Dalam percobaan loop tertutup, tikus dengan berat 250-350 g biasanya berpuasa semalaman dan diberi

akses ke air ad libitum. Merupakan praktik yang baik untuk memungkinkan hewan melakukan
aklimatisasi selama 1 minggu sebelum percobaan. Tikus dianestesi, ditempatkan pada bantalan pemanas
untuk menjaga suhu tubuh konstan 37 ◦C, dan laparotomi dilakukan untuk mengidentifikasi usus kecil.
Dua kanula berbentuk L dimasukkan melalui celah kecil di ujung duodenum dan ileum. Upaya dilakukan
untuk meminimalkan penanganan usus kecil dan untuk mengurangi operasi seminimal mungkin untuk
menjaga suplai darah yang utuh. Kanula diamankan dengan ligatur. Empat sentimeter

segmen tabung polietilen melekat pada ujung yang terbuka dari kedua kanula, dan jarum suntik
hipodermik 30-ml yang dilengkapi dengan stopcock tiga arah dan berisi larutan perfusi, dipanaskan
hingga 37 ◦C, melekat pada kanula duodenum. Solusi perfusi kemudian dilewatkan melalui segmen
untuk membersihkan isi usus dan limbah dibuang sampai berjalan jelas. Larutan perfusi yang tersisa
kemudian dikeluarkan dengan hati-hati, dengan udara yang dipompa melalui usus, 10 ml larutan obat
dimasukkan ke dalam segmen usus yang terisolasi, dan jarum suntik hipodermik kedua dipasang pada
kanula ileum. Pada interval waktu yang telah ditentukan sebelumnya (mis. Interval 5 menit selama 30
menit), larutan lumen diambil sampelnya dengan memompanya ke dalam duodenal atau jarum suntik
ileum, melepaskan larutan ∼0.1 ml, dan mengembalikan larutan lumen dalam 10–15 detik . Metode ini
dapat dimodifikasi dengan penambahan pompa peristaltik in-line yang memfasilitasi pencampuran
media yang konstan dan bertahap dalam lumen, tanpa trauma mekanis yang cenderung diberikan pada
masing-masing usus.

waktu konten jarum suntik berganti-ganti (mis. alat resirkulasi). Dengan asumsi kondisi wastafel berlaku,
konsentrasi obat di segmen usus 'tertutup' diasumsikan menurun secara orde pertama seiring waktu, t,
sebagaimana didefinisikan dalam

di mana C0 adalah konsentrasi obat awal. Oleh karena itu sebidang konsentrasi obat yang tersisa
terhadap waktu dapat dipasang pada persamaan orde pertama, untuk mendefinisikan ka, konstanta laju
absorpsi orde pertama. Peff karenanya dapat dihitung dari