Xilem sekunder batang konifer terutama terdiri dari tracheids,sel parenkim, dan ruang interselular, yang

mungkinberfungsi dalam konduksi dan penyimpanan air dan gas. Tracheids adalahdiisi dengan getah di
gubal dan memiliki air dan nutrisi fungsi transportasi atau penyimpanan kecuali jika terjadi kavitasi di
wilayahnya lumina (Utsumi et al., 2003). Pada banyak spesies konifera, kebanyakan trakea dikeringkan
di kayu perantara (Craib, 1923; Nakada, 2006), yang merupakan transisi antara kayu gubal dan
heartwood (Komite pada Nomenklatur, IAWA, 1964). DiKaret jantung, distribusi air di lumina trakea
tidak bervariasi hanya di antara spesies, tapi juga di dalam spesies, dan bahkan di dalam spesies
batang tunggal (Nakada, 2006). Sel parenkim Ray hadir di semua tumbuhan runjung (Nobuchi,1986),
sementara parenkim aksial tidak ada dalam banyak jenis konifera spesies (Spicer, 2005). Ray parenkim
tetap hidup bagi banyak orang tahun di gubal (Frey-Wyssling dan Bosshard, 1959; Gartneret al., 2000;
Nakaba dkk., 2006) dan merupakan tempat pertukaran bahan antara symplast dan apoplast dan untuk
penyimpanan dan pengangkutan karbohidrat (Spicer dan Holbrook, 2007b).
Parenkim biasanya mulai mati di intermediate kayu dan mensintesis metabolit sekunder (Nobuchi, 1986)
yang menanamkan ketahanan peluruhan, warna, dan permeabilitas yang dikurangi heartwood
(Spicer,2005). Pewarnaan heartwood dianggap karena oksidasi dan (ISRP), dan perubahan radialnya dari
kayu gubuk menjadi kayu ulin di Indonesia pohon hidup tidak diketahui; fungsi esensial belum telah
diverifikasi (Carlquist, 2001; Tyree dan Zimmermann, 2002). In-situ mengklarifikasi adanya atau tidak
adanya cairan di dalamnya ISRP sangat penting untuk memahami fungsinya. Cryptomeria japonica (L. f.)
D. Don (Cupressaceae) adalahnKonifer paling populer dibudidayakan di Jepang. Perbedaan yang jelas
ada dalam warna gubal, kayu perantara, dan kayu ulin (Sano dan Nakada, 1998), dan distribusi air di
dalamnya perubahan trakea selama transisi dari pohon gaharu (misalnya, Yazawa dan Fukazawa, 1956,
198 ± 43%, mean ± SD, kelembaban isi dalam kondisi hijau) ke kayu ulin (108 ± 47%) via intermediate
kayu (60 ± 15%). Isi kelembaban kayu ulin bervariasi, dan secara konsisten dikelilingi oleh kayu perantara
dari kadar air rendah (Nakada et al., 1999). Kelembaban rendah konten di kayu perantara telah
dipelajari dalam hubungan untuk pembentukan kayu ulin basah di beberapa tumbuhan runjung
termasuk C. japonica (Bauch et al, 1975; Nakada, 2006; Kuroda dkk.,2009). Namun, mekanisme yang
mendasari penggantian air dengan gas di dalam kayu dengan defisit yang tajam tidak dapat dijelaskan,
Juga bukan fungsi kayu perantara di kayu ulin formasi dipahami dengan baik (Hillis, 1987). Hubungan
antara kematian sel parenkim sinar dan pembangkitan kelembaban rendah, kayu perantara juga tetap
harus diperjelas (Nobuchi, 1986; Spicer, 2005).
Dalam penelitian ini, kami mengevaluasi fungsi ISRP berdasarkan ada atau tidak adanya cairan dan
kuantifikasi perubahan radial tracheids yang dilapisi dari kayu gubal ke kayu ulin di xilem C. japonica
Kami memantau berbagai distribusi cairan di tingkat jaringan dengan foto sinar-X yang lembut (Sano et
al., 1995; Nakada, 2006) dan menganalisis distribusi cairan di lumen sel dan ISRP dengan cryo-SEM in
situ (Utsumi et al.,1996, 2003; Kuroda dkk., 2009). Akhirnya, mekanisme generasi dari kayu antara dan
kayu inti dibahas berdasarkan perbedaan distribusi cairan antara lain ISRP, tracheids, dan sel parenkim
sinar.

BAHAN DAN METODE

Bahan dan pengambilan sampel - Lima pohon kriptomeria japonica yang digunakan di Indonesia
penelitian ini ditanam di lokasi percobaan Teknologi Kehutanan Institut Pusat Teknologi Prefektur Hyogo
untuk Pertanian, Kehutanan, dan Perikanan (35 ° 03 '79 "N, 134 ° 54' 76" E, ketinggian 140 m a.s.l.,
Shiso, Hyogo, Jepang). Dua pohon dikumpulkan pada 2 Oktober 2003 dan tiga pada 27 Agustus 2004.
Diameter sampel pada tinggi payudara adalah 14,5 ± 2,1 cm, tinggi badan 15,0 ± 1,6 m, dan umurnya
30,6 ± 4,9 tahun (mean ± SD, N = 5).
Sampel silinder batang yang berisi kayu gaharu dan kayu getah adalah dikumpulkan dari pohon hidup
pada ketinggian payudara setelah air xilem telah diperbaiki dengan membekukan batang (Utsumi et al.,
1996; Utsumi dan Sano, 2007; Kuroda et al., 2009). Kantung kedap air dilekatkan pada batang dan diisi
dengan cairan nitrogen (LN 2). Setelah pembekuan pengobatan 20-30 menit, pohon ditebang sebelum
matahari terbit (Tanaka dan Nakai, 2002; Utsumi et al., 2003; Yazaki et al., 2010). Sampel batang 8 dan
12 cm panjangnya segera dikumpulkan Dari bagian beku masing - masing pohon, confi ried menjadi
benar - benar beku oleh permukaan yang dilapisi gelas, dan disimpan dalam wadah dengan LN 2. Sampel
berukuran 12 cm dipecah menjadi batang penahan sekitar 3 × 3 cm 2 sebelum disimpan. Kadar air dalam
batang hijau - Setiap sampel batang beku berumur 8 cm dipindahkan ke laboratorium dengan LN 2, dan
disket cross-sectional 3 cm Tebal dipotong dari bagian tengah dengan gergaji melingkar. Strip setinggi 3
cm termasuk empulur diperoleh dari disk dan dibagi menjadi potongan kayu ulin,kayu perantara, dan
gubal, berdasarkan perbedaan warnanya. Kandungan air masing-masing dihitung dengan menggunakan
persamaan: u g = (m g - m d) / m d × 100, dimana u g (%) adalah kadar air dalam kondisi hijau yang
dinyatakan sebagai persentase dari kayu yang dikeringkan oven, m g (g) adalah massa spesimen di hijau,
dan m d (g) adalah massa spesimen kering oven.

Fotografi sinar-x lembut - Disk tebal 6 mm juga dipotong silang dari masing-masing Batang sampel beku
berumur 8 cm. Setiap disk segera ditempatkan pada kasus film, di mana sebuah film x-ray (foto x-ray FR,
Fuji Photo Film Co., Tokyo, Jepang) telah ada dipasang dan yang telah dipasang di aparatus sinar-X yang
lembut (M-60, Softex Co., Tokyo, Jepang), dan diiradiasi pada jarak 17,5 kVp, 2 mA, dan 0,6 m untuk 60
detik. Sampel sampel beku dari batang berukuran 12 cm dipindahkan ke suhu rendah ruang dalam LN 2
dan diseimbangkan ke -20 ° C. Pada suhu rendah ruangan, bagian melintang tebal 2 mm dipotong dari
bagian tengah dengan sebuah tangan dan direndam dalam LN 2. Bagian beku dipindahkan ke dalam
LN 2 dan diiradiasi dengan M-60 pada jarak 14,5 kVp, 2 mA, dan 0,6 m untuk 60 detik. Sampel beku
setebal 2 dan 6 mm digunakan untuk fotografi sinar-X lembut segera ditempatkan pada pemindai
flambed (CanoScan 5000F, Canon, Tokyo, Jepang) dan pesawat melintang dipindai untuk menghasilkan
gambar digital. Foto positif dari film negatif menggunakan dua jenis sinar-x lembut Fotografi digunakan
untuk menganalisis distribusi tingkat makroskopik dan jaringan dari air (Sano et al., 1995; Utsumi et al.,
2003). Gambar digitalnya digunakan untuk mengidentifikasi lokasi pengamatan dengan foto sinar X yang
lembut dancryo-SEM Cryo-scanning electron microscopy - Di ruang suhu rendah yang membeku batang
sampel, yang membujur secara longitudinal dengan bagian tebal 2 mm yang digunakan untuk fotografi
sinar-X lembut dan digital imaging, diseimbangkan ke -20 ° C, Kemudian dipangkas menjadi balok kecil (5
× 5 × 5 mm 3). Sebuah melintang atau tangensial Pesawat masing-masing blok direncanakan dengan
microtome geser (Yamato Kohki Industrial Co., Saitama, Jepang), kemudian spesimen beku dipindahkan
ke a Sistem cryo-SEM (JSM840-dilengkapi dengan CRU-7000, JEOL, Tokyo, Jepang; Fujikawa et al., 1988).
Spesimen beku dipertahankan di bawah ruang hampa udara kira-kira 1 × 10 -4 Pa pada -95 ° C atau -105
° C selama 5-10 menit untuk menghilangkannya kontaminasi oleh embun beku, dan kemudian dibalut
dengan pelet platina-karbon. Sampel dipantau pada tegangan percepatan 3-5 kV (Sano et al.,1995;
Utsumi dan Sano, 2007). Posisi tracheids cavitated dalam cincin tahunan di gubal diukur menggunakan
gambar positif dari film negatif (Fuji 100 Acros, Fuji Photo Film Co, Tokyo, Jepang) dari bagian melintang.
Lima garis lurus yang berjalan Sepanjang keseluruhan cincin tahunan digambar di file radial yang dipilih
secara sewenang-wenang tracheids. Mengikuti garis, jumlah sel dari batas cincin tahunan, radial
diameter, dan ada tidaknya air di setiap trakea berturut-turut diukur dengan perangkat lunak analisis
citra (ImageJ, National Institutes of Health,Bethesda, Maryland, AS). Batas antara earlywood dan
latewood ditentukan menurut defisit Mork (Denne, 1989). Suhu lingkungan - Temperatur udara setiap
hari, yang direkam pada situs Institut Teknologi Kehutanan dari Teknologi Prefektur Hyogo Pusat
Pertanian, Kehutanan dan Perikanan, dari bulan November 1994 sampai April2004 digunakan untuk
analisis. Suhu udara turun di bawah -5 ° C dan naik di atas 0 ° C dalam 24 d dari bulan Desember sampai
Februari.

HASIL
Radial perubahan dalam distribusi air di tracheids - Sapwood, kayu perantara, dan kayu getah dibedakan
dengan perbedaan warnanya (Gambar 1A). Soft x-ray Fotografi disk tebal 6 mm memecahkan berbagai
macam distribusi air (Gambar 1B) dan bagian tebal 2 mm diperbolehkan resolusi yang lebih tinggi
(Gambar 1C). Dalam fotografi x-ray yang lembut, gelap zona menunjukkan jumlah air yang relatif besar,
karena air menyerap sinar-x Cincin tahunan terluar di semua pohon contoh secara konsisten dipenuhi
air, dan sebagian besar gubal luar juga diisi dengan air (Gambar 1B). Di tengah ke dalam gubal, beberapa
cincin tahunan memiliki daerah cingulate-cavitated, yang kehilangan air sepanjang arah tangensial
dalam satu cincin tahunan (Gambar 1C, panah). Cryo-SEM mengungkapkan bahwa daerah cingulate-
cavitated terdiri dari lumina trakea yang mengandung tidak ada air (Gambar 1D, panah). Meski
panjangnya Daerah cingulate-cavitated pada arah tangensial bervariasi Di antara cincin individu, lebar
radial daerah berkisar dari beberapa sampai ca. 10 trakeids. Daerah yang berlubang itu terutama
terletak di bagian tengah sampai bagian dalam earlywood

Gambar 1. (A) Citra digital dan (B, C) x-ray lunak dan (D) mikrograf cryo-SEM bagian melintang dari
kriptomeria japonica. (A) Pesawat melintang dari kayu jati (S), kayu perantara (I), dan kayu ulin (H) dari
hard disk tebal 6 mm. (B) Sampelnya sama dengan (A). Sebagian besar gubal tampaknya dipenuhi air. (C)
Sapwood dalam bagian beku tebal 2 mm. Panah panah, daerah cingulate dengan sedikit air di sepanjang
arah tangensial. Angka menunjukkan cincin tahunan dihitung dari kambium. (D) Cincin tahunan ke-2
sampai ke-4 dihitung dari kambium. Panah, cingulate daerah tanpa air sepanjang arah tangensial. Bagian
tengah ke bagian dalam earlywood dilapisi pada cincin tahunan ke-2 dan ke-3. Hampir tidak ada tiga
sinar (panah) di seluruh
daerah cingulate yang cavitated Garis putus-putus menunjukkan batas cincin tahunan.

(Gambar 2). Sebagian besar tracheids dari bagian luar kayu perdana dan
semua tracheids zona transisi antara earlywood dan latewood
Bagian terminal kayu lateks dipenuhi air.
Gambar 3 menunjukkan perubahan radial pada frekuensi
daerah cingulate-cavitated di pohon getah; persentase dari
Cincin tahunan dengan daerah berkepang cenderung meningkat secara bertahap
dari gubuk luar sampai yang dalam.
Setelah kavitasi parsial gubal, kayu perantara
dibentuk, diikuti oleh kayu ulin (Gambar 3). Kayu perantara
terdiri dari dua sampai lima cincin tahunan (Gambar 3), dan sebagian besar
trakea earlywood dikapur (Gambar 4A, B, 15-17 tahunan
cincin) dibandingkan dengan pohon gambut tetangga (Gambar 4A, B,
Cincin tahunan ke 14). Pada tingkat sel, sejumlah besar
trakea earlywood dilapisi, sedangkan sebagian besar latewood
trakea diisi air (Gambar 4C).
Dalam batas antara kayu antara dan kayu inti,
Beberapa kayu laten adalah warna yang lebih terang (Gambar 4A, B, latewood
dari cincin tahunan ke 18) daripada di dalam dan luar yang berdekatan
kayu laten (Gambar 4A, B, kayu lateks dari cincin tahunan 17 dan 19)
dengan digital imaging dan foto sinar-X yang lembut. Cryo-SEM
mengungkapkan bahwa wilayah latewood terang ini (Gambar 4A, B, latewood
dari cincin tahunan ke-18) mengandung sedikit air (Gambar 4D, E).
Daerah cavitated ini di latewood, diamati di kedua pohon di Indonesia
2003 dan satu pohon pada tahun 2004, berada di seberang terluar
satu atau dua cincin tahunan dari kayu perantara dan / atau terluar
cincin tahunan pohon karet. Sebagian besar trakea earlywood
Di zona batas ini tetap kosong.
Kayu laten dari heartwood, di semua cincin tahunan kecuali untuk
yang terluar, secara konsisten diisi dengan air di semua lima yang dipelajari
pohon. Namun, luas dan kisaran distribusi air di
earlywood bervariasi di dalam dan di antara sampel (Gambar 4F-H).
Kandungan kelembaban kayu ulin, kayu perantara, dan
kayu jati 90 ± 36%, 77 ± 21%, dan 184 ± 51% (mean ± SD,
N = 5), masing-masing. Tidak ada perbedaan mencolok dalam air
pola isi antara dua periode sampling. Perubahan radikal dalam distribusi cairan di ISRP dan sinar
parenkim - Ruang interselular pasti ada
di samping sel parenkim sinar di semua pohon getah, intermediate
kayu, dan kayu ulin, dan di zona cambial. Banyak dari
ISRP di zona kambial diisi dengan zat cair
(Gambar 5A, panah kecil), dan beberapa di antaranya kekurangan zat
(Gambar 5A, kepala panah besar). Hampir semua ISRP di bedakan
Kayu gubuk kosong (Gambar 5B). Di daerah dari
zona kambial ke gubal, sebagian besar sel parenkim sinar,
termasuk sel yang berdekatan dengan trakeid yang berjejer
diisi dengan zat cair (Gambar 5A, B; Gambar 1D, panah).