International Journal of Kemajuan Analisis Farmasi

IJAPA Vol. 6 Edisi 1 (2016) 05-08

Sesuai Penulis *: malleswari.naga2011@gmail.com
5
Pengembangan metode enantioselektivitas dan validasi prolin oleh
menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi
Nagamalleswari Gampa *, Prachet Pinnamaneni, Naga Thirumalesh Chevala, Geervani
Pamidmarri, Arulsamy Elphine Prabahar, Venkata Suresh Ponnuru dan Rama Rao Nadendla
Departemen Analisis Farmasi, Chalapathi Institute of Pharmaceutical Sciences, Lam,
Guntur, Andhra
Kode Pradesh, India, Pin: 522034
Abstrak
Kiralitas adalah perhatian utama dalam industri farmasi modern. Pemisahan senyawa kiral
memiliki
menjadi sangat menarik karena mayoritas molekul bioorganik dan sintetis kiral. Tujuan dari
ini
penyelidikan adalah untuk mengembangkan spesifik, sederhana dan tepat fase normal cair
kinerja tinggi stereo
kromatografi (NP - HPLC) metode untuk pemisahan dan enantiopurity dari dextro (D) &
Levo (L) enansiomer
proline (PRO) dengan menggunakan Lux 5μm Amilosa - 1 LC kolom (250 × 4.6mm) dengan
menggunakan Hexane n: Iso propil alkohol
(IPA) sebagai fase gerak dalam rasio 90:10 v / v pada laju alir 1,2 ml / menit. D & L bentuk
PRO terdeteksi di 210Nm
dengan waktu retensi 8.1min dan 9 menit masing-masing dengan koefisien korelasi (R 2)
metode 0.999.The adalah
divalidasi dengan mengacu konferensi International harmonisasi (ICH) dalam hal linearitas,
akurasi, presisi
(Inter - hari dan intra - hari presisi), batas deteksi (LOD), batas kuantifikasi (LOQ), stabilitas
larutan uji,
spesifisitas, kesesuaian sistem, ketahanan dan kekasaran.
Kata kunci: enantiomer, enantioselektif, enantiopurity, kromatografi cair kinerja tinggi.
1. Perkenalan
Enantiomer adalah dua bahan kimia yang identik
molekul yang berbeda satu sama lain dengan non
gambar cermin superimposibel. Kiralitas molekul
tergantung pada kehadiran satu atau lebih jumlah
pusat kiral atau pesawat kiral atau sumbu kiral dll Berbeda
jenis enantiomer yang ditunjuk oleh berbagai
sebutan, hal itu dilakukan sesuai dengan Cahn - Ingold -
Prelog untuk sistem R dan S. oktahedral terstruktur
molekul yang ditunjuk dengan menggunakan Delta - Lambda. D
dan L Fisher - Ransoff harus digunakan untuk
sebutan untuk asam amino dan gula. Selama tahun 1980-an:
kepentingan dalam estimasi kuantitatif dan kualitatif
enantiomer dari gugus kimia terlepas dari mereka
Penggunaan ditemukan menjadi penting, karena variasi dalam mereka
kegiatan. Enantiomer berbeda dalam farmakologi mereka
aktivitas, sehingga estimasi dan pemisahan
enantiomer mendapat penting dalam bidang
analisis farmasi. Di antara semua kromatografi
teknik yang digunakan HPLC adalah salah satu metode terbaik yang
dapat digunakan untuk estimasi enantiopurity dan juga untuk
perpisahan mereka dengan fase diam amobil. Dalam
Skenario enantiopurity sebelumnya diperkirakan dengan menggunakan
Teknik akiral, dengan menggunakan aditif kiral atau kiral
fase mobile dan metode lain melibatkan penggunaan
reagen kiral bantu yang membantu dalam konversi
enantiomer ke diastereomer sana oleh enantiopurity
dapat ditentukan dengan menggunakan metode HPLC fase terbalik.
Dalam skenario ini dengan menggunakan fase diam kiral
enatiopurity diperkirakan. Di antara semua kiral yang
fasa diam, amilosa dan selulosa dikemas kolom
yang paling umum digunakan, karena berbagai
aplikasi. Resolusi puncak dan pemisahan
enantiomer tergantung pada komposisi seluler
fase, pH dan suhu kolom yang digunakan. prolin adalah
asam amino nonesensial alami yang disintesis oleh
jaringan mamalia membantu dalam pembentukan kolagen
di sendi dan tendon. Ini adalah nonpolar hidrofobik, hetero
asam amino siklik yang disebut sebagai asam imino yang
merupakan bagian dengan 5 struktur cincin beranggota. prolin adalah
tersedia dalam 2 enansiomer membentuk bentuk D dan L. Antara
dua bentuk bentuk L yang ditemukan memiliki peran penting dalam protein
sintesis dan juga membantu dalam fisiologis normal
berfungsi manusia.
2. Kondisi Eksperimental:
2.1 Bahan Pengadaan:
Dextro (D) dan Levo (L) bentuk prolin
(PRO) dibeli dari Sigma Aldrich dan Isopropyl
alkohol, n Hexane dan HPLC alkohol kelas yang
dibeli dari Merck ilmu kehidupan Pvt. Ltd, Mumbai.
2.2 Peralatan:
Metode pengembangan dan validasi
dilakukan pada HPLC, Mfg oleh Agilent, Model:. 1200
infinity LC, dengan detektor UV, amylose- 1 kolom
(250mm × 4.6mm, 5μ) Phenomenex India Pvt Ltd adalah
digunakan untuk pemisahan dan estimasi kuantitatif. ATX
- 224 keseimbangan elektronik analitis digunakan untuk menimbang
Mfg oleh Shimadzu, untuk pengukuran pH Titrasys -. 352
Model Mfg. Dengan Systronics digunakan.
2.3 Kondisi kromatografi:
Pemisahan Enantiotropic dilakukan pada
Amilosa-1 kolom, yang awalnya memerah dengan Iso
Propil alkohol selama 6 jam pada laju alir dari 0.5ml / min.

Halaman 2
Artikel Penelitian
Nagamalleswari Gampa et al / 2016
6
Kemudian kolom jenuh dengan n-heksana dan Iso
Campuran propil alkohol untuk 1 jam. Campuran n-Hexane:
IsoPropyl Alkohol di 90:10 (v / v) rasio diambil sebagai
fase gerak dan yang sebelumnya disaring oleh passing
melalui 0,45 mikron membran nilon menggunakan vakum
Teknik filtrasi. Kemudian disonikasi selama 30 menit
menggunakan air mandi sonikator untuk degassing.
2.4 Pemisahan sampel:
Sekitar 10 mg D dan L bentuk PRO
ditimbang dan dipindahkan ke 10 labu volumetrik ml
berisi 5ml dari fase gerak, kocok selama beberapa menit
sampai obat akan dibubarkan. Akhirnya Volume dibuat untuk
Tanda.
2.5 Metode Validasi:
Metode enantioselektif dikembangkan;
Metode divalidasi dengan mengacu pada pedoman ICH.
Metode disahkan untuk linearitas, presisi,
akurasi, LOQ, LOD, ketahanan dan kekasaran.
Rincian parameter divalidasi disebutkan di
hasil dan Diskusi.
2.6 Linearitas
Kurva regresi dibangun oleh detektor
penilaian linearitas respon. Tiga set standar
solusi disiapkan di kisaran linearitas 25 untuk
125 pM / ml mengandung rasemat campuran PRO di
fase gerak. 20μL larutan standar disuntikkan ke
kolom, RT dan luas puncak dari respon yang
dihitung. Kurva regresi diperoleh dengan memplot
konsentrasi (sumbu x) Vs daerah puncak (y axis). Regresi
(R 2) dan kemiringan dihitung dari plot.
2,7 Presisi dan akurasi
Mean konsentrasi terpilih dari
linearitas, hari antar dan intra hari presisi adalah
dihitung dari 6 ulangan berjalan berurutan (n = 6) dengan
analis yang berbeda. Akurasi untuk metode yang dikembangkan
juga dipelajari. % RSD dihitung untuk presisi
dan akurasi.
LOD dan LOQ
LOD dan LOQ dihitung dengan menggunakan berikut
rumus:
LOD = 3.3σ / S
LOQ = 10σ / S
S - Kemiringan grafik standar.
σ - y intercept dari garis regresi
2.8 Kekokohan
Ketahanan dari metode ini ditentukan berdasarkan
pada resolusi puncak campuran rasemat dan
pemisahan campuran rasemat dari PRO dengan mengubah
kondisi kromatografi. Sengaja laju alir adalah
diubah oleh kenaikan dan pengurangan dari 0,2 ml dengan yang
laju alir aktual dan resolusi puncak dihitung,
sama komposisi fase gerak diubah untuk menentukan
pengaruh fase gerak pada resolusi puncak dan
pemisahan campuran rasemat.
2,9 ketidakrataan
Kekasaran dari metode yang dikembangkan adalah
ditentukan dengan menghitung hari inter dan intraday
presisi untuk konsentrasi rata-rata standar.
3. Hasil dan Pembahasan:
3.1. linearitas:
Tabel 1: Data linearitas
S. Tidak ada
Konsentrasi
(ug / ml)
puncak Lokasi
1
25
5836489
2
50
11176389
3
75
16935268
4
100
22083764
5
125
26994726
Gambar 1: Linearitas plot Proline
3.2. Ketelitian:
3.2.1 interday:
Tabel 2: Data presisi interday
Konsentrasi (mg / ml)
Jejak
puncak Lokasi
100
t1
21346522
100
t2
21380512
100
t3
21462461
100
t4
21542158
100
T5
21649125
100
t6
21125435
SD
180.509,8
% RSD
0.842807
3.2.2 Intraday:
Tabel 3: Data presisi intraday
Konsentrasi (mg / ml)
Jejak
puncak Lokasi
100
t1
21380512
100
t2
21465325
100
t3
21215421
100
t4
21354921
100
T5
21245582
100
t6
21345215
SD
91.488,07
% RSD
0.428827

halaman 3
Artikel Penelitian
Nagamalleswari Gampa et al / 2016
7
3.3. Ketepatan:
Tabel 4: Data akurasi
Nominal
Konsentrasi
%
Ketepatan
Jumlah
berduri (mg / ml)
Terakhir
Konsentrasi
Jalur
Jumlah
pulih (mg / ml)
% Pemulihan
100
80%
100 + 80
180
t1
179,4
99,66
t2
179,6
99,77
t3
180.1
100,05
AVG
99,833
100
100%
100 + 100
200
t1
199,82
99,91
t2
201,25
100,625
t3
200,61
100,305
AVG
100,28
100
120%
100 + 120
220
t1
220,6
100,272
t2
221
100,454
t3
220.4
100,181
AVG
100,303
3.4. kekokohan:
Tabel 5: Data dari ketahanan
Resolusi parameter USP antara (S) - Proline dan (R) - Proline% RSD
laju alir
0,3
0,441
0,5
0.145
1.7
0,434
Rasio fase gerak (n-heksan: IPA)
85:15
0,612
90:10
0.425
95:05
0,299
3.5. Kekasaran:
Tabel 6: Data kekasaran
Konsentrasi (mg / ml)
Jejak
puncak Lokasi
100
t1
21380512
100
t2
21475124
100
t3
21682512
100
t4
21542152
100
T5
21642158
100
t6
21284215
SD
152.805,9
% RSD
0.710688
3.6. Batas Deteksi dan Batas Kuantifikasi:
Batas deteksi (LOD) untuk L enansiomer
ditemukan 2,784 untuk 10μl volume injeksi. Itu
batas kuantifikasi (LOQ) untuk L enansiomer adalah
ditemukan 8,436 untuk 10μl volume injeksi.
Gambar 2: Kromatogram Kosong
 halaman 4
Artikel Penelitian
Nagamalleswari Gampa et al / 2016
8
Gambar 3: Z Proline Kromatogram
Gambar 4: Campuran L dan D Proline Kromatogram
4. Kesimpulan
Metode khusus, sederhana dan tepat Stereo adalah
dikembangkan dan divalidasi untuk estimasi enantiopurity
dari prolin. Metode maju ditemukan memiliki stereo
spesifisitas dengan linearitas diterima, presisi dan
ketepatan. Sehingga metode yang dikembangkan dapat digunakan untuk
pemisahan dan estimasi enantiopurity.
Pengakuan
Para penulis berterima kasih kepada Universitas Hibah
Komisi (UGC), New Delhi, India untuk menyediakan
Asisten Keuangan; dan Chalapathi Institut
Farmasi Ilmu, Departemen Farmasi
Analisis, Guntur (India) untuk menyediakan fasilitas yang diperlukan
untuk melakukan penelitian dengan lancar.
Konflik kepentingan
Artikel ini tidak berisi studi dengan
subyek manusia dan hewan yang dilakukan oleh penulis.
Semua penulis menyatakan bahwa mereka tidak memiliki konflik kepentingan.
Referensi
[1] Caner H, Groner E, Levy L, Agranat I. Tren di
Pengembangan Kiral Obat. Penemuan Obat Hari ini
2004; 9 (3): 105-110.
[2] Devlin, TM, ed, Wiley-Liss.; Textbook of
Biokimia dengan Korelasi Klinis. New York,
NY: 2002; 97.792.
[3] Zhao Y, Pritts WA. Pemisahan kiral yang dipilih
Derivatif prolin menggunakan jenis polisakarida
fase stasioner dengan kinerja tinggi cair
kromatografi. J Chromatography A 2007 13 Juli;
1156 (1-2): 228-35.
[4] Subramanian G. Kiral Pemisahan Teknik - A
Pendekatan praktis. 2 nd ed., Diterbitkan oleh Wiley-
VCH, Weinheim. 2000; 317-341.
[5] Ravichandran V, Shalini S, Sundram KM, Harish
Rajak. Validasi Metode Analytical - Strategi
& Pentingnya. International Journal of Pharmacy
dan Ilmu Farmasi 2010; 2 (3): 25-29.
[6] ICH, Q2 (R1). Validasi Prosedur Analitis:
Teks dan Metodologi. Konferensi Internasional
Harmonisasi, Jenewa; 1994: 6-13.
[7] Sherry E. Layton. Perbandingan Berbagai Kiral
Fasa Diam untuk Pemisahan kromatografi
dari Kiral Farmasi.