LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA

Pemeriksaan Kadar Kolesterol

Kelompok 8

Eprila Darma Sari (172010101071)

Ezzalana Ikvina Dina Kamila (172010101073)

Handayani Sri Fatika L. (172010101074)

Thifal Antira Puspita (172010101087)

Farah Fadhila Nasywa P. (172010101088)

Fakultas Kedokteran

Universitas Jember

2018
 BAB 1 PENDAHULUAN

1.1 Dasar Teori

Kolesterol merupakan molekul biologi dari golongan lipid yang sangat penting, terutama
peranannya dalam membentuk struktur membran serta sebagai prekusor dalam sintesis hormon
steroid (seperti kortisol, testosteron, estrogen, dan progesteron), vitamin D dan asam empedu.
Kolesterol mempunyai peran biologis yang amat vital, misalnya pembentukan membran sel, hormon-
hormon steroid dan asam empedu. Asam empedu yang merupakan hasil konversi dari kolesterol
sangat dibutuhkan pada proses absorpsi lipid dari saluran cerna. Di sisi lain kelebihan kolesterol
diduga bertanggungjawab terhadap berbagai penyakit yang disebabkan oleh aterosklerosis, yang
insidensinya terus meningkat, disamping juga batu empedu.

Kolesterol berwarna kekuningan, berbentuk seperti lilin dan disebut sebagai steroid.
Ia merupakan produk khas hewani dan banyak terdapat dalam makanan yang berasal dari
hewan seperti kuning telur, daging, hati, usus dan otak. Makanan yang berasal dari tumbuh-
tumbuhan pasti tidak mengandung kolesterol, tetapi memiliki sterol lain seperti ergosterol
dan fitosterol.
Kolesterol dalam sirkulasi dibawa oleh partikel lipoprotein. Pengaturan metabolisme
kolesterol dalam tubuh diatur sangat ketat untuk menghindari terjadinya akumulasi yang
berlebihan serta deposisi abnormal dalam tubuh. Keadaaan klinis yang sangat penting akibat
deposisi abnormal kolesterol antaral lain aterosklerosis pada pembuluh darah arteri yang
penting sehingga menimbulkan penyakit serebrovaskuler, vaskuler perifer dan koroner.

1.2 Rumusan Masalah

Bagaimana cara menentukan kadar kolesterol dalam darah?

1.3 Tujuan

Memahami cara menentukan kadar kolesterol dalam darah dengan metode CHOD-PAP: enzymatic
photometric test
 BAB 2

METODOLOGI PRAKTIKUM

2.1 Alat dan Bahan

1. Tabung Reaksi
2. Cuvet
3. Pipet Mikro
4. Spektofotometer
5. Reagen CHOBPAP
6. Serum

2.2 Cara Kerja

1. Masukkan 1 ml reagen CHOB PAP ke dalam tabung reaksi

2. Masukkan 10 mikro serum ke dalam tabung yang sudah terisi reagen
3. Vortex hingga sekiranya tercampur
4. Inkubasi selama 10-15 menit
5. Pindahkan cairan ke cuvet untuk diletakkan ke spektofotometer
6. Keluarlah hasil.
 BAB 3

HASIL DAN PEMBAHASAN

3.1 Hasil pengamatan

Sampel Kelompok Abs sampel Kadar Kolesterol

Tabung 7 (perhitungan manual) 0.304 200 mg/dL
IV 8 (langsung di spektrofotometer) 0.618 592.380 mg/dL

Perhitungan nilai kolesterol

𝒎𝒈 𝑨𝒃𝒔 𝑺𝒂𝒎𝒑𝒍𝒆 − 𝑨𝒃𝒔 𝑩𝒍𝒂𝒏𝒌𝒐

𝑪𝒉𝒐𝒍𝒆𝒔𝒕𝒆𝒓𝒐𝒍 [ ]= 𝒙 𝑵𝒊𝒍𝒂𝒊 𝑺𝒕𝒂𝒏𝒅𝒂𝒓𝒅
𝒅𝑳 𝑨𝒃𝒔 𝑺𝒕𝒂𝒏𝒅𝒂𝒓𝒅 − 𝑨𝒃𝒔 𝑩𝒍𝒂𝒏𝒌𝒐

Keterangan :

 Standard = 200 mg/dL

 Abs blanko = 0.104
 Abs standard = 0.304

Kelompok 7
𝑚𝑔 0.304 − 0.104
𝐾𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 [ ] = 𝑥 200
𝑑𝐿 0.304 − 0.104

= 1 x 200
= 200 mg/dL

3.2 Pembahasan

Tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui kadar kolesterol menggunakan
metode CHOD-PAP. Prinsip praktikum ini adalah menentukan kadar kolesterol serum setelah
penguraian kolesterol dan esternya dengan reaksi oksidasi dan hidrolisis. Quinoneimine
(berwarna merah muda) menjadi indikator reaksi kolorimetri, yang terbentuk dari 4-
aminoantipyrine dan phenol pada reaksi hidrogen peroksida yang dikatalisis oleh enzim
peroksidase. Reaksi ini akan menimbulkan zat warna yang intensitasnya sebanding dengan
kadar kolesterol, yang kemudian dapat diukur secara fotometrik.

Reaksi
𝐶𝐻𝐸
𝐶ℎ𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟 + 𝐻2 𝑂 > 𝐶ℎ𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 + 𝐹𝑎𝑡𝑡𝑦 𝑎𝑐𝑖𝑑

𝐶𝐻𝑂
𝐶ℎ𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 + 𝑂2 > 𝐶ℎ𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 − 3 − 𝑜𝑛𝑒 + 𝐻2 𝑂2

𝑃𝑂𝐷
2 𝐻2 𝑂2 + 4 − 𝐴𝑚𝑖𝑛𝑜𝑎𝑛𝑡𝑖𝑝𝑦𝑟𝑖𝑛𝑒 + 𝑃ℎ𝑒𝑛𝑜𝑙 > 𝑄𝑢𝑖𝑛𝑜𝑛𝑖𝑚𝑖𝑛𝑒 + 4 𝐻2 𝑂
 Pertama, darah diambil pada bagian vena mediana cubiti dengan menggunakan jarum
suntik. Kemudian darah ditampung dalam tabung sentrifuge lalu kemudian disentrifuge.
Prinsip dari sentrifuge adalah memisahkan serum dan plasma berdasarkan prinsip berat jenis,
dimana plasma berwarna lebih merah tua pekat berada pada bagian bawah tabung (BJ besar),
sedangkan serum yang berwarna kekuningan/bening akan berada pada bagian atas (BJ kecil).
Serum (10 µL) dengan reagen (1000 µL) dicampur dengan menggunakan vortex. Setelah itu
inkubasi selama 20 menit pada suhu kamar atau 10 menit pada suhu 37° C, kemudian ukur
dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 546 nm.

Dari hasil pengukuran menggunakan spektrofotometer didapatkan nilai absorbansi

sampel pada kelompok 8 yaitu 0.618. Dan hasil kadar kolesterol kelompok 8 yaitu 592.380
mg/dL. Sample serum darah yang digunakan pada kelompok 7 dan kelompok 8 adalah sama.
Akan tetapi kadar kolesterol pada kelompok 7 dan 8 memiliki hasil yang berbeda. Dimana
kadar kolesterol pada kelompok 7 dihitung menggunakan perhitungan manual setelah
diketahui nilai absorbansinya melalui spektrofotometer, sedangkan kadar kolesterol dan nilai
absorbansi pada kelompok 8 didapatkan langsung melalui spektrofotometer. Ada beberapa
kelemahan dalam praktikum ini yang mengakibatkan hasil dari pengukuran kadar kolesterol
tidak akurat atau tidak sesuai, terutama adalah kesalahan teknis. Kesalahan teknis dari
praktikum mungkin bisa terjaid akibat cuvet yang kurang bersih, pengambilan serum yang
tercampur dengan eritrosit, atau mungkin pada saat pemeriksaan di spektrofotometer yang
mana pada saat penyedotan campuran terdapat udara atau hal lain yang ikut masuk atau ikut
terhitung pada spektrofotometer.
 BAB 4

KESIMPULAN

Pada praktikum ini dapat disimpulkan bahwa semakin tinggi intensitas warna dari
Quinoneimine (berwarna merah muda), maka kadar kolesterol serum yang terukur secara
fotometrik semakin tinggi juga.

Hasil pengukuran kadar kolesterol serum probandus adalah 592.380 mg/dL, menunjukkan
bahwa probandus mengalami hiperkolestrolemia karena nilai normal kolesterol serum adalah
<200 mg/dL. Namun, hal-hal yang bisa membuat pengukuran kurang tepat seperti yang
sudah dijelaskan di bagian pembahasan juga harus dipertimbangkan.
 DAFTAR PUSTAKA

Rahmawati, Ika. 2018 Pengukuran Kadar Kolesterol Serum. Jember: FK UNEJ

Murray, R. K., Granner, D. K., & Rodwell, V. W. 2009. Biokimia harper (27 ed.). Jakarta:
Buku Kedokteran EGC
 LAMPIRAN

Gambar Keterangan
Serum

Reagen

Reagen yang telah dicampur dengan

serum

Proses inkubasi dengan suhu ruangan

selama 20 menit

Proses pengukuran absorbasi sampel

dengan menggunakan spektrofotometer
Hasil pengukuran nilai absorbasi dan
kolesterol sampel dengan melalui
spektrofotometer