Ringkasan

Aktivitas antimikroba ekstrak berair kasar lateks dari Calotropis gigantean

(Apocynaceae) diuji terhadap enam spesies bakteri patogen (Staphylococcus aureus,
Bacillus cereus, Escherichia coli, Micrococcus luteus, Klebsiella pneumoniae dan
Pseudomonas aeruginosa) dan dua spesies jamur (Candida krusei dan Aspergillus
niger). In vitro Uji antimikroba dilakukan dengan metode difusi agar-agar pada agar
Mueller Hinton dan Sabouraud Dextrose agar untuk bakteri dan jamur masing-masing.
Ekstrak lateks C. gigantea menunjukkan efek penghambatan signifikan pada S. aureus,
B. cereus dan E. coli, efek moderat pada C. krusei, sedangkan, tidak berpengaruh pada
M. luteus, K. pneumonia, P. aeruginosa dan A. niger. Uji konsentrasi hambat minimum
dilakukan dengan modifikasi difusi agar-agar metode. Nilai MIC berkisar antara 62,5
hingga 125 µg / ml. Fourier Transform Infrared (FT-IR) analisis spektroskopi dari
bubuk lateks menunjukkan adanya kelompok fungsional utama dala mencicipi.

Introduction
Herbal dan tumbuhan telah digunakan sebagai sumber senyawa terapeutik dalam obat
tradisional sistem sejak zaman kuno. Ada kebutuhan yang terus menerus akan
pengembangan efektif baru obat antimikroba karena munculnya penyakit infeksi baru
dan resistansi obat. 1, 2 Baru-baru ini tanaman mendapat perhatian besar para ilmuwan
untuk pengembangan obat alternative menyembuhkan beberapa penyakit mematikan.

C. gigantea adalah tanaman asli yang tumbuh luas di India, Indonesia, Malaysia,
Filipina, Thailand, Sri Lanka dan Cina, umumnya dikenal sebagai gulma susu atau
gulma bunga mahkota. C. gigantea adalah tanaman bantalan lateks dan melepaskan
lateks setelah cedera jaringan. Tanaman lateks adalah campuran alkaloid, tanin, permen
karet, gula, pati, resin dan protein.

Daun, akar, batang, bunga dan lateks C. gigantea digunakan dalam obat tradisional
sistem untuk menyembuhkan beberapa penyakit dan potensi obat C. gigantea terbukti
secara ilmiah. Bunga-bunga C. gigantea digunakan dalam aktivitas perut, bechic,
antiasthmatic, analgesik. Akar digunakan untuk pengobatan lupus, lepra tuberkulosis,
dan ulserasi sifilis. Akar juga mengandung anti-pyretic activity 6 (Chitme et al., 2005),
aktivitas sitotoksik 7, aktivitas antimikroba 8, 9, 10, CNS kegiatan 11 dan kehamilan
interceptive properties 12. Daun dan areal bagian dari tanaman digunakan dalam
pengobatan pembengkakan eksternal dan diare. 13 Lateks dilaporkan mengandung
sifat pencahar, aktivitas prokoagulan 14 dan aktivitas penyembuhan luka. 15 C.
gigantea juga menggunakan untuk menyembuhkan sakit gigi, sakit telinga, keseleo,
kecemasan, nyeri, epilepsi dan gangguan mental.
Fokus dari penyelidikan ini adalah untuk menentukan aktivitas antimikroba lateks C.

gigantea melawan mikroorganisme patogen in vitro.

Materials and Methods

Chemicals
Nutrient broth (NB), MHA, SDA, penicillin G disc, disc polymyxin-B, amoxycillin
disc, disc amphotericin-B, dimethyl sulfoxide (DMSO) dibeli dari Hi-Media, Mumbai,
India. Potassium Bromide (KBr-FTTR grade) dibeli dari S.D. Baik, Mumbai, India.
Plant material

C. tanaman gigantea dikumpulkan dari tanah kosong distrik Vellore, TN, India (12 °
54′40 ″ N 79 ° 8′10 ″ E) di bulan Desember 2008. Tanaman diidentifikasi di Kebun
Herbal VIT University, TN, India, spesimen bukti dipertahankan di laboratorium kami
(Aksesi nomor: VIT / SBST / MMRL / CG / 10.1.2009 / 101)

Collection of latex from the plant

Bagian apikal tanaman dikumpulkan dari populasi alami C. gigantea. Lateks segar
dikumpulkan sebagai eksudat dari bagian tanaman apikal. Sampel lateks dibawa ke
Laboratorium Penelitian Mikrobiologi Molekuler, VIT University, TN, India. Sampel
lateks dikeringkan dalam oven udara panas pada 42 ° C. Lateks kering bubuk
menggunakan lesung dan alu.

Preparation of aqueous extract

Sepuluh gram serbuk lateks diekstraksi dengan 100 ml air suling selama dua hari di
kamar suhu. Ekstrak disaring dengan menggunakan empat lapis kain muslin. Ekstrak
terkonsentrasi di rotavapor dan dikeringkan dengan menggunakan lyophilizer. Bubuk
yang diekstraksi dilarutkan dalam DMSO sebagai 100 mg / ml (10% b / v) solusi.

Determination of antimicrobial activity

Test microorganisms
Ekstrak berair lateks C. gigantea diuji terhadap bakteri patogen S. aureus, B. cereus,
E. coli, M. luteus, K. pneumoniae dan P. aeruginosa dan jamur C. krusei dan A. niger.
Semua kultur diisolasi dari sampel klinis. Semua organisme uji diinokulasi di untuk
kaldu nutrisi dan diinkubasi pada 37 ° C selama 8 jam.

Positive and negative control

Disk Penicillin G (10 µg / disc) digunakan sebagai kontrol positif (PC) untuk S.
aureus dan M. luteus, Polymyxin-B (10 µg / disc) untuk E. coli dan P. aeruginosa,
Amoxycillin (10 µg / disc) untuk B. cereus dan K. pneumoniae dan Amphotericin-B
(20 µg / disc) untuk kultur jamur. DMSO digunakan sebagai kontrol negatif (NC).

Antimicrobial assay
Aktivitas antimikroba ekstrak getah kasar ditentukan dengan metode difusi agar. 16
Konsentrasi suspensi mikroba disesuaikan dengan 0,5 standar McFarland. Itu
suspensi bakteri yang diunggulkan di piring MHA dan suspensi jamur pada SDA
(dalam rangkap tiga). Di masing-masing lempeng ini, dua sumur dipotong
menggunakan penggerek cork steril. Menggunakan sebuah mikropipet, 100 μl ekstrak
kasar dan kontrol negatif ditambahkan ke dalam sumur yang berbeda. sebuah disk
antibiotik kontrol positif ditempatkan di piring. Pelat bakteri diinkubasi selama 24
jam di 37 ° C dan piring jamur selama 72 jam pada suhu kamar. Aktivitas
antimikroba adalah dievaluasi dengan mengukur zona inhibisi.

Determination of relative percentage inhibition

Penghambatan persentase relatif dari ekstrak getah mentah sehubungan dengan positif
kontrol dihitung dengan menggunakan rumus berikut

Relative percentage inhibition of the test extract = 100 × (a-b)

(c-b)
Where,
a: luas total penghambatan ekstrak uji

b: luas total inhibisi pelarut

c: luas total penghambatan obat standar

The total area of the inhibition was calculated by using area = πr2; where, r = radius of zone
of
inhibition.
Determination of minimum inhibitory concentration (MIC)
MIC dari ekstrak kasar ditentukan dengan metode difusi agar yang dimodifikasi juga.
18, 19 The ekstrak dilarutkan dalam DMSO untuk mendapatkan rentang konsentrasi
62,5, 125, 250, 500, 1000, 5000 dan 10000 μg / ml. Suspensi bakteri yang
diunggulkan di piring MHA dan jamur suspensi pada pelat SDA (dalam rangkap
tiga). Di masing-masing lempeng ini empat sumur dipotong menggunakan penggerek
gabus. Menggunakan micropipette, 100 µl of setiap pengenceran ditambahkan ke
dalam sumur. Pelat bakteri diinkubasi pada 37 º C selama 24 jam dan piring jamur
diinkubasi pada suhu kamar selama 48 hingga 72 jam. Minimum konsentrasi masing-
masing ekstrak menunjukkan zona penghambatan jelas dianggap MIC.
FT-IR analysis of the plant sample
Lateks kering C. gigantea ditumbuk halus menggunakan mortar dan alu. Dua
miligram sampel dicampur dengan 200 mg KBr (FT-IR grade) dan ditekan menjadi
pelet. Sampel pelet ditempatkan ke pemegang sampel dan spektrum FT-IR dicatat
dalam berkisar 4000-450 cm – 1 dalam spektroskopi FT-IR (AVATAR 300 FT-IR,
Thermo Nicolet, USA).

Statistical analysis
Hasil aktivitas antimikroba ekstrak lateks C. gigantea dinyatakan sebagai mean ±
standar deviasi dari respon dari 3 replikasi ulangan per sampel. Tingkat signifikansi
dinilai dengan uji t Student di P ≤ 0,05. Hasil dianalisis secara statis oleh
menggunakan Microsoft Excel 2007 (Roselle, IL, USA).

Results and Discussion

Pemilihan tanaman ini untuk penelitian ini didasarkan pada sifat obat dan digunakan
dalam sistem obat tradisional. Tanaman ini dikenal karena antimikroba, anti-diare,
antipiretik, penyembuhan luka dan aktivitas CNS dll. Dalam penelitian ini, ekstrak air
mentah lateks dari Calotropis mentah gigantea diuji terhadap spesies bakteri dan
jamur patogen.

Aktivitas antimikroba ekstrak air C gigantea lateks dengan hormat kontrol positif dan
negatif tercantum dalam Tabel 1. Semua nilai dinyatakan sebagai mean ± standar
penyimpangan dari tiga ulangan. Hasilnya dianalisis secara statistik dengan uji t pada
P'0.05 batas kepercayaan, tanaman menunjukkan penghambatan lebih tinggi secara
signifikan terhadap S. aureus, B. cereus, E. coli, secara signifikan penghambatan
rendah terhadap C. krusei, sedangkan, tidak ada aktivitas dilaporkan terhadap M.
luteus, K. pneumoniae, P. aeruginosa dan A. niger. Efek penghambatan ditunjukkan
oleh lateks ekstrak ditemukan lebih tinggi dari obat antimikroba standar yang
digunakan terhadap S. aureus, B. cereus, E. coli, sedangkan, sedikit lebih rendah untuk
C. krusei. Sebelumnya, aktivitas anti-Candida dari daun C. gigantea dilaporkan
terhadap isolat klinis Candida albicans, C. parapsilosis, C. tropicalis dan C. krusei. 8
C. gigantea dilaporkan memiliki aktivitas antibakteri terhadap S. aureus, E. coli, B.
cereus, P. aeruginosa, M. luteus dan K. pneumoniae. 9 Aktivitas antijamur C. gigantean
dilaporkan terhadap jamur patogen tanaman Fusarium mangiferae.

Hasil penghambatan persentase relatif dilaporkan pada Tabel 2. Ekstrak lateks

menunjukkan penghambatan persentase relatif maksimum terhadap E. coli (381,1%),
sedangkan, tidak penghambatan persentase relatif terhadap M. luteus, K. pneumoniae
dan P. aeruginosa dan A. niger (0%).
 Hasil MIC untuk ekstrak lateks disebutkan pada Tabel 2. Semua nilai adalah
dinyatakan sebagai rata-rata dari tiga ulangan. Nilai MIC untuk S. aureus dan E. coli
ditemukan 62,5 µg / ml, sedangkan, 125 µg / ml untuk B. cereus dan C. krusei.

Hasil untuk analisis FTIR untuk kelompok fungsional hadir di lateks C. gigantean
tercantum pada Tabel 3 dan Gambar 1. Spektrum FT-IR menunjukkan pita serapan
lemah pada 3629,48 cm-1 mewakili getaran peregangan O-H untuk asam amino.
Penyerapan yang kuat pita pada 3472,99 dan 3432,32 cm – 1 merupakan perwakilan
untuk vibrasi peregangan O-H dan N-H, karakteristik asam amino. Band serapan yang
sangat kuat di 2923,99 adalah perwakilan untuk Aliphatic - CH3 dan CH2 Peregangan
klorofil. Band serapan yang sangat kuat pada 1730.70 dan 1634,55 cm – 1 merupakan
perwakilan untuk C = 0 peregangan getaran untuk asam dan amida Sekunder masing-
masing. Band serapan yang kuat pada 1320,51 dan 1378,77 cm-1 merupakan
perwakilan untuk C = H deformasi gugus -CH2 atau –CH3 untuk lignin dalam alifatik.
Band serapan kuat di 1243,52 cm – 1 mewakili gugus karbonil ester, fenol. Band
serapan kuat di 1104,21 cm-1 adalah rerpresentatif untuk deformasi C-H, C-O, C-C
peregangan untuk karbohidrat. Band serapan yang kuat pada 1.018,28 cm-1 mewakili
C-O Peregangan polisakarida, Si-O peregangan asimetris untuk pati dan pengotor
silikat. Pita absorpsi pada 778,87 dan 676,24 cm – 1 mewakili CH dari bidang lentur
untuk karbohidrat (Ramamurthy dan Kannan, 2007).

Hasil penelitian saat ini menyimpulkan bahwa ekstrak getah lateks C. gigantean
memiliki aktivitas antimikroba yang signifikan terhadap berbagai mikroorganisme.
Acknowledgement
Penulis ingin berterima kasih kepada manajemen VIT University, Vellore, TN, India,
untuk menyediakan fasilitas dan dukungan yang diperlukan untuk penyelesaian
pekerjaan ini.