Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9​, 1621-1651; DOI: 10.

3390 / ijms9091621

BUKA AKSES ​Jurnal Internasional ​Ilmu Pengetahuan Molekuler ​ISSN 1422-0067

www.mdpi.org/ijms ​Meninjau

Pretreatment dari Lignocellulosic Limbah untuk Meningkatkan

Produksi Etanol dan Biogas: Tinjauan

Mohammad J. Taherzadeh 1,​​ * dan Keikhosro Karimi 1,​ 2

1​
Sekolah Teknik, Universitas Borås, 501 90 Borås, Swedia 2​ ​Departemen Teknik Kimia, Universitas

Teknologi Isfahan, Isfahan, 84156-83111,

Iran. E-Mail: Keikhosro.Karimi@hb.se

* Penulis kepada siapa korespondensi harus ditangani; E-Mail: Mohammad.Taherzadeh@hb.se

Tel. + 46-33-4355908, Faks: + 46-33-4354008

Diterima: 5 Maret 2008; dalam bentuk revisi: 27 Agustus 2008 / Diterima: 1 September 2008 /
Diterbitkan: 1 September 2008

Abstrak: ​Lignoselulosa sering merupakan komponen utama atau terkadang satu-satunya

komponen aliran limbah yang berbeda dari berbagai industri, kehutanan, pertanian, dan kota.
Hidrolisis bahan-bahan ini adalah langkah pertama untuk pencernaan biogas (metana) atau
fermentasi menjadi etanol. Namun, hidrolisis enzimatik lignoselulosa tanpa pretreatment
biasanya tidak begitu efektif karena stabilitas bahan yang tinggi terhadap serangan enzimatik
atau bakteri. Karya ini didedikasikan untuk meninjau metode yang telah dipelajari untuk
pretreatment limbah lignoselulosa untuk konversi menjadi etanol atau biogas. Parameter
efektif dalam pretreatment lignoselulosa, seperti kristalinitas, luas permukaan yang dapat
diakses, dan perlindungan oleh lignin dan hemiselulosa diuraikan terlebih dahulu. Kemudian,
beberapa metode pretreatment dibahas dan pengaruhnya terhadap peningkatan etanol dan /
atau produksi biogas dijelaskan. Mereka termasuk penggilingan, iradiasi, microwave,

ledakan uap, ledakan serat amonia (AFEX), COsuperkritis​2 ​dan ledakannya, hidrolisis basa,

pretreatment air panas cair,organosolv proses,

​ oksidasi basah, ozonolisis, encer dan hidrolisis
 asam pekat, dan pra-perlakukan biologis.

Kata kunci: ​Pretreatment, biogas, metana, etanol, lignoselulosa, limbah, biodegradasi.

Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1622

1. Pendahuluan

Produksi bahan limbah adalah bagian yang tak terbantahkan dari masyarakat manusia. Limbah
tersebut diproduksi oleh beberapa sektor termasuk industri, kehutanan, pertanian dan kota. Akumulasi
limbah dan “filosofi pembuangan” menghasilkan beberapa masalah lingkungan, masalah kesehatan dan
bahaya keselamatan, dan mencegah pembangunan berkelanjutan dalam hal pemulihan sumber daya dan
daur ulang bahan limbah. Perspektif yang bertujuan mempromosikan pembangunan berkelanjutan yang
lebih besar dan pemulihan sumber daya telah memengaruhi praktik pengelolaan limbah padat, dan secara
bertahap diimplementasikan melalui pedoman kebijakan di tingkat nasional di sejumlah negara industri
dan bahkan negara berkembang. Pedoman dan arahan untuk mengurangi timbulan limbah dan
mempromosikan pemulihan limbah ditetapkan sesuai dengan “hierarki pengelolaan limbah”, di mana
pencegahan, penggunaan kembali, daur ulang dan pemulihan energi limbah dirancang untuk
meminimalkan jumlah limbah yang tersisa untuk pembuangan akhir yang aman dan aman [1 ]
Etanol sekarang menjadi bahan bakar terbarukan yang paling penting dalam hal volume dan nilai
pasar [2]. Saat ini diproduksi dari bahan berbasis gula dan pati seperti tebu dan jagung. Namun, produksi
etanol generasi kedua yang berasal dari bahan lignoselulosa sekarang sedang diuji di pilot plant [3, 4].
Karya ini membuka jalan untuk mengintegrasikan aliran limbah ke dalam bahan baku untuk pabrik etanol,
dengan meninjau metode yang berbeda untuk pretreatment mereka untuk peningkatan produksi etanol.
Biogas adalah sumber energi lain yang digunakan sebagai bahan bakar mobil, atau untuk produksi
panas atau listrik di berbagai negara [5, 6]. Produksi biogas dari lumpur aktif adalah proses yang lama dan
hampir pasti. Baru-baru ini juga telah diproduksi pada skala industri dari limbah padat kota (MSW) dan
beberapa limbah homogen seperti pupuk kandang. Residu kehutanan dan pertanian serta MSW pada
dasarnya heterogen dalam ukuran, komposisi, struktur, dan properti. Gula, pati, lipid dan protein hadir
dalam MSW adalah di antara bahan yang mudah terdegradasi oleh mikroorganisme, sementara beberapa
fraksi lain seperti lignoselulosa dan keratin lebih sulit untuk didegradasi [7]. Degradasi biologis dari
polimer ini dilakukan oleh beberapa enzim seperti amilase, selulase, protease, keratinase dan lipase,
sebelum fermentasi lebih lanjut atau pencernaan seperti etanol atau biogas. Namun, polimer ini harus
dapat diakses oleh enzim untuk biodegradasi.
Pretreatment dengan cara fisik, kimia atau biologis adalah proses yang diteliti untuk produksi
etanol dari bahan lignoselulosa. Selain itu, ada beberapa upaya untuk melakukan pra-perlakukan bahan
limbah untuk produksi biogas. Pretreatment dapat meningkatkan bio-digestibilitas limbah untuk produksi
etanol dan biogas dan meningkatkan aksesibilitas enzim ke bahan. Ini menghasilkan pengayaan bahan
biodegradable yang sulit, dan meningkatkan hasil etanol atau biogas dari limbah (Gambar 1).
Karya ini berkaitan dengan meninjau proses pretreatment yang digunakan dalam proses etanol dan
biogas dari bahan limbah. Namun, karena limbah terdiri dari berbagai bahan, kami mendedikasikan ulasan
ini hanya untuk bagian lignoselulosa dari bahan limbah untuk mempersingkat diskusi.

2. Lignoselulosa di antara bahan limbah

Selain limbah anorganik, berbagai jenis polimer tersedia dalam berbagai bahan limbah. Bahan
alami seperti pati, lipid, glikogen, elastin, kolagen, keratin, kitin, dan lignoselulosa,
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1623
serta polimer sintetik seperti poliester, polietilen dan polipropilen, adalah beberapa di antaranya.
Dalam karya ini, kami fokus pada pengobatan polimer lignoselulosa yang resisten terhadap
degradasi biologis.
Gambar 1. ​Pretreatment bahan lignoselulosa sebelum produksi bioetanol dan biogas
1) Hidrolisis 2) Fermentasi 3) Distilasi
Lignoselulosa (Gambar 2) terdiri dari sebagian besar limbah padat kota (MSW), residu tanaman,
kotoran hewan, aris kayu, residu hutan , atau tanaman energi khusus [5]. Lignoselulosa terdiri
dari selulosa, hemiselulosa, lignin, ekstraktif, dan beberapa bahan anorganik [8]. Selulosa atau
β-1-4-glukan adalah polimer polisakarida linier glukosa yang terbuat dari unit selobiosa [9, 10].
Rantai selulosa dikemas oleh ikatan hidrogen dalam apa yang disebut 'elementer dan mikrofibril'
[11]. Fibril ini melekat satu sama lain oleh hemiselulosa, polimer amorf dari gula yang berbeda
serta polimer lain seperti pektin, dan ditutupi oleh lignin. Mikrofibril sering dikaitkan dalam
bentuk bundel atau makrofibril [9] (Gambar 2). Struktur khusus dan rumit ini membuat selulosa
resisten terhadap perawatan biologis dan kimia. Selulosa tersedia dalam aliran limbah dalam
bentuk lignoselulosa, atau sebagian dimurnikan dalam bentuk misalnya kertas atau selulosa
murni seperti kapas, atau dicampur dengan bahan lain, misalnya limbah sitrus [12].
Gula yang dominan pada hemiselulosa adalah manosa pada kayu lunak dan xilosa pada kayu
keras dan residu pertanian [13-15]. Selain itu, heteropolimer ini mengandung galaktosa, glukosa,
arabinosa, dan sejumlah kecil rhamnosa, asam glukuronat, asam metil glukuronat, dan asam
galakturonat. Berbeda dengan selulosa, yang kristalin dan kuat, hemiselulosa memiliki struktur
acak, amorf, dan bercabang dengan sedikit resistensi terhadap hidrolisis, dan mereka lebih
mudah terhidrolisis oleh asam ke komponen monomer mereka [8, 10, 16-18].
Lignin adalah molekul yang sangat kompleks yang dibangun dari unit fenilpropana yang
dihubungkan dalam struktur tiga dimensi yang sangat sulit diurai. Lignin adalah komponen yang
paling bandel dari dinding sel tanaman, dan semakin tinggi proporsi lignin, semakin tinggi
resistensi terhadap degradasi kimia dan enzimatik. Secara umum, kayu lunak mengandung lebih
banyak lignin daripada kayu keras dan sebagian besar residu pertanian. Ada ikatan kimia antara
lignin dan hemiselulosa dan bahkan selulosa [19, 20]. Lignin adalah salah satu kelemahan
menggunakan bahan lignoselulosa dalam fermentasi, karena membuat lignoselulosa resisten
terhadap degradasi kimia dan biologis.
bioetanol
Lignoselulosa
Pretreatment
Bahan ​
1) Hidrolisis 2) Asidogenesis 3) Asetogenesis 4) Metanogenesis
Biogas
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1624
3. Parameter yang efektif dalam pretreatment lignoselulosa
Sifat-sifat yang melekat pada bahan lignoselulosa asli membuatnya tahan terhadap serangan
enzimatik. Tujuan pretreatment adalah mengubah sifat-sifat ini untuk menyiapkan bahan untuk
degradasi enzimatik. Karena bahan lignoselulosa sangat rumit, pra-perlakukannya juga tidak
sederhana. Metode dan kondisi pretreatment terbaik sangat tergantung pada jenis lignoselulosa.
Sebagai contoh, pretreatment kulit kayu dari pohon poplar atau daun jagung dengan proses asam
encer tampaknya menjanjikan, tetapi metode ini tidak efektif untuk merawat kulit kayu dari
sweetgum atau batang jagung [21, 22].
Kristalinitas selulosa, luas permukaannya yang dapat diakses dan perlindungan oleh lignin dan
hemiselulosa, derajat polimerisasi selulosa, dan tingkat asetilasi hemiselulosa adalah faktor
utama yang dianggap mempengaruhi laju degradasi biologis lignoselulosa oleh enzim [23].
Faktor-faktor ini akan dibahas secara singkat di bawah ini.
Gambar 2. ​Pengaruh pretreatment pada aksesibilitas enzim pendegradasi
Lignoselulosa,
Limbah Padat Kota (MSW)
3.1. Kristalinitas
Mikrofibril selulosa memiliki daerah kristalin dan amorf, dan kristalinitas diberikan oleh jumlah
relatif kedua daerah ini. Bagian utama selulosa (sekitar 2/3 dari total selulosa) adalah dalam
bentuk kristal [24]. Hal ini menunjukkan bahwa selulase mudah menghidrolisis bagian amorf
lebih mudah diakses dari selulosa, sedangkan enzim ini tidak begitu efektif dalam menurunkan
kurang
OH
CH​2​OH ​
CH​2​OH OH
OH

CH​2​OH
OH

OH ​
OH ​ OH ​
Selulosa
CH​2​OH OH

Bioethanol atau biogas dengan hasil dan produktivitas tinggi dan residu lebih sedikit
Serat selulosa
Macrofibril
Hemicellulose
Bioethanol atau biogas dengan hasil dan produktivitas rendah dan residu tinggi
 Tanpa pretreatment
Lignin
Microfibril ​?

Merendahkan Enzim
​
Pretreatment
Enzim merendahkan
Int. J. Mol. Sci. 2​ 008​, ​9 1​ 625

bagian kristal yang dapat diakses. Oleh karena itu diharapkan selulosa kristalinitas tinggi akan lebih tahan
terhadap hidrolisis enzimatik, dan secara luas diterima bahwa penurunan kristalinitas meningkatkan
kecernaan lignoselulosa [25].
Sebaliknya, ada beberapa penelitian [23, 26] yang menunjukkan kecernaan lebih banyak dari
lignoselulosa kristalin. Konflik dalam laporan ini mungkin muncul, sementara efek dari faktor lain
diabaikan. Grethlein [26] merawat kayu keras dan lunak dengan hidrolisis asam ringan dan menentukan
distribusi ukuran pori mereka. Terlepas dari substrat, laju awal hidrolisis terbukti berkorelasi linier dengan
volume pori substrat yang dapat diakses dengan ukuran selulase. Namun, itu juga menunjukkan bahwa
indeks kristalinitas tidak memiliki hubungan dengan laju hidrolisis. Kim dan Holtzapple [27] menemukan
bahwa derajat kristalinitas brangkasan jagung sedikit meningkat dari 43% menjadi 60% melalui
delignifikasi dengan kalsium hidroksida, yang terkait dengan penghilangan komponen amorf (lignin,
hemicellulose). Namun, peningkatan kristalinitas bahan pretreated tidak berdampak negatif terhadap hasil
hidrolisis enzimatik. Fan ​et al​. [25] mempelajari efek ball milling pada luas permukaan dan kristalinitas
selulosa. Mereka mengamati peningkatan kristalinitas selulosa dengan mengurangi ukuran selulosa
melalui penggilingan. Dipercayai bahwa rekristalisasi selama pembengkakan air dapat meningkatkan
kristalinitas selulosa yang sangat-bola-digiling.
Diskusi ini dapat menunjukkan bahwa kristalinitas merupakan faktor penting dalam kecernaan
lignoselulosa. Namun, itu bukan satu-satunya faktor dalam hidrolisis enzimatik yang efektif dari
bahan-bahan ini, karena sifat heterogen selulosa dan kontribusi komponen lain seperti lignin dan
hemiselulosa.

3.2. Pengaruh luas permukaan yang

dapat diakses

Beberapa penelitian telah menunjukkan korelasi yang baik antara volume pori atau populasi (luas
permukaan yang dapat diakses untuk selulase) dan kecernaan enzimatik dari bahan lignoselulosa. Alasan
utama peningkatan hidrolisis enzimatik dengan menghilangkan lignin dan hemiselulosa terkait dengan
luas permukaan yang dapat diakses selulosa. Efek dari area ini mungkin berkorelasi dengan kristalinitas
atau perlindungan lignin atau presentasi hemiselulosa atau semuanya. Oleh karena itu, banyak peneliti
belum menganggap luas permukaan yang dapat diakses sebagai faktor individu yang mempengaruhi
hidrolisis enzimatik [23]. Bagian pertama dari hidrolisis enzimatik terdiri dari [23, 28]: (I) adsorpsi enzim
selulase dari fase cair ke permukaan selulosa (padatan), (II) biodegradasi selulosa menjadi gula sederhana,
terutama selobiosa dan oligomer, dan ( III) desorpsi selulase ke fase cair. Dengan demikian, reaksi adalah
reaksi katalitik heterogen dan kontak fisik langsung antara molekul enzim selulitik dan selulosa
merupakan prasyarat untuk hidrolisis enzimatik. Akibatnya, area permukaan yang dapat diakses dalam
bahan lignoselulosa dan interaksinya dengan enzim dapat membatasi hidrolisis enzimatik [25, 28, 29].
Bahan lignoselulosa memiliki dua jenis luas permukaan: eksternal dan internal. Luas permukaan
eksternal terkait dengan ukuran dan bentuk partikel, sedangkan luas permukaan internal tergantung pada
struktur kapiler serat selulosa. Biasanya, serat selulosa kering memiliki ukuran kecil, sekitar 15 hingga 40
μm, dan oleh karena itu serat ini memiliki luas permukaan spesifik eksternal yang besar, misalnya 0,6-1,6
m​2​/ g. Namun, luas permukaan internal serat selulosa kering lebih kecil dari luas permukaan eksternal.
Pembengkakan lignoselulosa dengan air dan pelarut polar menciptakan permukaan internal yang sangat
besar
. J. Mol. Sci. 2​ 008​, ​9 1​ 626

area [25]. Pengeringan serat dapat menyebabkan kolapsnya yang ireversibel dan menyusutnya kapiler
sehingga mengurangi area permukaan yang dapat diakses. Kehadiran air memiliki efek signifikan pada
luas permukaan spesifik selulosa alami. Luas permukaan spesifik diketahui meningkat dengan
pembasahan. Air diketahui meningkatkan kristalinitas selulosa, karena kristalisasi ulang selulosa yang
sangat amorf.
Perubahan luas permukaan yang dapat diakses selama hidrolisis enzimatik. Laju hidrolisis
biasanya sangat tinggi pada awalnya, dan kemudian menurun pada tahap selanjutnya. Luas permukaan
spesifik, atau luas permukaan yang dapat diakses per gram media (m​2​/ g), meningkat tajam selama tahap
awal. Namun, itu menunjukkan bahwa area permukaan selulosa bukan merupakan faktor pembatas utama
untuk hidrolisis selulosa murni [25]. Dengan kata lain, perlambatan hidrolisis pada tahap selanjutnya
bukan karena kurangnya luas permukaan yang terkait, tetapi karena kesulitan dalam hidrolisis bagian
kristal selulosa. Oleh karena itu, orang dapat mengharapkan tingkat hidrolisis yang lebih rendah setelah
hidrolisis selulosa amorf [25].

3.3. Efek lignin

Selulosa dan hemiselulosa disemen bersama oleh lignin. Lignin bertanggung jawab untuk
integritas, kekakuan struktural, dan pencegahan pembengkakan lignoselulosa. Dengan demikian,
kandungan dan distribusi lignin merupakan faktor yang paling dikenal yang bertanggung jawab untuk
pemulihan kembali bahan lignoselulosa menjadi degradasi enzimatik dengan membatasi aksesibilitas
enzim; oleh karena itu proses delignifikasi dapat meningkatkan laju dan luasnya hidrolisis enzimatik.
Namun, dalam sebagian besar metode delignifikasi, bagian dari hemiselulosa juga terhidrolisis, dan
karenanya delignifikasi tidak menunjukkan efek tunggal lignin [23]. Lignin terlarut karena misalnya
pretreatment lignoselulosa juga merupakan inhibitor untuk selulase, xilanase, dan glukosidase. Berbagai
selulase berbeda dalam penghambatannya oleh lignin, sedangkan xilanase dan glukosidase kurang
dipengaruhi oleh lignin [30].
Komposisi dan distribusi lignin mungkin juga sama pentingnya dengan konsentrasi lignin.
Beberapa kayu lunak lebih bandel daripada kayu keras. Ini mungkin terkait dengan jenis lignin, karena
kayu lunak terutama memiliki guaiacyl lignin sementara kayu keras memiliki campuran guaiacyl dan
syringyl lignin. Telah disarankan bahwa guaiacyl lignin membatasi pembengkakan serat dan aksesibilitas
enzim lebih dari syringyl lignin [31].
Dalam beberapa penyelidikan (misalnya [32]), peran penghambatan lignin telah dikaitkan dengan
efeknya pada pembengkakan selulosa. Di sisi lain, pembengkakan dapat dicapai tanpa menghilangkan
lignin, dan itu tidak meningkatkan ukuran pori atau tingkat hidrolisis. Namun, ditunjukkan bahwa lignin
masih memiliki efek signifikan pada kecernaan enzimatik, bahkan dalam kasus di mana lignin tidak lagi
mencegah pembengkakan serat. Alasan peningkatan laju hidrolisis dengan menghilangkan lignin mungkin
terkait dengan aksesibilitas permukaan yang lebih baik untuk enzim dengan meningkatkan populasi
pori-pori setelah mengeluarkan lignin.

3.4. Efek hemiselulosa

Hemiselulosa adalah penghalang fisik yang mengelilingi serat selulosa dan dapat melindungi
selulosa dari serangan enzimatik. Banyak metode pretreatment terbukti mampu menghilangkan
hemiselulosa dan akibatnya meningkatkan hidrolisis enzimatik. Tetapi sebagian besar dari proses ini
sebagian menghilangkan lignin juga, jadi peningkatan itu bukan hasil dari penghapusan hemiselulosa saja
[23]. Permukaan yang dapat diakses untuk serangan enzimatik mungkin terkait dengan kristalinitas
selulosa, lignin, dan konten hemiselulosa. Hemiselulosa dapat dihidrolisis oleh hidrolisis enzimatik oleh
hemiselulase.
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1627
Namun, pretreatment yang cocok, misalnya perawatan asam encer yang menghilangkan
hemiselulosa, menghilangkan atau mengurangi kebutuhan untuk penggunaan campuran enzim
hemiselulase untuk menurunkan biomassa [33].
4. Metode pretreatment untuk limbah lignoselulosa
Untuk mencapai degradasi enzimatik dalam produksi etanol oleh hidrolisis enzimatik atau untuk
meningkatkan pembentukan biogas, diperlukan proses pretreatment. Pretreatment yang efektif
dan ekonomis harus memenuhi persyaratan berikut: (a) produksi serat selulosa reaktif untuk
serangan enzimatik, (b) menghindari penghancuran hemiselulosa dan selulosa, (c) menghindari
pembentukan inhibitor yang mungkin untuk enzim hidrolitik dan fermentasi mikroorganisme, (d)
) meminimalkan permintaan energi, (e) mengurangi biaya pengurangan ukuran untuk bahan
baku, (f) mengurangi biaya bahan untuk pembangunan reaktor pretreatment, (g) memproduksi
lebih sedikit residu, (h) konsumsi sedikit atau tidak ada bahan kimia dan menggunakan bahan
kimia murah.
Beberapa metode telah diperkenalkan untuk pretreatment bahan lignoselulosa sebelum hidrolisis
atau pencernaan enzimatik. Metode-metode ini diklasifikasikan ke dalam "pretreatment fisik",
"pretreatment fisikokimia", "pretreatment kimia", dan "pretreatment biologis" [23, 30, 34- 56].
Metode pra-perlakukan bahan lignoselulosa diringkas dalam Tabel 1. Pada bagian ini, kami
meninjau metode ini, meskipun tidak semuanya belum cukup berkembang sehingga layak untuk
aplikasi dalam proses skala besar.
Tabel 1. ​Proses pretreatment dari bahan lignoselulosa
Metode pretreatment
Prosesdipelajari
aplikasi yang
Perubahan yang mungkin dalam biomassa
Catatan pentingdipilih
Referensi yang
Pretreatments fisik
Penggilingan:
Etanol
[57, 58, 63] - ​Penggilingan bolaPenggilingan -​ d​ ua rol -​ ​Penggilingan paluPenggilingan palu ​-- ​Penggilingan
koloid ​- ​Energi getaran penggilingan i​ radiasi:
Etanol dan
[74, 82-85] - ​Gamma-ray
biogas ​iradiasi -​ ​Elektron-beam
iradiasi -​ ​Microwave iradiasi L
​ ainnya:
Etanol dan
[101, 153] - ​hidrotermal
biogas- ​tekanantinggi
uap ​- ​Ekspansi -​ ​Extrusion ​- ​Pirolisis
- Kebanyakan metode ini sangat berenergi - - Menambah
permukaan yang mudah diakses
- Sebagian besar area dan ukuran pori
tidak dapat menghilangkan - Mengurangi
lignin selulosa
- Lebih disukai bukan kristalinitas
untuk menggunakan metode ini - Mengurangi
tingkat industri
polimerisasi aplikasi
-Tidak bahan kimia umumnya diperlukan untuk metode ini
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1628
Tabel 1. Lanjut.
Metode pretreatmentPretreatment
Prosesdipelajari
aplikasi yang
Perubahan yang mungkin dalam biomassa
Catatan pentingdipilih
Referensi yang
 kimia dan fisikokimia
Ledakan:
[15, 37, 43, - ​Ledakan uap
46, 47, 50- - ​Serat amoniak
54, 93, 95, ​ledakan (AFEX)
100, 118- - ​CO​2 ​ledakan

120, 156] - ​SO​2 ​ledakan ​Alkali: ​- ​Sodium hydroxide ​- ​Ammonia -​ ​Ammonium Sulfite
Etanol dan biogas
Etanol dan biogas
- Peningkatan luas permukaan yang dapat diakses - Delignifikasi sebagian atau hampir lengkap - Penurunan
kristalinitas selulosa - Penurunan kristalinitas selulosa - Penurunan derajat polimerisasi - hidrolisis parsial atau
lengkap dari hemiselulosa
[132, 127]
acid: ​- ​asam sulfat ​- ​asam klorida -​ ​asam fosfat
Etanol dan biogas
[3, 4, 21, 36]
Gas: ​- ​Klorin dioksida ​- ​Nitrogen dioksida -​ S​ ulfur dioksida
- Metode-metode ini adalah yang paling efektif dan termasuk Etanol
proses yang paling menjanjikan dan biogas
untuk aplikasi industri - Biasanya laju perawatan cepat - Biasanya membutuhkan kondisi yang keras - Ada bahan
kimia persyaratan
[56]
Oksidator: ​- ​Hidrogen peroksida -​ ​oksidasi Basah -​ ​Ozon
Etanol dan biogas
[151, 154, 156, 157, 159, 162, 164-168]
ekstraksi pelarut dari lignin: ​- ​Ethanol-air
ekstraksi -​ ​Benzene-air
ekstraksi -​ ​Ethylene glycol
ekstraksi -​ ​Butanol-air
ekstraksi -​ ​Pembengkakan agen
Etanol [121]
pretreatments Biologi
- kebutuhan energi rendah - delignifikasi
- Tidak ada bahan kimia - Penguranganderajat
persyaratan ​Jamur dan
Ethanol
polimerisasi
-lingkungan Mild ​actinomycetes
danbiogas
selulosa
kondisi- hidrolisis parsial
-hemiselulosa pengobatan yang sangat rendah
Tingkat- Tidak mempertimbangkan untuk aplikasi komersial
[158, 178-180]
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1629
4.1. Pretreatment fisik
Pretreatment

fisik dapat meningkatkan luas permukaan yang dapat diakses dan ukuran pori-pori, dan
mengurangi kristalinitas dan derajat polimerisasi selulosa. Berbagai jenis proses fisik seperti penggilingan
(mis. Penggilingan bola, penggilingan dua gulungan, penggilingan palu, penggilingan koloid, dan
penggilingan energi vibro) dan iradiasi (misalnya dengan sinar gamma, berkas elektron atau gelombang
mikro) dapat digunakan untuk meningkatkan hidrolisis enzimatik atau biodegradabilitas bahan limbah
lignoselulosa.

4.1.1.
Penggilingan

Penggilingan dapat digunakan untuk mengubah ultrastruktur yang melekat dari lignoselulosa dan
tingkat kristalinitas, dan akibatnya membuatnya lebih dapat menerima selulase [57]. Penggilingan dan
pengurangan ukuran telah diterapkan sebelum hidrolisis enzimatik, atau bahkan proses pretreatment
lainnya dengan asam encer, uap atau amonia, pada beberapa bahan limbah lignoselulosa, MSW dan
lumpur aktif [57-60]. Di antara proses penggilingan, pabrik koloid, fibrillator dan pelarut hanya cocok
untuk bahan basah, misalnya kertas basah dari pemisahan limbah domestik atau pulp kertas, sedangkan
ekstruder, pabrik rol, pabrik kriogenik dan pabrik hammer biasanya digunakan untuk bahan kering. Ball
mill dapat digunakan untuk bahan kering atau basah. Penggilingan dengan palu penggilingan kertas bekas
adalah metode yang menguntungkan [61].
Penggilingan dapat meningkatkan kerentanan terhadap hidrolisis enzimatik dengan mengurangi
ukuran bahan [62], dan tingkat kristalinitas lignoselulosa [25], yang meningkatkan degradasi enzimatik
dari bahan-bahan ini menjadi etanol atau biogas. Tanpa pretreatment, brangkasan jagung dengan ukuran
53-75 μm adalah 1,5 kali lebih produktif daripada partikel brangkasan jagung yang lebih besar 425-710
μm [62]. Sidiras dan Koukios [63] menunjukkan bahwa karena pengurangan kristalinitas dengan
penggilingan bola, sakarifikasi lebih dari 50% selulosa jerami dengan degradasi glukosa minimal menjadi
mungkin pada kondisi hidrolitik ringan. Indeks kristalinitas Solka Floc oleh ball milling berubah dari 74,2
menjadi 4,9% [25]. Proses penggilingan telah dipelajari sebelum dan dalam kombinasi dengan hidrolisis
enzimatik, di mana tindakan mekanis, transportasi massa dan hidrolisis enzimatik dilakukan secara
bersamaan untuk meningkatkan proses hidrolisis. Bioreaktor pabrik gesekan [64] dan reaktor transfer
massa intensif termasuk partikel feromagnetik dan dua induktor feromagnetik [65] adalah dua contoh dari
proses ini.
Mais ​et al.​ [57] menggunakan reaktor ball mill untuk pretreatment dan hidrolisis α-cellulose dan

SO​2​- impregnasi
​ serpihan kayu cemara Douglas yang meledak. Mereka melaporkan jumlah manik-manik
bola sebagai parameter efektif untuk meningkatkan hidrolisis enzimatik selulosa-a. Mereka memperoleh
hidrolisis hingga 100% dari substrat lignoselulosa dengan muatan enzim yang relatif rendah (10 unit
kertas saring / g selulosa) ketika bahan-bahan tersebut diolah terlebih dahulu dengan pabrik. Jim dan Chen
[66] mempelajari penggilingan prima, yaitu dalam urutan 60 μm, dari jerami padi yang meledak. Jerami
padi dipotong 5-8 cm dan uap meledak pada 180, 195, 210 dan 220 ° C selama 4-5 menit secara terpisah
oleh uap jenuh. Bahan yang diolah dengan uap kemudian ditumbuk menggunakan disintegrator vegetasi,
dan dimasukkan ke dalam penggilingan prima menggunakan alas jet fluidized-bed. Hidrolisis enzimatik
dari jerami bubuk prima memperoleh tingkat hidrolitik tertinggi dan menghasilkan gula pereduksi yang
sangat tinggi.
Terlihat bahwa partikel yang lebih kecil lebih baik dicerna dalam produksi biogas, tetapi
pengurangan ukuran akan lebih efisien jika dikombinasikan dengan pretreatment lain. Sebuah studi untuk
peningkatan
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1630

produksi biogas dari jerami menunjukkan bahwa kombinasi perlakuan penggilingan, pemanasan, dan
amonia (2%) menghasilkan hasil biogas tertinggi [59]. Dalam penelitian lain, penggilingan limbah padat
kota dari 2,2 ke 1,1 mm tidak berpengaruh pada pencernaan mesofilik, tetapi meningkatkan pencernaan
termofilik sebesar 14% [6]. Pekerjaan serupa pada lumpur yang diaktifkan limbah menunjukkan
peningkatan besar (16-110%) dalam penghancuran padatan volatil sebagai efek dari geser mekanis [60].
Namun, efek ini tergantung pada lumpur.
Penggilingan bola melibatkan biaya energi yang signifikan. Disarankan untuk menggunakan
reaktor tangki berpengaduk kontinyu (CSTR) yang terletak antara ball mill dan kartrid serat berlubang,
untuk mengurangi biaya energi [67]. Kelemahan lain dari penggilingan adalah ketidakmampuannya untuk
menghilangkan lignin yang membatasi akses enzim ke selulosa dan menghambat selulase [30, 68].

4.1.2. Iradiasi

Iradiasi oleh misalnya sinar gamma, berkas elektron dan gelombang mikro dapat meningkatkan
hidrolisis enzimatik dari lignoselulosa. Kombinasi radiasi dan metode lain seperti pengobatan asam dapat
lebih mempercepat hidrolisis enzimatik [69, 70]. Iradiasi telah meningkatkan degradasi enzim selulosa
menjadi glukosa. Namun, pra-iradiasi lebih efektif di udara daripada dalam larutan asam [70]. Kumakura
dan Kaetsu [71] mempelajari efek iradiasi untuk pretreatment bagasse sebelum hidrolisis enzimatiknya.
Ampas tebu yang diperlakukan sebelumnya menghasilkan dua kali lipat glukosa oleh hidrolisis
dibandingkan dengan yang tidak diobati. Komponen selulosa dari bahan lignoselulosa dapat terdegradasi
dengan iradiasi menjadi serat yang rapuh dan oligosakarida dengan berat molekul rendah dan bahkan
selobiosa [71]. Ini bisa disebabkan oleh disosiasi preferensi ikatan glukosida rantai molekul selulosa oleh
iradiasi di hadapan lignin. Iradiasi yang sangat tinggi, di atas 100 MR, dapat menyebabkan dekomposisi
oligosakarida dan struktur cincin glukosa [71]. Hidrolisis enzimatik kertas saring tanpa lignin tidak
diperbaiki dengan perlakuan awal iradiasi. Selain itu, hidrolisis enzimatik dari surat kabar dengan
sejumlah kecil lignin sedikit ditingkatkan oleh iradiasi. Oleh karena itu, efek radiasi harus dikorelasikan
dengan keberadaan lignin serta struktur seperti kristalinitas dan kepadatan [71-74]. Namun, metode
iradiasi mahal dan mengalami kesulitan dalam aplikasi industri.
Ultrasonografi adalah cara yang digunakan untuk pretreatment dalam produksi biogas. Ini dapat
digunakan untuk disintegrasi lumpur yang diaktifkan limbah dan limbah akuakultur [75-78]. Dalam
metode ini, flocculi lumpur hancur dan dinding sel bakteri terganggu [78]. Beberapa faktor seperti
kepadatan dan intensitas ultrasonik, pH lumpur dan konsentrasi lumpur berdampak pada disintegrasi [79].
Selain sonikasi, metode lain seperti kavitasi, pembekuan berulang dan defreezing, dan pemanasan pada
suhu rendah misalnya 60-170 ° C selama 5-30 menit atau suhu tinggi 180-200 ° C selama 10 detik, dapat
meningkatkan gangguan sel dan lysing [80, 81]. Metode fisik lainnya seperti γ-iradiasi [82], gelombang
mikro [83-85] dan pulsa listrik [86] juga telah digunakan untuk meningkatkan pembentukan biogas dari
bahan limbah.

4.2.fisiko-kimia

PretreatmentPretreatment yang menggabungkan proses kimia dan fisik disebut sebagai proses
fisiko-kimia [87]. Kami meninjau proses paling penting dari grup ini di bagian ini.
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1631

4.2.1. Ledakan uap (autohidrolisis)

Di antara proses fisika-kimia, mengukus dengan atau tanpa ledakan (autohidrolisis) telah
menerima perhatian besar dalam pretreatment untuk produksi etanol dan biogas. Pretreatment
menghilangkan sebagian besar hemiselulosa, sehingga meningkatkan pencernaan enzimatik. Dalam
ledakan uap, tekanan tiba-tiba berkurang dan membuat bahan mengalami dekompresi eksplosif. Tekanan
tinggi dan akibatnya suhu tinggi, biasanya antara 160 dan 260 ° C, selama beberapa detik (misalnya 30
detik) hingga beberapa menit (misalnya 20 menit), digunakan dalam ledakan uap [49, 88-99]. Proses
ledakan uap didokumentasikan dengan baik dan diuji dalam proses laboratorium dan uji coba oleh
beberapa kelompok penelitian dan perusahaan. Biaya energinya relatif moderat, dan memenuhi semua
persyaratan proses pra-perlakukan.
Proses ledakan uap didemonstrasikan pada skala komersial di pabrik Masonite [24]. Peningkatan
suhu hingga tingkat tertentu dapat secara efektif melepaskan gula hemiselulosa. Namun, kehilangan gula
terus meningkat dengan semakin meningkatkan suhu, menghasilkan penurunan pemulihan gula total
[100]. Ruiz ​et al.​ [100] mempelajari ledakan uap untuk pretreatment batang bunga matahari sebelum
hidrolisis enzimatik pada suhu di kisaran 180-230 ° C. Hasil glukosa tertinggi diperoleh pada batang
bunga matahari pretreated dengan uap pada 220 ° C, sedangkan pemulihan hemiselulosa tertinggi
diperoleh pada suhu 210 ° C sebelum perlakuan. Menggunakan proses ledakan uap untuk
pepatreatmentpoplar (​Populus nigrab​ iomassa), pada 210 ° C dan 4 menit, menghasilkan pemulihan
selulosa di atas 95%, menghasilkan hidrolisis menghasilkan sekitar 60%, dan 41% meningkatkan xilosa
dalam fraksi cair. Selain itu, partikel besar dapat digunakan untuk biomassa poplar, karena tidak ada efek
signifikan dari ukuran partikel pada hidrolisis enzimatik yang diamati [101].
Ballesteros ​et al​. [92] menerapkan ledakan uap untuk produksi etanol dari beberapa bahan
lignoselulosa dengan ​Kluyveromyces marxianus.​ Keripik poplar dan kayu putih diperlakukan pada 210 ° C
selama 4 menit; jerami gandum pada suhu 190 ° C selama 8 menit; ​Brassica carinata R ​ esidupada 210 ° C
pada 8 menit; dan bagasse sorgum manis pada 210 ° C selama 2 menit. Ledakan uap secara ekstensif
melarutkan gula hemiselulosa dan menurunkan 75-90% kandungan xilosa, tergantung pada substrat.
Dimungkinkan untuk menggabungkan pengukusan dan perawatan mekanis untuk secara efektif
mengganggu struktur selulosa. Beberapa teknologi kombinasi telah dikembangkan [24, 102, 103].
Ledakan uap dan perlakuan awal termal banyak diselidiki untuk meningkatkan produksi biogas
dari bahan khusus berbeda seperti residu hutan [104] dan limbah misalnya lumpur aktif [105-108], kotoran
ternak [109] atau limbah padat kota [110]. Namun, ada beberapa investigasi yang menggabungkan
pretreatment "termal" dengan penambahan basa seperti NaOH, yang biasanya memberikan hasil yang
lebih baik daripada pretreatment termal atau kimia individu (misalnya [111-113]).
Perhatian khusus harus diambil dalam memilih kondisi ledakan uap untuk menghindari degradasi
yang berlebihan dari sifat fisik dan kimia selulosa. Dalam kondisi yang sangat keras, kecernaan enzim
lignoselulosa yang lebih rendah juga dapat diamati setelah ledakan uap. Sebagai contoh, pembentukan zat
kondensasi antara polimer dalam ledakan uap jerami gandum dapat menyebabkan residu yang lebih
bandel [114].

4.2.2. Ledakan uap dengan penambahan SO​2

Steam pretreatment dapat dilakukan dengan penambahan sulfur dioksida (SO​2​), sementara tujuan

penambahan bahan
​ kimia ini adalah untuk meningkatkan pemulihan fraksi selulosa dan hemiselulosa.
Perawatan bisa
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1632

dilakukan oleh 1-4% SO​2 ​(b / b substrat) pada suhu tinggi, misalnya 160-230 ° C, untuk periode misalnya

10 menit [53]. Eklund ​et al.​ [53] mempelajari pretreatment uap willow dengan penambahan SO​2 ​atau

H​2​SO​4 ​untuk memulihkan selulosa dan hemiselulosa. Hasil glukosa maksimum, 95%, diperoleh
​ ketika

pohon willow diperlakukan dengan 1% SO​2 ​pada 200 ° C. Namun, hasil pemulihan xilosa oleh
​ SO​2 ​tidak
setinggi pretreatment dengan asam sulfat encer.

4.2.3. Ammonia fiber ledakan (AFEX)

AFEX adalah salah satu proses pra-perlakukan fisiko-kimia alkali. Di sini biomassa terpapar
dengan amonia cair pada suhu yang relatif tinggi (misalnya 90-100 ° C) untuk jangka waktu misalnya 30
menit, diikuti dengan pengurangan tekanan segera. Parameter efektif dalam proses AFEX adalah
pemuatan amonia, suhu, pemuatan air, tekanan blowdown, waktu, dan jumlah perlakuan [46]. Proses
AFEX hanya menghasilkan bahan padat pra-perawatan, sementara beberapa pra-perlakuan lainnya seperti
ledakan uap menghasilkan bubur yang dapat dipisahkan dalam fraksi padat dan cair [115].
Proses AFEX dapat memodifikasi atau secara efektif mengurangi fraksi lignin dari bahan
lignoselulosa, sedangkan fraksi hemiselulosa dan selulosa dapat tetap utuh. Pada kondisi optimal, AFEX
dapat secara signifikan meningkatkan hidrolisis enzimatik. Kondisi optimal untuk AFEX tergantung pada
bahan lignoselulosa. Sebagai contoh, kondisi optimal dalam pretreatment switchgrass dilaporkan sekitar
100 ° C, pemuatan amonia 1: 1 kg amonia per kg bahan kering, dan waktu retensi 5 menit [43]. Salah satu
keuntungan utama pretreatment AFEX adalah tidak terbentuknya beberapa jenis produk samping
penghambatan, yang diproduksi selama metode pretreatment lainnya, seperti furan dalam pra-asam encer
dan pretreatment ledakan uap. Namun, bagian fragmen fenolik dari lignin dan ekstraktif dinding sel
lainnya mungkin tetap pada permukaan selulosa. Oleh karena itu, mencuci dengan air mungkin diperlukan
untuk menghilangkan bagian dari komponen penghambat ini, meskipun meningkatkan jumlah air limbah
dari proses [116]. Namun, ada beberapa kelemahan dalam menggunakan proses AFEX dibandingkan
dengan beberapa proses lainnya. AFEX lebih efektif pada biomassa yang mengandung lebih sedikit lignin,
dan pretreatment AFEX tidak melarutkan hemiselulosa secara signifikan dibandingkan dengan proses
pretreatment lain seperti pretreatment asam encer. Selanjutnya, amonia harus didaur ulang setelah
pretreatment untuk mengurangi biaya dan melindungi lingkungan [23, 28, 117].

4.2.4.CO​2 ​Ledakan

Karbon dioksida superkritis telah dianggap sebagai pelarut ekstraksi untuk tujuan non-ekstraktif,
karena beberapa keuntungan seperti ketersediaan dengan biaya yang relatif rendah, tidak beracun, tidak
mudah terbakar, pemulihan mudah setelah ekstraksi, dan penerimaan lingkungan [118] . Karbon dioksida
superkritis menampilkan sifat transfer massa seperti gas, selain daya solvasi seperti cairan [119]. Telah

ditunjukkan bahwa dengan adanya air, COsuperkritis secara​2 ​efisien dapat meningkatkanenzim
kecernaanaspen (kayu keras) dan pinus kuning selatan (kayu lunak) [120]. Delignifikasi dengan karbon
dioksida pada tekanan tinggi dapat ditingkatkan dengan pelarut bersama seperti etanol-air atau asam
asetat-air, dan secara efisien dapat meningkatkan penghapusan lignin [121]. Molekul karbon dioksida
harus sebanding ukurannya dengan molekul air dan amonia, dan harus mampu menembus pori-pori kecil
yang dapat diakses oleh molekul air dan amonia.
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1633

Pretreatment simultan olehCO​2 ​ledakandan hidrolisis enzimatik dalam satu langkah juga menarik
​
[118, 122]. Park ​et al.​ [122] memperoleh hasil glukosa 100%, sementara menerapkan COsuperkritis​2 dan
​
hidrolisis enzimatik selulosa secara bersamaan. Selulase dipertahankan pada tekanan hingga 160 bar
selama 90 menit pada 50 ° C di bawah karbon dioksida superkritis. Mereka menemukan bahwa konstanta
kinetik hidrolisis dalam kondisi superkritis meningkat, dibandingkan dengan yang di bawah kondisi

atmosfer. Zheng dan Tsao [118] menunjukkan enzim selulase menjadi stabil dalam COsuperkritis​2 ​pada
suhu 35 ° C. Hanya sedikit kerusakan yang mengindikasikan hilangnya aktivitas sekitar 10% setelah 5
hari.
Pretreatment ledakan bahan selulosa oleh karbon dioksida superkritis dipelajari oleh Zheng ​et al.​
[119]. Setelah pelepasan tekanan karbon dioksida yang eksplosif, gangguan pada struktur selulosa harus
meningkatkan area permukaan yang dapat diakses dari substrat untuk hidrolisis enzimatik. Suhu
merupakan faktor penting dalam hidrolisis selulosa. Eksperimen dapat dilakukan pada suhu superkritis
atau subkritis (masing-masing di atas dan di bawah 31,1 ° C). Hasil eksperimental menunjukkan bahwa
karbon dioksida subkritis kurang efektif daripada superkritis [119]. Alasan keterbelakangan seperti itu
dalam karbon dioksida subkritis cenderung difusi rendah dalam karbon dioksida cair. Dibandingkan
dengan suhu superkritis, molekul karbon dioksida pada kondisi subkritis merasa relatif sulit untuk
menembus pori-pori dalam struktur selulosa, dan kemudian mengganggu mereka ketika tekanan karbon
dioksida dilepaskan secara tiba-tiba. Tekanan karbon dioksida yang lebih tinggi menghasilkan hasil
glukosa yang lebih tinggi, yang menunjukkan bahwa tekanan yang lebih tinggi diinginkan untuk penetrasi
molekul karbon dioksida yang lebih cepat ke dalam pori-pori selulosa [119]. Terlepas dari keunggulan ini,

proses COsuperkritis​2 ​mungkin terlalu mahal untuk aplikasi industri.

4.2.5. Pretreatment air panas cair

Memasak bahan lignoselulosa dalam air panas cair (LHW) adalah salah satu metode pretreatment
hidrotermal yang diterapkan untuk pretreatment bahan lignoselulosa sejak beberapa dekade lalu di
misalnya industri pulp. Air di bawah tekanan tinggi dapat menembus ke dalam biomassa, menghidrasi
selulosa, dan menghilangkan hemiselulosa dan bagian dari lignin. Keuntungan utama adalah tidak ada
penambahan bahan kimia dan tidak ada persyaratan bahan tahan korosi untuk reaktor hidrolisis dalam
proses ini. Pengurangan ukuran bahan baku adalah operasi yang sangat membutuhkan energi untuk
sebagian besar bahan pada skala komersial; mungkin tidak perlu untuk pengurangan ukuran pra-perawatan
LHW. Selain itu, proses ini memiliki kebutuhan bahan kimia yang jauh lebih rendah untuk netralisasi
hidrolisat yang dihasilkan, dan menghasilkan jumlah residu netralisasi yang lebih rendah dibandingkan
dengan banyak proses seperti pretreatment asam encer. Karbohidrat hemiselulosa dilarutkan sebagai
oligosakarida yang larut dalam cairan dan dapat dipisahkan dari fraksi selulosa dan lignin yang tidak larut.
LHW dapat memperbesar area permukaan selulosa yang mudah diakses dan rentan dan membuatnya lebih
mudah diakses oleh enzim hidrolitik [62].
Pretreatment dengan uap dan LHW keduanya pretreatment hidrotermal. Pemulihan pentosan yang
lebih tinggi dan pembentukan komponen penghambat yang lebih rendah adalah keunggulan utama
pretreatment LHW dibandingkan dengan ledakan uap. Sebagai contoh, pengolahan serat jagung
tanpa-starched dengan air panas pada 160 ° C selama 20 menit melarutkan 75% xilan [123]. Pada suhu
yang lebih tinggi, misalnya 220 ° C, LHW dapat melarutkan hemiselulosa sepenuhnya dan menghilangkan
sebagian lignin dalam waktu 2 menit tanpa bahan kimia yang digunakan [124].
Penghapusan xilan melalui reaktor perkolasi, atau dengan penambahan basa (menyesuaikan pH)
selama proses, telah disarankan untuk mengurangi pembentukan inhibitor seperti furfural dan degradasi
xylose
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1634

[98]. PH, suhu pemrosesan, dan waktu harus dikontrol untuk mengoptimalkan kecernaan enzimatik oleh
pretreatment LHW [23, 115, 125, 126]. Kondisi yang dioptimalkan untuk pretreatment LHW dari
brangkasan jagung dilaporkan 190 ° C selama 15 menit, di mana 90% dari konversi selulosa diamati oleh
hidrolisis enzimatik berikutnya [125]. Pretreatment LHW pada 160 ° C dan pH di atas 4.0 dapat
melarutkan 50% serat dari serat jagung dalam 20 menit [126]. Hasil penelitian menunjukkan bahwa
pretreatment memungkinkan hidrolisis enzimatik lengkap berikutnya dari polisakarida yang tersisa,
terutama selulosa, ke monomer yang sesuai. Pretreatment LHW menghasilkan 80% oligosakarida larut
dan 20% monosakarida dengan kurang dari 1% dari karbohidrat yang hilang akibat produk degradasi.
Laser ​et al​. [98] membandingkan kinerja LHW dan pretreatment uap dari ampas tebu, yang
kemudian digunakan dalam produksi etanol oleh SSF. Mereka melakukan perawatan dalam reaktor 25-l
pada 170-230 ° C selama 1-46 menit dengan konsentrasi padatan 1% hingga 8%. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa kedua metode dapat secara signifikan meningkatkan hidrolisis; Namun, LHW
menghasilkan pemulihan xilan yang jauh lebih baik dibandingkan dengan pretreatment uap. Dalam
kondisi optimal, hasil pretreatment LHW sebanding dengan proses pretreatment asam encer, selain tidak
memiliki persyaratan untuk asam atau produksi limbah netralisasi. Mereka juga menunjukkan bahwa
proses tersebut disukai suhu tinggi (di atas 220 ° C), waktu tinggal pendek (kurang dari 2 menit) dan
konsentrasi padatan rendah (kurang dari 5%).
Pemrosesan air panas terutama menghilangkan hemiselulosa. Proses dua tahap yang
menggabungkan air panas untuk menghilangkan hemiselulosa dan pengobatan untuk delignifikasi
(misalnya pengobatan amonia) juga disarankan untuk perbaikan hidrolisis enzimatik lebih lanjut [27, 127].
4.2.6. Pretreatmentmikro-kimia
Pretreatment

gelombanggelombang mikro / kimia menghasilkan pretreatment yang lebih efektif daripada

pretreatment bahan kimia pemanas konvensional dengan mempercepat reaksi selama proses pretreatment
[128, 129]. Zhu ​et al.​ [129] meneliti tiga proses microwave / kimia untuk pretreatment jerami padi -

microwave / alkali, microwave / asam / alkali dan microwave / asam / alkali / H​2​O2​ ​- untukenzimatiknya
hidrolisisdan untuk pemulihan xilosa dari cairan pretreatment. Mereka menemukan bahwa xilosa tidak
dapat dipulihkan selama proses pretreatment microwave / alkali, tetapi dapat dipulihkan sebagai xilosa

kristal selama microwave / asam / alkali dan microwave / asam / alkali / H​2​O​2 ​pretreatment.enzimatik
Hidrolisisdari jerami padi yang diberi perlakuan awal menunjukkan bahwa perlakuan awal dengan

microwave / asam / alkali / H​2​O​2 ​memiliki laju

​ hidrolisis dan kadar glukosa tertinggi dalam hidrolisat.

4.3. Pretreatment kimia

4.3.1. Hidrolisis

alkali Pretreatment alkali mengacu pada aplikasi larutan alkali seperti NaOH, Ca (OH)​2 ​(kapur)

atau amonia
​ untuk menghilangkan lignin dan bagian dari hemiselulosa, dan secara efisien meningkatkan
aksesibilitas enzim ke selulosa. Pretreatment alkali dapat menghasilkan peningkatan tajam dalam
sakarifikasi, dengan hasil berlipat ganda (misalnya [130]). Pretreatment dapat dilakukan pada suhu rendah
tetapi dengan waktu yang relatif lama dan konsentrasi pangkalan yang tinggi. Misalnya, ketika jerami
kedelai direndam di
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1635

cairan amonia (10%) selama 24 jam pada suhu kamar, hemiselulosa dan lignin masing-masing menurun
sebesar 41,45% dan 30,16% [131]. Namun, pretreatment basa terbukti lebih efektif pada residu pertanian
daripada pada bahan kayu.

Vaccarino ​et al.​ [132] mempelajari efek dari SO​2,​Na​2​CO​3,​dan pretreatments NaOH pada cerna
​
enzimatik anggur marc, dan efek merendahkan terbesar diperoleh oleh pretreatment dengan 1% larutan
NaOH pada 120 ° C. Silverstein ​et al.​ [133] mempelajari efektivitas asam sulfat, natrium hidroksida,
hidrogen peroksida, dan pretreatment ozon untuk konversi enzimatik batang kapas. Mereka menemukan
bahwa pretreatment natrium hidroksida menghasilkan tingkat delignifikasi tertinggi (65% dengan 2%
NaOH dalam 90 menit pada 121 ° C) dan konversi selulosa (60,8%). Zhao ​et al​. [134] melaporkan bahwa
pretreatment dengan NaOH dapat memperoleh rasio konversi enzimatik selulosa yang lebih tinggi

dibandingkan denganH​2​SO​4 ​pretreatment. Dibandingkan dengan reagen asam atau oksidatif, pengobatan

alkali tampaknya menjadi metode yang paling​ efektif dalam memutus ikatan ester antara lignin,
hemiselulosa dan selulosa, dan menghindari fragmentasi polimer hemiselulosa [135].
Pretreatment alkali juga digunakan sebagai metode pretreatment dalam produksi biogas.
Pretreatment dengan basa seperti Ca (OH)​2 ​bisa menjadi solusi, ketika banyak lipid dan senyawa
​ fenolik
menjadi sasaran pencernaan. Limbah pabrik zaitun adalah contoh limbah musiman dengan pH rendah
(sekitar 4,3), dan konsentrasi lipid tinggi (sekitar 13 g / l) dan senyawa fenolik (sekitar 8 g / l).
Penambahan kapur dan bentonit sangat meningkatkan pencernaan limbah pabrik zaitun dengan lebih dari

91% penghilangan COD [136]. Dalam pekerjaan lain, pretreatment dengan USG dan​NaHCO3 ​dilaporkan
untuk meningkatkan daya cerna kertas koran limbah [79]. Perlakuan lumpur yang diaktifkan limbah
dengan 0,3 g NaOH / g padatan volatil (VS) pada 130 ° C selama 5 menit menghasilkan 40-50% pelarutan
VS dan lebih dari 200% peningkatan dalam produksi metana dibandingkan dengan eksperimen kontrol
[137 , 138]. Selain itu, perawatan lumpur dengan NaOH encer (misalnya 1,6 g / l) pada ruangan atau suhu
rendah (25- 55 ° C) mampu meningkatkan pembuangan VS sebesar 40-90% [139, 140]. Perlakuan serupa
dengan 5 g / kg NaOH pada limbah padat kota juga telah meningkatkan pembentukan biogas sebesar 35%
[6].

4.3.2. Alkaline peroxide

Alkaline peroxide adalah metode yang efektif untuk pretreatment biomassa. Dalam metode ini,
lignoselulosa direndam dalam air yang diatur pH (misalnya hingga pH 11-12 menggunakan NaOH) yang

mengandung H​2​O​2 ​pada suhu

​ kamar selama periode waktu tertentu (misalnya 6-24 jam). Proses ini dapat
meningkatkan hidrolisis enzimatik dengan delignifikasi. Saha dan Cotta [141] menunjukkan bahwa
dengan menggunakan pretreatment alkali peroksida seperti itu, jerami gandum dapat dikonversi menjadi
gula yang dapat difermentasi dengan hasil yang sangat baik (97%) dengan sakarifikasi enzimatik. Dalam

laporan lain [142], mereka menunjukkan bahwa perlakuan alkali peroksida encer (7,5% H​2​O​2​, v / v; pH

11,5; 35 ° C; 24 jam) adalah metode yang efisien untuk pretreatment sekam padi, sehingga ​ hampir
lengkap konversi (96%) sekam padi menjadi gula setelah hidrolisis enzimatik. Tidak ada furfural dan
hydroxymethylfurfural (HMF) yang dapat diukur terdeteksi dalam proses, yang membuatnya lebih mudah
difermentasi / dicerna dibandingkan dengan misalnya dalam pretreatment asam encer. Mishima ​et al​.
[143] memeriksa dua puluh perlakuan awal kimiawi untuk meningkatkan efisiensi hidrolisis enzimatik
eceng gondok dan selada air. Telah ditunjukkan bahwa pretreatment alkali / oksidatif, di mana NaOH dan
H​2​O2​ ​digunakan, adalah metode yang paling efektif untuk meningkatkan hidrolisis enzimatik.
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1636

Sun ​et al​. [114] mempelajari proses dua tahap berdasarkan pretreatment ledakan uap diikuti oleh
alkali peroksida pasca perawatan. Jerami gandum pertama kali dikukus pada suhu 200-220 ° C dan 15-22

bar. Serat yang dicuci kemudian didelignifikasi dengan 2% H​2​O​2 ​pada 50 ° C selama 5 jam di bawah pH

11,5.ledakan uap Pretreatmentmenghasilkan

​ kerugian yang signifikan pada hemiselulosa, dan sekitar
11-12% lignin dihilangkan, sedangkan alkaline peroxide pasca perawatan menghasilkan 81-88%
penghilangan lignin asli, yang semuanya menghilangkan 92-99% dari yang asli. lignin dari jerami
gandum. Mereka juga menunjukkan bahwa struktur dasar yang tersisa hanya bersifat lignin, yang penting
bagi mereka yang merencanakan strategi biomassa terutama dalam hal penggunaan bahan kimia dari
lignin. Curreli ​et al​. [144] menyarankan dua langkah, pretreatment alkali / oksidatif ringan pada suhu
rendah (25-40 ° C) dan konsentrasi rendah bahan kimia. Pretreatment alkali (1% NaOH selama 24 jam)
pada langkah pertama melarutkan hemiselulosa, dan langkah alkali / oksidatif kedua (1% NaOH dan 0,3%

H​2​O​2 ​selama 24 jam) untuk melarutkan dan mengoksidasi lignin. Pretreatment

​ juga berguna untuk
menghilangkan lilin, silika, dan cutin tahan air yang melapisi jaringan tanaman.

4.3.3. Proses

organosolv Organosolv dapat digunakan untuk menyediakan selulosa yang diolah yang cocok
untuk hidrolisis enzimatik, menggunakan pelarut organik organik atau berair untuk menghilangkan atau
menguraikan jaringan lignin dan mungkin bagian dari hemiselulosa [144-147]. Dalam proses ini,
lignoselulosa dicampur dengan cairan organik dan air dan dipanaskan untuk melarutkan lignin dan bagian
dari hemiselulosa, meninggalkan selulosa reaktif dalam fase padat. Selain itu, katalis dapat ditambahkan
baik untuk mengurangi suhu operasi atau untuk meningkatkan proses delignifikasi [24]. Lignin dalam
biomassa dapat diekstraksi dari pelarut untuk misalnya menghasilkan listrik, proses panas, perekat
berbasis lignin dan produk lainnya, karena kemurnian tinggi dan berat molekul rendah [148].
Dalam pretreatment organosolv bahan lignoselulosa, sejumlah besar pelarut organik atau
berair-organik pada suhu 150-200 ° C dapat digunakan dengan atau tanpa penambahan katalis seperti
asam oksalat, salisilat, dan asam asetilsalisilat. Lebih lanjut, pelarut dapat menyertai asam asetat yang
dilepaskan dari gugus asetil yang dikembangkan oleh hidrolisis hemiselulosa. Berbagai pelarut organik
seperti alkohol, ester, keton, glikol, asam organik, fenol, dan eter telah digunakan. Namun, harga pelarut
dan kesederhanaan dalam pemulihan pelarut juga harus dipertimbangkan. Pelarut yang diterapkan harus
dipisahkan dengan misalnya penguapan dan kondensasi, dan didaur ulang untuk mengurangi biaya
operasional proses. Penghapusan pelarut dari selulosa pretreated biasanya diperlukan karena pelarut
mungkin menjadi penghambat hidrolisis enzimatik dan fermentasi atau pencernaan hidrolisat [28]. Araque
et al.​ [149] mempelajari organosolv aseton-air untuk pretreatment. Mereka menemukan hasil etanol
tertinggi menjadi 99,5% setelah pretreatment pada suhu 195 ° C, 5 menit, pH 2.0, dan rasio 1: 1 aseton-air.
Untuk alasan ekonomi, penggunaan alkohol dengan berat molekul rendah seperti etanol dan metanol lebih
disukai daripada alkohol dengan titik didih yang lebih tinggi, misalnya etilena glikol, tetrahidrofurfuril
alkohol [24, 28, 41]. Etanol adalah pelarut umum, meskipun menghambat enzim hidrolitik [23]. Karena
itu harus dihilangkan dari fraksi padat sebelum hidrolisis enzimatik. Keuntungan utama dari penggunaan
pelarut dibandingkan pretreatment kimia lainnya adalah bahwa lignin yang relatif murni dan berbobot
molekul rendah diperoleh kembali sebagai produk samping [28, 103].
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1637

Organosolv dapat digunakan bersama dengan hidrolisis asam untuk memisahkan hemiselulosa dan
lignin dalam fraksinasi dua tahap. Papatheofanous ​et al.​ [150] menyarankan sistem seperti itu untuk
pretreatment biomassa. Bahan baku lignoselulosa pertama-tama dapat diolah dengan asam encer encer
(asam sulfat 0,5-2,5 N) pada suhu sekitar 100 ° C selama 10-60 menit untuk menghidrolisis fraksi
hemiselulosa secara selektif. Tujuan tahap kedua dari proses ini adalah delignifikasi lignoselulosa
pra-perlakuan dengan kondisi asam (asam sulfat 2 N) pada sekitar 81 ° C selama 90 menit. Pada tahap ini,
etanol ditambahkan (62,5-87,5%) ke sistem untuk menyediakan media untuk melarutkan dan memulihkan
lignin yang dihasilkan dalam kondisi asam. Kehilangan selulosa yang dapat diabaikan (kurang dari 2% b /
b dari selulosa asli) dan penghilangan lignin yang tinggi (lebih dari 70% b / b dari lignin asli) membuat
proses dua tahap suhu rendah yang dikatalisis dengan asam menarik untuk pretreatment laboratorium
lignoselulosa sebelumnya. hidrolisis enzimatik.

4.3.4. Oksidasi basah

Oksidasi

basah telah diterapkan sebagai pretreatment untuk produksi etanol dan biogas. Dalam proses ini,
bahan-bahan tersebut diolah dengan air dan udara atau oksigen pada suhu di atas 120 ° C (misalnya
148-200 ° C) untuk periode misalnya 30 menit [151-153]. Suhu, diikuti oleh waktu reaksi dan tekanan
oksigen, adalah parameter paling penting dalam oksidasi basah [154]. Prosesnya eksotermik, dan karena
itu menjadi swadaya sehubungan dengan panas saat reaksi dimulai [154]. Oksidasi basah dari fraksi
hemiselulosa adalah keseimbangan antara pelarutan dan degradasi. Proses ini adalah metode yang efektif
dalam memisahkan fraksi selulosa dari lignin dan hemiselulosa [24, 155]. Oksigen ikut serta dalam reaksi
degradasi dan memungkinkan operasi pada temperatur yang relatif berkurang dengan meningkatkan
pembentukan asam organik. Namun, kontrol suhu reaktor sangat penting karena laju reaksi yang cepat dan
generasi panas [153]. Reaksi utama dalam pretreatment oksidasi basah adalah pembentukan asam dari
proses hidrolitik, serta reaksi oksidatif. Ketiga fraksi bahan lignoselulosa dipengaruhi dalam proses ini.
Hemiselulosa secara luas dibelah menjadi gula monomer; lignin mengalami pembelahan dan oksidasi; dan
selulosa sebagian terdegradasi. Selulosa menjadi sangat rentan terhadap hidrolisis enzimatik [156].
Bjerre ​et al.​ [157] menggabungkan oksidasi basah dan hidrolisis alkali untuk pretreatment jerami
gandum. Proses ini menghasilkan selulosa yang relatif sangat dapat dikonversi (85% hasil konversi) dan
hemiselulosa. Namun, penambahan beberapa zat alkali seperti natrium karbonat hanya memiliki efek kecil
pada konsentrasi hemiselulosa yang dilarutkan. Sementara itu, kondisi pretreatment alkali secara
signifikan menurunkan degradasi hemiselulosa menjadi inhibitor, misalnya furfural [158]. Martin et al.
[159] mempelajari oksidasi basah sebagai metode pra-perlakukan untuk meningkatkan konversi enzimatik
dari ampas tebu. Pretreatment pada suhu 195 ° C selama 15 menit melarutkan 93-94% hemiselulosa dan
40-50% lignin. Pretreatment oksidasi basah alkali pada 185 ° C selama 5 menit hanya melarutkan 30%
hemiselulosa dan 20% lignin; sementara itu kondisi basa mengurangi pembentukan furan. Hasil gula
tertinggi dalam fraksi cair diperoleh pada 185 ° C, 5 menit dan pH asam. Pretreatment oksidasi basah asam
pada 195 ° C selama 15 menit menghasilkan pembentukan asam karboksilat, fenol dan furan tertinggi,
yang mengakibatkan hilangnya bagian penting dari polisakarida karena degradasi dan pembentukan
produk samping.
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1638

Lissens ​et al.​ [160] menggunakan oksidasi basah untuk meningkatkan biodegradabilitas anaerob
dan hasil metana dari beberapa biowast mentah (limbah makanan, limbah pekarangan, dan biowaste yang
dicerna yang diolah dalam pabrik biogas skala penuh). Suhu oksidasi basah (185-220 ° C) dan tekanan
oksigen (0-12 bar) selama 15 menit digunakan untuk mengevaluasi efeknya terhadap hasil metana. Proses
oksidasi basah dilaporkan meningkatkan hasil metana sekitar 35-70% dari biowast lignoselulosa mentah
dan dicerna.
Mirip dengan banyak metode delignifikasi lainnya, lignin yang dihasilkan oleh oksidasi basah
tidak dapat digunakan sebagai bahan bakar, karena sebagian besar lignin mengalami pembelahan dan
oksidasi. Fenomena ini sangat mengurangi pendapatan dari produk sampingan ini pada skala industri
untuk produksi etanol dari bahan lignoselulosa [161].

Oksidasi basah juga dapat dilakukan oleh agen oksidasi seperti hidrogen peroksida (H​2​O2​ ​). Azzam
​
[162] menunjukkan bahwa pretreatment dengan hidrogen peroksida sangat meningkatkan kerentanan tebu
tebu terhadap hidrolisis enzimatik. Sekitar 50% dari lignin dan sebagian besar hemiselulosa dilarutkan

dengan memperlakukan biomassa dengan 2% H​2​O​2 p​ ada 30 ° C dalam 8 jam, memberikan

efisiensiglukosa sebesar 95% dari produksihidrolisis

​ enzimatik selulosa.

4.3.5. Ozonolysis pretreatment

Pretreatment dari bahan lignoselulosa dapat dilakukan dengan pengobatan dengan ozon, disebut
sebagai “ozonolysis” pretreatment. Metode ini dapat secara efektif menurunkan lignin dan bagian dari
hemiselulosa. Pretreatment biasanya dilakukan pada suhu kamar, dan tidak mengarah pada senyawa
penghambat [163]. Namun, ozonolisis mungkin mahal karena sejumlah besar ozon diperlukan [28].
Parameter utama dalam pretreatment ozonolisis adalah kadar air sampel, ukuran partikel, dan konsentrasi
ozon dalam aliran gas. Di antara parameter ini, faktor penting adalah persentase air dalam pakan, dan
memiliki efek paling signifikan pada pelarutan. Kadar air optimal ditemukan sekitar 30%, sesuai dengan
titik jenuh serat. Ini adalah metode pretreatment yang menarik karena tidak meninggalkan residu asam,
basa, atau beracun dalam bahan yang diolah [164].
Pretreatment ozonolisis untuk produksi biogas diselidiki untuk meningkatkan pencernaan beberapa
limbah seperti lumpur yang diaktifkan limbah [165-167] dan limbah pabrik zaitun [168]. Ozon juga
mengurangi senyawa fenolik yang ada dalam limbah pabrik zaitun, yang beracun bagi bakteri
metanogenik, dan menghasilkan peningkatan pencernaan.

4.3.6. Pretreatment hidrolisis asam.

Perawatan bahan lignoselulosa dengan asam pada suhu tinggi dapat secara efisien meningkatkan
hidrolisis enzimatik. Asam sulfat adalah asam yang paling banyak diaplikasikan, sementara asam lain
seperti HCl dan asam nitrat juga dilaporkan [3]. Pretreatment asam dapat beroperasi di bawah suhu tinggi
dan konsentrasi asam rendah (encer-asam pretreatment) atau di bawah suhu rendah dan konsentrasi asam
tinggi (pretreatment asam pekat). Temperatur operasi yang lebih rendah dalam pretreatment asam pekat
(misalnya 40 ° C) adalah keuntungan yang jelas dibandingkan dengan proses asam encer. Namun,
konsentrasi asam yang tinggi (misalnya 30-70%) dalam proses asam pekat membuatnya sangat korosif
dan berbahaya. Oleh karena itu, proses ini membutuhkan konstruksi non-logam khusus atau paduan
mahal. Pemulihan asam, yang diperlukan dalam proses asam pekat untuk alasan ekonomis, adalah energi-
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1639

proses menuntut. Di sisi lain, proses netralisasi menghasilkan gipsum dalam jumlah besar. Biaya investasi
dan pemeliharaan yang tinggi juga mengurangi minat komersial dalam proses ini sebagai opsi komersial
[23, 99, 169].
Hidrolisis asam encer mungkin adalah metode yang paling umum diterapkan di antara metode
pretreatment kimia. Hal ini dapat digunakan baik sebagai pretreatment dari lignoselulosa untuk hidrolisis
enzimatik, atau sebagai metode aktual hidrolisis menjadi gula yang dapat difermentasi. Berbagai jenis
reaktor seperti batch, perkolasi, aliran plug, arus berlawanan, dan reaktor susut, baik untuk pretreatment
atau hidrolisis bahan lignoselulosa oleh proses asam encer, telah diterapkan. Proses-proses ini dan
berbagai aspek hidrolisis dan pretreatment asam encer baru-baru ini telah ditinjau [3, 4]. Pada suhu tinggi
(mis. 140-190 ° C) dan konsentrasi asam yang rendah (mis., Asam sulfat 0,1-1%), perlakuan asam encer
dapat mencapai tingkat reaksi yang tinggi dan secara signifikan meningkatkan hidrolisis selulosa. Hampir
100% penghilangan hemiselulosa dimungkinkan dengan pretreatment asam encer. Pretreatment tidak
efektif dalam melarutkan lignin, tetapi dapat mengganggu lignin dan meningkatkan kerentanan selulosa
terhadap hidrolisis enzimatik [23, 170].
Pretreatment asam encer dapat dilakukan baik dalam waktu retensi pendek (misalnya 5 menit)
pada suhu tinggi (misalnya 180 ° C) atau dalam waktu retensi yang relatif lama (misalnya 30-90 menit)
pada suhu yang lebih rendah (misalnya 120 ° C). Sun dan Cheng [171] mengolah jerami gandum dan
rumput Bermuda untuk produksi etanol dengan hidrolisis enzimatik pada 121 ° C dengan konsentrasi
asam sulfat yang berbeda (0,6, 0,9, 1,2 dan 1,5%, b / b) dan waktu tinggal (30, 60, dan 90 mnt). Emmel ​et

al​. [15]pra- ​Eucalyptus grandis h​ amil diresapi dengan 0,087 dan 0,175% (b / b) H​2​SO​4 ​pada 200-210 ° C

selama 2-5 menit. Kondisi terbaik untukhemiselulosa pemulihandiperoleh

​ pada 210 ° C selama 2 menit,
sedangkan suhu pretreatment yang lebih rendah 200 ° C sudah cukup untuk mendapatkan hasil tertinggi
konversi selulosa (90%) dengan hidrolisis enzimatik.
Kondisi optimal untuk pemulihan gula hemiselulosa tertinggi tidak selalu berarti kondisi yang
paling efektif untuk hidrolisis enzimatik. Cara ​et al.​ [172] melaporkan pemulihan hemiselulosa maksimum
(83%) biomassa pohon zaitun yang diperoleh pada 170 ° C dan konsentrasi asam sulfat 1%, tetapi
aksesibilitas enzim dari padatan yang diberi perlakuan sebelumnya tidak terlalu tinggi. Hasil hidrolisis
enzimatik maksimum (76,5%) diperoleh ketika pretreated pada 210 ° C dengan konsentrasi asam 1,4%.
Gula total maksimum, 75% dari semua gula yang hadir dalam biomassa pohon zaitun, diperoleh ketika
bahan baku diolah dengan asam encer pada 180 ° C dengan konsentrasi asam sulfat 1%. Ini menunjukkan
bahwa gula keseluruhan tertinggi, pemulihan hemiselulosa yang lebih tinggi dan hasil hidrolisis enzimatik
yang lebih tinggi dapat dicapai dalam kondisi yang berbeda.
Pretreatment dengan asam seperti asetat dan nitrat juga digunakan untuk menghilangkan lignin
dari limbah kertas koran [173] dan lumpur aktif [174] untuk produksi biogas. Asosiasi selulosa-lignin
dianggap sebagai faktor pembatas utama pada pencernaan anaerob jangka panjang dari kertas koran.
Pretreatment dari ampas tebu dan serat kelapa dengan HCl meningkatkan pembentukan biogas dari
bahan-bahan ini masing-masing sebesar 31% dan 74% [175]. Asam asetat tidak dapat melarutkan lignin
bahkan pada konsentrasi yang sangat tinggi, misalnya setinggi 80%, pada suhu tinggi (dalam bak air
mendidih) selama 30 menit. Agar dapat secara efektif melarutkan sejumlah besar lignin, asam nitrat harus
ditambahkan. Perlakuan kertas koran dengan 30% asam asetat dan 2% asam nitrat menghasilkan
penghilangan 80% lignin dan meningkatkan rasio selulosa / lignin dari 1,6 menjadi 9,9. Perawatan ini
memberikan peningkatan pencernaan pada kertas koran. Produksi biogas meningkat tiga kali lipat dalam

60 hari inkubasi, dari 97 ml CH​4​/ g VS untuk kertas

​ koran yang tidak diolah menjadi 364 ml CH​4​/ gVS

untuk yang dirawat. Sebagian dari asam nitrat mungkin

Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1640

digantikan oleh asam kuat lain seperti asam klorida; Namun, waktu reaksi yang lebih lama mungkin
diperlukan untuk pra-perawatan dengan konsentrasi asam nitrat yang lebih rendah [173].
Hidrolisis asam encer dapat dikombinasikan dengan perawatan kimia lainnya. Azzam [176]

mempelajari bagasse pretreated dalam larutan ZnCl​2 ​dan 0,5% asam klorida, dipanaskan pada 145 ° C

selama 10 menit, didinginkan

​ dan diendapkan dengan aseton. Biomassa pretreated sangat terhidrolisis
(hasil 93%) oleh selulase.
Kelemahan utama dari beberapa metode pretreatment, terutama pada pH rendah adalah
pembentukan berbagai jenis inhibitor seperti asam karboksilat, furan dan senyawa fenolik [4, 19]. Bahan
kimia ini mungkin tidak mempengaruhi hidrolisis enzimatik, tetapi mereka biasanya menghambat
pertumbuhan dan fermentasi mikroba, yang menghasilkan lebih sedikit hasil dan produktivitas etanol atau
biogas [3]. Oleh karena itu, pretreatment pada pH rendah harus dipilih dengan benar untuk menghindari
atau setidaknya mengurangi pembentukan inhibitor ini.

4.4. Pretreatment biologis

Mikroorganisme juga dapat digunakan untuk mengobati lignoselulosa dan meningkatkan hidrolisis
enzimatik. Mikroorganisme yang diterapkan biasanya mendegradasi lignin dan hemiselulosa tetapi bagian
selulosa sangat sedikit, karena selulosa lebih resisten daripada bagian lignoselulosa lain terhadap serangan
biologis. Beberapa jamur, misalnya jamur coklat, putih dan lunak, telah digunakan untuk tujuan ini. Jamur
busuk putih adalah di antara mikroorganisme yang paling efektif untuk pretreatment biologis lignoselulosa
[28].
Taniguchi ​et al.​ [177] mengevaluasi pretreatment biologis jerami padi menggunakan empat jamur
busuk putih (​Phanerochaete chrysosporium, Trametes versicolor, Ceriporiopsis subvermispora, ​dan
Pleurotus ostreatus​) berdasarkan perubahan kuantitatif dan struktural pada komponen jerami padi
pra-perlakuan serta kerentanan terhadap jerami. hidrolisis enzimatik. Pretreatment dengan ​P. ostreatus
menghasilkan degradasi selektif lignin daripada komponen holoselulosa, dan meningkatkan kerentanan
jerami padi terhadap hidrolisis enzimatik. Beberapa bakteri juga dapat digunakan untuk pretreatment
biologis bahan lignoselulosa. Kurakake ​et al​. [178] mempelajari pretreatment biologis kertas kantor
dengan dua strain bakteri, ​Sphingomonas paucimobilis d​ an ​Bacillus circulans​, untuk hidrolisis enzimatik.
Pretreatment biologis dengan strain gabungan meningkatkan hidrolisis enzimatik kertas kantor dari limbah
kota. Dalam kondisi optimal, pemulihan gula ditingkatkan hingga 94% untuk kertas kantor.
Perawatan biologis dengan mikroorganisme atau enzim juga diselidiki untuk meningkatkan
pencernaan dalam produksi biogas. Pretreatment biologis dapat digunakan tidak hanya untuk
menghilangkan lignin, tetapi juga untuk menghilangkan secara biologis komponen spesifik seperti zat
antimikroba. Fermentasi solid-state kulit jeruk oleh strain jamur ​Sporotrichum, Aspergillus, Fusarium dan
Penicillum m​ eningkatkan ketersediaan konstituen pakan dan mengurangi tingkat zat antimikroba [179].
Dalam pekerjaan yang serupa, penanaman jamur busuk putih digunakan untuk mendetoksifikasi air limbah
pabrik zaitun dan meningkatkan pencernaannya [180].
Kebutuhan energi yang rendah, tidak ada persyaratan kimia, dan kondisi lingkungan yang ringan
adalah keuntungan utama dari perlakuan awal biologis. Namun, tingkat pengobatan sangat rendah dalam
sebagian besar proses pretreatment biologis [28].
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1641

5. Keterangan penutup

Beberapa metode pra-perlakukan telah disajikan untuk lignoselulosa dan bahan limbah untuk
meningkatkan produksi etanol atau biogas. Semua metode ini harus membuat lignoselulosa tersedia untuk
serangan enzimatik, di mana kristalinitas selulosa, luas permukaannya yang dapat diakses dan
perlindungan oleh lignin dan hemiselulosa adalah faktor utama untuk mendapatkan hidrolisis yang efisien.
Selain itu, pemanfaatan hemiselulosa yang efisien adalah peluang untuk mengurangi biaya produksi etanol
atau biogas. Beragam keuntungan telah dilaporkan untuk sebagian besar metode pretreatment, yang
membuatnya menarik untuk aplikasi industri. Sementara metode seperti asam encer, air panas, AFEX,
perkolasi daur ulang amonia, dan kapur padat modal [117], beberapa metode lain seperti pretreatment
biologis sangat lambat [28]. Selain itu, beberapa faktor teknologi seperti keseimbangan energi, daur ulang
pelarut dan korosi, serta faktor lingkungan seperti pengolahan air limbah, harus dipertimbangkan dengan
hati-hati untuk metode yang dipilih.

Pengakuan

Karya ini secara finansial didukung oleh Pusat Pengilangan Limbah Swedia Excellent Centre dan
Asosiasi Pemerintah Daerah Sjuhärad di Swedia.

Referensi

1. Isa, B.; Post, J.; Furedy, C. ​Solid Waste Management and Recycling; Actors, Partnerships and Policies
in Hyderabad, India and Nairobi, Kenya;​ Kluwer Academic Publishers: Dordrecht, London, UK, 2004. 2.
Licht, FO ​World ethanol markets: the outlook to 2015.​ Agra Europe special report: Tunbridge
Wells, 2006. 3. Taherzadeh, MJ; Karimi, K. Acid-based hydrolysis processes for ethanol from
lignocellulosic
materials: A review. ​BioResources ​2007​, ​2​, 472-499. 4. Taherzadeh, MJ; Karimi, K.
Enzymatic-based hydrolysis processes for ethanol from
lignocellulosic materials: A review. ​BioResources 2​ 007​, ​2,​ 707-738. 5. Sims, R. ​Biomass and
resources bioenergy options for a cleaner environment in developed and
 developing countries;​ Elsevier Science: London, UK, 2003. 6. Ghosh, S.; Henry, MP; Sajjad, A.;
Mensinger, MC; Arora, JL Pilot-scale gasification of municipal solid wastes by high-rate and two-phase
anaerobic digestion (TPAD). ​Water Sci. Technol. 2​ 000​, ​41,​ 101-110. 7. Buffiere, P.; Loisel, D.; Bernet,
N.; Delgenes, JP Towards new indicators for the prediction of
solid waste anaerobic digestion properties. ​Water Sci. Technol. 2​ 006​, ​53,​ 233-241. 8. Sjöström,
E. ​Wood chemistry: fundamentals and applications​; Academic Press: San Diego,
USA, 1993. 9. Delmer, DP; Amor, Y. Cellulose biosynthesis. ​Plant Cell
1995​, ​7​, 987-1000.
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1642

10. Morohoshi, N. Chemical characterization of wood and its components. In ​Wood and cellulosic
​ on, DNS, Shiraishi, N., Eds.; Marcel Dekker, Inc.: New York, USA, 1991; pp. 331-392. 11.
chemistry; H
Ha, MA; Apperley, DC; Evans, BW; Huxham, IM; Jardine, WG; Vietor, RJ; Reis, D.; Vian, B.; Jarvis,
MC Fine structure in cellulose microfibrils: NMR evidence from onion and quince. ​Plant J. 1​ 998​, ​16,​
183-190. 12. Talebnia, F.; Bafrani, MP; Lundin, M.; Taherzadeh, MJ Optimization study of citrus wastes
saccharification by dilute acid hydrolysis. ​BioResources ​2008​, ​3​, 108-122. 13. Persson, T.;
Matusiak, M.; Zacchi, G.; Jonsson, A.-S. Extraction of hemicelluloses from process
water from the production of masonite. ​Desalination ​2006​, ​199​, 411-412. 14. Lavarack, BP;
Giffin, GJ; Rodman, D. The acid hydrolysis of sugarcane bagasse hemicellulose
to produce xylose, arabinose, glucose, and other products. ​Biomass Bioenerg. ​2002​, ​23​, 367-380.
15. Emmel, A.; Mathias, AL; Wypych, F.; Ramos, LP Fractionation of Eucalyptus grandis chips by
dilute acid- catalysed steam explosion. ​Bioresource Technol. 2​ 003​, ​86,​ 105-115. 16. Ademark,
P.; Varga, A.; Medve, J.; Harjunpaa, V.; Drakenberg, T.; Tjerneld, F.; Stalbrand, H. Softwood
hemicellulose-degrading enzymes from Aspergillus niger: purification and properties of a
beta-mannanase. ​J. Biotechnol. 1​ 998​, ​63,​ 199-210. 17. Mod, RR; Ory, RL; Morris, NM; Normand, FL
Chemical properties and interactions of rice
hemicellulose with trace minerals ​in vitro​. ​J. Agr. Makanan Chem. ​1981​, ​29​, 449-454. 18.
O'Dwyer M, H. The hemicelluloses of the wood of English oak: The composition and properties of
hemicellulose A, isolated from samples of wood dried under various conditions. ​Biokem. J. 1​ 934​, ​28,​
2116-2124. 19. Taherzadeh, MJ ​Ethanol from lignocellulose: physiological effects of inhibitors and
fermentation strategies.​ Ph.D thesis in Biotechnology, Chemical Reaction Engineering, Chalmers
University of Technology, 1999. 20. Palmqvist, E.; Hahn-Hägerdal, B. Fermentation of lignocellulosic
hydrolysates. II: Inhibitors and
mechanisms of inhibition. ​Bioresource Technol. ​2000​, ​74​, 25-33. 21. Torget, R.; Himmel, ME;
Grohmann, K. Dilute sulfuric acid pretreatment of hardwood bark.
 Bioresource Technol. ​1991​, ​35​, 239-246. 22. Donghai, S.; Junshe, S.; Ping, L.; Yanping, L.
Effects of different pretreatment modes on the enzymatic digestibility of corn leaf and corn stalk. ​Chinese
J. Chem. Eng ​2006​, ​14​, 796-801. 23. Wyman, CE ​Handbook on bioethanol: production and utilization;​
Taylor & Francis:
Washington DC, USA, 1996. 24. Chum, HL; Douglas, LJ; Feinberg, DA; Schroeder, HA
Evaluation of pretreatments of biomass for enzymatic hydrolysis of cellulose.​ Solar Energy Research
Institute: Golden, Colorado, 1985; pp. 1-64. 25. Fan, LT; Lee, Y.; Beardmore, DH Mechanism of the
enzymatic hydrolysis of cellulose: Effects of major structural features of cellulose on enzymatic
hydrolysis. ​Bioteknol. Bioeng. 1​ 980​, ​22,​ 177-199. 26. Grethelin, HE The effect of pore size distribution on
the rate of enzymatic hydrolysis of
cellulosic substrates. ​Bioteknol. 1​ 985​, ​3,​ 155-160.
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1643

27. Kim, S.; Holtzapple, MT Effect of structural features on enzyme digestibility of corn stover.
Bioresource Technol. ​2006​, ​97​, 583-91. 28. Sun, Y.; Cheng, J. Hydrolysis of lignocellulosic
materials for ethanol production: A review.
Bioresource Technol. ​2002​, ​83​, 1-11. 29. Stone, JE; Scallan, AM; Donefer, E.; Ahlgren, E.
Cellulases and their Applications​. Hajny, GJ,
Reese, ET, Eds.; American Chemical Society: Washington DC, USA, 1969. 30. Berlin, A.;
Balakshin, M.; Gilkes, N.; Kadla, J.; Maximenko, V.; Kubo, S.; Saddler, J. Inhibition of cellulase,
xylanase and beta-glucosidase activities by softwood lignin preparations. ​J. Biotechnol. 2​ 006​, ​125,​
198-209. 31. Ramos, LP; Breuil, C.; Saddler, JN Comparison of steam pretreatment of eucalyptus, aspen,
and spruce wood chips and their enzymic hydrolysis. ​Appl. Biokem. Bioteknol. 1​ 992​, 37-48. 32. Mooney,
CA; Mansfield, SD; Touhy, MG; Saddler, JN The effect of initial pore volume and lignin content on the
enzymatic hydrolysis of softwoods. ​Bioresource Technol. ​1998​, ​64​, 113-119. 33. Saha, BC; Iten, LB;
Cotta, MA; Wu, YV Dilute acid pretreatment, enzymatic
saccharification, and fermentation of rice hulls to ethanol. ​Bioteknol. Progr. 2​ 005​, ​21,​ 816-822. 34.
Karimi, K.; Kheradmandinia, S.; Taherzadeh, MJ Conversion of rice straw to sugars by dilute-
acid hydrolysis. ​Biomass Bioenerg. ​2006​, ​30​, 247-253. 35. Sanchez, G.; Pilcher, L.; Roslander,
C.; Modig, T.; Galbe, M.; Liden, G. Dilute-acid hydrolysis for fermentation of the Bolivian straw material
Paja Brava. ​Bioresource Technol. ​2004​, ​93​, 249-256. 36. Schell, DJ; Farmer, J.; Newman, M.; McMillan,
JD Dilute-sulfuric acid pretreatment of corn stover in pilot-scale reactor: Investigation of yields, kinetics,
and enzymatic digestibilities of solids. ​Appl. Biokem. Bioteknol. 2​ 003​, ​105,​ 69-85. 37. Tucker, MP; Kim,
KH; Newman, MM; Nguyen, QA Effects of temperature and moisture on dilute-acid steam explosion
pretreatment of corn stover and cellulase enzyme digestibility. ​Appl. Biokem. Bioteknol. 2​ 003​, ​105,​
165-177. 38. Nguyen, QA; Tucker, MP; Keller, FA; Eddy, FP Two-stage dilute-acid pretreatment of
 softwoods. ​Appl. Biokem. Bioteknol. 2​ 000​, ​84-86,​ 561-576. 39. Lee, YY; Iyer, P.; Torget, RW
Dilute-acid hydrolysis of lignocellulosic biomass. ​Adv. Biokem.
Eng Bioteknol. ​1999​, ​65​, 93-115. 40. Barl, B.; Biliaderis, CG; Murray, ED; Macgregor, AW
Combined chemical and enzymatic
treatments of corn husk lignocellulosics. ​J. Sci. Agric Makanan 1​ 991​, ​56,​ 195-214. 41. Arato, C.;
Pye, EK; Gjennestad, G. The lignol approach to biorefining of woody biomass to
produce ethanol and chemicals. ​Appl. Biokem. Bioteknol. ​2005​, ​123​, 871-882. 42. Sidiras, D.;
Koukios, E. Simulation of acid-catalysed organosolv fractionation of wheat straw.
Bioresource Technol. ​2004​, ​94​, 91-98. 43. Alizadeh, H.; Teymouri, F.; Gilbert, TI; Dale, BE
Pretreatment of switchgrass by ammonia
fiber explosion (AFEX). ​Appl. Biokem. Bioteknol. 2​ 005​, ​124,​ 1133-41. 44. Vlasenko, EY; Ding,
H.; Labavitch, JM; Shoemaker, SP Enzymatic hydrolysis of pretreated
rice straw. ​Bioresource Technol. ​1997​, ​59​, 109-119.
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1644

45. Dale, BE; Leong, CK; Pham, TK; Esquivel, VM; Rios, I.; Latimer, VM Hydrolysis of lignocellulosics
at low enzymes level: application of the afex process. ​Bioresource Technol. 1​ 996​, ​56,​ 111-116. 46.
Holtzapple, MT; Jun, JH; Ashok, G.; Patibandla, SL; Dale, BE The ammonia freeze explosion (AFEX)
process – A practical lignocellulose pretreatment. ​Appl. Biokem. Bioteknol. 1​ 991​, ​28,​ 59-74. 47.
Ballesteros, I.; Oliva, JM; Navarro, AA; Gonzalez, A.; Carrasco, J.; Ballesteros, M. Effect of chip size on
steam explosion pretreatment of softwood. ​Appl. Biokem. Bioteknol. ​2000​, ​84​, 97-110. 48. Ogier, JC;
Ballerini, D.; Leygue, JP; Rigal, L.; Pourquie, J. Ethanol production from
lignocellulosic biomass. ​Oil Gas Sci. Technol. 1​ 999​, ​54,​ 67-94. 49. Boussaid, A.; Robinson, J.;
Cai, YJ; Gregg, DJ; Saddler, JR Fermentability of the hemicellulose-derived sugars from steam-exploded
softwood (Douglas fir). ​Bioteknol. Bioeng. ​1999​, ​64​, 284-289. 50. Sassner, P.; Galbe, M.; Zacchi, G.
Steam pretreatment of Salix with and without SO2 impregnation for production of bioethanol. ​Appl.
Biokem. Bioteknol. 2​ 005​, ​121,​ 1101-1117. 51. Ohgren, K.; Galbe, M.; Zacchi, G. Optimization of steam
pretreatment of SO2-impregnated corn
stover for fuel ethanol production. ​Appl. Biokem. Bioteknol. 2​ 005​, ​121,​ 1055-1067. 52.
Tengborg, C.; Stenberg, K.; Galbe, M.; Zacchi, G.; Larsson, S.; Palmqvist, E.; Hahn-Hägerdal, B.
Comparison of SO2 and H2SO4 impregnation of softwood prior to steam pretreatment on ethanol
production. ​Appl. Biokem. Bioteknol. ​1998​, ​70​, 3-15. 53. Eklund, R.; Galbe, M.; Zacchi, G. The influence
of SO2 and H2SO4 impregnation of willow prior
to steam pretreatment. ​Bioresource Technol. 1​ 995​, ​52,​ 225-229. 54. Stenberg, K.; Tengborg, C.;
Galbe, M.; Zacchi, G. Optimisation of steam pretreatment of SO2- impregnated mixed softwoods for
ethanol production. ​J. Chem. Technol. Bioteknol. ​1998​, ​71​, 299-308. 55. McMillan, JD Pretreatment of
lignocellulosic biomass. In ​Enzymatic Conversion of Biomass for Fuels Production; H ​ immel, ME, Baker,
JO, Overend, RP, Eds.; ACS: Washington DC, USA, 1994; pp. 292-324. 56. Fan, L.; Lee, Y.; Gharpuray,
M. The nature of lignocellulosics and their pretreatments for
enzymatic hydrolysis. ​Adv. Biokem. Eng Bioteknol. 1​ 982​, ​23,​ 158-183. 57. Mais, U.;
Esteghlalian, AR; Saddler, JN; Mansfield, SD Enhancing the enzymatic hydrolysis of cellulosic materials
using simultaneous ball milling. ​Appl. Biokem. Bioteknol. ​2002​, ​98​, 815-832. 58. Tassinari, T.; Macy, C.
Differential speed two roll mill pretreatment of cellulosic materials for
enzymatic hydrolysis. ​Bioteknol. Bioeng. 1​ 977​, ​19,​ 1321-1330. 59. Zhang, RH; Zhang, ZQ
Biogasification of rice straw with an anaerobic-phased solids digester
system. ​Bioresource Technol. ​1999​, ​68​, 235-245. 60. Muller, CD; Abu-Orf, M.; Novak, JT
Application of mechanical shear in an internal-recycle for
the enhancement of mesophilic anaerobic digestion. ​Water Environ. Res. ​2007​, ​79​,
297-304. 61. Walpot, JI Enzymatic hydrolysis of waste paper. ​Conserv. Recycling ​1986​, ​9​, 127-136.
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1645

62. Zeng, M.; Mosier, NS; Huang, CP; Sherman, DM; Ladisch, MR Microscopic examination of changes
of plant cell structure in corn stover due to hot water pretreatment and enzymatic hydrolysis. ​Bioteknol.
Bioeng. ​2007​, ​97​, 265-278. 63. Sidiras, DK; Koukios, EG Acid saccharification of ball-milled straw.
Biomass 1​ 989​, ​19,
289-306. 64. Ryu, SK; Lee, JM Bioconversion of waste cellulose by using an attrition
bioreactor. ​Bioteknol.
Bioeng. ​1983​, ​25​, 53-65. 65. Sinitsyn, AP; Gusakov, AV; Davydkin, IY; Davydkin, VY; Protas,
OV A hyperefficient process for enzymatic cellulose hydrolysis in the intensive mass transfer reactor.
Bioteknol. Lett. ​1993​, ​15​, 283-288. 66. Jin, S.; Chen, H. Superfine grinding of steam-exploded rice straw
and its enzymatic hydrolysis.
Biokem. Eng J. 2​ 006​, ​30,​ 225-230. 67. Henley, RG; Yang, RYK; Greenfield, PF Enzymatic
saccharification of cellulose in
membrane reactors. ​Enzyme Microb. Tech. 1​ 980​, ​2,​ 206-208. 68. Mooney, CA; Mansfield, SD;
Beatson, RP; Saddler, JN The effect of fiber characteristics on hydrolysis and cellulase accessibility to
softwood substrates. ​Enzyme Microb. Tech. 1​ 999​, ​25,​ 644-650. 69. Kumakura, M.; Kaetsu, I. Pretreatment
by radiation and acids of chaff and its effect on enzymatic
hydrolysis of cellulose. ​Agr. Wastes ​1984​, ​9​, 279-287. 70. Mamar, SAS; Hadjadj, A. Radiation
pretreatments of cellulose materials for the enhancement of
enzymatic hydrolysis. ​Radiat. Phys Chem ​1990​, ​35​, 451-455. 71. Kumakura, M.; Kaetsu, I.
Effect of radiation pretreatment of bagasse on enzymatic and acid
hydrolysis. ​Biomass ​1983​, ​3​, 199-208. 72 Kumakura, M.; Kaetsu, I. Radiation-induced
decomposition and enzymatic hydrolysis of
cellulose. ​Bioteknol. Bioeng. ​1978​, ​20​, 1309-1315. 73 Kumakura, M.; Kaetsu, I. Radiation
degradation and the subsequent enzymatic hydrolysis of
waste papers. ​Bioteknol. Bioeng. ​1982, ​24​, 991-997. 74 Kumakura, M.; Kojima, T.; Kaetsu, I.
Pretreatment of lignocellulosic wastes by combination of
irradiation and mechanical crushing. ​Biomass 1​ 982, ​2,​ 299-308. 75. McDermott, BL; Chalmers,
AD; Goodwin, JAS Ultrasonication as a pre-treatment method for the enhancement of the psychrophilic
anaerobic digestion of aquaculture effluents. ​Mengepung. Technol. 2​ 001​, ​22,​ 823-830. 76. Wang, QH;
Kuninobu, M.; Ogawa, HI; Kato, Y. Degradation of volatile fatty acids in highly
efficient anaerobic digestion. ​Biomass Bioenerg. ​1999​, ​16​, 407-416. 77. Cui, R.; Jahng, D.
Enhanced methane production from anaerobic digestion of disintegrated and
deproteinized excess sludge. ​Bioteknol. Lett. 2​ 006​, ​28,​ 531-538. 78. Chu, CP; Lee, DJ; Chang,
BV; You, CS; Tay, JH "Weak" ultrasonic pre-treatment on
anaerobic digestion of flocculated activated biosolids. ​Res Air. ​2002​, ​36​, 2681-2688. 79. Wang, F.; Wang,
Y.; Ji, M. Mechanisms and kinetics models for ultrasonic waste activated sludge
disintegration. ​J. Hazard. Mater. ​2005​, ​123​, 145-150. 80. Dohanyos, M.; Zabranska, J.; Jenicek,
P. Innovative technology for the improvement of the
anaerobic methane fermentation. ​Water Sci. Technol. ​1997​, ​36​, 333-340.
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1646

81. Wang, Q.; Noguchi, C.; Hara, Y.; Sharon, C.; Kakimoto, K.; Kato, Y. Studies on anaerobic digestion
mechanism: Influence of pretreatment temperature on biodegradation of waste activated sludge.
Mengepung. Technol. ​1997​, ​18​, 999-1008. 82. Lafitte-Trouque, S.; Forster, CF The use of ultrasound and
gamma-irradiation as pre-treatments for the anaerobic digestion of waste activated sludge at mesophilic
and thermophilic temperatures. ​Bioresource Technol. 2​ 002​, ​84,​ 113-118. 83. Kennedy, KJ; Thibault, G.;
Droste, RL Microwave enhanced digestion of aerobic SBR sludge.
Water SA 2​ 007​, ​33,​ 261-270. 84. Park, B.; Ahn, JH; Kim, J.; Hwang, S. Use of microwave
pretreatment for enhanced anaerobiosis
of secondary sludge. ​Water Sci. Technol. 2​ 004​, ​50,​ 17-23. 85. Eskicioglu, C.; Terzian, N.;
Kennedy, KJ; Droste, RL; Hamoda, M. Athermal microwave effects for enhancing digestibility of waste
activated sludge. ​Res Air. 2​ 007​, ​41,​ 2457-2466. 86. Choi, H.; Jeong, SW; Chung, YJ Enhanced anaerobic
gas production of waste activated sludge
pretreated by pulse power technique. ​Bioresource Technol. 2​ 006​, ​97,​ 198-203. 87. Chandra, R.;
Bura, R.; Mabee, W.; Berlin, A.; Pan, X.; Saddler, J. Substrate pretreatment: The key
to effective enzymatic hydrolysis of lignocellulosics? ​Adv. Biokem. Eng Bioteknol. 2​ 007​, ​108, 6​ 7-93. 88.
Varga, E.; Reczey, K.; Zacchi, G. Optimization of steam pretreatment of corn stover to enhance
enzymatic digestibility. ​Appl. Biokem. Bioteknol. ​2004​, ​113​, 509-523. 89. Ruiz, E.; Cara, C.;
Ballesteros, M.; Manzanares, P.; Ballesteros, I.; Castro, E. Ethanol production from pretreated olive tree
wood and sunflower stalks by an SSF process. ​Appl. Biokem. Bioteknol. ​2006​, ​129​, 631-643. 90. Kurabi,
A.; Berlin, A.; Gilkes, N.; Kilburn, D.; Bura, R.; Robinson, J.; Markov, A.; Skomarovsky, A.; Gusakov,
A.; Okunev, O.; Sinitsyn, A.; Gregg, D.; Xie, D.; Saddler, J. Enzymatic hydrolysis of steam-exploded and
ethanol organosolv-pretreated Douglas-Firby novel and commercial fungal cellulases. ​Appl. Biokem.
Bioteknol. 2​ 005​, ​121​, 219-230. 91. Cullis, IF; Saddler, JN; Mansfield, SD Effect of initial moisture
content and chip size on the bioconversion efficiency of softwood lignocellulosics. ​Bioteknol. Bioeng.
2004​, ​85​, 413-421. 92. Ballesteros, M.; Oliva, JM; Negro, MJ; Manzanares, P.; Ballesteros, I. Ethanol
from lignocellulosic materials by a simultaneous saccharification and fermentation process (SFS) with
Kluyveromyces marxianus CECT 10875. ​Process Biochem. 2​ 004​, ​39,​ 1843-1848. 93. Josefsson, T.;
Lennholm, H.; Gellerstedt, G. Steam explosion of aspen wood. Characterisation of
reaction products. ​Holzforschung 2​ 002​, ​56,​ 289-297. 94. Ahring, BK; Thomsen, AB A method
for processing lignocellulosic material. European Patent
EP1259466, 2001. 95. Carrasco, JE; Saiz, MC; Navarro, A.; Soriano, P.; Saez, F.; Martinez, JM
Effects of dilute-acid and steam explosion pretreatments on the cellulose structure and kinetics of
cellulosic fraction hydrolysis by dilute acids in lignocellulosic materials. ​Appl. Biokem. Bioteknol. 1​ 994​,
45​, 23-34. 96. Mes-Hartree, M.; Saddler, JN The nature of inhibitory materials present in pretreated
lignocellulosic substrates which inhibit the enzymic hydrolysis of cellulose. ​Bioteknol. Lett. ​1983​, ​5​,
531-536.
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1647

97. Pfeifer, PA; Bonn, G.; Bobleter, O. Influence of biomass degradation products on the fermentation of
glucose to ethanol by ​Saccharomyces carlsbergensis ​W 34. ​Biotechnol. Lett. 1​ 984​, ​6,​ 541-546. 98. Laser,
M.; Schulman, D.; Allen, SG; Lichwa, J.; Antal, MJ, Jr.; Lynd, LR A comparison of liquid hot water and
steam pretreatments of sugar cane bagasse for bioconversion to ethanol. ​Bioresource Technol. 2​ 002​, ​81,​
33-44. 99. Sun, XF; Xu, F.; Sun, RC; Wang, YX; Fowler, P.; Baird, MS Characteristics of degraded
lignins obtained from steam exploded wheat straw. ​Polim. Degrad. Stabil. ​2004​, ​86​, 245-256. 100. Ruiz,
E.; Cara, C.; Manzanares, P.; Ballesteros, M.; Castro, E. Evaluation of steam explosion pre-
treatment for enzymatic hydrolysis of sunflower stalks. ​Enzyme Microb. Tech. ​2008​, ​42​,
160-166. 101. Negro, MJ; Manzanares, P.; Ballesteros, I.; Oliva, JM; Cabanas, A.; Ballesteros, M.
Hydrothermal pretreatment conditions to enhance ethanol production from poplar biomass. ​Appl. Biokem.
Bioteknol. ​2003​, ​105​, 87-100. 102. Mason, WH Process and apparatus for disintegration of wood and the
like. US Patent
 1,578,609, 1926. 103. Katzen, R.; Madson, PW; Monceaux, DA Use of cellulosic feedstocks for
alcohol production. In ​The Alcohols Textbook​; Lyons, TP, Murtagh, JE, Kelsall, DR, Eds.; Nothingham
University Press, 1995; pp. 37-46. 104. Hooper, RJ; Li, J. Summary of the factors critical to the
commercial application of bioenergy
technologies. ​Biomass Bioenerg. 1​ 996​, ​11,​ 469-474. 105. Ward, A.; Stensel, HD; Ferguson, JF;
Ma, G.; Hummel, S. Effect of autothermal treatment on
anaerobic digestion in the dual digestion process. ​Water Sci. Technol. 1​ 998​, ​38,​ 435-442. 106. Bougrier,
C.; Delgenes, JP; Carrere, H. Impacts of thermal pre-treatments on the semi-
continuous anaerobic digestion of waste activated sludge. ​Biokem. Eng J. ​2007​, ​34​, 20-27. 107. Dereix,
M.; Parker, W.; Kennedy, K. Steam-explosion pretreatment for enhancing anaerobic
digestion of municipal wastewater sludge. ​Water Environ. Res. ​2006​, ​78​, 474-485. 108.
Bougrier, C.; Delgenes, JP; Carrere, H. Combination of thermal treatments and anaerobic digestion to
reduce sewage sludge quantity and improve biogas yield. ​Process Saf. Mengepung. Protect. 2​ 006​, ​84,​
280-284. 109. Mladenovska, Z.; Hartmann, H.; Kvist, T.; Sales-Cruz, M.; Gani, R.; Ahring, BK Thermal
pretreatment of the solid fraction of manure: impact on the biogas reactor performance and microbial
community. ​Water Sci. Technol. ​2006​, ​53​, 59-67. 110. Solheim, OE Method of and arrangement for
continuous hydrolysis of organic material. US
Patent 0,168,990, 2004. 111. Moeller-Chavez, G.; Gonzalez-Martinez, S. Two combined
techniques to enhance anaerobic
digestion of sludge. ​Water Sci. Technol. ​2002​, ​46​, 167-172. 112. Kim, J.; Park, C.; Kim, TH;
Lee, M.; Kim, S.; Kim, SW; Lee, J. Effects of various pretreatments for enhanced anaerobic digestion with
waste activated sludge. ​J. Biosci. Bioeng. 2​ 003​, ​95,​ 271-275. 113. DiStefano, TD; Ambulkar, A. Methane
production and solids destruction in an anaerobic solid
waste reactor due to post-reactor caustic and heat treatment. ​Water Sci. Technol. ​2006​, ​53​, 33-41.
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1648

114. Sun, XF; Xu, F.; Sun, RC; Fowler, P.; Bairdd, MS Characteristics of degraded cellulose
obtained from steam-exploded wheat straw. ​Carbohyd. Res. ​2005​, ​340​, 97-106. 115. Mosier, N.;
Wyman, C.; Dale, B.; Elander, R.; Lee, YY; Holtzapple, M.; Ladisch, M. Features of promising
technologies for pretreatment of lignocellulosic biomass. ​Bioresource Technol. 2​ 005​, ​96,​ 673-686. 116.
Chundawat, SP; Venkatesh, B.; Dale, BE Effect of particle size based separation of milled corn
stover on AFEX pretreatment and enzymatic digestibility. ​Bioteknol. Bioeng. ​2007​, ​96​, 219-231.
117. Eggeman, T.; Elander, RT Process and economic analysis of pretreatment technologies.
Bioresource Technol. ​2005​, ​96​, 2019-2025. 118. Zheng, Y.; Tsao, GT Avicel hydrolysis by
cellulase enzyme in supercritical CO​2​. ​Bioteknol.
Lett. ​1996​, ​18​, 451-454. 119. Zheng, Y.; Lin, H.-M.; Wen, J.; Cao, N.; Yu, X.; Tsao, GT
Supercritical carbon dioxide
explosion as a pretreatment for cellulose hydrolysis. ​Bioteknol. Lett. ​1995​, ​17​, 845-850. 120. Kim, KH;

Hong, J. Supercritical CO​2 ​pretreatment of lignocellulose enhances enzymatic

cellulose hydrolysis. ​Bioresource Technol. 2​ 001​, ​77,​ 139-144. 121. Pasquini, D.; Pimenta, MTB;
Ferreira, LH; Curvelo, AAdS Extraction of lignin from sugar cane bagasse and Pinus taeda wood chips
using ethanol-water mixtures and carbon dioxide at high pressures. ​J. Supercrit. Fluid. ​2005​, ​36​, 31-39.
122. Park, CY; Ryu, YW; Kim, C. Kinetics and rate of enzymatic hydrolysis of cellulose in
supercritical carbon dioxide. ​Korean J. Chem. Eng 2​ 001​, ​18,​ 475-478. 123. Dien, BS; Li, XL;
Iten, LB; Jordan, DB; Nichols, NN; O'Bryan, PJ; Cotta, MA Enzymatic saccharification of hot-water
pretreated corn fiber for production of monosaccharides. ​Enzyme Microb. Tech. 2​ 006​, ​39,​ 1137-1144. 124.
Sreenath, HK; Koegel, RG; Moldes, AB; Jeffries, TW; Straub, RJ Enzymic saccharification
of alfalfa fibre after liquid hot water pretreatment. ​Process Biochem. 1​ 999​, ​35,​ 33-41. 125. Mosier, N.;
Hendrickson, R.; Ho, N.; Sedlak, M.; Ladisch, MR Optimization of pH controlled
liquid hot water pretreatment of corn stover. ​Bioresource Technol. ​2005​, ​96​, 1986-1993. 126. Mosier, NS;
Hendrickson, R.; Brewer, M.; Ho, N.; Sedlak, M.; Dreshel, R.; Welch, G.; Dien, BS; Aden, A.; Ladisch,
MR Industrial scale-up of pH-controlled liquid hot water pretreatment of corn fiber for fuel ethanol
production. ​Appl. Biokem. Bioteknol. ​2005​, ​125​, 77-97. 127. Kim, TH; Lee, YY Fractionation of corn
stover by hot-water and aqueous ammonia treatment.
Bioresource Technol. ​2006​, ​97​, 224-232. 128. Zhu, S.; Wu, Y.; Yu, Z.; Liao, J.; Zhang, Y.
Pretreatment by microwave/alkali of rice straw and
its enzymatic hydrolysis. ​Process Biochem. 2​ 005​, ​40,​ 3082-3086. 129. Zhu, S.; Wu, Y.; Yu, Z.;
Wang, C.; Yu, F.; Jin, S.; Ding, Y.; Chi, R.; Liao, J.; Zhang, Y. Comparison of three microwave/chemical
pretreatment processes for enzymatic hydrolysis of rice straw. ​Biosyst. Eng 2​ 006​, ​93,​ 279-283. 130.
Kassim, EA; El-Shahed, AS Enzymatic and chemical hydrolysis of certain cellulosic materials.
Agr. Wastes ​1986​, ​17​, 229-233. 131. Xu, Z.; Wang, Q.; Jiang, Z.; Yang, X.-X.; Ji, Y. Enzymatic
hydrolysis of pretreated soybean
straw. ​Biomass Bioenerg. 2​ 007​, ​31,​ 162-167.
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1649

132. Vaccarino, C.; Lo Curto, RB; Tripodo, MM; Bellocco, E.; Laganfi, G.; Patan, R. Effect of SO​2​,

NaOH and Na​2​CO​3 ​pretreatments on the degradability and cellulase digestibility of grape marc. Biol.
​
Waste. 1​ 987​, ​20,​ 79-88. 133. Silverstein, RA; Chen, Y.; Sharma-Shivappa, RR; Boyette, MD; Osborne, J.
A comparison of chemical pretreatment methods for improving saccharification of cotton stalks.
Bioresource Technol. ​2007​, ​98​, 3000-3011. 134. Zhao, X.; Zhang, L.; Liu, D. Comparative study on
chemical pretreatment methods for improving
enzymatic digestibility of crofton weed stem. ​Bioresource Technol. ​2007​, ​99​, 3729-3736. 135. Gaspar,
M.; Kalman, G.; Reczey, K. Corn fiber as a raw material for hemicellulose and ethanol
production. ​Process Biochem. ​2007​, ​42​, 1135-1139. 136. Beccari, M.; Majone, M.; Papini, MP;

Torrisi, L. Enhancement of anaerobic treatability of olive oil mill effluents by addition of Ca(OH)​2 ​and

bentonite without intermediate solid/liquid separation.

​ ​Water Sci. Technol. 2​ 001​, ​43,​ 275-282. 137.
Tanaka, S.; Kobayashi, T.; Kamiyama, K.; Bildan, M. Effects of thermochemical pretreatment on
the anaerobic digestion of waste activated sludge. ​Water Sci. Technol. 1​ 997​, ​35,​ 209-215. 138. Tanaka, S.;
Kamiyama, K. Thermochemical pretreatment in the anaerobic digestion of waste
activated sludge. ​Water Sci. Technol. ​2002​, ​46​, 173-179. 139. Lin, JG; Ma, YS; Chao, AC;
Huang, CL BMP test on chemically pretreated sludge.
Bioresource Technol. ​1999​, ​68​, 187-192. 140. Heo, NH; Park, SC; Lee, JS; Kang, H.
Solubilization of waste activated sludge by alkaline pretreatment and biochemical methane potential
(BMP) tests for anaerobic co-digestion of municipal organic waste. ​Water Sci. Technol. 2​ 003​, ​48,​
211-219. 141. Saha, BC; Cotta, MA Ethanol production from alkaline peroxide pretreated enzymatically
saccharified wheat straw. ​Bioteknol. Progr. 2​ 006​, ​22,​ 449-453. 142. Saha, BC; Cotta, MA
Enzymatic saccharification and fermentation of alkaline peroxide
pretreated rice hulls to ethanol. ​Enzyme Microb. Tech. 2​ 007​, ​41,​ 528-532. 143. Mishima, D.;
Tateda, M.; Ike, M.; Fujita, M. Comparative study on chemical pretreatments to accelerate enzymatic
hydrolysis of aquatic macrophyte biomass used in water purification processes. ​Bioresource Technol.
2006​, ​97​, 2166-2172. 144. Curreli, N.; Fadda, MB; Rescigno, A.; Rinaldi, AC; Soddu, G.; Sollai, F.;
Vaccargiu, S.; Sanjust, E.; Rinaldi, A. Mild alkaline/oxidative pretreatment of wheat straw. ​Process
Biochem. 1​ 997​, ​32,​ 665-670. 145. Itoh, H.; Wada, M.; Honda, Y.; Kuwahara, M.; Watanabe, T.
Bioorganosolve pretreatments for simultaneous saccharification and fermentation of beech wood by
ethanolysis and white rot fungi. ​J. Biotechnol. 2​ 003​, ​103,​ 273-280. 146. Pan, X.; Gilkes, N.; Kadla, J.;
Pye, K.; Saka, S.; Gregg, D.; Ehara, K.; Xie, D.; Lam, D.; Saddler, J. Bioconversion of hybrid poplar to
ethanol and co-products using an organosolv fractionation process: optimization of process yields.
Bioteknol. Bioeng. ​2006​, ​94​, 851-861. 147. Rolz, C.; de Arriola, MC; Valladares, J.; de Cabrera, S. Effects
of some physical and chemical pretreatments on the composition and enzymatic hydrolysis and
digestibility of lemon grass and citronella bagasse. ​Agr. Wastes ​1986​, ​18​, 145-161.
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1650
148. Pan, X.; Arato, C.; Gilkes, N.; Gregg, D.; Mabee, W.; Pye, K.; Xiao, Z.; Zhang, X.; Saddler, J.
Biorefining of softwoods using ethanol organosolv pulping: Preliminary evaluation of process streams for
manufacture of fuel-grade ethanol and co-products. ​Bioteknol. Bioeng. ​2005​, ​90​, 473-481. 149. Araque,
E.; Parra, C.; Freer, J.; Contreras, D.; Rodriguez, J.; Mendonca, R.; Baeza, J. Evaluation of organosolv
pretreatment for the conversion of Pinus radiata D. Don to ethanol. ​Enzyme Microb. Tech. 2​ 007​, ​43,​
214-219. 150. Papatheofanous, MG; Billa, E.; Koullas, DP; Monties, B.; Koukios, EG Two-stage acid-
catalyzed fractionation of lignocellulosic biomass in aqueous ethanol systems at low temperatures.
Bioresource Technol. ​1995​, ​54​, 305-310. 151. Palonen, H.; Thomsen, AB; Tenkanen, M.; Schmidt, AS;
Viikari, L. Evaluation of wet oxidation pretreatment for enzymatic hydrolysis of softwood. ​Appl. Biokem.
Bioteknol. ​2004​, ​117​, 1-17. 152. Varga, E.; Klinke, HB; Reczey, K.; Thomsen, AB High Solid
Simultaneous Saccharification and Fermentation of Wet Oxidized Corn Stover to Ethanol. ​Bioteknol.
Bioeng. ​2004​, ​88​, 567-574. 153. Garrote, G.; Dominguez, H.; Parajo, JC Hydrothermal processing of
lignocellulosic materials.
Holz Als Roh-und Werkst. ​1999​, ​57​, 191-202. 154. Schmidt, A.; Thomsen, A. Optimization of
wet oxidation pretreatment of wheat straw.
Bioresource Technol. ​1998​, ​64​, 139-151. 155. Saha, BC Hemicellulose bioconversion. ​Ind.
Microbiol. Bioteknol. 2​ 003​, ​30,​ 279-291. 156. Schultz, TP; McGinnis, GD; Biermann, CJ Similarities and
differences in pretreating woody biomass by steam explosion, wet oxidation, autohydrolysis, and rapid
steam hydrolysis/continuous extraction. In Proceedings of Annual Symposium on Energy from Biomass
and Wastes, Lake Buena Vista, FL, USA, 1984. 157. Bjerre, AB; Olesen, AB; Fernqvist, T. Pretreatment
of wheat straw using combined wet oxidation and alkaline hydrolysis resulting in convertible cellulose
and hemicellulose. ​Bioteknol. Bioeng. 1​ 996​, ​49,​ 568–577. 158. Ahring, BK; Jensen, K.; Nielsen, P.;
Bjerre, AB; Schmidt, AS Pretreatment of wheat straw and conversion of xylose and xylan to ethanol by
thermophilic anaerobic bacteria. ​Bioresource Technol. ​1996​, ​58​, 107-113. 159. Martin, C.; Klinke, HB;
Thomsen, AB Wet oxidation as a pretreatment method for enhancing the enzymatic convertibility of
sugarcane bagasse. ​Enzyme Microb. Tech. 2​ 007​, ​40,​ 426-432. 160. Lissens, G.; Thomsen, AB; De Baere,
L.; Verstraete, W.; Ahring, BK Thermal wet oxidation improves anaerobic biodegradability of raw and
digested biowaste. ​Mengepung. Sci. Technol. ​2004​, ​38​, 3418-3424. 161. Galbe, M.; Zacchi, G. A review
of the production of ethanol from softwood. ​Appl. Mikrobiol.
Bioteknol. ​2002​, ​59​, 618-628. 162. Azzam, AM Pretreatment of cane bagasse with alkaline
hydrogen peroxide for enzymatic
hydrolysis of cellulose and ethanol fermentation. ​J. Environ. Sci. Heal. 1​ 989​, ​24,​ 421-433. 163. Vidal, PF;
Molinier, J. Ozonolysis of Lignin – Improvement of ​in vitro ​digestibility of poplar
sawdust. ​Biomass 1​ 988​, ​16,​ 1-17.
Int. J. Mol. Sci. ​2008​, ​9 ​1651
164. Neely, WC Factors affecting the pretreatment of biomass with gaseous ozone. ​Bioteknol.
Bioeng. ​1984​, ​26​, 59-65. 165. Weemaes, M.; Grootaerd, H.; Simoens, F.; Verstraete, W.
Anaerobic digestion of ozonized
biosolids. ​Res Air. ​2000​, ​34​, 2330-2336. 166. Goel, R.; Tokutomi, T.; Yasui, H. Anaerobic
digestion of excess activated sludge with ozone
pretreatment. ​Water Sci. Technol. 2​ 003​, ​47,​ 207-214. 167. Goel, R.; Tokutomi, T.; Yasui, H.;
Noike, T. Optimal process configuration for anaerobic
digestion with ozonation. ​Water Sci. Technol. ​2003​, ​48​, 85-96. 168. Benitez, FJ; BeltranHeredia,
J.; Torregrosa, J.; Acero, JL Improvement of the anaerobic biodegradation of olive mill wastewaters by
prior ozonation pretreatment. ​Bioprocess Eng. 1​ 997​, ​17,​ 169-175. 169. Jones, J.; Semrau, K. Wood
hydrolysis for ethanol production previous experience and the
economics of selected processes. ​Biomass ​1984​, ​5​, 109-135. 170. Yang, B.; Wyman, CE Effect
of xylan and lignin removal by batch and flowthrough pretreatment on the enzymatic digestibility of corn
stover cellulose. ​Bioteknol. Bioeng. 2​ 004​, ​86,​ 88-95. 171. Sun, Y.; Cheng, JJ Dilute acid pretreatment of
rye straw and bermudagrass for ethanol
production. ​Bioresource Technol. ​2005​, ​96​, 1599-606. 172. Cara, C.; Ruiz, E.; Oliva, JM; Saez,
F.; Castro, E. Conversion of olive tree biomass into fermentable sugars by dilute acid pretreatment and
enzymatic saccharification. ​Bioresource Technol. ​2007​, ​99​, 1869-1876. 173. Xiao, WP; Clarkson, WW
Acid solubilization of lignin and bioconversion of treated newsprint
to methane. ​Biodegradation ​1997​, ​8​, 61-66. 174. Chen, YG; Jiang, S.; Yuan, HY; Zhou, Q.; Gu,
GW Hydrolysis and acidification of waste
activated sludge at different pHs. ​Res Air. 2​ 007​, ​41,​ 683-689. 175. Kivaisi, AK; Eliapenda, S.
Pretreatment of bagasse and coconut fibres for enhanced anaerobic
degradation by rumen microorganisms. ​Renew. Energy 1​ 994​, ​5,​ 791-795. 176. Azzam, AM

Saccharification of bagasse cellulose pretreated with ZnCl​2 ​and HCl. ​Biomass

Bioenerg. ​1987​, ​12​, 71-77. 177. Taniguchi, M.; Suzuki, H.; Watanabe, D.; Sakai, K.; Hoshino,
K.; Tanaka, T. Evaluation of pretreatment with Pleurotus ostreatus for enzymatic hydrolysis of rice straw.
J. Biosci. Bioeng. 2​ 005​, ​100,​ 637-43. 178. Kurakake, M.; Ide, N.; Komaki, T. Biological pretreatment
with two bacterial strains for
enzymatic hydrolysis of office paper. ​Curr Microbiol ​2007​, ​54​, 424-428. 179. Srilatha, HR;
Nand, K.; Babu, KS; Madhukara, K. Fungal pretreatment of orange processing wastes by solid-state
fermentation for improved production of methane. ​Process Biochem. ​1995​, ​30​, 327-331. 180. Dhouib, A.;
Ellouz, M.; Aloui, F.; Sayadi, S. Effect of bioaugmentation of activated sludge with
white-rot fungi on olive mill wastewater detoxification. ​Lett. Appl. Mikrobiol. 2​ 006​, ​42,​ 405-411.
© 2008 by the authors; licensee Molecular Diversity Preservation International, Basel, Switzerland. This
article is an open-access article distributed under the terms and conditions of the Creative Commons
Attribution license (http://creativecommons.org/licenses/by/3.0/).