UJI FITOKIMIA DAN UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN

INFUSED WATER DAN BUAH SEGAR LEMON

(Citrus limon (L.) Osbeck)
Venia Endah Tamara1, Taty Rusliati Rusli2

Abstract: Back to nature is re-utilizing natural resources in daily life. Water and
fruits have many benefits for humans. There is an alternative drink called
intravenous water. Water infused is made by inserting pieces of fruits into the
water in some jam. This research is intended to know the secondary metabolite
compounds and antioxidant activity of fresh fruit and infused water. This research
uses lemon (Citrus limon (L.) Osbeck) as research material. Phytochemical tests
are performed to see secondary metabolite compounds such as alkaloids,
phenolics, flavonoids, saponins, tannins, and terpenoids. Antioxidant activity test
using DPPH method (2,2-diphenyl-1-picrilhidrazil). The results showed that
antioxidant activity on infusion of lemon juice with IC50 value of 281.8383x10-1
ppm and fresh fruit had IC50 value of 3.94x1013 ppm, compared with ascorbic acid
as positive control with IC50 value of 1972x10-3 ppm.it can be concluded that
infused water and fruit fresh lemon have antioxidant activity. In the results of
phytochemical tests obtained secondary metabolite compounds such as saponins,
terpenoids, then followed by alkaloids, phenols, flavonoids, and tannins.
Key words: infused water, Citrus limon (L.) Osbeck, antioxidant, DPPH,
phytochemical test.

Abstrak: Kembali ke alam merupakan kembali memanfaatkan sumber daya alam

di kehidupan sehari-hari. Air dan buah-buahan memiliki banyak khasiat untuk
manusia. Terdapat minuman alternatif yang disebut infused water. Infused water
dibuat dengan cara memasukkan potongan buah-buahan ke dalam air putih dalam
beberapa jam. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui senyawa metabolit
sekunder dan aktivitas antioksidan dari buah segar dan infused water. Penelitian
ini menggunakan buah lemon (Citrus limon (L.) Osbeck) sebagai bahan
penelitian. Uji fitokimia dilakukan untuk melihat senyawa metabolit sekunder
seperti alkaloid, fenolik, flavonoid, saponin, tanin, dan terpenoid. Uji aktivitas
antioksidan menggunakan metode DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil). Hasil
penelitian menunjukkan bahwa uji aktivitas antioksidan pada infused water buah
lemon dengan nilai IC50 sebesar 281.838,3 ppm dan buah segar memiliki nilai IC50
sebesar 3,94x1013 ppm, dibandingkan dengan asam askorbat sebagai kontrol
positif dengan nilai IC50 sebesar 1,972 ppm, Dapat disimpulkan bahwa infused
water dan buah segar jeruk lemon memiliki aktivitas antioksidan. Pada hasil uji
fitokimia didapatkan senyawa metabolit sekunder seperti saponin, terpenoid,
kemudian iikuti dengan alkaloid, fenol, flavonoid, dan tanin.
Kata-kata kunci: infused water, Citrus limon (L.) Osbeck, antioksidan, DPPH, uji
fitokimia.

1
LATAR BELAKANG
Kembali ke alam (Back to Nature)
sebuah kata yang sangat populer saat ini
sehingga masyarakat kembali
menggunakan bahan alam sebagai
kebutuhan sehari-hari termasuk air dan
tumbuhan. Air sangat diperlukan untuk
keseimbangan tubuh seperti mengatur
suhu tubuh, detoksifikasi, menjaga
kesehatan saluran cerna, saluran kemih,
dan kulit.1
Baru-baru ini muncul sebuah
tren di tahun 2013 yaitu infused water,
minuman yang terdiri dari air putih
yang di dalamnya dimasukkan
potongan buah-buahan dan herbal.
Dengan cara tersebut mereka yang tidak
suka meminum air putih biasa dan
memakan buah dapat mencoba untuk
mengonsumsi infused water. Minuman
ini berbeda dengan minuman yang
banyak di temukan dengan kandungan
gula yang tinggi dan pemanis buatan
lainnya. Sehingga di harapkan agar
masyarakat dapat menggunakan bahan-
bahan alami sebagai penggantinya. 1
Buah lemon memiliki aktivitas 3.Bahan uji antioksidan: Infused water
antioksidan dan kemampuannya dan Buah lemon segar , DPPH.
sebagai senyawa bioaktif untuk
menjaga struktur dan fungsi sel yang CARA KERJA
secara efektif menangkal radikal bebas,
menghambat reaksi peroksidasi lipid,
dan mencegah kerusakan oksidatif
lainnya.2
Berdasarkan hal tersebut
peneliti belum mendapatkan data
apakah infused water memiliki
kandungan senyawa metabolit sekunder
dan senyawa antioksidan .
METODE PENELITIAN
Desain penelitian yang digunakan
dalam penelitian ini adalah
eksperimental.
ALAT DAN BAHAN
1. Alat uji fitokimia: aluminium foil,
blender, gelas ukur, gunting, neraca
analitik, pemanas air, plat tetes, rotary
evaporation, pipet.
2.Alat infused water: gelas kaca, pisau.
3.Alat uji antioksidan: labu takar,
spektrofotometer, gelas ukur.
Bahan-bahan yang digunakan dalam
penelitian iniadalah:
1.Bahan uji fitokimia: buah lemon
segar, asetat hidrida amoniak, amil
alkohol, Etanol, FeCl3 1%, H2SO4, HCl
pekat, Metanol, Mg, NaOH 10%,
Pereaksi Mayer dan Dragendorff.
2.Bahan infused water: Buah lemon
segar, Air putih.
1. Infused water
Buah lemon dengan berat 100
gram dicuci sampai bersih
dengan air suling dan dipotong
menjadi beberapa bagian,
potongan dari buah tersebut di
masukkan kedalam gelas kaca
yang berisi air matang 500 ml,
kemudian di diamkan selama 7-
9jam.
2. Uji fitokimia
Pemeriksaan kualitatif atau uji
fitokimia yang bertujuan untuk
2
mengetahui kandungan senyawa
dari sampel tumbuhan, uji
fitokimia dilakukan terhadap
golongan senyawa alkaloid,
flavonoid, saponin, tanin, dan
terpenoid.
a. Pengujian Golongan
Alkaloid
Sampel segar kurang lebih 4
gram ditambahkan 20 ml
kloroform diaduk dan
ditambahkan amoniak, diaduk
lagi kemudian disaring. Filtrate
ditambahkan asam sulfat 2 N
sebanyak 10 tetes, dikocok
sampai setengah menit dan
didiamkan sampai terbentuk 2
lapisan. Lapisan bagian atas
diambil, kemudian dipindahkan
pada tiga tabung reaksi.
Selanjutnya pada masing-
masing tabung rekasi
ditambahkan pereaksi
Dragendorff, Mayer dan pada
tabung ketiga tambahkan
aquades 1-2 tetes sebagai
kontrolnya. Jika sampel
mengandung alkaloid akan
terbentuk berturut-turut endapan
jingga dan putih atau berwarna
kuning/kemerahan.30
b. Pengujian Golongan
Flavonoid
Sampel segar sebanyak kurang
lebih 4 gram yang sudah di
haluskan dimasukan ke dalam
tabung reaksi dan diekstraksi
dengan eter. Ekstrak disaring
dan ditambahkan 2ml natrium
hidroksida 10% kemudian
dikocok 1-2menit, jika ada
flavon hidrokuinon, warna
lapisan basa berubah menjadi
kuning, merah atau oranye.
Larutan sebelah bawah yang
3
berupa natrium fenolat diambil,
ditambahkan HCL 2 N dan
kemudian ditambahkan 2-3 ml
eter lagi, dikocok, didiamkan
sampai terbentuk dua lapisan
larutan. Larutan sebelah atas
atau larutan eter diambil dan
dipindahkan ke dalam 2 tabung
reaksi, kemudian tambahkan
etanol ke dalam salah satu
tabung sedangkan tabung yang
lain sebagai pembandingnya.
Selanjutnya dilakukan uji
dengan pereaksi Shinoda, yaitu
logam magnesium dalam HCL
pekat, apabila terbentuk larutan
merah menunjukan adanya
flavonoid. 30
c. Pengujian Golongan
Saponin
Sampel sebanyak 4 gram
kemudian masukan ke dalam
tabung reaksi. Tambahkan 5 ml
air lalu dikocok. Uji positif
ditunjukkan dengan
terbentuknya buih yang stabil. 30
d. Pengujian Golongan Tanin
Sampel sebanyak 4 gram
dilarutkan dengan 10 ml
methanol, kemudian masukan
ke dalam 2 tabung pereaksi.
Pada tabung 1 diberi 1-3 tetes
pereaksi FeCl3 1%. Uji positif
ditunjukkan oleh terbentuknya
warna hijau, biru atau ungu.
Sedangkan tabung 2 sebagai
kontrol.30
e. Pengujian Golongan
Terpenoid
Sampel sebanyak 4 gram
ditambahkan dengan 10 ml
kloroform kemudian di aduk,
disaring dan masukan ke dalam
3 lubang plat tetes dan
 dikeringkan selama 3-5 menit.
Selanjutnya ditambahkan
beberapa tetes pereaksi
Liebermann-Burchard, yaitu
asam asetat anhidridat kemudian
diaduk. Setelah itu tambahkan
dengan asam sulfat pekat dan
amati perubahan warna terjadi.
Apabila adanya triterpenoid
ditunjukkan dengan
terbentuknya warna merah atau
ungu.30
3. Uji antioksidan
a. Pengukuran DPPH
Larutan DPPH yang akan
digunakan dibuat dengan
cara menimbang seksama
1,97 mg DPPH ditimbang
dan dilarutkan dalam labu
ukur 50 ml kemudian
diambil 1 ml lalu diencerkan
sampai 10 ml dan diukur
sehingga mendapatkan
serapan 0,902. Larutan
DPPH disimpan dalam
wadah yang dilindungi dari
cahaya dengan cara
melapisinya dengan kertas
aluminium. Untuk setiap
pengujian, larutan DPPH
harus dibuat baru. Larutan
ini ditentukan spectrum
serapannya menggunakan
spektrofotometer UV pada
panjang gelombang 517 nm.
b. Pengukuran perasan jeruk
lemon
Menimbang sampel 10 mg
lalu dilarutkan dengan
metanol sebanyak 100 ml
sehingga diperoleh
konsentrasi larutan induk
sampel perasan jeruk lemon
100 ppm. Dari larutan induk
100 ppm masing-masing
ekstrak diambil 2; 4; 8; 10
ml dimasukkan ke dalam
4
labu ukur 10 ml lalu
diencerkan dengan metanol
hingga tanda batas.
Sehingga konsentrasi yang
diperoleh yaitu 20: 40: 80:
100 ppm. Kemudian dari
konsentrasi diambil 1 ml dan
dimasukkan ke dalam
tabung reaksi lalu
ditambahkan 3 ml DPPH
0,1mm. kemudian
diinkubasi pada suhu 37°C
selama 30 menit, selanjutnya
serapan diukur pada panjang
gelombang 517 nm. Nilai
IC50 dihitung masing-masing
dengan menggunakan rumus
persamaan regresi.31
c. Pengukuran infused water
jeruk lemon
Menimbang sampel 10 mg
lalu dilarutkan dengan
metanol sebanyak 100 ml
sehingga diperoleh
konsentrasi larutan induk
sampel infused water jeruk
lemon 100 ppm. Dari larutan
induk 100 ppm masing-
masing ekstrak diambil 2; 4;
8; 10 ml dimasukkan ke
dalam labu ukur 10 ml lalu
diencerkan dengan metanol
hingga tanda batas.
Sehingga konsentrasi yang
diperoleh yaitu 20: 40: 80:
100 ppm. Kemudian dari
konsentrasi diambil 1 ml dan
dimasukkan ke dalam
tabung reaksi lalu
ditambahkan 3 ml DPPH
0,1mm. kemudian
diinkubasi pada suhu 37°C
selama 30 menit, selanjutnya
serapan diukur pada panjang
gelombang 517 nm. Nilai
IC50 dihitung masing-masing
dengan menggunakan rumus
persamaan regresi.31
HASIL PENELITIAN
Tabel 1. Hasil uji fitokimia pada buah lemon segar

Uji Hasil

Alkaloid +

Flavonoid +

Fenolik +

Saponin ++

Steroid +

Terpenoid ++

Tabel 2. Aktivitas antioksidan perasan jeruk lemon (PJL), infused water jeruk
lemon (IWJL), dan Asam askorbat

Konsentrasi Absorbansi

PJL IWJL As. Askorbat

0 0,902 0,902

20 0.898 0,655 0,201

40 0,884 0,631 0,102

80 0,880 0,632 0,042

100 0,869 0,620

Semakin tinggi konsentrasi maka semakin kecil absorbansi.

5
Konsentrasi Persen hambatan

PJL IWJL As.askorbat

20 0,44% 27,38% 77,67%

40 1,99% 30,04% 88,69%

80 2,43% 30,93% 95,34%

100 3,95% 31,26%

Semakin tinggi konsentrasi maka semakin besar persen hambatan.

IC50

PJL IWJL As.askorbat

3,94X1013 281.838X10-1 1972X10-3

Semakin kecil nilai IC50 maka semakin besar aktivitas antioksidan.

PEMBAHASAN Kandungan terpenoid dan

Dari hasil uji fitokimia menunjukkan
bahwa buah lemon mengandung
alkaloid, fenolik, saponin, steroid,
dan terpenoid tetapi masing-masing
sampel memiliki kadar yang
berbeda-beda yang terlihat secara
kualitatif. Dari hasil uji fitokimia
hanya terdapat sedikit flavonoid dan
berbeda pada peneliti sebelumnya6.
Buah ini memiliki kandungan
saponin sebagai anti mmikroba19.
Adanya tanin di dalam buah jeruk
lemon yang menyebabkan sedikit
rasa sepat pada buah ini, uji positif
tanin yang terdapat dibuah ini adalah
tanin terhidrolisis.
steroid memberikan hasil positif
pada uji fitokimia. Dimana terpenoid
dikenal sebagai senyawa pemberi
aroma wangi dan harum pada buah
jeruk lemon21.
Terdapat perbedaan uji
fitokimia yang telah diteliti oleh
Hwang SL bahwa buah lemon
memiliki kadar flavonoid yang
tinggi.6 senyawa fenolik juga hanya
sedikit pada buah lemon dan berbeda
pada penelitian yang dilakukan oleh
Zou Z.2 Perbedaan tersebut dapat
disebabkan oleh perbedaan tempat,
jenis bibit, iklim, kesuburan tanah
sebagai faktor penyebab tidak
adanya kandungan flavonoid.

6
 Uji akivitas antioksidan
menggunakan metode radical
scavenger atau penangkal radikal
bebas (DPPH). Metode DPPH (2,2-
difenil-1-pikrilhidrazil) dilakukan
berdasarkan kemampuan antioksidan
untuk menghambat radikal bebas
dengan mendonorkan atom hidrogen
kepada DPPH, yang merupakan
radikal bebas yang stabil pada suhu
kamar.
Dipilih metode DPPH karena
merupakan metode yang cepat,
sederhana, dan murah untuk
mengukur aktivitas antioksidan.
Reaksi DPPH dengan antioksidan
akan menetralkan radikal bebas dari
DPPH dan membentuk DPPH
tereduksi. Pengukuran absorbansi
diukur menggunakan
spektofotometer dengan panjang
gelombang 517 nm.
Hasil analisis kuantitatif pada
penelitian yang memiliki aktivitas
antioksidan dapat dilihat dengan
adanya perubahan warna DPPH yang
sebelumnya berwarna ungu menjadi
warna kuning, hal ini dikarenakan
ketika antioksidan mampu
mendonorkan hidrogen yang
bereaksi dengan radikal DPPH,
reaksi ini akan memberikan
peningkatan kompleks non radikal
dan menurunkan radikal DPPH yang
ditandai dengan terbentuknya warna
kuning.
Setelah pengukuran didapat
data absorbansi kemudian dihitung
persen hambatannya dimana semakin
tinggi konsentrasi zat uji maka
semakin besar persen hambatannya.
Dari hasil uji antioksidan
menunjukkan bahwa infused water
buah lemon memiliki sifat
antioksidan yang lebih besar dengan
IC50 sebesar 281.8383x10-1 ppm
dibandingkan dengan perasan jeruk
lemon yang memiliki nilai IC50
sebesar 3,94x1013 ppm. Tetapi
didapatkan hasil yang berbeda antara
uji antioksidan infused water buah
lemon dengan asam askorbat yang
memiliki nilai IC50 sebesar 1972x10-3
ppm yang merupakan kontrol positif.
KESIMPULAN
1.Kandungan terbanyak pada sediaan
segar jeruk lemon adalah terpenoid
(++), saponin (++). sedangkan
Alkaloid (+), fenolik (+), flavonoid
(+), steroid (+) hanya ada sedikit
pada buah lemon.
2.Infused water jeruk lemon
memiliki aktivitas antioksidan
dengan nilai IC50 sebesar
281.8383x10-1 ppm dan perasan
jeruk lemon memiliki sifat
antioksidan dengan nilai IC50 sebesar
3,94x1013 ppm dibandingkan dengan
asam askorbat dengan IC50 sebesar
1972x10-3 ppm. Dapat dikatakan
bahwa infused water dan buah segar
jeruk lemon memiliki kekuatan
antioksidan.
SARAN
1.Perlu dilakukan penelitian lebih
lanjut terhadap uji aktivitas
antioksidan dari infused water jeruk
lemon pada hewan coba seperti
mencit.
2.Perlu dilakukan penelitian terhadap
uji aktivitas antioksidan dari kulit
jeruk lemon.
DAFTAR PUSTAKA
1. Murtie A, YM. Infused
Water. 2nd ed. L P, editor.
jakarta : PT Bhuana Ilmu
Populer; 2014.
7
2. Zou Z, Xi W, Hu Y, Nie C,
Zhou Z. Antioxidant activity of
Citrus fruits. Food Chemistry.
2015; 196(15): 885–896.
3. Dalimartha S AF. Khasiat
Buah dan Sayur. Jakarta:
Penebar Swadaya; 2011.
4. Campêlo LM, de Almeida AA,
de Freitas RL, Cerqueira GS,
de Sousa GF, Saldanha GB.
Antioxidant and
Antinociceptive Effects of
Citrus limon Essential Oil in
Mice.J Biomed
Biotechnol.2011 May :1-9.
5. Lv X, Zhao S, Ning Z, Zeng
H, Shu Y, Tao O. Citrus fruits
as a treasure trove of active
natural metabolites that
potentially provide benefits for
human health. Chemistry
Central Journal.2015 Dec;9:
68
6. Hwang SL, Shih PH , Yen GC.
Citrus Flvonoids and Effects in
Dementia and Age-related
Cognitive Decline. Diet and
Nutrition in Dementia and
Cognitive Decline. 2015: 869–
878
7. Ledesma-Escobar CA, Priego-
Capote F, Luque de Castro
MD. Comparative Study of the
Effect of Sample pretreatment
and Extraction on the
Determination of Flavonoids
from Lemon (Citrus limon).
PLoS ONE. 2016 Jan 25;11(1)
8. Golmakani MT, Moayyedi M.
Comparison of heat and mass
transfer of different
microwave-assited extraction
methods of essential oil from
Citrus limon (Lisbon variety)
peel. Food Science & in vitro antimicrobial and
Nutrition.2015 May 5;3(6):506-
18
8
9. C M. Plantamor. (updated 2012;
cited 2016 Jul 29). Available
from:
http://www.plantamor.com/inde
x.php?about=1.
10. González-Molina E,
Domínguez-Perles R, Moreno
DA, García-Viguera C. Natural
bioactive compounds of Citrus
limon for food and health. J
Pharm Biomed Anal. 2010 Jan
20; 51(2):327-45.
11. Puspaningtyas DE,
Prasetyaningrum YI. Variasi
Favorit Infused Water
Berkhasiat. Jakarta Selatan:
FMedia. 2014: 31-34
12. FoodNetwork. Infused water.
(updated 2016; cited 2016 Okt
20). Available from:
http://www.foodnetwork.com/re
cipes/food-network-
kitchens/lemon-infused-
water.html.
13. Harborne JB. Metode Fitokimia,
Penuntun cara modern
menganalisis tumbuhan. 1st ed.
S M, editor. Bandung: ITB;
1987.
14. G.A. Cordell. Introduction to
Alkaloids. A Biogenetic
Approach, Wiley Interscience,
New York, NY, 1981. 1055
15. Alam MA, Subhan N, Rahman
MM, Uddin SJ, Reza HM,
Sarker SD. Effect of Citrus
Flavonoids, Naringin and
Naringenin, on Metabolic
Syndrome and Their
Mechanism of Action.Adv
Nutr. 2014 Jul 14;5(4):404-17
16. N. Akremi,D. Cappoen, R.
Anthonissen,L. Verschaeve,A.
Bouraoui. Phytochemical and
genotoxic activity in the brown
algae Dictyopteris
membranacea. South African
 Journal of Botany. 2016 Jul;
12(4): 395-9
17. Halbwirth H. The Creation and
Physiological Relevance of
Divergent Hydroxylation
Patterns in the Flavonoid
Pathway. Int J Mol Sci.2010
Feb; 11(2): 595–621.
18. Hassan HS, Sule MI, Musa
AM, Musa KY, Abubakar MS,
Hassan AS.Anti-inflammatory
activity of crude saponin
extracts from five Nigerian
medicinal plants. Afr J Tradit
Complement Altern Med. 2011
Dec 29;9(2):250-5
19. Gong X, Zhang Y, Pan J, Qu
H. Optimization of the Ethanol
Recycling Reflux Extraction
Process for Saponins Using a
Design Space Approach. PLoS
One. 2014 Dec 3;9(12).
20. Epharmacognosy. Terpenoids.
(updated 2012; cited 2016 Okt
20). Available from:
http://www.epharmacognosy.c
om/
21. Winarsi H. Antioksidan Alami
& Radikal Bebas. Yogyakarta:
Kanisius. 2007.
22. Carmona-Jiménez Y, García-
Moreno MV, Igartuburu JM,
Garcia Barroso
C.Simplification of the DPPH
assay for estimating the
antioxidant activity of wine
and wine by-products. Food
Chem.2014 Dec 15;165:198-
204.
23. Letelier ME, Molina-Berríos
A, Cortés-Troncoso J, Jara-
Sandoval J, Holst M, Palma K.
DPPH and oxygen free radicals
as pro-oxidant of
biomolecules.Toxicol In Vitro.
2008
24. Locatelli M, Gindro R,
Travaglia F, Coïsson JD,
9
Rinaldi M, Arlorio M. Study of
the DPPH-Scavenging activity:
Development of a free software
for the correct interpretation of
data. Food Chemistry. 2008
Oct; 114 (3): 889-897
25. Bayar N, Kriaa M, Kammoun
R. Extraction and
characterization of three
polysaccharides extracted from
Opuntia ficus indica cladodes.
Int J Biol Macromol.2016
Nov;92:441-450.
26. Kenzom T, Srivastava P,
Mishra S. Structural insights
into 2,2'-azino-Bis(3-
ethylbenzothiazoline-6-
sulfonic acid) (ABTS)-
mediated degradation of
reactive blue 21 by engineered
Cyathus bulleri Laccase and
characterization of degradation
products. Appl Environ
Microbiol.2014
Dec;80(24):7484-95.
27. Ou MC, Liu YH, Sun YW,
Chan CF. The composition,
Antioxidant and Antibacterial
Activities of Cold-Pressed and
Distilled Essential Oils of
Citrus paradisi and Citrus
grandis (L.) Osbeck. Evid
Based Complement Alternat
Med. 2015 Nov:9
28. Liu Q, Li D, Wang W, Wang
D, Meng X, Wang Y.
Chemical composition and
antioxidant activity of essential
oils and methanol extracts of
different parts from Juniperus
rigida Sieb. et Zucc. Chem
Biodivers. 2016 Jul; 13(9):
1240-1250.
29. Wang H, Wang J, Qiu C, Ye Y,
Guo X, Chen G. Comparison
of phytochemical profiles and
Health Benefits in Fiber and
Oil Flaxseeds
 (Linumusitatissimum L.). Food
Chem. 2017 Jan 1;214:227-33.
31. Bendra A. Uji Aktivitas
Antioksidan Ekstrak Daun
Premna oblongata Miq.
dengan Metode DPPH dan
Identifikasi Golongan
10
30. Robinson T. Kandungan
Organik Tumbuhan Tinggi. Ed
6. Bandung: Penerbit ITB;
1991. p.170-286
Senyawa Kimia dari Fraksi
Teraktif. Skripsi. Depok:
Universitas Indonesia; 2012.
h.16.