PEWARNAAN GRAM

No. Dokumen : No. Revisi : Halaman

Rev-01 1 dari 2

Tanggal ditetapkan Ditetapkan

STANDAR Direktur Operasional
PROSEDUR
OPERASIONAL

I. PENGERTIAN Adalah tata cara untuk mewarnai bakteri pada sediaan/preparat dengan pulasan
Gram yang terdiri dari Gentian violet berwarna ungu/violet, Lugol, alkohol 70%, serta
fuchsin yang berwarna merah, dimana bakteri yang merupakan golongan Gram
negatif akan berwarna merah sedangkan bakteri Gram positif akan berwarna
ungu/violet.

II. TUJUAN Mewarnai bakteri pada preparat untuk menentukan golongan kuman Gram positif
atau kuman Gram negatif

III. KEBIJAKAN 3.1. Termasuk dalam pelayanan pemeriksaan Laboratorium Patologi Klinik
Mikrobiologi.
3.2. Petugas Laboratorium harus melakukan pemeriksaan sesuai dengan standar
prosedur operasional yang telah ditetapkan
3.3. Petugas analis dapat menolak bahan pemeriksan yang tidak memenuhi
standard untuk diperiksa.

IV. PROSEDUR 4.1. Peralatan:

4.1.1. Mikroskop
4.1.2. Ose
4.1.3. Wadah steril spesimen
4.1.4. Lampu Bunsen
4.1.5. Minyak imersi
4.1.6. Objek glass
4.1.7. Pewarna Gram:
1. Gentian Violet
2. Lugol
3. Alkohol 70%
4. Fuchsin

4.2. Memperhatikan hal sebagai berikut sebelum melakukan pemeriksaan :

4.2.1. Bahan pemeriksaan ditampung pada wadah steril yang sesuai dan
spesifik untuk jenis pemeriksaan.

4.3. Prosedur:
4.3.1. Memberi label identitas pasien pada slide objek glass yang akan
digunakan
4.3.2. Membuat preparat dengan mengambill spesimen menggunakan ose
steril, lalu membuat apusan diatas objek glass tersebut dengan ukuran
2 cm x 3 cm. Menyertakan kuman control, untuk Gram positif
menggunakan kuman Staphylococcus epidermidis, dan untuk Gram
negatif menggunakan kuman Escherichia coli.
4.3.3. Membiarkan sediaan mengering pada suhu kamar dan fiksasi diatas
nyala api 2-3 kali setiap 5 detik.
4.3.4. Menggenangi preparat dengan zat warna Gentian Violet, selama 30
detik.
4.3.5. Mencuci dengan air mengalir, dan meniriskan
4.3.6. Menggenangi dengan reagen Lugol selama 30 detik.
 PEWARNAAN GRAM

No. Dokumen : No. Revisi : Halaman

SPO-PJM-LPK-405 Rev-01 2 dari 2

4.3.7. Mencuci dengan air mengalir, dan meniriskan

4.3.8. Membilas dengan Alkohol 70% hingga pewarna Gentian Violet luntur ±
15 detik
4.3.9. Mencuci dengan air mengalir, dan meniriskan
4.3.10. Menggenangi dengan zat warna Fuchsin, selama 60 detik.
4.3.11. Mencuci dengan air mengalir, mengeringkan di udara
4.3.12. Membaca sediaan dibawah mikroskop dengan pembesaran 100 X

V. UNIT TERKAIT 5.1. Laboratorium