Jurnal Sains dan Teknologi Farmasi, Vol. 17, No.

2, 2012, halaman 92-97 ISSN : 1410-0177

UJI BIOAKTIVITAS LOSARTAN TERHADAP JARINGAN FIBROSIS HATI

TIKUS YANG DI INDUKSI KARBON TETRAKLORIDA (CCL4)

Anisyah Achmad
Laboratorium Famasi Klinik, Jurusan Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu- Ilmu
Kesehatan, UNSOED Dr.Soeparno, Kampus Karangwangkal, Purwokerto, Jawa Tengah
( 0281- 642840 ) Telp. 08122582885
Email : r3600mc@yahoo.com

ABSTRACT

Hepatic fibrosis is an inflammation of liver which involves series of cells and mediators.
Hepatic fibrosis can lead to cirrhosis. Hepatic fibrosis increase the risk of clinical
complication such as portal hypertension and hepatocyte disfunction. This study aimed at
finding amarker for non invasive hepatic fibrosis or an antifibrotic by comparison of the
degree of hepatic fibrosis after administration of CCl4 and losartan. Thirty five rat’s were
divided into 7 groups which were K-1, K-2, K-3, K-4, K-5, K-6, K-7 respectively. K-1 was
olive oil control group, K-2, K-3 and K-4 were given CCl4 0,2 ml/100g interperitonially third
a week, K-5, K-6 and K-7 were given CCl4 and losartan 5 mg/Kg BB per oral per day. CCl4
and losartan were given for 6 weeks and the change in rat’s hepatic histopathology was
observed at week 1st, 4th, and 6th. Histopatology of rat’s liver changed from centrotubular
necrosis to centrotubular degeneration but did not show hepatic fibrosis.

Keyword : Histology, Hepatic fibrosis, Carbon Tetrachloride

PENDAHULUAN kronik. Akumulasi protein ECM

Hati merupakan organ metabolisme
terpenting dalam proses sintesis,
penyimpanan, metabolisme dan klirens
banyak senyawa endogen (Aslam et al,
2003). Liver atau hati adalah organ vital
yang memiliki peran besar dalam sistem
pencernaan, biosintesis, metabolisme
energi, pembersihan sampah tubuh, dan
pengatur sistem kekebalan tubuh.
Fibrosis hati merupakan akumulasi
berlebihan protein matriks ekstraselular
termasuk kolagen yang terjadi pada
sebagian besar jenis penyakit hati kronis
(Bataller dan Brenner, 2005). Fibrosis hati
terjadi sebagai akibat kerusakan hati
kronik dalam hubungannya dengan
akumulasi protein matriks ekstraseluler
(extracellular matrix, ECM) yang khas
bagi kebanyakan jenis penyakit hati
mendistorsi struktur hati dengan
membentuk bekas luka berserat, yang
selanjutnya dapat menjadi sirosis. Sirosis
menghasilkan disfungsi hepatoseluler dan
ketahanan intrahepatik meningkat menjadi
aliran darah, menyebabkan kegagalan hati
dan hipertensi portal (Leija et al., 2007;
Iredale et al., 2007).
Sejumlah obat antifibrotik dapat
mengurangi penumpukan jaringan parut
dalam model eksperimental cedera hati
kronis. Terapi antifibrotik yang ideal
seharusnya bersifat spesifik untuk hati,
ditoleransi dengan baik pada pemberian
jangka lama, dan efektif dalam mengurangi
deposisi kolagen yang berlebihan tanpa
mempengaruhi sintesis ECM normal
(Bataller dan Brenner, 2005). Kesulitan
penelitian untuk membuktikan khasiat
antifibrotik pada manusia disebabkan
92
Anisyah A., et al.
adanya kebutuhan untuk melaksanakan
biopsi hati untuk menilai secara akurat
perubahan dari fibrosis hati.
Biopsi merupakan baku emas namun
memiliki beberapa keterbatasan seperti
keengganan pasien untuk melakukan
biopsi, biaya yang lebih mahal, kesalahan
sampel, kesalahan interpretasi, resiko yang
akan didapat oleh pasien, cenderung
perdarahan, dan keterbatasan pemahaman
fibrosis bila sampel minimal. Dengan
keterbatasan biopsi hati, petanda fibrosis
non invasif sangat dibutuhkan untuk
melihat progresifitas penyakit dan fibrosis
hati sebelum dan sesudah pengobatan.
Adapun petanda non infasif fibrosis hati
harus memenuhi persyaratan seperti :
spesifik untuk hati, mudah dilakukan di
laboratorium klinik, menggambarkan
stadium dari fibrosis, tidak mahal,
pemeriksaan terstandarisas di laboratorium
(Mardini, 2005 ; Afdhal, 2004 ; Sebastiani,
2006).
Salah satu obat yang dapat berfungsi
sebagai antifibrotik adalah Losartan.
Losartan adalah salah satu obat dengan
mekanisme kerja blok reseptor
angiostensin II. Angiotensin II merupakan
suatu vasokonstriktor yang berupa peptida
efektor dari sistem renin-angiotensin
dengan regulator mayor dalam homeostasis
tekanan arteri pada manusia. Inhibisi
sistem renin-angiotensin boleh jadi
merupakan strategi yang paling
menjanjikan dalam pengobatan fibrosis
hati karena menimbulkan peningkatan
kontraksi dan proliferasi HSC (Hepar
Stellate Cell). Oleh karena itu perlu
dilakukan penelitian mengenai “ uji
bioaktivitas Losartan terhadap jaringan
fibrosis hati tikus yang diinduksi dengan
karbon tetraklorida ( CCl4)”
J. Sains Tek. Far., 17(2), 2012
METODE PENELITIAN
Bahan dan Alat
Bahan-bahan yang digunakan dalam
penelitian ini adalah tikus putih jantan
galur wistar, umur 3 bulan dengan berat
150-200 gram dan sehat, CCl4 (carbon
tetraclorida), olive oil, akuades, Losartan
tablet, NaCl fisiologis, formalin 10%,
alkohol absolute, xylol, parafin, pereaksi
warna haematoxylin-eosin (HE).
Alat yang digunakan adalah peralatan
gelas (Pyrex), neraca analitik, timbangan
hewan uji, spuit injeksi 3 ml, sonde tikus,
mikropipet, fotometer, alat sentrifugasi,
alat bedah, object glass, cover glass,
mikroskop cahaya, kamera.
Rancangan Penelitian
Penelitian ini menggunakan metode
eksperimen laboratorium dengan
Rancangan Acak Lengkap (RAL). Jenis
penelitian ini adalah post test only control
group design dengan parameter yang
diamati adalah gambaran histopatologi
hati tikus. Teknik sampling dalam
penelitian ini adalah purposive sampling
untuk pemilihan sampel hewan uji dan
simple random sampling untuk
pengelompokan ke dalam kelompok
perlakuan. Dalam penelitian ini terdapat 7
kelompok perlakuan yang terbagi menjadi
kelompok kontrol (K-1), kelompok CCl4
(K,2; K-3; K-4) dan kelompok perlakuan
CCl4 + Losartan (K-5; K-6; K-7) dengan
masing-masing kelompok terdiri dari 5
hewan uji.
Cara Kerja
Sebanyak 35 ekor tikus dikelompokkan ke
dalam 7 kelompok yaitu kelompok kontrol
(K-1), kelompok CCl4 (K-2, K-3, K-4),
dan kelompok perlakuan CCl4 + Losartan
93
Anisyah A., et al.
(K-5, K-6, K-7) dengan masing-masing
kelompok terdiri dari 5 ekor tikus.
1. Penyiapan Hewan Uji
Semua hewan uji dalam kelompok
dikandangkan secara terpisah dan
diadaptasikan selama lebih kurang 7
hari. Selama penelitian tikus
mendapatkan makan dan minum standar
yang sama ad libitum.
2. Penentuan Dosis
 CCl4
CCl4 diberikan secara intra
peritonial 0,2 ml/ 100 gr BB tikus
dengan olive oil sebagai pelarut.
Perbandingan dosis CCl4 dan olive
oil didasarkan pada penelitian yang
dilakukan oleh Reyes (2008).
Perbandingan CCl4 : olive oil (1:6)
pada minggu ke-1
Perbandingan CCl4 : olive oil (1:5)
pada minggu ke-2
Perbandingan CCl4 : olive oil (1:4)
pada minggu ke-3
Perbandingan CCl4 : olive oil (1:3)
pada minggu ke-4 sampai minggu
ke-6
 Losartan
Terapi losartan yang diberikan
berdasarkan pada penelitian
Gultom (2001) pada tikus yang
mengalami cedera hati yaitu
dengan dosis 5 mg/kg BB tikus per
hari dengan rute pemberian secara
per oral.
3. Perlakuan
a. Kelompok Kontrol (K-1)
Hewan uji pada kelompok ini
hanya diberikan perlakuan olive
oil selama 6 minggu.
b. Kelompok K-2 & K-5 (Self-
Limiting Injury)
Hewan uji pada K-2 diberi
perlakuan CCl4 secara intra
peritonial setiap 3 kali seminggu
selama 1 minggu sedangkan K-5
diberikan CCl4 seperti K-2
J. Sains Tek. Far., 17(2), 2012
ditambah Losartan peroral setiap
harinya.
c. Kelompok K-3 & K-6 (Early
Fibrosis)
Hewan uji pada K-3 diberi
perlakuan CCl4 secara intra
peritonial setiap 3 kali seminggu
selama 4 minggu sedangkan K-6
diberikan CCl4 seperti K-3
ditambah Losartan peroral setiap
harinya.
d. Kelompok K-4 & K- 7
(Reversible Fibrosis)
Hewan uji K- 4 diberi perlakuan
CCl4 secara intra peritonial setiap
3 kali seminggu selama 6 minggu
sedangkan K-7 diberikan CCl4
seperti K-4 ditambah Losartan
peroral setiap harinya.
pengamatan histopatologi
Hewan uji dikorbankan dengan cara
dislokasi cervical setelah waktu perlakuan
dari masing-masing kelompok selesai.
Hewan uji kemudian dibedah untuk
mengambil organ hatinya. Organ hati yang
diambil kemudian dicuci dengan NaCl
fisiologis, selanjutnya difiksasi dengan
menggunakan formalin 10%. Jaringan
yang telah difiksasi kemudian didehidrasi
dengan alkohol mulai dari konsentrasi
50%, 70%, 80%, 90%, 96% masing-
masing selama 1 jam dilanjutkan dengan
alkohol 100% selama 1 jam yang diulang
tiga kali. Setelah didehidrasi dilanjutkan
dengan penjernihan dengan menggunakan
xilol sebanyak tiga kali masing-masing
selama 1 jam, jaringan kemudian ditanam
dalam media parafin. Selanjutnya
dilakukan penyayatan dengan ketebalan 4-
5 mikron. Hasil sayatan diletakan pada
kaca objek, kemudian diwarnai dengan
pewarnaan hematoksilin-eosin (HE)
Preparat organ hati selanjutnya diamati di
bawah mikroskop cahaya.
94
Anisyah A., et al. J. Sains Tek. Far., 17(2), 2012

mengalami kematian sel terpogram

HASIL DAN PEMBAHASAN (apoptosis).

Gambaran histopatologi hati tikus untuk

kelompok kontrol negatif terlihat sebagian
sel normal. Seperti yang diutarakan oleh
Susanti (2002) dan Oktaviani (2005) sel
hati normal memiliki bentuk sel polyhedral
yang tersusun radial mengelilingi vena
sentralis, berbatas jelas dan inti terlihat di
tengah sel. Namun terdapat sebagian sel
yang mengalami peradangan.

Gambar 2. Histopatologi hati tikus kelompok

Gambar 1. Gambaran Histopatologi hati tikus self limiting injury (K-2)
kelompok kontrol (K-1)

Peradangan sel adalah suatu degenerasi sel

yang secara mikroskopik ukurannya lebih
besar dari pada ukuran sel normal akibat
kegagalan sel tersebut untuk
mempertahankan homeostatis cairan dan
elektrolit intraseluler, sehingga terjadi
akumulasi air di dalam sel. Peradangan
tersebut ditandai dengan terjadinya
kekeruhan sitoplasma karena munculnya
granula-granula dalam sitoplasma akibat
endapan protein pada mitokondria dan Gambar 3. Histopatologi hati tikus
retikulum endoplasma akibat gangguan kelompok self limiting
oksidasi. Hal ini diduga karena stres yang injury (K-5)
didapatkan oleh hewan uji selama Gambaran histopatologi pada kelompok K-
perlakuan, dimana stres tersebut dapat 2 (self limiting injury) tampak jelas
memacu pengeluaran ROS (reactive terjadinya degenerasi sentrolobular.
oxygen species). Pada kelompok ini juga Degenerasi ini terjadi karena adanya
terdapat kematian sel, walaupun jumlahnya gangguan pada membran sel yang
sangat sedikit. Kematian sel merupakan hal menyebabkan cairan masuk ke dalam
yang wajar pada suatu jaringan makhluk sitoplasma sehingga menimbulkan
hidup dimana sel-sel di dalamnya vakuola-vakuola kecil sampai besar,
karena sel tidak dapat menyingkirkan
95
Anisyah A., et al.
cairan yang masuk (Oktavianti, 2005).
Pada kelompok K-5 yang merupakan
kelompok terapi losartan juga terjadi
degenerasi sentrolobular, namun hanya
sedikit bila dibandingkan dengan
kelompok K-2 yang hanya diinduksi CCl4
tanpa diberi terapi.
Gambar 4. Histopatologi hati tikus
kelompok early fibrosis
(K-3)
Gambar 5. Histopatologi hati tikus
kelompok early fibrosis
(K-6)
Hasil pengamatan gambaran histopatologi
pada kelompok early fibrosis (K-3)
menunjukan terjadinya nekrosis. Hal ini
ditunjukan dengan warna inti sel yang
hitam menunjukan adanya nekrosis.
Seperti yang diketahui daya toksisitas
CCl4 pada hepar dapat menyebabkan
J. Sains Tek. Far., 17(2), 2012
nekrosis sel yang kerusakannya terlihat
jelas pada lobulus zona sentral sedangkan
pada kelompok K-5 yang merupakan
kelompok terapi losartan terlihat kerusakan
jaringan hati hanya sampai tahap
degenerasi. Hal ini menunjukan terjadi
penurunan keparahan antara kelompok
yang tidak diberi terapi losartan yaitu K-3
dengan kelompok yang diberi terapi
losartan (K-6).
Gambar 6. Histopatologi hati tikus
kelompok reversible fibrosis
(K-4)
Gambar 7. Histopatologi hati tikus
kelompok reversible fibrosis
(K-7)
Hasil pengamatan gambaran histopatologi
pada kelompok reversible fibrosis (K-4)
terlihat jelas terjadinya nekrosis
sentrolobuler. Nekrosis sentrolobular dapat
disebabkan oleh gangguan peredaran darah
hepatik yang ditandai dengan hepatosit
96
Anisyah A., et al.
yang menunjukkan eosinofilia, diikuti
dengan kongesti dan inflamasi (Gressner,
2006). Menurut Ressang (1984) nekrosis
pada hati bisa juga disebabkan oleh
pengaruh langsung agen yang bersifat
toksik seperti zat kimia maupun toksin
kuman (nekrosis toksopatik), atau karena
kekurangan faktor-faktor yang sangat
diperlukan sel seperti oksigen dan zat-zat
makanan (nekrosis trofoatik) sedangkan
pada kelompok yang diberi terapi losartan
(K-7), hanya terjadi degenerasi
sentrolobuler.
Hasil gambaran histopatologi ini
menunjukan adanya perbaikan jaringan
pada kelompok perlakuan yang diberi
losartan. Losartan akan menghambat
terjadinya proses proliferasi sel hati yang
akan menginduksi terjadinya fibrogenesis,
selain itu losartan dapat menyebabkan
fasodilatasi yang dapat mengakibatkan
penurunan proliferasi hati sehingga sel
miofibroblas tidak akan terbentuk dan akan
meminimalisir akumulasi kolagen serta
lemak pada jaringan hati.
KESIMPULAN
Gambaran histopatologi hati tikus belum
menunjukkan terjadinya fibrosis namun
histopatologi kelompok yang diberi terapi
Losartan mengalami kerusakan jaringan
hati yang lebih ringan dibandingkan
dengan kelompok yang tidak diberi terapi
Losartan.
DAFTAR PUSTAKA
Afdhal, N.H., and Nunes, D., 2004, Evaluation
of Liver Fibrosis : a Concise Review,
Am J Gastroenterol, 99:1160-74.
Aslam, M, dkk. 2003. Farmasi Klilnik
(Clinical Pharmacy). Jakarta : PT.
Elex Media Komputindo
Bataller, R., and Brenner, D.A., 2005, Liver
fibrosis, The Journal of Clinical
Investigation, 115:209-218.
J. Sains Tek. Far., 17(2), 2012
Gressner A.M, Weiskirchen R. 2006. Modern
Pathogenetic Concepts of Liver
Fibrosis Suggest Stellate Cells and
TGF-β as Major Players and
Therapeutic Targets. J.Cell.Mol.Med;
10:76-99
Gultom, E.T.M., 2001, Efek Proteksi Kaptopril
dan Losartan terhadap Cedera Sel Hati
Tikus yang Diinduksi dengan
Parasetamol, CCL4, dan Etanol,
Iredale, J.P., 2007, Models of Liver Fibrosis:
Exploring The Dynamic Nature of
Inflammation And Repair In A Solid
Organ, J Clin Invest, 117:539-548.
Leija, A., Reyes, J., Rodriquez, L., 2007,
Hepatic stellate cells are a major
component of liver fibrosis and a
target for the treatment of chronic liver
disease, Biotecnologia Aplicada,
24:19-25.
Mardini, H., Record, C., Detection Assessment
and Monitoring of Hepatic Fibrosis:
Biochemistry or Biopsy, Ann Clin
Biochemistry, 42:441-47.
Oktavianti, R., Harini, M., Handajani, N.S.,
2005, Struktur Histologis Hepar
Mencit (Mus musculus L.) setelah
Pemberian Aspartam Secara Oral,
Enviro, 5 (1), 30-33.
Reyes, A.G.L., Netzahualcoyotl, A.C.,
Beiman, G.C., Victor, J.L.D., Gustavo,
E., Guajardo, S., Jose, F.I., Vincente,
M.O., Luis, A.M.G., Francisco, J.G.G.,
Guillermo, G., Jorge, E.M.C., 2008,
Black Been Extract Ameliorates Liver
Fibrosis in Rats with CCl4-Induced
Injury, Annals of Hepatology,
7(2):April-June:130-135.
Sebastiani, G., Albert A., 2006. Non Invasive
Fibrosis Biomarkers Reduce but Not
Substitute The Need for iver Biopsy,
Gastroenterol, 12:3682-94.
Susanti, R., Nuryanto, Salasia, S.I.O., 2002,
Intoksikasi 2,3,7,8
Tetrachlorodibenzo-p-Dioxin
(TCDD):II Efek Terhadap
Histopatologis Hati, Ginjal dan Paru
Tikus Putih (Rattus novergicus), Biota
Vol VII, (1), 29-36
97