9/16/2012

Teknik Kultur
Bab I : Pendahuluan
In Vitro
Tanaman
• Prinsip dasar kultur jaringan
Sri Sumarsih tanaman
• Kultur jaringan dalam bioteknologi
Prodi Agroteknologi
pertanian
Fakultas Pertanian
UPN “Veteran” Yogyakarta
• Beberapa terminologi
Email: Sumarsih_03@yahoo.com
Weblog: Sumarsih07.wordpress.com
Website: agriculture.upnyk.ac.id

Prinsip dasar kultur jaringan Bagian tanaman mampu

tanaman beregenerasi menjadi tanaman
lengkap
BUDIDAYA (KULTUR) JARINGAN :
• Metode mengisolasi bagian dr tanaman
• Sel/protoplasma sel tanaman
(protoplasma, sel, sekelompok sel,
• Jaringan tanaman
jaringan / organ) menumbuhkannya
• Organ/bagian tanaman
(aseptik) memperbanyak diri &
beregenerasi tanaman lengkap

1
 9/16/2012

Tiga kemampuan dasar tanaman

 Totipotensi (Total genetic potential)
Potensi atau kemampuan bawaan sel tanaman untuk
berkembang menjadi tanaman lengkap pada kondisi
yang sesuai.
Seluruh informasi genetik untuk pertumbuhan dan
reproduksi makhluk hidup ada di dalam sel.
 Dediferensiasi
Kemampuan sel dewasa untuk kembali menjadi kondisi
meristematik dan berkembang menjadi titik tumbuh
baru, diikuti rediferensiasi yang dapat mengatur untuk
membentuk organ tanaman baru.
 Kompetensi
Potensi dalam tanaman untuk membentuk sel
atau jaringan berkembang sesuai sifat masing-
masing
Zat pengatur pertumbuhan
tanaman
• Dua hormon tanaman yang mempengaruhi
diferensiasi jaringan tanaman:
– Auxin: merangsang pertumbuhan akar
– Cytokinin: merangsang pertumbuhan pucuk
• Perbandingan 2 hormon menyebabkan
perkembangan tanaman:
– Auxin ↓Cytokinin = perkembangan akar
– Cytokinin ↓Auxin = perkembangan pucuk
– Auxin = Cytokinin = perkembangan kalus

Jaringan Meristem
Sel dan Jaringan Tanaman

Apical dan Axillary

meristem

2

Meristem pada jaringan
vaskular dan akar
Kultur jaringan sangat perlu pada
tanaman yang :
• Persentase perkecambahan biji rendah
• Tnm hibrida dr tetua yg tdk
menunjukkan male sterility
• Hibrida2 yg unik
• Perbanyakan pohon2 elite dan atau utk
btg bawah
• Tnm yg selalu diperbanyak scr vegetatif
9/16/2012
Kelebihan Kultur Jaringan :
• Tdk tergantung musim dan fakt
lingk lain
• Tdk perlu daerah pembibitan yg
luas
• Hanya perlu bag kecil dr tnm asal
• Membantu dlm usaha eliminasi
patogen
• Memudahkan pertukaran plasma
nutfah internasional
MANFAAT KULTUR JARINGAN
DALAM PEMULIAAN TANAMAN
• Manipulasi jml kromosom mel bahan kimia
colchicine
• Tnm haploid & double haploid yg
homogeneous (kultur anther/mikrospora)
• Pollinasi in vitro & pertumb embrio yg scr
normal abortif
• Hibridisasi somatik mel teknik fusi
protoplasma (intraspesifik/interspesifik)
• Variasi somaklonal
• Transfer DNA/organel utk memperoleh sifat
tertentu
3
 9/16/2012

Aplikasi Kultur Jaringan dalam Perbanyakan tanaman secara

Bioteknologi Pertanian mikro (Mikropropagasi)
 Micropropagation (perbanyakan tnm scr mikro)
 Pengawetan plasma nutfah • Embriogenesis
 Variasi somaklonal – Embryogenesis secara langsung
 Produksi dihaploid – Embryogenesis scr tidak langsung melalui kalus
• Organogenesis
 Fusi protoplasma
– Organogenesis melalui pembentukan kalus
 Produksi metabolit sekunder – Pembentukan organ adventif secara langsung
 Rekayasa genetik • Microcutting
– Kultur meristem dan pucuk
– Kultur tunas

Perbanyakan mikro (mikropropagasi): Pembagian Kultur

menumb bag tnm (media aseptik),
memperbanyak hingga menghasilkan tnm Jaringan
sempurna dipindah ke media non aseptik
• Kultur organ
(Kultur meristem, pucuk, embrio)
Tujuan :
• Kultur kalus
• Prod tnm dlm jmlh besar, dlm waktu
singkat • Kultur suspensi sel
(Contoh: 4jt pucuk anggrek per tahun) • Kultur protoplasma
• Tanaman bebas patogen (virus) • Kultur haploid
(bhn awal : meristem pucuk 0.1 - 0.3 (Kultur anther, polen, ovul, ploidi)
mm, kombinasi thermotheraphy)

4
 9/16/2012

Kultur Organ Kultur Organ

(Meristem) (embrio)

Ekspla
n
embri
o
Eksplan
berupa
pucuk

Organogenesis Somatik Embriogenesis

• Produksi akar, batang • Embriogenesis:
atau daun
produksi embrio
• Organ tumbuh dari
perkembangan • Embrio somatik:
meristem atau dari
diferensiasi jaringan embrio dari somatik
atau bukan sel
• Melalui pembentukan
kelamin
kalus tetapi kadang-
kadang tanpa kalus • Terjadi setelah
pembentukan kalus

5
 9/16/2012

Somatik embriogenesis Kacang Tanah

Definisi Kultur Embrio
• Isolasi secara steril embrio
matang ataupun belum matang,
dengan tujuan memperoleh
tanaman yang viabel
• macam kultur embrio:
– Kultur embrio yg belum matang, utk
mencegah keguguran : embryo
rescue
– Kultur embrio matang, utk
merangsang perkecambahan :
embryo culture

Perkembangan protocorm
Contoh aplikasi kultur
anggrek
embrio
1. Memecahkan dormansi
– Pd Musa balbisiana, tdk mungkin memperoleh
perkecambahan secara normal
– Cherry, hazel, acer : tanaman yg memiliki dormansi
panjang
2.Mencegah gugurnya embrio pd persilangan
interspesifik Embrio
– Persilangan ini sering menghasilkan biji dengan rescue
endosperm yg tdk sempurna, atau embrio yg lemah, pada biji
kecil. Contoh: Kacang, Kapas, Tomat, Padi. anggrek
yang
3. Hibridisasi utk produksi triploid (buah tanpa biji)
hampir
– Jeruk triploid Citrus sinensis tidak
Diploid citrus X tetraploid citrus = jeruk tanpa biji punya
– Pisang triploid cadangan
Musa acuminata (AA) X Musa balbisiana (BB) = pisang tanpa makanan
biji (AAB)

6
 9/16/2012

Kultur kalus tanaman padi

Pengertian Kultur Kalus

• Kultur kalus bertujuan untuk memperoleh
kalus dari eksplan yang diisolasi dan
ditumbuhkan dalam lingkungan terkendali
• Kalus diharapkan memperbanyak diri (massa
selnya) secara terus menerus.
• Kalus dihasilkan dari kultur organ, dengan
media diberi auksin atau sitokinin, kecuali
untuk eksplan yang mengandung kambium
dapat membentuk kalus tanpa diberi ZPT

Aplikasi Kultur Kalus Kultur suspensi sel

Potongan kalus disaring
• Dalam beberapa hal, perlu fase digojok di media cair 1 2
pertumbuhan kalus sebelum regenerasi
via somatik embryogenesis atau +
organogenesis Kalus

• Untuk menghasilkan varian somaklonal Subkultur

kalus
(genetik atau epigenetik)
• Sebagai bahan awal kultur protoplast dan
kultur suspensi
• Untuk produksi metabolit sekunder Kultur suspensi
suspensi sel bebas
• Digunakan untuk seleksi in vitro di dalam bioreaktor
stirer tank atau agregat sel

7
 9/16/2012

Kultur Protoplasma Kultur Haploid (Anther/Mikrospora)