Honey. International Journal of
Molecular Sciences, 13, 15054–
15073.
https://doi.org/10.3390/ijms131115
054
Ahmad, M. (2008). Pengaruh Ekstrak
Jahe Merah (Zingiber officinale
Rubrum) dan Mahkota Dewa
(Phaleria macrocarpa (Scheff)
Boerl) Terhadap Penghambatan
Proliferasi Sel Leukimia THP-1
Secara In Vitro. Skripsi, (Fakultas
Teknologi Pertanian Institut
Pertanian Bogor, Bogor).
Badan Penelitian dan Pengembangan
Kesehatan. (2013). Riset
Kesehatan Dasar 2013. Laporan
Nasional 2013. https://doi.org/1
Desember 2013
Borek, C. (2001). Antioxidant Health
Page 5
Journal of Nutrition, (131), 1010–
1015.
Kelly Wolfe, X. W. and R. H. L.
(2003). Antioxidant Activity of
Apple Peels. Journal Agric Food
Chem, 51, 609–614.
Lastari, D. S. (1998). Mempelajari
Pengaruh Komponen Bioaktif
Bawang Putih Terhadap Aktifitas
Sitolitik Sel Llmfosit Manusia
Secara In Wtro. Skripsi, (Fakultas
Teknologi Pertanian Institut
Pertanian Bogor, Bogor).
Meyer, B. N., Ferrigni, N. R., Putnam,
J. E., Jacobsen, L. B., Nichols, D.
E., and McLaughlin, J. L. (1982).
Brine Shrimp : A Convenient
General Bioassay for Active Plant
Constituents. Journal of Medicinal
Plant, 45(West Lafayette : Plant
Medica), 31–34.
https://doi.org/10.1055/s-2007-
971236
Robbins dan Cotran. (2002). Buku Saku
Dasar Pataologis Penyakit
Robbins & Cotran (7 ed.). Jakarta:
EGC.
Rostinawati, T. (2009). Aktivitas
Antibakteri Madu Amber Dan
Madu Putih Terhadap Bakteri
Pseudomonas aeruginosa
Multiresisten Dan Staphylococcus
aureus Resisten Metisilin.
Penelitian Mandiri, (Fakultas
Farmasi Universitas Padjadjaran,
Jatinangor).
Samarghandian, S., Samini, F. and
Taghavi, M. (2014).
Antiproliferative and cytotoxic
properties of honey in human
prostate cancer cell line ( PC-3 ):
Possible mechanism of cell growth
inhibition and apoptosis induction.
 Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia 2016 / 2017

African Journal of Pharmacy and

Pharmacology, 8(1), 9–15.
https://doi.org/10.5897/AJPP10.25
0
Tejasari, dan Zakaria, F. R. (2006).
Senyawa Bioaktif Rimpang Jahe
(Zingiber officinale Roscue )
Meningkatkan Respon Sitolitik Sel
NK Terhadap Sel Kanker Darah K-
562 In Vitro. Jurnal teknol. dan
Industri pangan, 7(2), hal. 97-18.
Xiangjiu He and Rui Hai Liu. (2007).
Triterpenoids Isolated from Apple
Peels Have Potent
Antiproliferative Activity and May
Be Partially Responsible for
Apple’s Anticancer Activity.
Journal Agric.FoodChem, 55,
4366–4370.

Page 6