Materi
Materi
Maka dari itu, digunakan parameter yang pasti, seperti pembelahan dan produksi blastosist
sebagai pengukuran kualitas oosit.
http://yudhiestar.blogspot.com/2010/05/kualitas-oosit-dan-embrio.html
Hermilinda, Bambang. 2014. Tingkat Fertilisasi Oosit Sapi Silangan Simmental Peranakan
Ongole Secara In Vitro. Vol. 1, No. 6, 28 – 31. Jurnal Imlu Ternak. Kupang.
Penentuan kualitas oosit dapat dilakukan dengan beberapa metode untuk memilih oosit yang
akan digunakan pada proses FIV. Metode seleksi oosit yang banyak digunakan adalah
pemilihan oosit berdasarkan morfologi sel kumulus yang berada disekitar oosit (Lonergan et
al. 1994; Alvarez et al. 2009). Teknik grading merupakan cara yang lebih mudah dan objektif
untuk mengevaluasi sel-sel kumulus oosit yang komplek. Keberadaan sel kumulus
mendukung pematangan oosit sampai pada tahap metaphase II dan pematangan sitoplasma
yang diperlukan untuk kemampuan perkembangan setelah fertilisasi (Abeydeera 2002). Oosit
dengan kumulus yang multilayer digunakan dalam produksi embrio secara in vitro (Qian et
al. 2005). Menurut Gordon (2003), kriteria pemilihan oosit yang berkualitas baik dapat dilihat
dari bagian ooplasma yang homogen, sel kumulus yang kompak mengelilingi zona pelusida.
Oosit yang dikoleksi dikategorikan menjadi 4 grade berdasarkan kualitasnya: grade A adalah
oosit yang memiliki kumulus yang seragam dan kompak dengan dikelilingi oleh lima lapisan
atau lebih sel kumulus. Oosit dengan grade B adalah oosit yang memiliki sitoplasma yang
gelap dengan komplemen dari korona radiata yang lengkap tetapi dikelilingi tidak lebih dari
lima lapis sel kumulus. Oosit dengan grade C adalah oosit yang ditandai dengan oosit yang
kurang seragam dan warna sitoplasma lebih transparan dan tidak merata serta terlihat tidak
kompak. Oosit dengan kategori D mempunyai sitoplasma yang transparan bahkan terdapat
fragmentasi pada sitoplasma. Sel-sel kumulus yang mengelilingi oosit terlihat sangat jarang
dan bahkan beberapa oosit tidak memiliki sel kumulus.
Kualitas oosit adalah salah satu faktor penting dalam kesuburan wanita,
pematangan in vitro (IVM), dan perkembangan embrionik selanjutnya
[1]. Untuk ternak khususnya, IVM digunakan untuk menghasilkan banyak tanaman dewasa
oosit yang mampu berkembang menjadi embrio [2]. Cumulus-oosit
complexes (COCs), terdiri dari oocyte dan sekitarnya
sel kumulus, adalah unit lengkap, fungsional, dinamis yang memainkan a
peran penting dalam metabolisme oosit selama pematangan [3]. Antara
oosit dan sel kumulus, pertukaran dua arah nutrisi
dan molekul sangat penting untuk pematangan oosit, kumulus
ekspansi sel, dan perkembangan embrionik selanjutnya [4]. Itu
* Penulis yang sesuai. dua faktor parakrin turunan oosit primer, protein morfogenetik tulang
15 (BMP15) dan faktor diferensiasi pertumbuhan 9 (GDF9),
berpartisipasi dalam penangkapan meiosis oosit dan mendukung dan mengatur
metabolisme sel kumulus, pematangan, pertumbuhan, dan ekspansi [5].
Hormon steroid diproduksi oleh sel kumulus, seperti progesteron
(P4) dan estradiol (E2), juga terlibat dalam pengaturan penting
fase siklus reproduksi, termasuk pertumbuhan oosit dan
pematangan [6].
Metabolisme energi sangat penting untuk pematangan oosit dan perkembangan embrionik
selanjutnya, karena proses dinamis ini
mengkonsumsi sejumlah besar energi yang berasal dari berbagai substrat,
termasuk karbohidrat, asam amino, dan lipid [7]. Metabolisme karbohidrat (termasuk
glukosa, piruvat, dan laktat)
oleh oosit ditandai dengan baik [8]. Selain karbohidrat,
asam lemak, yang beberapa kali lebih kaya energi daripada karbohidrat, juga merupakan
sumber energi penting untuk pematangan dan
mengembangkan oosit
Hui-Yan Xu, 2018. Treatment with acetyl-L-carnitine during in vitro maturation of buffalo
oocytes improves oocyte quality and subsequent embryonic development. Vol 118 Pg 80-89.
Theriogenology Elsevier Inc.
Dalam sel somatik, mitokondria memainkan peran penting dalam akumulasi kalsium,
apoptosis, dan produksi energi. Pada hewan domestik dan
manusia, satu oosit mengandung sekitar 100.000 mitokondria. Mitokondria memasok ATP ke
oosit melalui oksidasi dan asam lemak
fosforilasi oksidatif untuk pertumbuhan oosit, pematangan, pemupukan,
dan perkembangan embrio awal (Reynier et al., 2001; Dumollard et al.,
2004; Santos et al., 2006; Dunning et al., 2010; Iwata et al., 2011). Itu
angka mitokondria diyakini sangat penting sejauh oosit yang mengandung jumlah rendah dan
kualitas rendah mitokondria memiliki
kualitas oosit rendah (May-Panloup et al., 2005; Zhang et al., 2006).
Oleh karena itu, penting untuk mengontrol kualitas mitokondria dan
kuantitas dalam oosit untuk digunakan dalam teknologi reproduksi berbantuan pada manusia
dan hewan.
Kami sebelumnya melaporkan bahwa mitokondria uncoupler (CCCP) yang diinduksi
depolarisasi mitokondria dalam oosit babi mengarah ke Sirtuin.
1 (SIRT1: histone deacetylase) - dan protein kinase yang diaktifkan AMP
(AMPK) - degradasi mitokondria dan biogenesis, dan
mempertahankan kualitas mitokondria dan kemampuan oosit untuk
berkembang menjadi blastokista (Itami et al., 2015). Selanjutnya, kami juga
menunjukkan bahwa resveratrol, penggerak potensial dan spesifik SIRT1, mendorong
degradasi dan biogenesis mitokondria, dan meningkatkan
kemampuan perkembangan oosit (Sato et al., 2014). Penemuan-penemuan ini
menunjukkan bahwa aktivasi SIRT1 non-invasif efektif dalam meningkatkan
kualitas mitokondria, serta kemampuan perkembangan
oosit.
Karpe dan Tikoo (2014) melaporkan bahwa stres panas jangka pendek (SHS)
pada tikus membalikkan ekspresi rendah SIRT1 yang diinduksi diet tinggi lemak
jaringan aorta. Mereka selanjutnya menyarankan bahwa ekspresi SIRT1 yang tinggi di
jaringan berasal dari aktivasi sengatan panas akibat stres panas
protein 72 (HSP72). Henstridge et al. (2014) menunjukkan tikus itu bersama
Aktivasi tampilan berlebih HSP72 dari SIRT1 dan AMPK, dan
peningkatan jumlah mitokondria pada otot rangka. Selanjutnya,
Ekspresi berlebih HSP72 meningkatkan aktivitas mitokondria dan mengembalikan
resistensi insulin yang diinduksi obesitas pada otot rangka (Chung et al.,
2008). Selanjutnya, Liu dan Brooks (2012) menunjukkan bahwa SHS menginduksi
biogenesis mitokondria pada otot rangka melalui aktivasi
dari jalur HSP72 / SIRT1, bersama dengan peningkatan selanjutnya dalam
ekspresi PGC1α dan TFAM, yang mengatur biogenesis mitokondria. Namun, sejauh
pengetahuan kami, tidak ada penelitian yang menyelidiki apakah SHS efektif untuk aktivasi
SIRT1, juga
sebagai peningkatan kemampuan perkembangan oosit.
Dalam penelitian ini, kami menginkubasi oosit babi pada 41,5 ° C, yang
adalah 3 ° C lebih tinggi dari kondisi kultur normal, untuk 1 jam pertama di
titik waktu awal pematangan in vitro dan memeriksa
Nobuhiko Itami. 2018. Short-term heat stress induces mitochondrial degradation and
biogenesis and enhances mitochondrial quality in porcine oocytes. Journal of Thermal
Biology 74 (2018) 256–263. Elsevier Ltd.
Discussion
Suhu lingkungan yang lebih tinggi mempengaruhi acara reproduksi
seperti folliculogenesis, fertilisasi, perkembangan embrionik, uterus
lingkungan, dan kesuburan pada hewan sasaran. Di latar belakang ini, the
laporan yang tersedia mengkonfirmasi bahwa oosit dikumpulkan dari panas
betina terpapar, mudah mengalami perubahan seperti apoptosis yang
mengurangi pematangan in vitro dan kapasitas pemupukan. Dalam
penelitian ini, pengaruh HS dan dampak perbaikan quercetin
pada pengembangan folikel, kualitas oosit dan kompetensinya untuk
menjadi dewasa telah dievaluasi. Ini adalah studi pertama dari jenisnya
yang menggambarkan dampak positif quercetin pada perkembangan folikel,
produksi oosit, dan aktivitas apoptosis di bawah HS
kondisi.
Musim panas HS menyebabkan tingkat kehamilan yang rendah karena penurunan
perekrutan dan pengembangan folikel [18,19]. Pada saat ini
studi, lebih sedikit jumlah oosit yang diambil dan perkembangan folikel
menunjukkan efek yang merugikan dari HS pada reproduksi pada wanita
kelinci. Folikel mengandung pertahanan antioksidan yang mapan
sistem yang melindungi integritas fungsional dan struktural
membungkus sel oosit dan granulosa di sekitarnya. ROS memainkan peran vital
peran untuk terjadinya ovulasi; Namun, semakin tinggi produksi ROS
dalam folikel dalam kondisi stres menyebabkan penuaan oosit [20]. Karenanya, a
keseimbangan antara produksi ROS dan sistem antioksidan dalam
folikel adalah prasyarat untuk kelangsungan hidup oosit dan sekitarnya
sel granulosa selama kondisi normal dan stres [21]. Dalam
penelitian ini, wanita HS diberi makan dengan kuersetin diet
yang merupakan senyawa antioksidan kuat. Kehadiran lebih tinggi
jumlah folikel dan oosit yang diambil dari kelompok yang diberi quercetin
jelas bahwa ROS tambahan telah dihapuskan oleh ketentuan quercetin
pada kelinci HS. Temuan saat ini sejalan dengan
Pengamatan sebelumnya, di mana vitamin C diberikan kepada wanita HS
kelinci [19]. Demikian pula, Beazley dan Nurminskaya [22] melaporkan hal itu
asupan quercetin oral meningkatkan perkembangan folikel dan
fekunditas pada tikus betina muda. Atresia folikuler kemungkinan disebabkan oleh
produksi ROS tinggi, sementara itu, kehadiran jumlah yang lebih tinggi
folikel pada ovarium kelompok QU-HS mungkin terkait dengan
suplementasi quercetin [23]. Selain itu, semakin tinggi konsentrasi FSH
merangsang sintesis glutathione di dalam folikel yang di dalamnya
gilirannya mengurangi tingkat ROS dan selanjutnya menurunkan insiden
apoptosis sel granulosa [24]. Ini berspekulasi bahwa diet
quercetin mungkin terlibat dalam stimulasi FSH yang secara tidak langsung
meningkatkan sintesis GSH yang pada gilirannya menghilangkan ROS yang berlebihan
dari pengembangan folikel.
Tingkat pematangan oosit tergantung pada oosit awal
ukuran. Oosit dengan ukuran kecil tidak dapat matang; namun demikian
oocyte dengan dimeter lebih dari 80% dari ukuran akhir, memiliki kapasitas
untuk melanjutkan proses meiosis. Pada kelinci, rata-rata oosit
diameter (tanpa zona pellucida) sekitar 147 mm [25]. Dalam
penelitian ini, diameter yang lebih rendah (143 mm) oosit dikumpulkan di
kelompok yang diberi quercetin dan ukuran oosit yang dikumpulkan ini mampu
untuk melanjutkan aktivitas meiotik. Demikian pula, telah dilaporkan
bovine oocyte dengan diameter 100 mm [26] dan 115 mm [27]
melanjutkan kompetensi meiotik penuh (tahap MII) dan perkembangan
kompetensi untuk tahap blastokista. Perbedaan tidak signifikan
dalam hasil tingkat IVM menunjukkan bahwa oosit dikumpulkan baik
dari quercetin kelompok yang diberi suplemen atau tidak
sama-sama mampu menjalani pematangan, terlepas dari oosit
ukuran.
Dalam penelitian ini, hasil yang sama diperoleh setelah pematangan
dari oosit yang dikumpulkan dari quercetin yang ditambah atau
kelinci betina HS tanpa tambahan. Sebaliknya, peningkatan oosit
tingkat maturasi dilaporkan dalam laporan sebelumnya [19]. Tambahan
studi direkomendasikan untuk mengungkap temuan terperinci tentang
efek quercetin pada oosit, pematangan, pemupukan dan selanjutnya
perkembangan embrio dalam kondisi HS. Sejumlah penelitian
tersedia mengenai efek kuersetin pada oosit selama in vitro
percobaan [28,29]. Namun, ada variabilitas besar di antara yang dilaporkan
hasil yang berkaitan dengan tingkat dosis quercetin. Sebagai tambahan,
perbedaan yang tidak signifikan ini dapat dikaitkan dengan
impedansi eCG / FSH, yang membantu untuk mempertahankan tingkat GSH
dalam mengembangkan folikel [30] dan aktivitas steroidogenik folikel
sel [31]. Dalam penelitian ini, eCG atau FSH belum digunakan
stimulasi ovarium; Oleh karena itu, sejumlah ke cil GSH dalam oosit tanpa FSH tidak dapat
mempertahankan antioksidan internal
sistem terhadap produksi ROS yang lebih tinggi. Kondisi ini mungkin
bertanggung jawab untuk menginduksi perubahan apoptosis atau ireversibel pada
sel granulosa, oosit dan tingkat maturasi oosit selanjutnya.
Perlu dicatat bahwa oosit diproduksi di bawah tekanan
kondisi, kurang memiliki kemampuan untuk matang karena mengandung tinggi
tingkat ROS. Suplemen antioksidan dalam pematangan
media atau menyuntikkan antioksidan ke wanita adalah strategi untuk diatasi
berbagai HS menyebabkan perubahan ireversibel pada oosit [32]
misalnya penyimpangan kromosom meiotik [33], perubahan pada tahap GV
oosit [34], dan penurunan ekspresi gen ibu [35]. Di
Selain itu, konfigurasi nuklir dan sitoplasma oosit
organel memiliki sensitivitas tinggi terhadap perubahan yang diinduksi HS [36].
Sebelumnya, peran apoptosis pada penghambatan meiosis pada oosit HS dan
pengaruh pada mikrotubulus aktin dan mikrofilamen di sitoskeleton
oosit telah didokumentasikan [9]. Ini penting untuk
menjaga konfigurasi kedua kompartemen agar berhasil
pematangan oosit. Oleh karena itu, penyelidikan yang luas diperlukan
untuk mengeksplorasi perubahan yang diinduksi HS dan efek perbaikan
flavonoid yang berbeda pada kompartemen nuklir dan sitoplasma
dari oosit.
Sel-sel kumulus mempengaruhi tingkat pematangan oosit [37] dan
membantu memerangi stres oksidatif [38] dengan mensintesis protein dan
memperketat persimpangan GAP yang mempertahankan transformasi
agen pengatur untuk mekanisme tahan-termal. Perubahan
dalam mekanisme ini dan insiden apoptosis yang lebih tinggi di Indonesia
sel kumulus bisa menjadi alasan yang masuk akal untuk oosit yang sama
tingkat pematangan antar kelompok dalam penelitian ini. Penelitian sebelumnya
telah menunjukkan bahwa kuersetin melindungi sel kumulus terhadap kadmium
diinduksi toksisitas dengan mempertahankan sistem antioksidan dan
mengurangi apoptosis [15]. Apalagi penentuan tekad
ekspresi faktor-faktor terkait stres dalam sel kumulus bisa
menarik untuk mengungkapkan pengaruh quercetin di bawah HS.
Dalam penelitian ini, apoptosis folikel pada primer, sekunder
atau tahap antral telah diselidiki selama kondisi HS.
Aktivitas apoptosis dalam sel granulosa sangat menurun pada
quercetin menambah kelompok HS. Insiden apoptosis adalah
maksimal pada folikel primer dan antral, namun, folikel primordial
tetap tidak terpengaruh. Seperti yang telah dijelaskan sebelumnya bahwa apoptosis memiliki
hubungan positif dengan produksi ROS yang berlebihan [39],
sehingga tingkat apoptosis yang lebih rendah dalam folikel quercetin ditambah
kelompok jelas menunjukkan aksi antioksidan kuat quercetin
melawan stres oksidatif. ROS tinggi dan konsentrasi GSH rendah
di bawah tekanan bisa menjadi alasan yang mungkin untuk apoptosis yang lebih tinggi pada
sel granulosa dari folikel antral. Apalagi quercetin
administrasi memainkan peran penting dalam mengurangi ekspresi
interleukin yang bertanggung jawab untuk peningkatan superoksida
tingkat dismutase dan kemampuan beradaptasi hewan terhadap iklim panas.
Level GSH yang lebih tinggi dan pemberian antioksidan menghambat proses
sel apoptosis granulosa [40]; Oleh karena itu, penentuan
Penanda antioksidan atau kadar MDA dalam cairan folikuler bisa jadi
membantu untuk mengeksplorasi keterlibatan ROS dalam sel granulosa
apoptosis selama HS. Dampak flavonoid pada kompetensi oosit
dan pengembangan embrio lebih lanjut perlu dieksplorasi.
Terlebih lagi, sebuah studi elaboratif tentang ekspresi apoptosis atau
faktor-faktor terkait stres dalam mengembangkan folikel atau dalam oosit bisa
membantu memahami mekanisme terkait stres pada molekul
tingkat.