I.

Penjelasan Sampel

Kehadiran berbagai senyawa fitokimia di Cynodon dactylon dan Carica papaya secara
kualitatif dan kuantitatif ditentukan oleh berbagai metode standar analisis. Tanaman yang dipilih
memiliki berbagai konstituen fitokimia, maka lebih lanjut penjelasan dari senyawa bioaktif
tersebut sangat penting untuk dipelajari bagaimana penggunaan tradisionalnya.

Tabel 1: Review penggunaan tanaman Cynodon dactylon dan Carica papaya untuk keperluan
medis

II. Preparasi Sampel

2.1 Persiapan Tanaman

Pucuk daun yang segar dan bebas penyakit C. dactylon dan daun C. papaya dikumpulkan.
Daun yang dikumpulkan dibersihkan, dicuci dengan air dan dikeringkan selama 15 hari di
tempat terlindungi dan pada suhu kamar. Daun dibasahi dan diawetkan dalam wadah plastik
bersih, jauh dari cahaya, panas dan kelembaban sampai digunakan.
2.2 Persiapan Ekstraksi Tanaman

Ekstraksi dalam air panas 5 gram bubuk bahan tanaman disuspensikan dalam 200 ml air
suling. Campuran ini dipanaskan dengan pengadukan kontinu pada 30ºC hingga 40ºC selama
20 menit. Ekstrak air disaring melalui kertas saring Whatman No.1 dan selanjutnya filtrat
digunakan untuk analisis fitokimia.

2.3 Ekstraksi Pelarut

Sampel tanaman diekstraksi dengan berbagai pelarut organik (Chloroform, Aseton &
Etanol) dan air panas untuk meningkatkan sifat polaritas. 5 gram serbuk kering disuspensikan
dalam 25 ml kloroform dan disimpan selama 48 jam inkubasi dengan pengocokan terus
menerus. Setelah 48 jam suspensi disaring dengan kertas saring Whatman No.1. Filtrat pelarut
disentrifugasi pada 5000 rpm selama 5 menit. Proses ini diulang tiga kali dan supernatan
dikumpulkan aseton ini diulang sebanyak tiga kali. Proses di atas diterapkan dengan etanol dan
air dan bersama. Bahan sisa tanaman yang tersisa setelah penyaringan dikeringkan dengan
udara untuk menguapkan kloroform sepenuhnya. Residu diperlakukan dengan aseton untuk
ekstraksi. Proses ekstraksi masing-masing supernatan pelarut dikumpulkan untuk analisis
fitokimia dan sifat fisik mereka diamati (Tabel 2).

Tabel 2: Tampilan fisik Cynodon dactylon dan ekstrak Carica papaya dalam pelarut yang
berbeda
III. Metode Skrining Fitokimia

3.1 Analisis Kualitatif Total Protein

Kehadiran protein dilakukan dengan Million tes (5 ml pereaksi Million) dan uji Ninhidrin
(5 ml Ninhidrin reagen) yang dilakukan secara terpisah untuk ekstrak pelarut C. dactylon dan
C. papaya diikuti dengan pemanasan kecil yang memberikan pengembangan warna biru muda .

3.2 Analisis Kualitatif Karbohidrat

Kehadiran karbohidrat dalam ekstrak pelarut ditentukan oleh metode yang berbeda seperti,
tes Fehling, tes Benediktus, tes Molisch dan uji yodium.

a. Uji Fehling: volume yang sama dari pereaksi Fehling A dan B dicampur bersama dan 2 ml
campuran ditambahkan ke ekstrak tumbuhan mentah diikuti pemanasan kecil, campuran
akan berubah warna merah bata.
b. Tes Benediktus: 2ml larutan Benediktus ditambahkan ke ekstrak tumbuhan mentah diikuti
dengan perebusan mendidih yang memberikan endapan coklat kemerahan.
c. Tes Molisch: 2 ml reagen Molisch ditambahkan dalam ekstrak tumbuhan diikuti
penambahan H2SO4 yang memberikan penampilan cincin ungu di interfase.
d. Uji yodium: 2 ml larutan iodin ditambahkan pada ekstrak tumbuhan memberikan
pengembangan biru gelap. Bersamaan dengan itu, kehadiran fenol dan tanin diuji: 2 ml 2%
dari larutan FeCl3 ditambahkan dalam ekstrak tanaman, pengembangan hijau gelap untuk
senyawa fenolik dan warna hitam untuk kehadiran tanin.

3.3 Analisis Kualitatif Flavonoid

2 ml 2% NaOH ditambahkan dalam ekstrak tumbuhan memberikan warna kuning intens

yang akan menghilang selama beberapa menit. penambahan lebih lanjut dari beberapa tetes
larutan alumunium 1% yang ditambahkan pada setiap filtrat mengubah kemunculan kembali
warna kuning menunjukkan adanya flavonoid.
3.4 Analisis Kualitatif Flavonoid dengan Metode Bohm dan Kocipai-Abyazan

Flavonoid diuji dengan 10 gram sampel tanaman yang telah diekstraksi berulang kali
dengan 100 ml 80% metanol berair pada suhu kamar. Seluruh larutan disaring melalui kertas
saring Whatman No. 42 (125 mm). Filtrat kemudian dipindahkan ke dalam wadah dan
diuapkan di atas penangas air dan diukur dengan berat konstan.

3.5 Analisis Kualitatif Metode Saponin oleh Obadoni dan Ochuko

5 ml ekstrak tumbuhan dicampur dengan volume air suling yang sama dan dikocok dengan
kuat selama 3 hingga 5 menit memberikan pengembangan busa stabil yang tinggi. Penambahan
menggunakan 3 ml minyak zaitun dikocok dengan keras, diamati perkembangan emulsi.

3.6 Analisis Kualitatif Glikosida dengan Metode Uji Keller-Killani

2 ml kloroform, 2 ml asam asetat ditambahkan ke ekstrak tumbuhan dan dibiarkan dingin,

diikuti dengan penambahan 2 ml H2SO4 pekat mengubah ungu menjadi biru kemudian hijau,
menunjukkan adanya nukleus steroid yang merupakan bagian glikon glikosida, cincin steroid
itu adalah bagian glikon glikosida. Dengan cara lain, glikosida jantung yang tersedia diuji
dengan penambahan 1-2 tetes asam asetat glasial dan 2% larutan FeCl3 dalam ekstrak
tumbuhan mentah diikuti oleh 2ml H2SO4, memberikan cincin coklat pada interfase
menunjukkan adanya glikosida jantung.

3.7 Analisis Kualitatif Steroid

Ekstrak tumbuhan dicampur dalam 2 ml kloroform dan H2SO4 ditambahkan perlahan-

lahan, yang mengarah pada pengembangan warna merah di lapisan kloroform bawah
menunjukkan adanya steroid, dan selanjutnya dikonfirmasi dengan penambahan asam asetat
yang mengembangkan formasi warna kehijauan.

3.8 Analisis Kualitatif Terpenoid dengan Metode Tes Salkowski

Kehadiran terpenoid dalam ekstrak tumbuhan ditentukan sesuai dengan metode Salkowski.
5 ml (1 mg/ml) fraksi dikombinasikan dengan beberapa tetes kloroform, dan 3 ml H2SO4 pekat.
Perubahan warna coklat kemerahan mengungkapkan adanya terpenoid.
3.9 Analisis Kualitatif Alkaloid dengan Metode Phenonthroline

Alkaloid dalam ekstrak tumbuhan dideteksi sesuai dengan metode Phenonthroline. Ekstrak
tumbuhan ditambahkan dengan 8 ml HCl (1%), dihangatkan dan disaring. 2 ml setiap filtrat
dititrasi secara terpisah dengan menggunakan (a) potassium mercuric iodide (reagen Mayer)
dan (b) potassium bismuth (pereaksi Dragendroff). Kekeruhan menunjukkan adanya alkaloid.

3.10 Persiapan Reagen Maeyer

0,355 gm dari merkuri klorida dilarutkan dalam 60 ml air suling. 5 gram kalium iodida
dilarutkan dalam 20 ml air suling. Kedua larutan dicampur dan volume dinaikkan menjadi 100
ml dengan air suling.

3.11 Persiapan Reagen Dragendorff

Larutan A: 1.7 gram bismuth nitrat dasar dan 20 gram asam tartarat dilarutkan dalam 80
ml air suling. Larutan B: 16 gram kalium iodida dilarutkan dalam 40 ml air suling. Kedua
solusi (A dan B) dicampur dalam rasio 1: 1.

3.12 Analisis Kualitatif Metode Uji Napthoquinone dengan Dam - Karrer

Kehadiran napthoquinone diidentifikasi dengan penambahan beberapa tetes larutan KOH

10% dalam ekstrak tanaman yang memberikan hasil warna biru (Siddiqui dan Ali, 1997).

3.13 Analisis Kualitatif Antosianin

Kehadiran Anthocyanin, diuji dengan penambahan 2 ml HCl dan amonia dengan 2 ml

ekstrak tanaman berair, memberikan pengembangan dari merah muda berubah menjadi warna
ungu.

3.14 Analisis Kualitatif Leukoantosianin

Leucoanthocyanins diuji dengan menambahkan volume yang sama dari ekstrak tumbuhan
dan isoamil alkohol yang memberikan hasil warna merah.
3.15 Analisis Kualitatif dari Kumarins

5 ml ekstrak tumbuhan pelarut yang sudah dibasahi diambil dalam tabung reaksi. Mulut
tabung ditutupi dengan kertas saring yang diolah dengan larutan NaOH 1N. Tabung reaksi
ditempatkan selama beberapa menit dalam air mendidih dan kemudian kertas saring diangkat
dan diperiksa di bawah sinar UV, untuk fluoresensi kuning menunjukkan adanya coumarin.

3.16 Analisis Kualitatif Fenol dan Tanin

Ekstrak kasar dicampur dengan 2 ml larutan 2% FeCl3. Warna biru-hijau atau hitam
menunjukkan adanya fenol dan tanin.

3.17 Analisis Kualitatif Total Fenol dengan Metode Spektrofotometri

Sampel bebas lemak direbus dengan 50 ml eter untuk ekstraksi komponen fenolik selama
15 menit. 5 ml ekstrak dipipet ke dalam labu 50 ml, kemudian ditambahkan 10 ml air suling.
2 ml larutan amonium hidroksida dan 5 ml amilalkohol pekat juga ditambahkan. Sampel dibuat
untuk menandai dan dibiarkan bereaksi selama 30 menit untuk pengembangan warna. Panjang
gelombang serapan spektrofotometri diukur pada 505 nm.

3.18 Analisis Kuantitatif Fitokimia dari Ekstrak Tumbuhan (C. dactylon Dan C. papaya)
Analisis Kuantitatif Alkaloid dengan Metode Harborne

Sampel residu ekstrak tanaman C. dactylon dan C.papaya diukur 10 gram secara terpisah
yang diambil dalam gelas kimia 250 ml dan 200 ml asam asetat, selanjutnya 10% etanol
ditambahkan. Gelas ditutup selama 4 jam. Larutan disaring melalui kertas saring Whatman No:
1 dan ekstrak dipekatkan pada rotator air sampai seperempat dari konsentrasi volume aslinya,
NH3OH ditambahkan tetes demi tetes ke dalam ekstrak tumbuhan sampai pengendapan selesai.
Endapan dikumpulkan dari larutan dan dicuci dengan NH3OH encer dan disaring. Residu
adalah alkaloid yang ditimbang setelah kering sempurna dan persentasenya dihitung.

3.19 Analisis Kuantitatif Tannin dengan Metode Van-Burden dan Robinson

Sampel residu ekstrak tanaman C. dactylon dan C. papaya diukur untuk 10 gram dalam
setiap kasus diambil dalam botol schotduran, dan 50 ml air suling ditambahkan. Kemudian
dikocok selama 1 jam, dan disaring dalam labu volumetrik 50 ml. 5 ml filtrat dipipet dan
diletakkan ke tabung reaksi dan dicampur dengan 2 ml 0,1 M FeCl3 dalam 0,1 N HCl dan 0,008
M K4Fe(CN)6. Panjang gelombang absorbansi diukur pada 120 nm dalam 10 menit.

3.20 Analisis Kuantitatif Saponin dengan Metode Obadoni dan Ochuko

10 gram filtrat sisa sampel dari masing-masing kasus diambil ke dalam labu berbentuk
kerucut dan 20% dari 15 ml etanol berair ditambahkan. Kemudian labu dipanaskan di atas bak
air panas selama 4 jam dengan pengadukan konstan pada sekitar 55°C. Sampel campuran
disaring dan residu sekali lagi diekstraksi dengan etanol 20%. Ekstrak gabungan dikurangi
menjadi 40 ml pada perendaman air panas sekitar 90°C. Konsentrat dipindahkan ke corong
pemisah 250 ml, ditambahkan 20 ml dietil eter diikuti dengan campuran kuat. Lapisan berair
ditemukan kembali ketika lapisan eter dibuang. Proses pemurnian diulang. 60 ml n-butanol
ditambahkan. Ekstrak n-butanol dikombinasikan dicuci dua kali dengan 10 ml natrium klorida
berair 5%. Larutan yang tersisa dipanaskan dalam bak air. Setelah penguapan, sampel
dikeringkan dalam oven, diukur dan kandungan saponin dihitung sebagai persentase.

3.21 Analisis Kuantitatif Total Fenol dengan Metode Spektrofotometri

10 gram setiap sampel tanaman filtrat sisa pelarut dihilangkan lemaknya dengan bantuan
100 ml dietil eter menggunakan alat soxhlet selama 2 jam. Sampel bebas lemak direbus dengan
50 ml eter selama 15 menit untuk ekstraksi komponen fenolik. 5 ml ekstrak itu pipet ke dalam
labu 50ml dan air suling 10ml ditambahkan. 2 ml larutan amonium hidroksida dan 5 ml
amilalkohol pekat juga ditambahkan di dalamnya. Sampel dibuat untuk menandai dan
dibiarkan bereaksi selama 30 menit. Warna dikembangkan dan panjang gelombang absorbansi
diukur pada 505nm.

3.22 Analisis Kuantitatif Flavonoid dengan Metode Bohm dan Kocipai-Abyazan

10 gram setiap filtrat sampel sisa pelarut diekstraksi dengan 100 ml aseton, kloroform,
etanol dan air panas secara terpisah dalam setiap kasus, berulang kali pada suhu kamar. Seluruh
larutan disaring melalui kertas saring Whatman 42 (125 mm). Filtrat kemudian dipindahkan
ke dalam wadah dan diuapkan ke dalam kekeringan di atas penangas air, pengukuran bahan
dan persentase kuantitas dihitung.

3.23 Analisis kuantitatif Kumarin dengan metode basis kering

 10 gram setiap ekstrak sisa tanaman pelarut dicampur dengan menambahkan 10 ml NaOH
5 N kemudian direbus pada 800C selama 30 menit, kemudian dinginkan pada suhu kamar dan
tambahkan 2 ml 5N H2SO4 dicampur secara menyeluruh, ditambahkan 0,25 gram NaHCO3
anhidrat, aduk rata dan transfer konten ke alat pengambilan sari. Volume ekstraktor dibuat
hingga 50 ml dengan petroleum eter. Diekstrak segera selama 3 jam dengan petroleum eter,
ditambahkan 20 ml air ke ekstrak petroleum eter dan dengan hati-hati diuapkan eter dengan
memutar labu dalam bak air 500C hingga 550C. Dipindahkan larutan berair ke labu ukur 50 ml,
dibuat volume 30 ml dengan H2O, dipisahkan 25 ml aliquot ke dalam tabung reaksi.
Ditambahkan 5 ml larutan Na2CO3 1%, dipanaskan dalam bak air di 850C selama 15 menit,
dan didinginkan pada suhu kamar. Ditambahkan 5 ml larutan diazonium, dibuatlah 50 ml
dengan H2O, dicampur dengan baik dan didiamkan 2 jam, sedimen dikeringkan dan dihitung
persentase kumarin.

3.24 Analisis Kuantitatif Glikosida Jantung dengan Metode Reagen Baljet

Estimasi kuantitatif glikosida sisa ekstrak tanaman C. dactylon dan C. pepaya dievaluasi
menggunakan reagen, (95 ml asam picat berair dan 5 ml 10 NaOH berair). Kehadiran glikosida
mengembangkan warna oranye-merah dengan reagen Baljet. Intensitas warna yang dihasilkan
sebanding dengan konsentrasi glikosida. Pembentukan warna ini digunakan untuk estimasi
glikosida dalam sampel. 10 gram setiap sampel diekstraksi residu dengan perendaman
semalam dengan 10 ml alkohol 70% dan disaring. Ekstrak di sana dimurnikan menggunakan
timbal asetat dan larutan Na2HPO4. Intensitas warna yang dihasilkan diukur menggunakan
spektrofotometri panjang gelombang absorbansi pada 495 nm. Air dan reagen bertindak
sebagai Blank. Intensitas warna yang dihasilkan sebanding dengan konsentrasi glikosida.

3.25 Analisis kuantitatif Steroid dengan metode Liberman-Burchard

10 gram filtrat pelarut residu dari sampel ekstrak tanaman diambil secara terpisah, yang
dibuat bebas dari pelarut. 2ml reagen ditambahkan diikuti dengan penambahan volume gradien
kloroform. Tabung ditutup dengan kertas hitam dan diinkubasi dalam gelap selama 15 menit,
semua sampel diukur panjang gelombang absorbansi pada 640 nm. Grafik standar diplot untuk
perhitungan persentase kehadiran steroid.

3.26 Analisis Kuantitatif Terpenoid dengan Metode Ferguson

 10 gram filtrat sisa masing-masing sampel ekstrak tanaman diambil secara terpisah dan
direndam dalam alkohol selama 24 jam. Kemudian disaring, filtrat diekstraksi dengan
petroleum eter; Ekstrak eter diperlakukan sebagai total terpenoid.

IV. Hasil dan Diskusi

Studi saat ini untuk tanaman beriklim yang dipilih mengungkapkan adanya berbagai
konstituen fitokimia. Kehadiran berbagai konstituen fitokimia di C. dactylon dan C. papaya
dilengkapi di bawah ini (pada Tabel 3). Ekstraksi yang menunjukkan adanya persentase yang
tinggi dalam kisaran 0,01-1,46 dan 0,02 sampai 10,0 persentase fitokimia dibandingkan dengan
ekstrak pelarut lainnya. Persentase moderat 0,01 hingga 1,0 dan 0,00 hingga 0,7 persentase
diperoleh dalam sistem ekstraksi kloroform dan paling sedikit 0,00-1,04 dan 0,01 hingga 0,64
persentase konstituen dalam ekstrak aseton, persentase paling rendah dari konstituen fitokimia
diamati pada kisaran 0,00 hingga 0,03 dan 0,00 0,04 persentase dalam sistem ekstraksi air panas
pada Tabel 4 (A & B).

Tabel (1 & 2) dengan jelas menunjukkan sistem pelarut yang ideal untuk ekstraksi
fitokimia yang diinginkan dari tanaman obat yang dipilih. Hasil dari tabel 4 (a) & 4 (b) dengan
jelas menunjukkan Ethanol adalah sistem pelarut yang ideal untuk ekstraksi Phytochemicals dalam
ekstrak pucuk cynodon dactylon dan ekstrak daun karica pepaya. Investigasi penelitian lebih lanjut
tentang identifikasi dan penjelasan struktural masing-masing dan setiap konstitusi dalam ekstrak
bagian pucuk C. dactylon dan bagian daun C. papaya perlu dieksplorasi lebih lanjut dalam
pendekatan tingkat molekuler terhadap berbagai penyakit.

Tabel 3: Analisis Kualitatif Phytochemical di Cynodon dactylon dan Carica papaya

Tabel 4 (a): Persentase konstituen fitokimia dalam ekstrak pelarut yang berbeda dari ekstrak
cynodon dactylon menembak data mewakili rata-rata dari tiga ulangan.

Penapisan fitokimia dan estimasi persentase (kuantitatif) dari berbagai ekstrak minyak
mentah pelarut menghasilkan dalam studi bagian pucuk dan daun menunjukkan adanya Flavonoid,
Saphonin, Glikosida, Steroid, Terpinoid, Napthoquinones, Anthrocyanin, Leucocyanin,
Coumarin, Phenol Dan Tanin. Mereka dikenal untuk menunjukkan aktivitas obat serta aktivitas
fisiologis. Protein ditemukan di semua bagian tanaman, yang penting dan terkait dengan polifenol.
Kandungan flavanoid hampir sama hadir di kedua ekstrak mentah tanaman, yang penting untuk
pigmentasi dan juga bertindak sebagai unit penyaringan UV. Saphonin berfungsi sebagai anti-
feedant, hadir dalam tunas dan daun tanaman yang dipilih.
Tabel 4 (b): Persentase konstituen fitokimia dalam ekstrak pelarut yang berbeda dari ekstrak daun
Carica papaya data mewakili rata-rata tiga replikasi

Glikosida jantung, Terpenoid, Leukoantosianins dan Cumarin tidak ada di C. dactylon

tetapi hadir dalam ekstrak daun C. papaya. Tingkat phyto yang tidak dapat dilacak ini diperkirakan
secara kualitatif. Ekstrak daun mentah dari C .papaya tidak memiliki Napthoquinone. Kedua fenol
dan tanin hadir dalam ekstrak pucuk dan daun, yang terutama digunakan untuk mekanisme
pertahanan tanaman terhadap berbagai infeksi. Kehadiran Steroid dan terpinoid di C. dactylon dan
C. papaya telah dilaporkan oleh para peneliti dan secara luas digunakan sebagai obat-obatan
herbal. Tanaman yang diidentifikasi untuk penelitian ini adalah sumber potensial fitokimia yang
berguna.
 RESUME JURNAL ILMIAH SKRINING FITOKIMIA

Antimicrobial Activity and Phytochemical Screening of Cynodon dactylon and

Carica papaya

Diajukan untuk memenuhi tugas mata kuliah Fitokimia

DOSEN:

Indah Yulia Ningsih, S. Farm., M. Farm., Apt.

Disusun oleh

Nama: Vinda Aisya Vira

NIM: 162210101088

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS JEMBER

2018