CULTIVATION TECHNIQUE AND KINETICS  Metode Tidak Langsung: Pengukuran komponen seluler E.

g: ATP,
Pertumbuhan Mikroba enzim, klorofil
- Replikasi Fermentasi: Secara tradisional, didefinisikan sebagai proses untuk
- Ubah ukuran sel produksi alkohol atau asam laktat dari glukosa. Secara luas, didefinisikan
Mengubah nutrisi dari medium menjadi biologis senyawa sebagai "transformasi yang dikendalikan secara enzimatik dari senyawa
 substrat + sel → produk ekstraseluler + lebih banyak sel organik ”
Tingkat pertumbuhan ∞ konsentrasi sel
 μnet = 1 / X dX / dT
Kultur sel tanpa penambahan lebih lanjut atau penngurangan nutrisi
Sel harus dikuantifikasi baik:
- Langsung (tidak layak: karena kehadiran padatan tersuspensi), atau
- Secara tidak langsung (massa sel, nomor sel)
Menentukan Densitas Nomor Sel
Densitas Nomor Sel
- Menggunakan slide Petroff-Hausser / hemocytometer
- 20 kotak kotak di hitung menggunakan mikroskop → rata-rata
Kekurangan: Medium harus bebas dari partikel, Noda digunakan untuk
Pola Pertumbuhan & Kinetika dalam Gelombang
membedakan antara mati / hidup sel, Tidak cocok untuk budaya agregat, Tidak
 Lag Phase
cocok untuk cetakan.
- Terjadi segera setelah inokulasi
Plate Count
- Masa adaptasi sel
 Digunakan untuk menghitung sel yang layak
- Massa sel bertambah, jumlah sel tetap konstan
 Unit: Unit Pembentuk Koloni (CFU)
- Kondisi inokulum yang buruk (usia inokulum)
 Kultur diencerkan dan menyebar pada permukaan agar
- Konsentrasi rendah beberapa nutrisi penting
 Pelat diinkubasi dan koloni yang layak dihitung
- Ukuran inokulum (5% - 10% v / v)
 Jumlah lempeng yang baik harus terdiri antara 30-200 koloni
- Multiple lag phase - pertumbuhan diauxic
 Cocok untuk ragi dan bakteri
- Penambahan aktivator pertumbuhan => Mg2 + Aerobacter aerogen
 Kurang cocok untuk cetakan
tumbuh dalam glukosa dan fosfat
 Seleksi untuk pertumbuhan menengah terbaik sangat penting
 Exponential Phase
 Sel tunggal → koloni yang dapat diamati (25 generasi)
- Fase logaritmik
Electrical Resistance of cells
- Sel disesuaikan dengan lingkungan baru
 Hambatan listrik sel Sel yang melewati lubang menyebabkan
- Massa sel & angka berkembang biak dengan cepat
resistensi dan menyediakan pulsa
- ‘Pertumbuhan Saldo’ => semua pertumbuhan komponen @
 Pulsa angka adalah ukuran ∝ jumlah sel
tingkat yang sama
 Tinggi pulsa → ukur ukuran sel
- Tingkat pertumbuhan independen nutrisi konsentrasi
Light Intensity Measurement
 Intensitas konsentrasi sel ∝ cahaya
 Hanya untuk suspensi encer
Menentukan Konsentrasi Massa Sel
 Metode langsung: Penentuan Biomassa, Spektrofotometer
 - Tingkat spesifik pembentukan produk ∞ spesifik tingkat pertumbuhan
- Produk: Metabolit primer
- E.g: Enzim protease (Bacillus subtilis), asam amino.
qp = αX = 1/X dP/dt = YP/X μg
Non Growth Associated
- Produksi terjadi selama fase diam
- Tingkat spesifik produk formasi adalah
 Deceleration Growth Phase konstan
- Menipisnya nutrisi penting - Produk: Metabolit sekunder
- Akumulasi racun oleh produk - E.g: Hormon, antibiotik (penisilin)
- Pertumbuhan tidak seimbang => restrukturisasi sel qp = β = constant
 Stationary Phase Mixed Growth Associated
- Tingkat pertumbuhan nol (tidak ada pembelahan sel) atau, - Produksi terjadi selama lambat fase
- Tingkat pertumbuhan sama dengan tingkat kematian pertumbuhan dan stasioner
- Sel aktif secara metabolik - E. g: xanthan gum, asam laktat
- Terjadi produksi metabolit sekunder (mis: antibiotik, hormon) - qp = αμg + β = constant
- 'Metabolisme endogen' berlangsung
Metabolit Primer
Terjadi karena: Kelelahan nutrisi penting dan Akumulasi racun oleh  Dibentuk saat primer fase pertumbuhan
produk 
Beberapa fenomena dapat terjadi:  Produk penting untuk aktivitas
 Total massa sel konstan, penurunan sel yang layak metabolisme & pertumbuhan
 Lisis sel, terjadi pertumbuhan samar  Diproduksi dari pertumbuhan substrat
 Sel tidak tumbuh, metabolisme aktif (produksi) metabolisme oleh aktivitas sel
sekunder)  E.g: Alkohol (Saccharomyces
 Death Phase cerevisiae), asam amino
Pembentukan produk Metabolit Sekunder
 Metabolit Utama Terkait pertumbuhan  Dibentuk pada bagian akhir atau
 Metabolit Sekunder terkait Pertumbuhan stasioner selama pertumbuhan stasioner
Microbial Product  Masing-masing dibentuk oleh sangat
 Makanan: Roti, keju, yogurt, jamur, anggur, bir, kecap, sake. sedikit organism
 Komoditas: Aditif makanan - asam amino, zat pengental, vitamin,  Tidak penting untuk pertumbuhan
Pelarut - butanol, etanol Biofuel - etanol, metana,  Kondisi pertumbuhan sangat penting
hidrogen untuk menentukan tingkat sintesis
 Bahan kimia: Obat-obatan - antibiotik, antijamur, metabolit sekunder
Reagen laboratorium dan diagnostik - enzim biokimia,  Kelompok struktur yang terkait erat
protein  Dapat "diproduksi berlebihan"
Growth Associated  Dari substrat pertumbuhan atau primer metabolisme
- Diproduksi bersamaan dengan pertumbuhan
  E.g: Penisilin, antibiotik β-laktam (Streptomyces spp., Nocardia spp.,
Cephalosporium spp.)
Continuous Culture
Pentingnya continous culture:
 Pemeliharaan budaya secara konstan kondisi lingkungan melalui
kontinu pasokan nutrisi
 Pemberian nutrisi dan pembuangan limbah.
Berguna untuk: Belajar dalam fase pertumbuhan tertentu, Studi di
bawah konsentrasi nutrisi rendah, Studi evolusi.
How Cells Grow in Continuous Culture
- Media segar terus-menerus dipasok ke aduk culture
- Produk (media sel / kultur) secara terus menerus ditarik
- Selama budidaya, pertumbuhan & pembentukan produk bisa
berkepanjangan.
- Pada kondisi stabil: sel, produk, dan media konsentrasi tetap konstan.
- Nutrisi penting dalam jumlah terbatas
Plug flow reactor (PFR)
 Culture terus menerus
 Tidak ada backmixing
 konsentrasi nutrisi, dekat dengan yang hadir di lingkungan alami. studi
Chemostat
 Mengacu pada lingkungan kimia yang konstan
 Aliran kontinu dicampur sempurna
 Dilengkapi dengan pH, DO, level controller
 Feeding medium segar dan penghapusan
suspensi sel terjadi pada tingkat yang sama
 Volume konstanta reactor
- Peralatan yang memasukkan media steril ke dalam budaya pada
tingkat yang sama di mana ia berada dihapus
- Nutrisi esensial membatasi sehingga mengalir rate menentukan laju
pertumbuhan
- Tingkat pengenceran - tingkat di mana medium mengalir melalui
kapal relatif ke kapal ukuran
- Catatan: kepadatan sel dipertahankan pada lebar kisaran pengenceran
- Tarif dan chemostat beroperasi paling baik di tingkat pengenceran
yang rendah
- Tidak peduli seberapa cepat media masuk bakteri tidak bisa tumbuh
lebih cepat daripada mereka akan dalam budaya batch di bawah
kondisi yang digunakan dalam ruang.
Turbidostat
 Konsentrasi sel dalam konstanta wadah kultur (monitor OD & laju
aliran umpan)
 Volume dijaga konstan dengan menghilangkan kaldu kultur
 Cocok untuk mikroorganisme yang mampu menahan tekanan
lingkungan
 Laju aliran ke dalam sistem disesuaikan untuk mempertahankan
kekeruhan yang telah ditetapkan (kepadatan sel).
 Tidak membatasi nutrisi
- Mengatur laju aliran media melalui kapal untuk mempertahankan
yang telah ditentukan kekeruhan atau kepadatan sel
- Tingkat pengenceran bervariasi
- Tidak membatasi nutrisi
- Beroperasi terbaik pada tingkat pengenceran tinggi
Importance of Continuous culture methods
pasokan sel yang konstan dalam fase eksponensial tumbuh pada
tingkat yang dikenal studi tentang mikroba pertumbuhan sangat rendah
interaksi mikroba di bawah kondisi menyerupai mereka yang di air
lingkungan, makanan dan mikrobiologi industri
MEDIA FORMULATION FOR BIOINDUSTRY
Aspek biokimia microbial sel amino asam, dan urea. Sumber nitrogen dalam budidaya lab adalah nitrogen
 Komposisi khas sel bakteri terdiri dari 50% C, 20% O, 14% N, 8% H, organic sebagai ekstrak ragi dan pepton. Beberapa bakteri seperti Azotobacter
3% P, 1% S, dan jumlah kecil Mg 2+, K +, Na +, Ca 2+, Cl – dan sp dan cyanobacteria memperoleh nitrogen langsung dari udara dan
vitamin. mengubahnya menjadi amonium. Nitrogen digunakan oleh sel sebagai elemen
 Sel-sel hidup pada dasarnya adalah reaktor kompleks ada lebih dari untuk mengembangkan protein dan asam nukleat.
2000 reaksi terjadi. Sumber Karbon Sumber Nitrogen
Nutrisi Sel Mikroba Limbah pati (jagung dan Tepung kedelai
 Semua organisme kecuali virus mengandung sekitar 80% air. kentang) Ekstrak ragi
 Kurang lebih 50% dari berat kering sel adalah protein, sebagian besar Molase (tebu dan bit) Dengan produpenyulingan
di antaranya adalah enzim. Air dadih Ekstrak biji kapas
 Kadar asam nukleat bervariasi antara 10-20%, kecuali virus yang bisa n-Alkane Darah kering
mencapai 50%. limbah sulfit Langkah minuman keras
 Kadar lemak sekitar 5-15%, kecuali dalam mikroba memproduksi Limbah rumah tangga jagung
PHB yang bisa mencapai 90%. Limbah selulosa Tepung ikan
Nutrisi yang dibutuhkan oleh sel mikroba terdiri dari: Kacang Tepung kacang
 Makronutrien, yaitu unsur C, O, N, H, P, S, Mg 2+, K +. Elemen-
elemen ini diperlukan di konsentrasi ≥ 10-4 M. Hidrogen
 Zat gizi mikro / elemen penelusuran, yaitu Mo2+, Zn2+, Cu2+, Mn2+, Sekitar 8% dari berat kering sel adalah hidrogen. Unsur hidrogen diperoleh
Fe2+, Ca2+, Na+, vitamin, pertumbuhan hormon dan prekursor dari senyawa karbon seperti karbohidrat. Bakteri metanogenik menggunakan
metabolisme. hidrogen sebagai sumber energi.
Macronutriens Fosfat
Karbon: Senyawa karbon adalah energi utama dan karbon Sekitar 3% dari berat kering sel adalah Fosfor. Fosfor ada di cid nukleat dan
sumber. dinding sel bakteri gram positif. P adalah elemen kunci dalam regulasi sel
Sumber karbon umum dalam bioindustri adalah: molase (sukrosa), pati Metabolisme Sumber P utama adalah garam fosfat anorganik, seperti KH2PO4
(terhidrolisis menjadi glukosa atau dekstrin), sirup jagung, limbah sulfit dari dan K2HPO4.
pulp dan kertas industri (glukosa), metanol, etanol, metana. Sulfur
Sumber karbon umum dalam budidaya skala lab adalah glukosa, sukrosa, dan Sekitar 1% dari berat kering sel adalah sulfur. Sulfur ada dalam protein dan
fruktosa. Dalam budidaya aerobik, substrat karbon 50% digunakan untuk beberapa koenzim. Sumber sulfur utama adalah garam sulfat seperti (NH4)
bahan seluler, 50% sisanya digunakan untuk energi sumber. Dalam budidaya 2SO4. Sumber sulfur lainnya mengandung asam amino Belerang. Beberapa
anaerob, kurang dari 30% karbon substrat diubah menjadi sel, sisanya 70% bakteri autotrof menggunakan energi S2- dan S sumber.
karbon Sumber diubah menjadi produk (sel atau metabolit). Kalium (Pospat)
Oksigen Kalium adalah kofaktor bagi sebagian enzim dan dibutuhkan dalam
Kurang lebih 20% berat kering sel adalah oksigen. Oksigen ada di semua karbohidrat metabolisme Sumber kalium utama adalah garam KH2PO4 dan
komponen organik dan air. Molekul oksigen diperlukan sebagai akseptor K2HPO4.
elektron di metabolisme aerob senyawa karbon. Gas oksigen disuplai ke dalam Magnesium
bioreaktor melalui aerasi. Mg adalah kofaktor untuk beberapa enzim, dan ada di dinding sel dan
Nitrogen membran. Ribosom membutuhkan ion Mg 2+. Magnesium umumnya
10-14% dari berat kering sel adalah Nitrogen. Sumber N utama adalah amonia, disediakan di bentuk garam MgSO4.7H2O atau MgCl.
atau garam ammonium (NH4Cl, (NH4) 2SO4, NH4NO3), protein, peptida,

Micronutriens
Kekurangan zat gizi mikro (elemen jejak) akan memperpanjang fase lag, dan
mengurangi laju pertumbuhan spesifik dan hasil produk.
Ada 3 kategori elemen penelusuran:
- Melacak elemen yang sangat dibutuhkan, yaitu Fe, Zn, dan Mn.
Semua adalah kofaktor penting.
- Lacak elemen yang diperlukan untuk spesifik produk, seperti Cu, Co,
- Mo, Ca, Na, Cl, Ni, dan Se.
- Melacak elemen yang jarang dibutuhkan seperti B, Al, Si, Cr, V, Sn,
Be, F, Ti, Ga, Ge, Br, Zr, W, Li, I. Jika perlu, itu harus pada
konsentrasi <10-6 M dan toksik pada konsentrasi ≥ 10-4 M.
Beberapa ion seperti Mg2 +, Fe3 + dan PO43-, mungkin membuat sedimen
dalam medium. Karena itu perlu agen kelat untuk membubarkan mereka.
Chelating agen memiliki ligan (seperti karboksil, amina, mercapto) untuk
mengikat ion logam dan membentuk senyawa kompleks yang dilarutkan
dalam air. Asam sitrat, EDTA, polifosfat, histidin, tirosin, dan sistein adalah
pengkelat agen yang biasa digunakan. Chelating agen diperlukan pada
konsentrasi rendah (1 mM).
Faktor pertumbuhan
 Faktor pertumbuhan merangsang pertumbuhan dan sintesis metabolit.
 Vitamin, asam amino dan hormon tumbuh faktor.
 Vitamin B1 (tiamin), B2 (riboflavin), B6 (piridoksin), B12
(sianokobalamin), biotin, asam folat, asam lipoat, asam p-amino
benzoid, dan vitamin K, berfungsi sebagai koenzim.
 Vitamin dibutuhkan pada konsentrasi 10-6 - 10-12 M.
 Beberapa mikroba auksotrofik perlu dipastikan asam amino 10-6 - 10-
13 M.
 Hormon insulin adalah hormon umum untuk sel hewan, sementara
sitokinin tumbuh hormon untuk tanaman.
Kultivasi Media
 Media Yang Ditentukan ==> mengandung tertentu Jumlah bahan
kimia murni dengan tertentu komposisi. Contoh: glukosa, (NH4)
2SO4, KH2PO4, MgCl2. Hasil culture dapat dikontrol dan
direproduksi.
 Media kompleks ==> mengandung natural senyawa yang
komposisinya tidak diketahui persis. Umumnya juga mengandung
faktor pertumbuhan, vitamin, hormon, dan elemen pelacak sehingga
menghasilkan lebih banyak sel. Contoh: ekstrak ragi, pepton, molase,
cairan langkah jagung.
Pertimbangan pemilihan media:
1. Biaya dan ketersediaan: idealnya, bahan harus murah, dan kualitas
serta tahun yang konsisten ketersediaan bulat
2. Kemudahan penanganan dalam bentuk padat atau cair dengan biaya
transportasi dan penyimpanan terkait, mis. persyaratan untuk kontrol
suhu.
3. Persyaratan sterilisasi dan segala potensi masalah denaturasi.
4. Formulasi, pencampuran, pengompleksan dan viskositas karakteristik
yang dapat mempengaruhi agitasi, aerasi dan berbusa selama
fermentasi dan hilir tahap pemrosesan.
5. Konsentrasi produk target tercapai, nilainya formasi dan hasil per
gram substrat yang digunakan
6. Tingkat dan kisaran pengotor, dan potensi untuk menghasilkan produk
yang tidak diinginkan lebih lanjut selama proses
7. Implikasi kesehatan dan keselamatan secara keseluruhan
Apa Peran Media dalam Fermentasi?
  Dalam sebagian besar proses fermentasi industri ada beberapa tahap
di mana media diperlukan: beberapa inokulum (culture starter),
langkah-langkah propagasi, fermentasi skala pilot dan produksi utama
fermentasi.
 Tujuan teknis perbanyakan inoculum (Persiapan populasi m / o dari
culture stok aktif ke keadaan aktif pertumbuhan itu cocok untuk
inokulasi dalam produksi akhir tahap) dan fermentasi utama seringkali
sangat ⇒ perbedaan yang berbeda dalam formulasi medianya.
 Di mana biomassa atau metabolit primer adalah target produk,
tujuannya adalah untuk menyediakan media produksi yang
memungkinkan pertumbuhan optimal dari m / o
 Produksi metabolit sekunder tidak berhubungan dengan pertumbuhan.
Akibatnya, media dirancang untuk memberikan inisial periode
pertumbuhan sel, diikuti oleh kondisi yang dioptimalkan untuk
produksi metabolit sekunder. Pada titik ini pasokan satu atau lebih
nutrisi (karbon, fosfor atau sumber nitrogen) mungkin terbatas dan
pertumbuhan cepat berhenti.
Masalah yang Sering Terjadi
 Senyawa yang dimetabolisme dengan cepat mungkin menekan
formasi produk. Untuk mengatasi ini, penambahan segar yang
intermiten atau berkelanjutan media dapat dilakukan untuk
mempertahankan konsentrasi relatif rendah yang tidak represif.
 Nutrisi media atau lingkungan tertentu kondisi dapat mempengaruhi
fisiologi, biokimia, dan morfologi mikroorganisme. Dalam beberapa
ragi sel tunggal dapat berkembang menjadi pseudo-miselium atau
flokulasi, dan jamur berfilamen dapat terbentuk pelet. Ini tidak
diinginkan karena mempengaruhi hasil produk
Media yang diadopsi juga tergantung pada skala fermentasi.
 Untuk fermentasi laboratorium skala kecil bahan kimia murni sering
digunakan dalam definisi yang baik media
 Namun, ini tidak mungkin untuk sebagian besar proses fermentasi
skala industri, hanya karena biaya, sebagai komponen media dapat
mencapai 60-80% dari proses pengeluaran
 Fermentasi skala industri terutama digunakan substrat kompleks
hemat biaya, di mana banyak Sumber C dan N hampir tidak dapat
didefinisikan. Paling berasal dari tumbuhan alami dan hewan bahan,
seringkali produk sampingan dari industri lain, dengan komposisi
bervariasi dan bervariasi.
Sumber Karbon
- Faktor-faktor yang mempengaruhi pilihan Sumber-C
- Tingkat di mana sumber-C dimetabolisme
- Harga & ketersediaan
- Sterilisasi media
Karbohidrat: Pati dari sereal, biji-bijian dan jagung; malt dari barley; sukrosa
dari tebu;
bentuk: tebu tebu, minuman curam jagung, whey from industri susu
Minyak & Lemak: Kandungan asam lemak (juga antifoaming properti)
Hyrdocarbon dan turunannya: n-alkana untuk produksi asam organik, asam
amino, vitamin.
Contoh sumber karbon:
 Molase, produk sampingan dari produksi gula, adalah salah satunya
sumber karbohidrat termurah. Selain besar jumlah gula, molase
mengandung nitrogen zat, vitamin, dan elemen pelacak. Namun,
komposisi molase bervariasi tergantung pada bahan baku yang
digunakan untuk produksi gula
 Ekstrak malt, ekstrak air malt barley, adalah substrat yang sangat baik
untuk banyak jamur, ragi, dan actinomycetes. Ekstrak malt kering
terdiri dari sekitar 90-92% karbohidrat, dan tersusun dari heksosa
(glukosa, fruktosa), disaccrides (maltose, sukrosa), trisaccharides
(maltotriose), dan dekstrin. Nitrogen zat yang hadir dalam ekstrak
malt termasuk protein, peptida, asam amino, purin, pirimidin, dan
vitamin.
Sumber Nitrogen
Faktor-faktor yang mempengaruhi pemilihan sumber nitrogen
- Sumber nitrogen individu memengaruhi metabolisme peraturan
(misalnya: A. Nidulans, amonia mengatur produksi protease)
- Jenis, konsentrasi (NH4Cl-NH4OH, pH kuat perubahan)
- Sumber nitrogen kompleks mendukung produksi antibiotic
- Efek hilir
Sumber nitrogen umum: Bungkil kedelai (membawa kerusakan bertahap &
mencegahnya akumulasi ion amonia), amonia, garam amonium atau nitrat
Mineral
Membutuhkan mineral untuk pertumbuhan dan metabolisme. Mg, P, K, S, Ca
dll. Perlu ditambahkan sebagai komponen yang berbeda Cu, Fe, Mn, Zn, Mo
dll penting untuk produksi metabolit sekunder.
Prekursor dan Metabolik Regulator
 - Mengatur produksi daripada mempromosikan pertumbuhan Foaming
- Prekursor: PAA (asam fenilasetat) untuk Pena G; Cl untuk - Berbusa
chlortetracycline - Penghapusan sel dari kultur
Inhibitor: Untuk mengakumulasi zat antara metabolisme. misalnya: Produk: - Perubahan fisik
Gliserol, inhibitor: Nabisulphite, efek: asetaldehida produksi ditekan, m / o: - Pengurangan volume kerja
S.cerevisiae. - Rasio massa & panas lebih rendah
produk: tetrasiklin, penghambat: bromida, efek: chlortetracycline formasi - Data proses tidak valid
ditekan, m / o: Streptomyces aureofaciens Induser: Mayoritas enzim tidak - Penurunan sterilitas
dapat diinduksi. protein asing membatasi pertumbuhan sel, induksi pada 3 cara untuk menyelesaikan: Media, antifoam, atau pemutus busa mekanis
konsentrasi tertentu  Antifoam yang ideal
 Harus menyebar dengan mudah dan memiliki aksi cepat pada busa
Persyaratan oksigen  Harus aktif pada konsentrasi rendah
- Sedang mempengaruhi ketersediaan oksigen  Harus lama bertindak dalam mencegah pembentukan busa baru
- Metabolisme cepat: Keterbatasan oksigen  Seharusnya tidak dimetabolisme oleh m / o
- Rheologi: Viskositas & selanjutnya perilaku dengan aerasi & agitasi  Seharusnya tidak beracun untuk m / o
- Antifoam: Pengurangan zat aktif permukaan kecepatan transfer  Seharusnya tidak menyebabkan masalah pada langkah ekstraksi
oksigen  Harus murah
- Oksigen biasanya merupakan nutrisi yang membatasi karena rendah  Harus disterilkan
kelarutan dalam media kultur Contoh: Silikon, sulfonat, ester, asam lemak, alcohol
- Saat dicampur, keseragaman sangat penting untuk oksigen distribusi
di bioreaktor, distribusi ukuran gelembung adalah faktor terpenting
untuk mengatur massa transfer
- Ketika bioreaktor ditingkatkan dari laboratorium ke ukuran produksi,
desain mereka harus memenuhi oksigen distribusi dan persyaratan
pemindahan massa oksigen
- Parameter penting dalam kontrol pO2 adalah kecepatan rotasi mixer
n: nmin dan nmax. Ini berarti bahwa, ketika mengendalikan pO2, n
hanya akan bervariasi dalam kisaran ini. Ini batas ditentukan
sehubungan dengan menghilangkan berbagai yang tidak diinginkan
fenomena.
N min ditentukan:
 untuk mengamankan tingkat pencampuran sebagian turbulen
minimal; ENVIRONMENTAL EFFECTS ON GROWTH AND PRODUCT
 oleh dispersi gelembung dijamin; FORMATION
 oleh sedimentasi yang dicegah. Pengaruh lingkungan:
nmax ditentukan oleh:  Suhu
 pengaturan rezim berbusa intensif;  pH
 kerusakan mekanis ireversibel sel  Ketersediaan Oksigen
 fluktuasi permukaan cair dan penguapan.  Tekanan Osmotik / Konsentrasi Garam
  Ketersediaan Nutrisi
Efek suhu terhadap pertumbuhan
- Temperatur yang lebih tinggi mempercepat reaksi kimia, ~ dua kali
lipat untuk setiap 10oC dalam suhu.
- Harapkan sel untuk tumbuh lebih cepat sebagai temp. naik, hingga
titik tertentu. Tapi terlalu tinggi suhu denaturasi protein dan asam
nukleat, kehilangan kritis enzim dan hilangnya metabolisme.
- Temperatur kardinal: setiap organisme dapat ditandai dengan 3suhu:
suhu minimum, di bawahnya tidak ada pertumbuhan, suhu optimal, di
mana pertumbuhan tercepat terjadi, suhu maksimum, di atas itu tidak
ada pertumbuhan terjadi
- Mikroba yang berbeda diadaptasi untuk rentang suhu yang berbeda
- Bakteri khas dapat tumbuh lebih dari ~ 30 derajat. C temp. rentang
(stenothermal); beberapa dapat tumbuh pada rentang yang lebih luas
(eurythermal).
Suhu optimal untuk pertumbuhan dan pembentukan produk bisa berbeda
 Psychrophiles - suhu optimal. biasanya
15oC atau lebih rendah.
 catatan: beberapa organisme
psychrotolerant – optimal suhu 20-40
derajat, tetapi bisa tumbuh serendah 0o.
Ini adalah tidak dianggap psikofil.
 Mesofil - optima dari 20-45o minimal
sekitar 15-20o.
 Termofil - optima 55o atau lebih tinggi. Beberapa (hipertermofil)
miliki optimal 80 deg atau lebih tinggi (kebanyakan Archaea dalam
grup ini). Ditemukan di sumber air panas, laut dalamventilasi
hidrotermal.
Adaptasi fisiologis dan struktural terkait
dengan suhu:
- Psikrofil menghasilkan enzim
dengan suhu yang lebih rendah.
Mereka sering denaturasi pada suhu
kamar.
- Psikrofil memiliki asam lemak tak
jenuh yang lebih tinggi dalam lipid membrane cairan membran pada
suhu yang lebih rendah
- Termofil memiliki enzim yang stabil terhadap panas, juga ribosom
bekerja lebih tinggi temps. Hanya sedikit perubahan asam amino dari
protein mesofil yang tampaknya perlu dalam beberapa kasus
memungkinkan stabilitas suhu tinggi.
- Membran termofil memiliki banyak asam lemak rantai panjang,
banyak lemak jenuh asam. lipid membran "membeku" menjadi bentuk
padat pada apa yang kita anggap hangat suhu, sehingga menghambat
transportasi. Tetapi pada suhu yang sangat tinggi, membran berfungsi
dengan baik.
Efek Oksigen
 Faktor pembatas pertumbuhan oksigen
 Di atas konsentrasi oksigen kritis, laju pertumbuhan tidak tergantung
pada oksigen terlarut (DO)
E.g: Azotobacter vinelandii hanya 50% dari pertumbuhan @ DO =
0,05 mg / l (kelebihan glukosa)
 Kebutuhan oksigen untuk organisme: Bakteri / ragi => 5 - 10%, Mold
(kapang) => 10 -50% (ukuran pelet)
 Oxygen Uptake Rate (OUR)
 Laju Pemindahan Oksigen (Oxygen transfer rate) => desain reaktor
efek
Efek oksigen pada pertumbuhan
 Catatan: organisme yang lebih tinggi semuanya membutuhkan
oksigen; Tetapi beberapa mikroba tumbuh secara anaerob atau
sepanjang waktu.
 Aerob obligat - tumbuh hanya jika oksigen hadir
 Anaerob fakultatif - tumbuh dengan atau tanpa oksigen, tumbuh lebih
baik dalam oksigen (bernafas)
 Anaerob aerotolerant - abaikan oksigen, tumbuh sama baiknya dengan
atau tanpa
 obligate anaerob - mati di hadapan oksigen
 Microaerophiles - tidak akan tumbuh secara normal oksigen atmosfer
(20%), tetapi membutuhkan beberapa oksigen untuk pertumbuhan (2-
10%)
Habitat anaerob lebih umum dari yang diperkirakan. Mis: di mulut manusia,
plak berisi kebun binatang bakteri. Anaerob fakultatif mengkonsumsi oksigen,
membuat fit lingkungan mikro anaerob untuk anaerob obligat. Secara umum,
di mana pun bahan organik terakumulasi, mikroba akan habis
oksigen lebih cepat dari yang bisa diganti, buat lingkungan anaerob. Esp. benar
di bawah air, karena oksigen tidak larut dalam air. Danau dan kolam
dikelompokkan menjadi aerobik (atas) dan zona anaerob (lebih rendah) di
musim panas karena pertumbuhan mikroba yang kuat pada sedimen.
Mengapa obligat anaerob / Mengapa pasokan oksigen berlebih mematikan
bagi organisme tertentu?
 Oksigen sendiri adalah reaktif (agen pengoksidasi), yang mampu
mendegradasi molekul organik. Tapi oksigen dapat dengan mudah
menghasilkan produk sampingan yang sangat beracun, zat
pengoksidasi kuat yang bereaksi tanpa pandang bulu dengan molekul
organik apa pun, termasuk DNA, protein, dll : (superoksida, peroksida
& radikal hidroksil)
Teknik kultur
 untuk aerob: goyang atau putar biakan untuk menambah lebih banyak
oksigen, atau udara yang disaring melalui gelembung culture
 untuk anaerob: gunakan media dengan reduktor (gabungkan dengan
oksigen secara kimia) pompa keluar udara, siram dengan tabung
gasPak gas nitrogen murni, segel pelat dalam botol, gunakan katalis
+gas hidrogen untuk menghilangkan oksigen
Efek pH terhadap pertumbuhan
 Konsentrasi ion hidrogen mempengaruhi aktivitas
enzim, karena itu mempengaruhi tingkat
pertumbuhan mikroba
 pH mengukur keasaman. pH = log 10 dari
konsentrasi H +.
Air murni memiliki pH 7; 1 asam molar pH = 0.
 Mikroba berbeda memiliki pH optimal:
Asidofil = pH asam optimal (1 hingga 5,5)
Neutrofil = pH 5,5 hingga 8 optimal
Alkalifilis = pH 8,5 hingga 11,5
Alkolifilis ekstrim = pH optimal 10 atau lebih besar
Catatan: sebagian besar bakteri adalah neutrofil (Pengecualian:
beberapa bakteri di sumber air panas memiliki optimal 1-3)
Tetapi kebanyakan jamur lebih suka sedikit asam (pH 4 hingga 6)
 Saboraud's Medium - menggunakan pH rendah untuk menghentikan
bakteri pertumbuhan, selektif untuk pertumbuhan jamur.
 PH optimal untuk pertumbuhan dan pembentukan produk bisa
berbeda
 Organisme mempertahankan pH intraselulernya pada tingkat konstan
 Organisme yang berbeda membutuhkan rentang pH yang berbeda
 Pasokan CO2 ke medium dapat mengubah pH medium.
 Dalam fermentasi, pemilihan komponen medium mempengaruhi pola
pH profil selama operasi E. g: N sumber: Ammonium (konsumsi,
penurunan pH)
 Nitrat (Nitrat direduksi menjadi Ammonium, peningkatan pH)
 PH optimal untuk pertumbuhan berbagai organisme: Bakteri 3 – 8,
Ragi 3 – 6, Kapang 3- 7, Sel Tumbuhan 5 – 6, Sel Hewan 6.5 - 7.5
Kontrol pH: Buffer
Efek tekanan osmotic
 Beberapa organisme dapat menangani garam tinggi atau konsentrasi
terlarut, dan membutuhkannya untuk bertahan hidup.
 Organisme diklasifikasikan ke dalam 3 kategori:
Halofil - 1 - 15% NaCl
Halophiles Ekstrim - 15 -30% NaCl
Halotoleran - organisme dapat bertahan dalam konsentrasi garam yang
lebih tinggi tetapi jangan suka itu.
Efek zat terlarut dan aktivitas air terhadap pertumbuhan
 Sel membutuhkan sejumlah air bebas untuk dapat melakukan
metabolisme.
 Ketika ditempatkan di lingkungan hipertonik, banyak sel berhenti
tumbuh.
 Beberapa dapat mengkompensasi, mensintesis zat terlarut yang
kompatibel (= molekul yang fungsinya adalah untuk
menyeimbangkan kekuatan osmotik). Contoh: kolin, prolin, betain,
asam glutamat, dll.
 Stafilokokus adalah contoh yang baik; tumbuh di kulit, tempat garam
biasa.
 Staph dapat mentolerir garam hingga 10%; dapat merancang media
kultur dengan garam 7,5%, menekan pertumbuhan sebagian besar
bakteri lain, pilih untuk Staph
 Beberapa bakteri membutuhkan kekuatan osmotik yang sangat tinggi
untuk pertumbuhan = Halofil; Ex.
 Halobacterium halobium tumbuh di Laut Mati, Great Salt Lake, garam
menguap flat. Tidak akan tumbuh jika konsentrasi garam kurang dari
3M! Catatan: ini adalah anggota Archaea; memiliki dinding sel yang
sangat dimodifikasi dan membran. Akumulasi sejumlah besar kalium
sebagai kompatibel terlarut.
Efek radiasi pada pertumbuhan
  Cahaya dan UV adalah bagian dari spektrum EM; meluas ke radiasi
yang sangat kuat (Sinar gamma), radiasi yang sangat lemah (panas,
radio)
 Cahaya tampak (terutama violet yang lebih enerjik dan biru) cukup
kuat, bisa membunuh bakteri. Banyak bakteri yang disebarkan melalui
udara berpigmen; pigmen menyerap radiasi, mencegah kerusakan sel.
Catatan: mutan tanpa pigmen menunjukkan sensitivitas lebih terhadap
cahaya daripada berpigmen bentuk.
Mekanisme kerusakan:
- cahaya yang diserap oleh beberapa pigmen (mis. sitokrom, flavin,
klorofil), energy dipindahkan ke oksigen untuk menghasilkan oksigen
singlet = zat pengoksidasi yang sangat kuat, menyebabkan banyak
kerusakan
- Sinar UV menyebabkan kerusakan spesifik pada DNA, maks. efek
pada 260 nm -> timin dimer
- Radiasi pengion menyebabkan banyak jenis kerusakan: memecah
ikatan H, teroksidasi banyak kelompok, dapat mematahkan untai
DNA (target paling rentan).
Faktor nutrisi yang Mempengaruhi Pertumbuhan Bakteri
 Umumnya konsentrasi zat terlarut (yaitu pertumbuhan kimia
komponen) lebih tinggi di dalam sel mikroba daripada di lingkungan
ekstraseluler. Penghalang utama yang mengatur hal ini bagian
diferensial dari komponen kimia adalah selselaput.
Fungsi membran adalah:
i) menyimpan nutrisi penting dan makromolekul di dalam sel.
ii) memompa nutrisi tertentu di dalam sel terhadap konsentrasi gradien.
iii) memungkinkan aliran nutrisi gratis melintasi membran.
iv) mengecualikan beberapa zat terlarut dalam lingkungan dari masuk ke sel