Stabilitas Sterilisasi Liposom dari Novel Antikanker Agen Phospho-IbuProfen

(MDC-917): Karakteristik Preparasi dan Evaluasi In Vivo/In Vitro

Disusun guna memenuhi tugas Sistem Penghantar Obat

Disusun Oleh :
1. Weka Agustin 152210101021
2. Rochman dwi 152210101029
3. Misshael Iksan 152210101047
4. Adelia Anastasya 152210101050

Dosen Pengampu : Kuni Zu’aimah B., S.Farm., M.Farm,. Apt.

BAGIAN FARMASETIKA FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS JEMBER
2019
 Obat anti inflamasi nonsteroid (NSAID) berkhasiat menghambat perkembangan
neoplastik dini dan konversi ganas. Salah satu NSAID yang dimodifikasi tersebut adalah fosfo-
ibuprofen (P-I), turunan dari ibuprofen, yang terdiri dari ibuprofen secara kovalen melekat pada
gugus dietilfosfat melalui bagian pengatur jarak. P-I (fosfo-ibuprofen) menghambat pertumbuhan
xenografts kanker usus besar pada nude mice. Metode pemberian obat yang lebih baik dapat
meningkatkan efikasi anti tumor atau menggunakan dosis obat yang lebih rendah.

Liposom, banyak digunakan sebagai pembawa obat. liposom dapat mengakomodasi agen
lipofilik yang kurang larut dan meningkatkan indeks terapeutik obat. Contohnya liposom pegilasi
yang menggabungkan berbagai agen antikanker . fungsinya untuk efek waktu sirkulasi yang
panjang karena liposom dapat menghindari sistem recticuloendothelial (RES), dan akumulasi
preferensi pada tumor padat melalui "peningkatan permeabilitas dan retensi" (EPR).

P-I memiliki kelarutan dalam air yang rendah (logP = 5.22) dan digunakan untuk
kendaraan hidrofob yang diperlukan sebagai pelarut. Tujuan penelitian ini, mempelajari efek
komposisi lipid dan cryoprotectants pada efisiensi penjeratan obat, ukuran liposom, potensi zeta
dan stabilitas jangka panjang.

Bahan

Soy-phosphatidylcholine (soy-PC), egg-phosphatidylcholine (egg-PC), soy-

phosphatidylserine (soy-PS), soy-phosphatidylethanolamine (soy-PE) dan methoxy-poly (etilena
glikol) 2000-distearoylphosphatidylethanolamine (PEG2000-PE). Insulin manusia, Kolesterol,
octadecylamine (stearylamine), asetonitril, kloroform, bermacam-macam reagen dan pelarut.

Metode

P-I yang dimuat liposom disiapkan menggunakan metode hidrasi film, dan dikarakterisasi untuk
ukuran, potensi zeta, kandungan obat dan pelepasan obat. Kami memeriksa stabilitas fisik
mereka dengan perubahan ukuran partikel; kemampuan liofilisasi mereka di hadapan
cryoprotectants; dan aktivitas antitumor mereka secara in vitro dalam garis sel kanker manusia
dan in vivo dalam model murine xenograft.

 Sel Culture
 MCF-7 dan MDA-MB-231 kanker payudara manusia dan sel kanker usus besar manusia
SW840 dan tumbuh sebagai lapisan tunggal. Media kultur sel (MEM untuk sel MCF-7; L-15
untuk sel MDA-MB-231; dan RPMI 1640 untuk sel SW480) dilengkapi dengan 10% heat-
inaktivasi serum janin sapi yang dilemahkan (FBS), antibiotik 1% (50 U / ml penisilin dan
streptomisin 0,05 mg / ml) dan insulin manusia 0,01 mg / ml (insulin hanya digunakan untuk
MCF-7). Sel dipertahankan pada suhu 37 ° C dalam inkubator yang dilembabkan yang
mengandung 5% CO2.

Liposome Formulations
Liposom P-1 di buat dengan liposom ektrusi multilamellar menggunakan campuran
fosfolipid. Untuk menghasilkan vesikel unilamellar yang homogen, di gunakan hidrasi film obat
lipid, di ikuti dengan ekstruksi melalui membrane polikarbonat. Liposom yang terdiri dari
fosfasidilkolin (PC) dengan jumlah molar yang sama dari P1 menunjukkan efisiensi maksimal
(sekitar 60%), dengan kandungan obats ekitar 15 mg/ml di anggap cukup tinggi. Rata rata
diameter hidrodinamik adalah 140 nm dan potensi zeta -28 mv.
Penggunaan phophatidylserine (PS) dan pada tingkat yang lebih rendah
,phosphatidylethanolamine (PE) dalam lamgkah terbukti telah mengurangi ukurannya meski
tidak secara signifikan mengubah potensi zeta pada ph fisiologi. Tujuan dari substitusi ini untuk
mengurangi ukuran lipsoom atau meningkatkan EE tanpa mengubah potensi zeta suspense
liposom.
Stabilitas dan pelepasan liposom

Ketidakstabilan dari suspense liposom menyebabkan agresi atau fusi, dari liposom
selama penyimpanan dapat meningkatkan ukuran partikel, dan mempercepat pelepasan obat.
Kolestrol dapat digunakan sebagai agen membran pengeras dengan bergabung dengan liposom.
Kolestrol menunjukan dapat meningkatkan retensi dengan memodulasi fluiditas dari membrane
liposom. Kolestrol dalam fosfolipid membrane bilayer dapat meningkatkan stabilitas liposom.

Dalam penelitian hanya liposom Soy-PC yang digunakan karena, Soy-PE, Soy-PS dan
Egg-PC tidak memiliki efek yang menguntungkan pada karakteristik liposom. Ditunjukan pada
table II (kelompok E-G) kolestrol 1-10% tidak mempengaruhi obat EE tetapi meningkatkan
diameter lipsom dari 150 hingga 170 nm.
 Gambar 2 menunjukan stabilitas dari liposom dievaluasi oleh ukuran liposom dan tingkat
pelepasan obat , tidak tergantung pada kadar kolesterol.
Muatan Permukaan
Muatan permukaan dari nanocarries dapat mempengaruhi mekanisme dan tingkat dari
interaksi dengan sel dan jaringan dan mempercepat pembersihan plasma setelah administrasi
sistemik. Penggunaan dari stearylamine dalam liposom telah dibuktikan untuk mengubah muatan
permukaan positif liposom, memfasilitasi interaksi dengan target bermuatan negatif, karena itu
mempersiapkan liposom dengan dengan stearylamine konten antara 5% dan 15% dan
menentukan ukurannya, zeta potensial dan obat EE.

PENGARUH P-I LIPOSOMAL TERHADAP PERTUMBUHAN SEL KANKER IN

VITRO DAN IN VIVO

Pertama kali, dilakukan uji MTT untuk menentukan sitotoksisitas dari P-I yang terdapat pada
liposom (P-I liposomal) di dalam sel kanker pada in vitro. Diuji dua sel kanker payudara MDA-
MB-231, MCF-7, dan sel kanker usus kemudian membandingkan efek dari liposomal P-I dengan
liposomal tanpa P-I. Nilai dari IC50 selama 24 jam sebagai berikut:

 sel MDA-MB-231: P-I=18 µM, P-I liposom = 40 µM

 sel MCF-7: P-I= 27 µM, P-I liposom = 56 µM
 sel SW480: P-I= 32 µM, P-I liposom = 52 µM

liposom yang kosong tidak menunjukkan adanya efek pada pertumbuhan sel .

Dievaluasi efek P-I liposomal pada pertumbuhan xenograf subkutan SW480 pada tikus
SCID. P-I liposomal menghambat pertumbuhan xenograf bergantung pada dosisnya, turunnya
pertumbuhan xenograf sebesar 42% (p<0,05) pada konsentrasi lebih rendah (100 mg/kg/hari)
dan 67% (p<0,01) pada konsentrasi lebih besar (300 mg/kg/hari), dibandingkan dengan kontrol.
P-I tanpa liposom (100 mg/kg/hari) hanya memiliki efek penghambatan (25%) dan tidak
signifikan secara statistik terhadap pertumbuhan tumor. Perbedaan efikasi antara P-I dan P-I
liposomal pada dosis yang sama (100 mg/kg/hari) mendapatkan hasil yang signifikan secara
statistik (p<0,05). P-I liposomal ditoleransi dengan baik oleh mencit, ditunjukkan dengan tidak
adanya penurunan berat badan atau tanda toksisitas yang lainnya.

DISKUSI

Dua dari parameter penting yang diteliti adalah ukuran liposom dan potensial zeta karena
dapat mempengaruhi efikasi terapi dari P-I yang dimasukkan. Berdasarkan hal tersebut, untuk
menghasilkan liposom dengan diameter kurang dari 200nm dengan potensi zeta mendekati
netral, mengoptimalkan jumlah obat yang termuat, dan stabilitas yaitu dengan menyeimbangkan
parameter tersebut. Sukrosa terbukti melindungi liposom selama liofilisasi,

P-I liposomal efektif dalam menghambat pertumbuhan sel kanker manusia, baik in vitro
maupun in vivo dengan. Secara in vitro, liposom P-I memiliki IC50 yang agak lebih tinggi
dibandingkan dengan yang tanpa P-I. Peningkatan nilai IC50 (penurunan sitotoksisitas) liposom
P-I mungkin terkait dengan hambatan sterik dari molekul PEG pada permukaan liposom yang
dapat memperlambat pelepasan P-I ketika liposom berkontak dengan sel . pada in vivo, ketika
liposomal P-I lebih efektif daripada P-I biasa dalam menghambat pertumbuhan xenografts
kanker manusia.

KESIMPULAN

Formulasi liposom yang distabilkan secara sterik menunjukkan peningkatan stabilitas

dalam jangka waktu yang lama dan dapat diliofilisasi dengan adanya sukrosa sebagai
krioprotektan. Peningkatan aktivitas antitumor diamati dengan P-I liposomal dalam model tumor
xenograft pada tikus tanpa bulu dibandingkan dengan P-I tanpa liposom. Hasil ini membenarkan
evaluasi lebih lanjut dari P-I yang memuat liposom dalam pengobatan kanker.