Janin Campylobacter terdiri dari dua subspesies, C. fetus subsp. janin dan C. janin subsp.

venerealis,
yang dianggap patogen yang muncul pada manusia dan hewan. Perbandingan pada tingkat genom
telah mengungkapkan variasi spesifik subspesies sederhana; Namun demikian, dua subspesies ini
menunjukkan preferensi host dan niche yang berbeda. C. fetus subsp. Janin adalah komensal dan
patogen hewan peliharaan yang dapat ditularkan ke manusia melalui makanan yang terkontaminasi.
Gambaran klinis infeksi manusia bisa parah, terutama pada inang yang mengalami gangguan.
Sebaliknya, C. fetus subsp. venerealis adalah patogen yang ditularkan secara seksual yang pada
dasarnya terbatas pada sapi. Infeksi yang mengarah ke campylobacteriosis bovine venereal
menyebabkan kerugian ekonomi yang cukup besar karena aborsi dan infertilitas. Sekuensing genom
baru-baru ini dari dua subspesies telah memajukan pemahaman kita tentang adaptasi C. fetus
melalui genomik komparatif dan identifikasi daerah gen spesifik subspesies yang diprediksi akan
terlibat dalam patogenesis. Perbedaan yang paling mencolok antara subspesies adalah asosiasi
subspesies yang sangat spesifik dari pulau patogenisitas dalam C. fetus subsp. kromosom venerealis.
Wilayah yang disisipkan mengkodekan sistem sekresi Tipe 4, yang berkontribusi terhadap sifat
virulensi organisme ini secara in vitro. Tinjauan ini menjelaskan perbedaan utama dalam
karakteristik epidemiologis, fenotipik, dan molekuler dari dua subspesies dan merangkum kemajuan
terbaru untuk memahami mekanisme molekuler patogenesis C. fetus.

Kata kunci: Subspesies Campylobacter fetus, genomik komparatif, patogen manusia / hewan,
patogenisitas

Pergi ke:

pengantar

Campylobacter adalah bakteri patogen zoonosis yang menyebabkan penyakit pada manusia dan
hewan. Anggota genus yang paling menonjol adalah C. jejuni, yang merupakan penyebab utama
diare bakteri pada manusia. C. jejuni dan C. coli merupakan 95% dari karakter Campylob yang
diisolasi dalam kasus infeksi manusia [1-3]. Namun demikian, C. fetus diakui sebagai patogen yang
relevan dari ternak, sangat beradaptasi dengan mukosa usus dan / atau saluran urogenital inangnya.
C. fetus juga merupakan patogen manusia. Ini adalah spesies Campylobacter yang paling sering
diisolasi dari darah manusia dalam kasus bakteremia, dan jumlah infeksi C. janin yang dilaporkan
diyakini secara substansial diremehkan [2, 4]. C. fetus terdiri dari dua subspesies, C. fetus subsp.
janin dan C. janin subsp. venerealis, yang menampilkan preferensi host dan niche yang sangat
berbeda, meskipun mereka sangat terkait pada tingkat genom.

Pergi ke:

Epidemiologi dan signifikansi klinis

Meskipun dua subspesies C. fetus subsp. janin dan C. janin subsp. venerealis berbagi banyak
karakteristik, mereka menampilkan mikrobiologi, epidemiologi dan fitur infeksi yang berbeda pada
manusia (C. fetus subsp. fetus) dan ternak (C. fetus subsp. fetus dan C. fetus subsp. venerealis) [5, 6],
seperti diringkas dalam
C. fetus subsp. janin adalah subspesies dominan yang menginfeksi manusia [6]. Habitat alami C. fetus
subsp. Janin adalah usus domba dan sapi, di mana ia dianggap sebagai komensal. Selain itu, dapat
diisolasi dari babi, unggas, dan reptil [2, 7-9]. C. fetus subsp. janin dianggap sebagai patogen
oportunistik yang menyebabkan penyakit parah, terutama pada pasien lansia dan pasien dengan
gangguan sistem imun [4]. Penularan diyakini terjadi terutama oleh konsumsi makanan atau air yang
terkontaminasi, meskipun wabah diare C. fetus di Alberta, Kanada, dikaitkan dengan bekerja di
rumah jagal komunitas [10]. Infeksi C. fetus manusia pertama kali dilaporkan pada tahun 1947,
terkait dengan konsumsi susu yang tidak dipasteurisasi [4]. Biasanya, pasien dengan C. fetus subsp.
bakteremia janin melaporkan mengonsumsi susu mentah, daging sapi mentah, atau hati sapi, atau
babi yang kurang matang [11-13]. C. fetus subsp. janin menjajah saluran usus, yang dapat
menyebabkan diare akut. Lebih penting lagi, infeksi primer mengarah ke bakteremia portal, dan C.
fetus subsp. janin kemudian berkoloni di hati. Ekskresi melalui saluran empedu menyebabkan fase
kedua kolonisasi usus. Orang sehat biasanya menghilangkan C. fetus subsp. janin dan ada
bakteremia sistemik sementara atau tidak ada [4]. Pada host yang mengalami gangguan, terutama
lansia, bayi, atau pasien dengan penyakit yang mendasarinya seperti alkoholisme, diabetes, infeksi
HIV, atau kanker, C. fetus subsp. infeksi janin dapat terjadi [12, 14-18]. Dalam kasus ini, infeksi
mengakibatkan septikemia, peritonitis, endo dan perikarditis, selulitis, meningoensefalitis, dan
osteoartritis. Menariknya, C. fetus subsp. janin sering diisolasi dari pembuluh darah yang terinfeksi
(mis. aneurisma arteri yang terinfeksi). Pasien sering mengalami infeksi kambuh, yang setidaknya
sebagian disebabkan oleh variasi antigenik patogen (untuk perincian lihat bagian “Patogenesis
infeksi C. fetus”). Aborsi manusia akibat infeksi jarang terjadi [13, 19-22]. Perlu dicatat, bahwa C.
fetus subsp. janin menunjukkan patogenisitas pada hewan, menyebabkan aborsi pada sapi, ovin, dan
kaprin. Rute penularan fecal-oral dijelaskan, dan perjalanan infeksi tidak dianggap epidemi [5].

C. fetus subsp. venerealis sebagian besar merupakan patogen sapi. Ini menjajah saluran urogenital
sapi [5]. Reservoir C. fetus subsp. venerealis adalah cryptus epitel dari kulit khatan. Infeksi ini sering
asimptomatik tetapi berlanjut sepanjang masa hidup hewan [23]. Sapi terinfeksi selama koitus, di
mana C. fetus subsp. venerealis menjajah vagina, leher rahim, uterus, dan saluran telur, yang
menyebabkan infeksi meninggi yang menyebabkan infertilitas dan aborsi. Meskipun respon imun, C.
fetus subsp. venerealis dapat bertahan di vagina sapi. Bertahannya kulit preputium dan vagina
merupakan faktor utama penyebaran epidemi C. fetus subsp. venerealis yang mengarah ke bovine
venereal campylobacteriosis (BVC). BVC adalah penyakit wajib dengan distribusi di seluruh dunia [5].
Ini penting untuk pembibitan sapi dan perdagangan embrio internasional, dan itu menempatkan
beban ekonomi yang signifikan pada industri inseminasi buatan [24].

Pergi ke:

Diferensiasi, isolasi, dan mengetikkan subspesies C. fetus

Filogeni dan subspesifikasi

C. fetus dapat berupa serotipe A, B, atau AB berdasarkan pada antigen-O yang berbeda (mis. LPS). C.
fetus subsp. venerealis selalu tipe A, sedangkan C. fetus subsp. janin mungkin tipe A, tipe B, atau tipe
AB yang jarang [25-27]. Serotipe yang berbeda sesuai juga dengan tipe protein S-layer yang berbeda.
Sejak C. fetus subsp. venerealis dan C. fetus subsp. janin keduanya LPS / getah tipe A, diferensiasi
antara subspesies mungkin terjadi setelah tipe A-tipe B split [28]. Penelitian pengetikan urutan
multilokus (MLST) juga menekankan bahwa C. fetus subsp. venerealis mewakili klon "bovine" dari C.
fetus subsp. janin tipe A [29]. Menariknya, perbandingan sekuens 16S rRNA dari strain C. fetus yang
berasal dari mamalia dan reptil menunjukkan adanya pengelompokan filogenetik dari strain reptil
antara mamalia C. subspesies janin mamalia dan C. hyointestinalis [28]. Lebih lanjut, reptil C. fetus
dan strain mamalia menunjukkan divergensi genetik yang lebih tinggi daripada antara C. fetus subsp.
janin dan C. janin subsp. venerealis dan antara tipe A dan tipe B [30]. Analisis genom terperinci dari
strain C. fetus dari reptil mendukung definisi subspesies reptil C. fetus baru [31, 32]. Gambar 1
menggambarkan hubungan leluhur yang diusulkan antara subspesies C. fetus, berdasarkan studi
filogenetik yang disebutkan di atas.

Isolasi, identifikasi, dan diferensiasi subspesies

Pengumpulan spesimen, pilihan media transportasi dan isolasi, serta penggunaan teknik selektif
seperti filter semuanya memengaruhi tingkat isolasi C. janin (ditinjau dalam Pustaka [33]).
Karakteristik pertumbuhan yang lambat dari deteksi batas C. fetus dibandingkan dengan bakteri
non-cepat lain yang ada dalam spesimen [2, 34]. Media selektif yang mengandung sefalotin
menghambat pertumbuhan C. fetus [4, 6, 35, 36]. Secara keseluruhan, ini berkontribusi pada
perkiraan infeksi C. fetus yang terlalu rendah.

Diferensiasi antara C. fetus subsp. janin dan C. janin subsp. venerealis sulit, meskipun wajib, karena
hanya C. fetus subsp. venerealis mewakili agen penyakit yang diwajibkan BVC [24, 33]. Beberapa tes
untuk diferensiasi fenotipik dan genotipik telah ditetapkan [33]. Standar emas yang saat ini
direkomendasikan dalam diferensiasi adalah uji toleransi glisin 1%, di mana C. fetus subsp. janin
toleran glisin [37]. Tes biokimia berdasarkan produksi H2S dan pengurangan selenite atau
aerotolerance dan pertumbuhan pada 42 ° C dilaporkan untuk membedakan antara subspesies
tetapi sering menghasilkan hasil yang tidak konsisten [33]. Kelompok berbeda dari strain C. fetus
yang ditunjuk sebagai C. fetus subsp. venerealis biovar intermedius dijelaskan, yang bereaksi positif
dalam uji H2S (biasanya positif untuk C. fetus subsp. fetus) tetapi sebaliknya menyerupai C. fetus
subsp. venerealis [38]. Juga, data MLST menunjukkan bahwa jenis ini memiliki tipe urutan yang sama
dengan C. fetus subsp. venerealis [29].

Kebutuhan akan pengujian yang lebih andal mengarah pada penerapan metode molekuler untuk
diskriminasi subspesies. Salah satu metode analisis berbasis polimerase rantai reaksi (PCR) pertama
yang dikembangkan adalah PCR multipleks yang dijelaskan oleh Hum et al. [39]. Sayangnya, metode
ini tidak dapat secara andal mengidentifikasi strain biovar intermedius [29]. Tes PCR lebih lanjut
dijelaskan, memodifikasi alat PCR asli atau menerapkan primer spesifik subspesies baru [40-44].
Metode molekuler pertama yang dapat diandalkan untuk diferensiasi adalah sidik jari amplifikasi
panjang polimorfisme (AFLP) yang dijelaskan oleh Wagenaar et al. [45], yang juga mendukung
diskriminasi biovar intermedius [29]. Data PCR dan AFLP yang dikonfirmasi MLST [29]. Evaluasi
toleransi glisin dalam kombinasi dengan metode molekuler ini cukup dan andal untuk membedakan
C. fetus subsp. janin, C. janin subsp. venerealis, dan C. fetus subsp. venerealis biovar intermedius
[33].

Pergi ke:

Genomik dari subspesies C. fetus

Analisis komparatif

Perbandingan genom adalah alat yang sangat diperlukan untuk memahami biologi bakteri dan
virulensi. Genom Campylobacter lengkap lengkap pertama yang tersedia adalah dari klinis C. jejuni
isolat NCTC 11168 [46]. Ini memiliki genom melingkar, sangat padat, dan agak kecil (~ 1,6 Mb)
dengan konten G + C rendah (~ 30%). Anehnya, genom C. jejuni ini tidak memiliki elemen penyisipan
atau ramalan [46]. Studi elektroforesis gel pulsedfield awal mengungkapkan ukuran genom yang
lebih kecil untuk C. fetus subsp. janin (~ 1,2 Mb) dan C. janin subsp. venerealis (1,3-1,5 Mb),
meskipun variasi antara isolat yang berbeda telah dilaporkan [47]. Pada tahun 2006, urutan genom
lengkap C. fetus subsp. galur janin 82-40, sebuah isolat darah manusia, diterbitkan (GenBank acc. no.
NC_008599) dengan ukuran genom sekitar 1,8 Mb dan lebih dari 90% urutan pengkodean. Baru-baru
ini, urutan genom yang belum selesai dari sapi Argentina mengisolasi C. fetus subsp. venerealis
strain AZUL-94 [48] dan C. fetus subsp. tipe venerealis strain NCTC 10354T [49] diterbitkan dan
mengungkapkan ukuran genom ~ 1,9 Mb dan kandungan G + C ~ 33%. Alignment dari sekuens
mengungkapkan bahwa genom C.spesies janin sangat sintenik dengan lebih dari 99% identitas asam
amino rata-rata antara proteom inti [48, 50]. Menariknya, perbandingan antara proteom inti reptil
dan mamalia C. fetus subsp. janin mengungkapkan tingkat yang lebih rendah dari identitas asam
amino (~ 94%), menggarisbawahi bahwa reptil C. fetus mewakili subspesies yang terpisah [32].

Representational difference analysis (RDA) dan proyek sekuensing genom lengkap dari C. fetus
subsp. venerealis strain 84-112 [25] di laboratorium kami membantu mengidentifikasi daerah gen
yang hadir secara unik di salah satu dari dua subspesies janin C. dan memahami gaya hidup mereka
yang berbeda [51, 52]. Meskipun homologi yang tinggi antara subspesies, sejumlah gen yang
menarik diidentifikasi yang mungkin berkontribusi terhadap perbedaan dalam spesifisitas inang dan
adaptasi (naskah dalam persiapan [53]) termasuk subspes C. fetus. venogenalis-pathogenicity
genomik spesifik pulau (PAI) (lihat di bawah), yang tidak ada dari semua C. janin yang diuji subsp.
galur janin [51]. Sebaliknya, wilayah yang dikodekan untuk homolog GDP-mannose 4,6-dehydratase
(GMD) diidentifikasi secara unik di C. fetus subsp. janin [51]. Enzim ini terlibat dalam sintesis GDP-L-
fucose yang diperlukan untuk sintesis LPS [54, 55]. Dalam Helicobacter pylori

Keterikatan dan invasi

Lampiran patogen bakteri pada sel epitel merupakan prasyarat untuk invasi sel inang dan
selanjutnya translokasi ke lapisan mukosa yang lebih dalam. Bentuk sel spiral dan motilitas mirip
pembuka botol yang diberikan oleh flagela C. fetus diperlukan untuk menjajah dan melintasi
penghalang lendir yang menutupi epitel. Flagella mutan C. jejuni sangat dilemahkan dalam virulensi.
Selain itu, flagel telah terbukti menjadi adhesin penting untuk C. jejuni dan mungkin memiliki fungsi
serupa pada C. fetus [77, 78]. Genom dari kedua subspesies C. fetus memiliki homolog adhesin PEB1,
yang merupakan protein membran luar, dan CadF. CadF adalah protein fibronektinbinding yang
memediasi ikatan Campylobacter ke matriks ekstraseluler epitel dan tampaknya sangat penting
untuk penyerapan seluler secara istimewa pada permukaan sel basolateral [79]. C. fetus telah
terbukti melekat dan menyerang sel epitel manusia seperti INT 407 dan Caco-2 [51, 80, 81]. Tes
perlindungan Gentamicin juga mengungkapkan replikasi C. fetus intraseluler dalam sel INT 407,
meskipun ceruk intraseluler C. fetus belum didefinisikan hingga sekarang [80]. Pengikatan C. fetus
dengan fibronektin yang diimobilisasi dan peningkatan invasi sel INT 407 oleh fibronectin telah
ditunjukkan [82]. Invasi sel inang oleh C. jejuni dilaporkan terjadi melalui dua proses yang berbeda.
Satu tergantung mikrotubulus dan terjadi terutama pada permukaan sel apikal. Mekanisme kedua
adalah tergantung mikrofilamen dan diamati pada sisi basolateral sel, mungkin berkontribusi
terhadap infeksi ulang sel setelah translokasi C. jejuni melintasi epitel [77]. Menggunakan sel Caco-2
terpolarisasi sebagai model untuk epitel usus, Baker dan Graham mengamati bahwa C. fetus
melintasi epitel tanpa mengganggu integritas lapisan tunggal. Oleh karena itu penulis ini
mengusulkan bahwa C. fetus lebih memilih rute transelular untuk melewati penghalang epitel [83].
Selain itu, penulis melaporkan bahwa invasi dan translokasi C. fetus di sel Caco-2 terjadi secara
independen, sedangkan sitoskeleton tubulin fungsional diperlukan untuk translokasi tetapi tidak
untuk invasi sel Caco-2 [83]. Temuan ini bertentangan dengan situasi dengan C. jejuni dan karakter
Campylob lainnya, seperti C. concisus, yang mentranslokasi melintasi monolayer sel melalui rute
paracellular, menginduksi disfungsi penghalang epitel, dan akhirnya memulai apoptosis sel epitel
dan nekrosis [84, 85] . Migrasi bakteri di bawah sel inang sebelum invasi yang efisien, proses yang
disebut subvasion, dilaporkan untuk C. jejuni [86]. Mikroskopi konfokal dari monolayer Caco-2 yang
terinfeksi C. fetus juga menunjukkan migrasi bakteri di bawah sel eukariotik [52]. Selain itu, tes
proteksi gentamisin transwell menunjukkan tingkat invasi C. fetus dan C. jejuni yang lebih rendah
dibandingkan dengan tes standar jika gentamisin diterapkan pada kompartemen basolateral,
menunjukkan mekanisme subvasion yang serupa yang digunakan oleh C. fetus [52].

Sitolethal toksin yang mendatar dan faktor virulensi lainnya

Spesies Campylobacter menghasilkan toksin Cdt cytolethal yang membesar, terdiri dari tiga subunit
yang dikodekan oleh cdtA, cdtB dan cdtC [87]. Ketiga subunit diperlukan untuk toksisitas penuh,
membentuk kompleks enzim aktif, yang terikat pada membran sel inang melalui CdtA dan CdtC [88,
89]. CdtB menunjukkan aktivitas seperti DNase I yang menyebabkan kerusakan DNA dan mengarah
pada penghentian siklus sel dalam fase G2 dan pembesaran sel inang [90]. Keterlibatan Cdt yang
diusulkan dalam virulensi Campylobacter membayangkan bahwa toksin tersebut memperbesar sel-
sel individu di lapisan epitel, mungkin menyebabkan gangguan penghalang epitel (mis.
Persimpangan ketat) dan memungkinkan bakteri untuk mencapai kompartemen sel basolateral.
Cluster gen cdt lengkap ditemukan pada C. fetus, dan protein CdtB menunjukkan homologi tinggi (~
60%) ke C. jejuni CdtB [91]. C. fetus Cdt menunjukkan toksisitas terhadap sel HeLa in vitro [91].
Seperti halnya dengan C. jejuni, Cdt tidak terlibat dalam invasi langsung sel inang karena mutan C.
fetus cdtB tidak menunjukkan fenotip invasi yang berubah dalam tes perlindungan gentamisin
dengan sel Caco-2 [51]. Selain itu, subspesies C. fetus mengandung homolog dari penentu virulensi
MviN (MurJ) dan antigen invasi Campylobacter (CiaB). Yang terakhir telah terbukti disekresikan
melalui sistem sekresi flagel Tipe 3 di C. jejuni dan dapat dideteksi dalam sitoplasma sel inang
setelah infeksi [78]. Selain itu, genom dari kedua subspesies mengandung hemagglutinin filatif
diduga dari keluarga HecA yang aktivitasnya masih harus diuji.

Pembunuh

Atribut virulensi terbaik yang dicirikan umum untuk kedua subspesies C. fetus sejauh ini adalah
lapisan permukaan (S), suatu struktur protein yang menutupi permukaan sel bakteri. Studi awal
menunjukkan bahwa lapisan-S berperan dalam resistensi terhadap fagositosis oleh sel mononuklear.
McCoy et al. adalah yang pertama memurnikan nam antigen permukaan