Apoptosis menginduksi aktivitas senyawa disaring dan ditandai dari

cinobufacini dengan kendali isolasi bioassay

Abstrak. Cinobufacini (huachansu), ekstrak air dari kulit katak Bufo bufo gargarizans
Cantor, adalah persiapan obat tradisional Cina secara luas digunakan dalam terapi kanker
klinis di Cina. Di sini, kita disaring dan mengidentifikasi senyawa aktif dari cinobufacini dan
diselidiki efek apoptosis-inducing mereka pada sel HepG2. Skrining dilakukan dengan
menggunakan isolasi bioassay-dipandu. Efek dari fraksi yang berbeda pada proliferasi sel
HepG2 terdeteksi oleh assay MTT. Ekstraksi dan isolasi dari fraksi aktif dilakukan dengan
ekstraksi kloroform, silika kromatografi kolom, kromatografi lapis tipis dan kinerja tinggi
kromatografi cair. Resonansi magnetik nuklir (NMR) pencitraan dan elektron ionisasi-
spektrometri massa (EI-MS) yang digunakan untuk mengidentifikasi struktur senyawa aktif.
Tingkat apoptosis sel terdeteksi oleh Hoechst 33.258 pewarnaan dan mengalir analisis
cytometric. analisis Western blot digunakan untuk mendeteksi ekspresi yang berhubungan
dengan apoptosis protein Bax dan Bcl-2. Melalui isolasi bioassay-dipandu, dua senyawa yang
diisolasi dari cinobufacini. Data NMRand EI-MS mengungkapkan senyawa ini menjadi
resibufogenin dan cinobufagin. Cinobufagin bertekad untuk menjadi lebih efisien dari dua
dalam menghambat proliferasi sel HepG2. Hoechst 33.258 pewarnaan dan analisis aliran
cytometric menunjukkan bahwa cinobufagin diinduksi ditandai perubahan morfologi
apoptosis dan secara signifikan meningkatkan proporsi sel apoptosis pada sel HepG2. analisis
Western blot menunjukkan bahwa cinobufagin up-diatur ekspresi Bax dan down-diatur
ekspresi Bcl-2. Kesimpulannya, kami disaring dan mengidentifikasi dua senyawa anti-
proliferasi cinibufacini, resibufogenin dan cinobufagin. Yang paling efektif majemuk,
cinobufagin, proliferasi sel menghambat dengan menginduksi apoptosis sel HepG2. Hal ini
berpotensi dipicu oleh regulasi rasio Bax / Bcl-2.

Kata kunci: cinobufacini, bioassay-kendali isolasi, cinobufagin, apoptosis

pengantar
Dalam beberapa tahun terakhir, banyak obat-obatan tradisional Cina telah ditemukan
memiliki aktivitas anti-kanker yang kuat, dan telah menarik minat yang cukup sebagai calon
potensial untuk pengembangan terapi kanker baru (1). Kulit katak Bufo bufo gargarizans
Cantor, yang digunakan dalam pengobatan tradisional Cina, pameran antipiretik, detoxicant,
diuresis, stasis-eliminatif dan sifat nanah pemakaian (2-4). Cinobufacini (huachansu), ekstrak
berair B. bufo gargarizans Cantor kulit, adalah persiapan obat tradisional Cina secara luas
digunakan dalam terapi kanker klinis di Cina. Hal itu ditunjukkan untuk memiliki efek anti-
kanker yang signifikan dalam berbagai kanker, termasuk hati, lambung, pankreas dan kanker
esofagus (5-9).

Mempelajari senyawa aktif penting untuk pengembangan obat tradisional Cina (13).
Komponen kimia cinobufacini telah diselidiki sejak 1980-an (14). Telah menunjukkan bahwa
bufadienolides dan alkaloid indol seperti bufalin, cinobufagin, resibufogenin, bufothionine,
bufotenidine dan serotonin adalah senyawa kimia utama cinibufacini (14,15). Namun, untuk
yang terbaik dari pengetahuan kita, senyawa bioaktif dari cinobufacini mampu menghambat
proliferasi sel kanker dan menginduksi apoptosis sel telah belum ditentukan.

Dalam penelitian kami sebelumnya, cinobufacini ditunjukkan untuk menghambat

pertumbuhan sel dengan menginduksi apoptosis pada sel HepG2 (12). Dalam penelitian ini,
kami disaring dan mengidentifikasi senyawa aktif dari cinobufacini dengan efek anti-kanker,
dan menyelidiki efek apoptosis-inducing mereka dalam sel HepG2.

material dan metode

Persiapan cinobufacini. Cinobufacini, ekstrak air dari kulit katak bufo B. gargarizans Cantor,
diperoleh dari Anhui Jinchan Biochemical Co, Ltd, Anhui, Cina. Proses persiapan adalah
sebagai berikut: kulit B. bufo gargarizans Cantor (20 g) direbus dua kali dengan air suling.
rebusan yang dihasilkan dicampur dan disaring menggunakan kertas saring, maka solusi
disaring dikumpulkan, terkonsentrasi, lyophilized dan diekstraksi dua kali dengan 60 dan
85% etanol. Akhirnya, setiap rebusan dari 20 g B. bufo gargarizans Cantor kulit dipekatkan
sampai 1 ml.

Budaya sel. Sel-sel HepG2 garis sel hepatoblastoma manusia dipertahankan dalam
dimodifikasi Eagle menengah tinggi glukosa Dulbecco (DMEM; Invitrogen, Carlsbad, CA,
USA), ditambah dengan 10% panas dilemahkan janin bovine serum (Invitrogen), 100 U / ml
penisilin dan 100 ug / ml streptomisin (Sigma, St Louis, MO, USA) dalam suasana lembab
dengan 5% CO2 di udara pada 37C. Sel-sel pada fase logaritmik pertumbuhan dikumpulkan
untuk percobaan.

Penilaian efek anti-proliferasi pada sel HepG2.sel HepG2 pada fase logaritmik pertumbuhan
dikumpulkan dan berlapis dengan kepadatan 8x104 sel / ml dalam piring 96-baik. Setelah
inkubasi selama 24 jam, sel-sel diinkubasi dengan fraksi yang berbeda pada berbagai
konsentrasi dalam serum bebas DMEM tinggi glukosa seperti yang ditunjukkan. Sebagai
kontrol negatif, sel-sel diobati dengan 0,1% DMSO. Setelah inkubasi selama waktu yang
ditunjukkan, viabilitas sel dideteksi menggunakan 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-difenil
tetrazolium bromide (MTT) assay (Roche, Mannheim, Jerman). nilai IC50 (konsentrasi obat
yang dibutuhkan untuk menghambat pertumbuhan sel oleh 50%) kemudian dihitung.

Skrining dan identifikasi senyawa aktif dari cinobufacini. In vitroisolasi bioaktivitas-dipandu

dilakukan ke layar untuk senyawa anti-kanker aktif cinobufacini. Pemurnian kelas
cinobufacini sama sekali fraksi dipantau dengan kromatografi lapis tipis (TLC) (chlorofome /
etil asetat, 1: 1) menggunakan 10% reagen asam sulfat, diikuti dengan inkubasi pada 100C
selama 5 menit. Dalam percobaan ini, cinobufacini (50 ml) pertama kali difraksinasi ke
dalam (200 ml) fasa air dan kloroform. Kedua fase kloroform dan fasa air yang tersisa
diuapkan di bawah vakum pada 40˚C. residu diekstraksi kemudian ditimbang dan efek anti-
proliferasi mereka pada HepG2 Sel-sel dievaluasi menggunakan assay MTT.

Selanjutnya, lebih aktif kloroform fraksi (2,2 g) teradsorpsi pada kolom silika dari 200 g
Wakogel C-200 (Wako Co, Osaka, Jepang) dan berturut-turut dielusi dengan n-butil alkohol /
kloroform / aseton (4: 3: 3) dan metanol. Fraksi (fraksi I-IX) diuapkan pada tekanan
berkurang. residu diekstraksi ditimbang dan cytotoxicities dari semua fraksi dievaluasi.
Fraksi III (154,8 mg) dengan peningkatan aktivitas anti-proliferasi difraksinasi lagi dengan 40
g kromatografi silika-gel (Wakogel C-200), kemudian berturut-turut dielusi dengan
kloroform / etil asetat (1: 1) dan metanol. Setiap fraksi (fraksi 1-13) dikeringkan dan
ditimbang, diikuti oleh evaluasi cytotoxicities.

Fraksi 8 (38 mg) ditemukan menjadi yang paling efektif dan selanjutnya dimurnikan dengan
KLT preparatif (Wako Co) dan semi-preparatif kromatografi-cair kinerja tinggi (HPLC)
dengan kolom C-18 μBondasphere (Waters Inc., Tokyo , Jepang). Dua fraksi murni
diperoleh. nilai pemurnian mereka lebih terdeteksi menggunakan COSMOSILCholester fase
terbalik C-18 kolom (Waters, Jepang) dielusi dengan 45% asetonitril.

Struktur senyawa terisolasi dijelaskan oleh analisis ekstensif 1H resonansi magnetik nuklir
(NMR), 13C NMR, distortionless peningkatan melalui transfer polarisasi (DEPT) dan
elektron ionisasi-spektrometri massa (EI-MS; JMS-SX102A, JEOL, Tokyo, Jepang), dan
diidentifikasi oleh data spektrum dan rotasi tertentu dalam literatur.

Analisis apoptosis sel. Hoechst 33.258 pewarnaan (Dojindo Laboratories, Kumamoto,

Jepang) digunakan untuk mengamati morfologi sel apoptosis. Sel (2x105 sel / ml) yang
diunggulkan di piring 12-baik dan diinkubasi selama 24 jam. Setelah inkubasi dengan 0,04 ug
/ ml (1 M) cinobufagin selama 24 jam, sel-sel tetap dengan 4% formaldehid dalam fosfat
buffered saline (PBS) selama 15 menit dan diwarnai dengan Hoechst 33.258 solusi pada suhu
kamar selama 10 menit. Kemudian, setelah mencuci di PBS, perubahan morfologi sel
termasuk pengurangan volume dan kromatin nuklir kondensasi diamati di bawah mikroskop
fluoresensi dan difoto pada perbesaran X400.

Efek apoptosis-inducing dari cinobufagin juga ditentukan oleh aliran cytometry. Secara
singkat, setelah inkubasi dengan 0,04 ug / ml cinobufagin selama 24 jam, sel trypsinized,
dicuci dengan PBS, tetap di 70% dingin etanol dan disimpan pada -20C. Sebelum analisis, sel
dicuci lagi dengan PBS dan diperlakukan dengan DNA-mengikat propidium iodida (PI; BD
PharMingenTM, CA, USA) solusi (10 mg / ml dalam PBS, yang mengandung 0,05 mg / ml
RNase A) sesuai dengan instruksi pabrik. Akhirnya, proporsi sel fase apoptosis atau sub-G1
diukur dengan sitometri dan dianalisis menggunakan software ModFit (ModFit LT untuk
Mac V2.0).

analisis Western blot. Setelah pengobatan dengan 0,04 ug / ml cinobufagin selama 24 jam,
sel-sel dipanen dan segaris dengan RIPA Lisis Buffer (Sigma) selama 30 menit di atas es,
maka lisat disentrifugasi pada 10.000 g selama 10 menit dan supernatan colleted. Konsentrasi
protein supernatan ditentukan dengan uji kit DCProtein (Bio-Rad Laboratories, Hercules,
CA, USA). jumlah yang sama protein (30 mg) dipisahkan dengan elektroforesis pada gel
SDS-poliakrilamida dan ditransfer ke membran polyvinylidene difluorida. Membran pertama
kali diinkubasi dalam memblokir solusi (5% susu skim) selama 1 jam dan kemudian
diinkubasi semalam pada 4C dengan antibodi primer anti-Bax atau anti-Bcl-2 (1: 1.000
pengenceran) (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA). Setelah mencuci dengan
TBS-T (Tris buffer saline dengan Tween-20: 20 mM Tris-HCL, 0,14 M NaCL, 0,1% Tween-
20, pH 7. 6) tiga kali, membran diinkubasi dengan antibodi IgG sekunder HRP-label selama
satu jam lagi dan kemudian dicuci dengan TBS-T tiga kali lebih. Akhirnya, pita protein
divisualisasikan menggunakan sistem deteksi chemiluminescence ditingkatkan. Sebagai
pengendalian internal,β-actin terdeteksi dengan antiβantibodi -actin (Sigma).

Analisis statistik. Percobaan dilakukan dalam rangkap tiga dan hasilnya dinyatakan sebagai
mean ± SD. Analisis statistik dilakukan dengan analisis satu arah varians (ANOVA)
menggunakan software SPSS.15.0. P <0,05 adalah indikasi dari perbedaan yang signifikan.

hasil
efek anti-proliferasi dari fraksi terisolasi dari cinobufacini di HepG2 sel. Di bawah fraksinasi
bioaktivitas-dipandu, efektif komponen anti-kanker dari cinobufacini dimurnikan. Seperti
yang ditunjukkan pada Tabel I, komponen anti-kanker yang efisien diekstraksi dengan
kloroform, yang dipamerkan IC yang lebih rendah50 (0,18 ug / ml) dari residu air (IC50
576,0 ug / ml) dan cinobufacini (IC50 1,6 mg / ml) di HepG2 sel. pemurnian lebih lanjut dari
ekstrak kloroform dilakukan dengan kromatografi silika-gel. The cytotoxicities dari fraksi I-
IX tercantum pada Tabel II. Pecahan I, II, V, VII, VIII dan IX ditampilkan efek anti-
proliferasi yang lemah pada HepG2 sel dengan IC50 ≥31.1 ug / ml, sedangkan fraksi IVand
VI menunjukkan efek anti-proliferasi moderat dengan IC50 ≥11.2 ug / ml. Sebaliknya, fraksi
III menunjukkan aktivitas sitotoksik yang signifikan dalam HepG2 sel dengan IC terendah50
Nilai (5,8 mg / ml). Hasil ini menunjukkan bahwa fraksi III adalah kandidat yang
menjanjikan untuk penyelidikan lebih lanjut. Oleh karena itu, kromatografi silika-gel lain
dilakukan untuk lebih memurnikan fraksi III. Tiga belas fraksi (fraksi 1-13) dipisahkan dan
kegiatan anti-kanker mereka ditentukan. Seperti yang ditunjukkan pada Tabel III, fraksi 8
ditampilkan IC jauh lebih rendah50 (5.0 mg / ml) dibandingkan fraksi lain. Oleh karena itu,
fraksi 8 dipilih untuk pemurnian senyawa anti-proliferasi.

Pemurnian senyawa aktif dalam fraksi 8. Untuk layar senyawa bioaktif dari fraksi 8,
preparatif TLC dan HPLC fase terbalik dengan kolom μBondasphere dipekerjakan. Dua
fraksi dimurnikan diisolasi dengan KLT preparatif dan HPLC dari fraksi 8. Deteksi akhir dari
salah satu fraksi ini menggunakan HPLC menghasilkan puncak tunggal (Gambar. 1),
menunjukkan bahwa dua senyawa yang sangat homogen (Senyawa 1 dan 2) diperoleh.

Identifikasi senyawa aktif. Senyawa 1 diperoleh sebagai bubuk putih yang EI-MS spektrum
showedthe (M + H)+ ion puncak pada 385. Dikombinasikan dengan hasil 1H NMR (data
tidak ditampilkan) dan 13 CNMR, Data DEPT ditunjukkan pada Tabel IV, rumus molekul
dari senyawa ini adalah C24H32 HAI4 (Mr = 384). Senyawa 2 diperoleh sebagai spektrum
bubuk putih yang EI-MS menunjukkan (M + H)+ ion puncak pada 443. Dikombinasikan
dengan 1H NMRdata (data tidak ditampilkan) dan 13C NMR, data yang DEPT ditunjukkan
pada Tabel IV, rumus molekul dari senyawa ini adalah C26H34HAI6 (Mr = 442). Setelah
menganalisis dan membandingkan data ini secara online (SciFinder Scholar) dengan senyawa
dilaporkan dan referensi, struktur Senyawa 1 dan 2 diidentifikasi sebagai resibufogenin
(Compound 1) dan cinobufagin (Compound 2) (Gambar. 1), yang sebelumnya terdeteksi di
sekresi parotis dari kodok B. marinus, B. gargarizans dan B. melanostictus (15,16).

TABEL 1
Efek dari resibufogenin dan cinobufagin pada proliferasi sel. pertumbuhan sel penghambatan
oleh resibufogenin dan cinobufagin pengobatan ditentukan oleh assay MTT. Seperti
ditunjukkan dalam Gambar. 2, baik resibufogenin dan cinobufagin penghambatan pengobatan
diinduksi pertumbuhan HepG2 sel dengan cara dosis-dan tergantung waktu. Namun,
cinobufagin menunjukkan sitotoksisitas lebih signifikan pada HepG2 sel dari resibufogenin.
Pada 24 jam terapi obat, IC yang50 nilai cinobufagin adalah 0,55 mg / ml, sedangkan
resibufogenin adalah 6,9 mg / ml. Oleh karena itu, cinobufagin dipilih untuk penyelidikan
lebih lanjut karena sitotoksisitas signifikan.

TABLE 2,3,4

Efek dari cinobufagin pada apoptosis sel. Untuk mengetahui pengaruh cinobufagin pada
morfologi sel apoptosis, Hoechst 33.258 pewarnaan digunakan. Setelah pengobatan dengan
0,04 ug / ml cinobufagin selama 24 jam, ditandai perubahan morfologi morfologi kromatin,
seperti krenasi, kondensasi dan fragmentasi, yang diamati pada HepG2 sel (Gambar. 3A).
Untuk analisis kuantitatif lebih lanjut dari sel apoptosis, penduduk di fase sub-G1 dianalisis,
dan populasi sel apoptosis diperkirakan. Seperti ditunjukkan pada Gambar. 3B, cinobufagin
pengobatan mengakibatkan akumulasi peningkatan sel sub-G1. Setelah pengobatan dengan
0,04 ug / ml cinobufagin selama 24 jam, populasi sel apoptosis HepG2 sel adalah 22,24%.
Hasil ini menunjukkan bahwa cinobufagin nyata menginduksi apoptosis di HepG2 sel.

Efek dari cinobufagin terhadap ekspresi protein yang berhubungan dengan apoptosis Bax
dan Bcl-2. Untuk memperjelas mekanisme apoptosis yang disebabkan oleh cinobufagin,
ekspresi protein Bax dan Bcl-2 diperiksa di HepG2 sel setelah pengobatan dengan 0,04 ug /
ml cinobufagin selama 24 jam. Seperti ditunjukkan pada Gambar. 4A, ekspresi protein Bax
pro-apoptosis naik-diatur, sedangkan ekspresi anti-apoptosis protein Bcl-2 bawah-diatur.
Rasio Bax / Bcl-2 meningkat secara signifikan dalam sel cinobufagin-diperlakukan
dibandingkan dengan kontrol (Gambar. 4B)

GAMBAR 1

HPLC kromatogram resibufogenin (A) dan cinobufagin (B) dari cinobufacini. Kondisi
HPLC: COSMOSIL cholester fase terbalik C-18 kolom; fase gerak, 45% asetonitril; rate, 1
ml / menit mengalir; deteksi panjang gelombang, 296 nm. Sampel dilarutkan dalam methano

GAMBAR 2

Waktu dan tergantung dosis efek resibufogenin (A) dan cinobufagin (B) pada proliferasi
HepG2 sel. Sel diobati dengan berbagai konsentrasi regibufogenin atau cinobutagin (0.0001-
100 ug / ml) selama 24, 48 dan 72 h. Penghambatan proliferasi sel diukur dengan MTT assay.
Setiap nilai adalah mean ± SD dari tiga penentuan.*penghambatan yang signifikan (P <0,05)
dibandingkan dengan kontrol

GAMBAR 3

Pengaruh cinobufagin pada induksi apoptosis pada sel HepG2. (A) Pengaruh cinobufagin
pada morfologi sel apoptosis. Hoechst 33.258 pewarnaan digunakan. pembesaran asli, x200.
(B) analisis kuantitatif sel apoptosis. Populasi dalam fase sub-G1 dihitung dengan aliran
cytometry untuk memperkirakan populasi sel apoptosis. Sel diobati dengan 0 atau 0,04 ug /
ml cinobufagin selama 24 jam. Daerah biru mewakili sel sub-G1.

GAMBAR 4

Pengaruh cinobufagin terhadap ekspresi Bax dan Bcl-2 di HepG2 sel. (A) analisis Western
blot dari tingkat protein Bax dan Bcl-2. (B) Rasio Bax / Bcl-2. Sel diobati dengan 0 atau 0,04
ug / ml cinobufagin selama 24 jam. Setiap nilai adalah mean ± SD dari tiga
penentuan.*penghambatan yang signifikan (P <0,05) dibandingkan dengan kontrol ..

Diskusi
Dalam studi ini, kami bertujuan untuk mengisolasi senyawa aktif dari cinobufacini, ekstrak
digunakan dalam pengobatan tradisional Cina. Senyawa Cinobufacini yang terutama dibagi
menjadi dua fraksi melalui ekstraksi kloroform. Hal ini menunjukkan bahwa, meskipun fraksi
kloroform memberikan kontribusi hanya 15,4% dari total jumlah cinobufacini, fraksi kurang
hidrofilik ini dipamerkan IC jauh lebih rendah50 nilai-nilai dari fraksi berair cinobufacini di
HepG2 sel. Hasil ini menunjukkan bahwa senyawa kurang hidrofilik dari cinobufacini
mungkin memainkan peran paling penting dalam anti-proliferasi di HepG2 sel.

Melalui isolasi bioassay-dipandu, dua senyawa aktif yang diisolasi dari bahan-bahan yang
kurang hidrofilik cinobufacini. Kedua senyawa aktif diidentifikasi sebagai resibufogenin dan
cinobufagin, yang merupakan anggota dari keluarga bufadienolide. Bufadienolides, termasuk
resibufogenin, cinobufagin, bufalin, bufotalin dan arenobufagin, adalah jenis glikosida
jantung steroid (17) yang menunjukkan berbagai efek biologis, termasuk kardiotonik, anestesi
dan kegiatan anti-neoplastik (18). Bufalin, sebagai senyawa aktif utama dari bufadienolide,
telah terbukti memiliki aktivitas anti-proliferasi yang signifikan dan efek apoptosis-inducing
pada leukemia manusia, hati, prostat, endometrium dan sel-sel kanker ovarium (19,20).
Dalam penelitian ini, kami menemukan bahwa dua bufadienolides,2 sel dengan cara dosis-
dan tergantung waktu. Cinobufagin diinduksi amore ditandai efek anti-proliferasi dari
resibufogenin di HepG2 sel, menunjukkan cinobufagin itu adalah agen anti-kanker yang lebih
efektif dari dua, dan bahwa mekanisme yang diperlukan penyelidikan lebih lanjut.

Apoptosis, juga disebut kematian sel terprogram, memainkan peran penting dalam
pembentukan dan evolusi tumor (21). Induksi apoptosis merupakan mekanisme pelindung
utama terhadap kanker. Penelitian ini menemukan bahwa cinobufagin menginduksi apoptosis
HepG2 sel. perubahan morfologi ditandai indikasi apoptosis sel jelas diamati ketika sel-sel
diobati dengan 0,04 ug / ml cinobufagin selama 24 jam. Selanjutnya, menurut analisis aliran
cytometric, populasi sel apoptosis meningkat secara signifikan setelah cinobufagin
pengobatan.

Berdasarkan temuan ini, kami diteliti lebih lanjut mekanisme yang mungkin apoptosis
diinduksi oleh cinobufagin. Apoptosis diatur oleh berbagai molekul yang berhubungan
dengan apoptosis termasuk Bcl-2 keluarga (misalnya, Bcl-2, Bcl-xl, Bax dan Bad), p53, Fas
dan FasL (22). Bcl-2 keluarga memainkan peran penting dalam mengendalikan apoptosis dan
terutama terdiri dari dua kelompok fungsional yang berbeda: protein anti-apoptosis, seperti
Bcl-2 dan Bcl-xL, yang melindungi sel dari apoptosis, dan protein pro-apoptosis , seperti Bax
dan Bad, yang memicu apoptosis (23). Ditemukan bahwa penurunan ekspresi Bcl-2
mempromosikan apoptosis yang disebabkan oleh rangsangan apoptosis beragam, sementara
peningkatan ekspresi Bax menginduksi apoptosis dengan menekan aktivitas Bcl-2. Dengan
demikian, rasio Bax untuk Bcl-2, bukan Bcl-2 saja, sangat penting untuk kelangsungan hidup
apoptosis diinduksi obat (23). Studi kami menunjukkan bahwa cinobufagin nyata up-diatur
ekspresi Bax dan down-diatur ekspresi Bcl-2, akhirnya mengarah ke peningkatan rasio Bax /
Bcl-2 tingkat. hasil ini menunjukkan bahwa up-regulasi Bax berekspresi dan down-regulasi
ekspresi Bcl-2 mungkin salah satu apoptosis penting menginduksi mekanisme cinobufagin.

senyawa anti-kanker, resibufogenin dan cinobufagin, dari cinibufacini. Kedua senyawa

menunjukkan aktivitas anti-proliferasi yang signifikan terhadap HepG2 sel. Selanjutnya,
cinobufagin ditemukan menghambat proliferasi sel dengan menginduksi apoptosis HepG2
sel. Up-regulasi Bax dan down-regulasi ekspresi Bcl-2 mungkin menjadi salah satu
mekanisme kunci apoptosis induksi. Namun, penelitian lebih lanjut diperlukan untuk
memperjelas jalur sinyal yang mendasari apoptosis diinduksi oleh cinobufagin dan senyawa
aktif utama lainnya dari cinobufacini.

Ucapan Terima Kasih

Penelitian ini didukung oleh Grant-in-Aid untuk Riset Ilmiah di Area Prioritas dari
Departemen Pendidikan, Kebudayaan, Olahraga dan Teknologi Jepang.