TUGAS

PENGANTAR BIOTEKNOLOGI PERIKANAN

Ringkasan Peran Bioteknologi di Prodi Manajemen Sumberdaya Akuatik

”Production, characterization and biotechnological potential of lipopeptide

biosurfactants from a novel marine Bacillus stratosphericus strain FLU5”

Oleh

Dorra Hentatia, Alif Chebbia, Fatma Hadricha, Ilhem Frikhaa, Francesc Rabanalb,
Sami Sayadia, Angeles Manresac, dan Mohamed Chamkhaa,

OLEH
FENI SUSANTI
17/412835/PN/15157
MANAJEMEN SUMBERDAYA AKUATIK

DEPARTEMEN PERIKANAN
FAKULTAS PERTANIAN
UNVERSITAS GADJAH MADA
YOGYAKARTA
2019
 TUGAS
PENGANTAR BIOTEKNOLOGI PERIKANAN
Ringkasan Peran Bioteknologi di Prodi Manajemen Sumberdaya Akuatik

”Production, characterization and biotechnological potential of lipopeptide

biosurfactants from a novel marine Bacillus stratosphericus strain FLU5”

Oleh

Dorra Hentatia, Alif Chebbia, Fatma Hadricha, Ilhem Frikhaa, Francesc Rabanalb,
Sami Sayadia, Angeles Manresac, dan Mohamed Chamkhaa,

Feni Susanti
17/412835/PN/15157
Manajemen Sumberdaya Akuatik

A. Tujuan Penelitian
Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari potensi bakteri laut
hidrokarbonoklastik baru, Bacillus stratospnerieus strain FLU5, untuk menghasilkan
biosurfaktan lipopetida yang efisien aktif pada permukaan agen strain BS-FLU5.

B. Pengantar

Biosurfaktan adalah molekul amphiphilic alami, yang terdiri dari gugus

hidrofobik dan gugus hidrofilik, yang diproduksi secara ekstraseluler oleh berbagai
bakteri, jamur dan ragi (Santos et al., 2016). Komponen ini memiliki beberapa
keunggulan seperti; toksisitas rendah, biodegradabilitas tinggi, dapat mudah dicerna,
biokompatibilitas dan iritasi rendah, serta memiliki keragaman pada sifat dan struktur
kimia. Selain itu, surfaktan biologis dapat dihasilkan dari sumber karbon terbarukan
melalui proses bioteknologi, yang diidentifikasi dengan (CMC) yang didefinisikan
sebagai konsentrasi minimum surfaktan yang diperlukan untuk memberikan
pengurangan tegangan permukaan maksimum air dan memulai pembentukan misel.
Aktivitas permukaan yang tinggi dan efektif bahkan pada kondisi ekstrim yaitu pada
pH, suhu dan salinitas yang tinggi (Banat et al., 2014). Karena keunggulan ini,
biosurfaktan telah banyak digunakan di berbagai bidang aplikasi seperti bioremediasi,
untuk pemulihan minyak , pengolahan makanan, dan berbagai ilmu farmasi (Makkar
et al., 2011).

Biosurfaktan diklasifikasikan menurut struktur molekul dan jenis spesies mikroba

yang memproduksi biosurfaktan, terutama lipopeptides, glikolipid, fosfolipid, asam
lemak dan surfaktan polimer (Santos et al., 2016). Di antara kelompok-kelompok
yang berbeda, lipopeptides adalah biosurfaktan paling populer karena efisiensi yang
luar biasa dan bernilai komersil ( Sriram et al., 2011 ). Genus Bacillus dikenal sebagai
produsen yang paling efisien untuk menghasilkan biosurfaktan lipopeptide. Zat-zat ini
dibagi menjadi tiga jenis yang berbeda, tergantung pada asam amino yang berurutan
yaitu: surfactins, iturins dan fengycins (Jacques, 2011). Produksi surfaktan baru-baru
ini dilaporkan isolasi dan karakterisasi hidrokarbonoklastik yang efisien bakteri laut
yaitu Bacillus stratosphericus strain FLU5 dari pelaut yang terkontaminasi (Hentati et
al., 2016). Strain ini telah terbukti menjadi degrader efektif dari berbagai-macam
hidrokarbon, hidrokarbon aromatik polisiklik khususnya (PAH), dan bisa juga
diterapkan secara luas dalam teknologi bioremediasi. Fokus penelitian ini yaitu pada
produksi, pemurnian, identifikasi dan karakterisasi dari biosurfaktan yang dihasilkan
oleh B. stratosphericus FLU5 bersama dengan kapasitasnya untuk menghapus
hidrokarbon dari tanah yang terkontaminasi oleh minyak motor bekas.

C. Metode

Bacillus stratosphericus strain FLU5, sebelumnya diisolasi lalu setelahnya

dikultur pada fluoranthene, sebuah polycyclic persisten dan hidrokarbon beracun
aromatik dari air laut yang terkontaminasi. Strain FLU5 juga mampu mengurangi
tegangan permukaan medium yang steril selama pertumbuhan pada fluoranthene yang
mendukung sekresi biosurfaktan (Hentati et al., 2016). Metode yang dilakukan pada
pembuatan biosurfaktan ini yaitu dilakukan beberapa langkah-langkah diantaranya
proses kultur dengan menggunakan media kultur; produksi biosurfaktan oleh strain
FLU5 menggunakan berbagai sumber karbon, tegangan permukaan, dan perpindahan
minyak uji; ekstraksi biosurfaktan dan pemurnian, penentuan konsentrasi misel kritis
(CMC); pengujian stabilitas biosurfaktan pada pengaruh ph, suhu dan salinitas;
pengujian sitotoksisitas kadar logam; penerapan BS-FLU5 dalam penghapusan
hidrokarbon dari tanah yang terkontaminasi, dan analisis statistik.

Pada proses kultur dengan menggunakan media kultur, media kultur yang
digunakan yaitu nutrisi kaldu (NB) yang mengandung (g/l): 15 pepton, 3 ragi ekstrak,
1 glukosa dan 6 NaCl. Kompleks hidrokarbon termasuk bahan bakar diesel dan motor
minyak yang diperoleh dari Perusahaan Shell (Sfax, Tunisia) dan disterilisasi dengan
penyaringan (ukuran pori 0,45 m; Millipore), sementara minyak mentah dikumpulkan
dan disterilisasi dengan autoklaf. Produksi biosurfaktan oleh strain FLU5
menggunakan berbagai sumber karbon, tegangan permukaan, dan perpindahan
minyak uji. Kemampuan strain FLU5 untuk menghasilkan biosurfaktan dengan
menggunakan sumber karbon yang berbeda dilakukan dengan menambahkan substrat
yang berbeda (minyak mentah, bahan bakar diesel, oli motor, digunakan oli motor,
minyak jagung, minyak zaitun, minyak goreng sisa dan gliserol) pada konsentrasi 1%
(v/v) ke dalam termos containing BM bawah agitasi dari 180 rpm pada suhu 37°C.

Produksi biosurfaktan dilakukan pada media yang kaya (NB) oleh strain FLU5.
Percobaan dilakukan dalam rangkap tiga dengan ukuran inokulum dari 5% (v/v).
Pertumbuhan sel diidentifikasi oleh OD pada pengukuran 600 nm. Tegangan
permukaan ditentukan pada filer (kertas Whatman) supernatan bebas sel atau
biosurfaktan solusi, dengan model Gibertini Tensiometr TSD 132.389 (Milan, Italia),
menggunakan metode Cincin Du Nouy. Nilai yang dilaporkan adalah rata-rata tiga
pengukuran ± standar deviasi. Perpindahan minyak diukur dengan mengukur diameter
zona bening pada permukaan minyak. Ekstraksi biosurfaktan dilakukan dengan
pembuatan biosurfaktan dilakukan setelah 2 hari pada kaldu nutrisi (NB), minyak
zaitun dan minyak jagung, setelah 3 hari untuk minyak goreng sisa dan gliserol dan
setelah 4 hari untuk minyak mentah, bahan bakar diesel, oli motor dan digunakan oli
motor. Untuk pemurnian, biosurfaktan mentah yang diproduksi pada media NB
dikromatografi pada kolom silika gel (60 Mesh) dan dielusi dengan campuran
kloroform / metanol / air (65: 25:4, v/v/v ). Untuk setiap konsentrasi, pengukuran
tegangan permukaan ditentukan sampai nilai konstan tercapai. Hasil dinyatakan
sebagai mean dari tiga tes independen ± standar deviasi.

Pengaruh pH, suhu dan salinitas pada stabilitas biosurfaktan diukur untuk
mengetahui pengaruhnya pada produksi biosurfaktan. Penerapan BS-FLU5 dalam
penghapusan hidrokarbon dari tanah yang terkontaminasi diukur untuk mengukur
kesesuaian biosurfaktan untuk pemulihan minyak yang ditingkatkan dilakukan dengan
menggunakan tanah yang terkontaminasi dikumpulkan dari taman dengan minyak
bekas bermotor (20%, v/w). Jumlah minyak yang berada di tanah setelah dampak
surfaktan secara gravimetri ditentukan sebagai jumlah bahan yang diekstraksi dari
tanah oleh heksana dan diekspresikan menggunakan persamaan berikut ini:
Remobilisasi (waktu) = Residu yang tersisa setelah penguapan pelarut dari
surfaktan-diperlakukan tanah (mg)/Residu yang tersisa setelah penguapan pelarut dari
Milli-Q tanah air diperlakukan (mg). Analisis statistik dilakukan pada semua
nilai-nilai mewakili mean ± standar deviasi (SD). Data dianalisis secara statistik
dengan ANOVA satu arah, menggunakan beberapa tes perbandingan Tukey dan
menerapkan tingkat signifikansi p <0,05.

D. Hasil dan Pembahasan

Hasil dari biosurfaktan dipengaruhi oleh jenis substrat karbon yang digunakan.
Produksi biosurfaktan dengan strain FLU5 diuji menggunakan kaldu nutrisi (NB) dan
berbagai sumber karbon termasuk minyak mentah, minyak diesel, minyak motor,
minyak motor bekas, minyak jagung, minyak zaitun, sisa minyak goreng dan gliserol
di hadapan medium basal. Strain FLU5 menunjukkan pertumbuhan yang lebih baik
pada kaldu nutrisi dan minyak nabati (minyak zaitun, sisa minyak goreng dan minyak
jagung) daripada hidrokarbon (minyak mentah, oli bekas, oli motor dan solar).
Disebutkan dalam literatur bahwa substrat hidrofobik, termasuk hidrokarbon dan
minyak nabati, dapat menyebabkan produksi surfaktan biologis (Vijaya et al., 2013).
Namun, sintesis yang rendah pada biosurfaktan hidrokarbon bisa dijelaskan oleh fakta
bahwa senyawa ini kurang biodegradable, karena strukturnya yang kompleks,
sehingga menyebabkan pertumbuhan bakteri yang lemah dan setelah itu produksi
surfaktan yang rendah (Chebbi et al., 2017).
Sisa dari minyak goreng sangat baik digunakan sebagai substrat untuk produksi
biosurfaktan oleh strain FLU5. Penyaringan FLU5 menunjukkan kapasitas yang
penting untuk menggunakan sisa minyak goreng sebagai karbon sumber (ODmax =
1,87). Apalagi saat pertumbuhan strain FLU5 pada sisa minyak goreng, tegangan
permukaan menurun dari 64 hingga 36 mN / m, setelah 3 hari inkubasi pada 37°C dan
tetap stabil selama fase diam. Tes perpindahan oli, menunjukkan juga pembentukan
halo dengan diameter penting (8,5 cm), setelahnya penambahan supernatan kultur
strain FLU5 tumbuh pada residu minyak goreng. Hasil ini mendukung potensi strain
FLU5 untuk menghasilkan zat aktif permukaan yang menggunakan minyak goreng
residu sebagai karbon sumber. Akibatnya, strain FLU5 dari Bacillus stratosphericus,
bisa jadi digunakan untuk mengurangi beberapa limbah yang dihasilkan oleh industri
makanan, seperti sisa minyak goreng, dan mengubahnya menjadi nilai yang lebih
tinggi produk.
Karakterisasi biosurfaktan yang dihasilkan oleh strain FLU5 (BS ‐ FLU5)
diantaranya yaitu adanya titik merah muda ketika disemprot dengan reagen ninhidrin,
dan hal ini menunjukkan adanya asam amino, ketika disemprot dengan pereaksi asam
fosfomolibdat, menghasilkan titik biru-ungu yang menunjukkan keberadaan
kelompok asam lemak. Dalam spektrum massa BS-FLU5 yang dimurnikan,
diidentifikasi sebagai surfaktin dan pumilacidin mengandung asam lemak β-hidroksil
dengan panjang rantai masing-masing 14 dan 16 atom karbon. Di CMC, biosurfaktan
kasar dari strain FLU5 mampu mengurangi tegangan permukaan air ultra-murni dari
72 hingga 34 mN / m, sedangkan, lipopeptida yang dimurnikan mampu menurunkan
air yang sangat murni tegangan permukaan hingga 28 mN / m. Biosurfaktan strain
BS-FLU5 tahan pada kondisi ekstrim pH, suhu dan salinitas.
BS-FLU5 menunjukkan efek sitotoksik yang tidak berpengaruh pada garis sel
embrionik ginjal manusia HEK293 dan menunjukkan kegunaannya sebagai bahan
biologis. Setelah 24 jam perawatan, viabilitas sel adalah 96% dalam kasus 1000 μg /
ml BS-FLU5 (konsentrasi maksimum), sedangkan viabilitas sel 100% tercapai untuk
kontrol. Ketika waktu inkubasi meningkat, kelangsungan hidup sel sedikit berkurang.
Setelah 48 jam inkubasi, diamati bahwa viabilitas sel dalam kontrol adalah 99%,
sedangkan dalam kasus 1000 μg / ml, viabilitas dikurangi menjadi 92%. Sesuai
dengan ISO 10993-5, 2009, viabilitas sel di atas 80% dapat dianggap sebagai tidak
beracun (ISO Laporan, 2009).
Untuk menyelidiki aplikasi biosurfaktan yang dihasilkan oleh Bacillus
stratosphericus FLU5 dalam penghilangan hidrokarbon. Percobaan menggunakan
biosurfaktan mentah BS-FLU5, supernatan bebas sel kultur FLU5 pada sisa minyak
goreng dan surfaktan sintetis (Triton X-100, Tween 20, Tween 80 dan SDS)
dilakukan untuk memverifikasi menghilangkan polutan oli motor bekas dari sampel
tanah. Menurut analisis statistik, uji ANOVA dan Tukey, efek pelarutan hidrokarbon
lebih ditandai menggunakan supernatan bebas sel mengandung biosurfaktan
(kelarutan 5 kali lipat), dibandingkan dengan BS-FLU5 (kelarutan 3 kali lipat) dan
surfaktan sintetis yang diuji (antara kelarutan 1,6 dan 2,8 kali lipat) (p <0,05).
Penghapusan oli motor bekas dari tanah yang terkontaminasi menggunakan
biosurfaktan mentah BSFLU5, Trixton X-100 dan Tween 20, tidak berbeda nyata
(p≥0.05). Sebaliknya, biosurfaktan mentah BS-FLU5 lebih efektif pada remobilisasi
hidrokarbon daripada bahan kimia surfaktan Tween-80 dan SDS (p <0,05). Hasil ini
mengkonfirmasi kemampuan menjanjikan BS-FLU5 dalam menghilangkan oli motor
bekas dari yang terkontaminasi tanah, dibandingkan dengan surfaktan sintetis yang
banyak digambarkan sebagai berbahaya bagi ekosistem karena biodegradabilitasnya
yang rendah dan toksisitas (de França et al., 2015).
E. Kesimpulan

Kesimpulan yang didapat dalam penelitian ini yaitu Bacillus stratosphericus

hidrokarbonoklastik laut, strain FLU5 menunjukkan potensi yang menarik untuk
diproduksi sebagai surfaktan biologis dengan adanya sebagian besar sumber karbon.
Penggunaan sisa minyak goreng sebagai substrat cukup menjanjikan dan alternatif
murah untuk produksi biosurfaktan. Setelah ekstraksi dan pemurnian, analisis
MALDI-TOF MS/MS menunjukkan bahwa biosurfaktan BS-FLU5 terdiri dari
surfaktin dan pumilacidin lipopeptida. Konsentrasi misel kritis dari lipopeptida murni
BS-FLU5 adalah 50 mg / l dan tegangan permukaan air berkurang dari 72 menjadi 28
mN / m, hal ini menunjukkan sifat tensioaktif yang kuat dari BS-FLU5. Lipopeptida
BS-FLU5 menunjukkan kapasitas pengurangan tegangan permukaan yang stabil di
bawah suhu tinggi, kondisi pH dan salin berbeda. Stabilitas tinggi BS-FLU5 pada
kondisi ekstrem mendukung aplikasinya baik untuk bioremediasi di lingkungan yang
panas, basa dan hipersalin dan bioremediasi tumpahan minyak di laut.

Aplikasi lipopeptida dari strain FLU5 dalam perolehan minyak dari yang
digunakan tanah yang terkontaminasi oli motor menunjukkan bahwa BS-FLUS dapat
bermanfaat untuk membersihkan kontainasi tersebut. Hidrokarbon ini lebih efektif
daripada empat sintetis yang paling umum digunakan. Sebagai surfaktan seperti
Tween 20, Tween 80, Triton X-100 dan SDS. Penerapan BS-FLU5 dalam pemulihan
minyak dari tanah yang terkontaminasi oli motor yang menghasilkan hidrokarbon
menunjukkan bahwa itu lebih efektif pada hidrokarbon-remobilisasi dari beberapa
surfaktan sintetis diuji. Menariknya, biosurfaktan BS-FLU5 menunjukkan sitotoksik
yang tidak berbahaya terhadap ginjal manusia. Hasil ini menyoroti manfaat dan
potensi penggunaan lipopeptida, yang diproduksi oleh Bacillus stratosphericus FLU5,
dalam berbagai bidang industri, rehabilitasi lingkungan dan aplikasi bioteknologi.