Autentikasi Ftir
Autentikasi Ftir
1
ISSN : 0853-8115
Email :
1
agusms@ipb.ac.id / amsstk@yahoo.com
Abstrak
Komposisi kimia yang terkandung dalam ekstrak obat bahan alam merupakan
suatu komposisi yang kompleks, dengan demikian pengujian keotentikannya
tidak dapat dilakukan melalui pedekatan tunggal. Salah satu teknik analisis
yang dapat menggambarkan secara menyeluruh karakteristik kimia suatu
bahan adalah teknik spektroskopi FTIR. Spektra FTIR dihasilkan dari interaksi
antara energi sinar inframerah dan komponen kimia penyusun campuran
bahan, sehingga suatu spektra FTIR merupakan indentitas khas campuran
tersebut. Keotentikan komposisi suatu obat bahan alam pada studi ini
ditentukan berdasarkan pada analisis komponen utama spektra inframerahnya.
Studi dilakukan pada obat bahan alam/fitofarmaka penurun tekanan darah
(Tensigard® : terdiri dari ekstrak seledri dan ekstrak daun kumis kucing).
Pengukuran spektra inframerah dilakukan terhadap formula obat yang
persentase komposisinya ditentukan melalui simplex lattice design. Selain itu
pengukuran spektra inframerah juga dilakukan terhadap formula obat dengan
mengganti (adulterasi) ekstrak kumis kucing dengan obat sintetis (reserpin) dan
ekstrak sambiloto. Berdasarkan plot antara skor komponen utama pertama dan
skor komponen utama kedua menunjukkan plot tersebut dapat digunakan untuk
mendeteksi komposisi obat, tetapi tidak dapat mendeteksi adanya adulterasi
komposisi oleh bahan lain.
1
Model Otentikasi Komposisi Obat Bahan Alam Berdasarkan Spektra Forum Statistika dan Komputasi
Infra Merah dan Komponen Utama
Studi Kasus : Obat Bahan Alam/Fittofarmaka Penurun Tekanan Darah
ditentukan berdasarkan pada analisis komponen diserap oleh contoh. Serapan pada panjang
utama (PCA) spektra inframerahnya. Untuk contoh gelombang tertentu dapat menghasilkan nilai
model otentikasi, analisis komponen utama akan konsentrasi contoh berdasarkan hukum Beer.
dilakukan terhadap spektra inframerah formula atau Berbeda dari spektrometer klasik, FTIR tidak
penyusun formula obat bahan alam/fitofarmaka mengukur panjang gelombang satu demi satu,
penurun tekanan darah (Tensigard®, terdiri dari melainkan dapat mengukur intensitas transmitan
ekstrak seledri, ekstrak daun kumis kucing, dan pada berbagai panjang gelombang secara serempak
bahan pengisi). (Skoog et al. 1998). Monokromator prisma atau
grating yang dapat mengurangi energi sinar diganti
Tujuan dengan interferometer. Interferometer ini mengatur
Penelitian ini betujuan mengembangkan model intensitas sumber sinar inframerah dengan
otentikasi komposisi penyusun fitofarmaka mengubah posisi dari cermin pemantul yang
Tensigard (ekstrak seledri, kumis kucing, dan bahan memantulkan sinar dari sumber sinar ke sampel.
pengisi). Model yang dikembangkan didasarkan Jadi, adanya interferometer membuat spektrometer
pada interpretasi spektra FTIR dengan metode mampu mengukur semua frekuensi optik secara
kemometrik. serempak dengan mengatur intensitas dari setiap
frekuensi tunggal sebelum sinyal sampai ke
detektor. Hasil dari pindai interferometer yang
TINJAUAN PUSTAKA berupa interferogram (plot antara intensitas dengan
posisi cermin) ini tidak dapat diinterpretasikan
Spektroskopi Inframerah Transformasi Fourier dalam bentuk aslinya. Proses transformasi fourier
(FTIR) akan mengubah interferogram menjadi spektrum
Metode spektrofotometer mengukur jumlah antara intensitas dengan frekuensi (George &
radiasi elektromagnetik yang diserap oleh larutan McIntyre 1987).
contoh. Jumlah serapan ini berkaitan dengan
konsentrasi analit dalam larutan. Terdapat tiga Analisis Kemometrik Spektrum Inframerah
proses dasar penyerapan radiasi oleh molekul yang Spektrum inframerah sangat kaya akan
semuanya melibatkan kenaikan molekul ke tingkat informasi sktruktur molekular yang terbentuk dari
energi yang lebih tinggi, yaitu rotasi, vibrasi, dan gerak rotasi dan vibrasi atom dalam molekul.
transisi elektronik (Christian 1986). Banyaknya gerakan molekular dari molekul
Radiasi IR tidak memiliki cukup energi untuk poliatom membentuk serangkaian pita serapan yang
menyebabkan transisi elektronik. Bila radiasi IR spesifik untuk masing-masing molekul. Hal ini
dilewatkan melalui suatu cuplikan, maka molekul membuat spektroskopi inframerah menjadi metode
akan menyerap energi sehingga terjadi vibrasi. analisis kualitatif yang sangat berguna, namun
Panjang gelombang serapan oleh suatu ikatan interpretasinya juga kadang sulit dilakukan akibat
bergantung pada jenis getaran ikatan antar atom. adanya kemiripan dari setiap respon spektrum.
Oleh karena itu, tipe ikatan yang berlainan akan Analisis kuantitatif spektrum inframerah juga
menyerap radiasi IR pada panjang gelombang yang sangat sulit karena adanya tumpang tindih spektrum
berbeda (Fessenden & Fessenden 1986). Vibrasi serapan dari molekul yang terdapat dalam sampel
yang terjadi meliputi vibrasi ulur dan tekuk dan (Stchur et al. 2002)
dikenal beberapa istilah, yaitu rocking, twisting, Kemometrik merupakan seni mengekstrak
scissoring, dan waging (Hollas 2004). informasi kimia dari data yang dihasilkan oleh
Daerah radiasi spektroskopi IR berkisar pada suatu percobaan kimia. Kemometrik menyediakan
bilangan gelombang 12800-10 cm-1. Daerah 1400- metode untuk mengurangi data berukuran besar
4000 cm-1 merupakan daerah yang khusus untuk yang diperoleh dari instrumen seperti
identifikasi gugus-gugus fungsional sedangkan spektrofotometer (Varmuza 2002) dan Naes (2002).
daerah 1500-800 cm-1 merupakan daerah sidik jari Salah satu analisis spektrum yang ada yaitu
(fingerprint region)(Murad et al. 2006). Pada membentuk model otentikasi menggunakan metode
daerah sidik jari, sedikit saja perbedaan struktur dan pengenalan pola seperti analisis komponen utama
susunan molekul akan menyebabkan perubahan (PCA) dengan cara membentuk diagram kontrol
distribusi puncak serapan. berdasarkan nilai komponen utama yang diperoleh
Spektrum IR diperoleh dengan mengukur untuk mengidentifikasi adanya adulteran pada suatu
intensitas radiasi cahaya sebelum (I0) dan sesudah formulasi bahan.
(I) melewati contoh. Spektrum IR ditampilkan
dengan mengalurkan transmitans (T=I/I0) sebagai
fungsi dari bilangan gelombang. Nilai transmitans
dapat diganti dengan nilai serapan, yaitu sinar yang
2
Model Otentikasi Komposisi Obat Bahan Alam Berdasarkan Spektra Forum Statistika dan Komputasi
Infra Merah dan Komponen Utama
Studi Kasus : Obat Bahan Alam/Fittofarmaka Penurun Tekanan Darah
Analisis Komponen Utama (PCA) dicampur dengan obat sintetis (resepin) dan juga
ekstrak sambiloto dengan tipe kisi yang sama pula.
PCA merupakan suatu teknik multivariat untuk
mereduksi dimensi variabel dengan tidak
kehilangan informasi. Prinsip PCA adalah mencari
komponen utama yang merupakan kombinasi linear
dari peubah asli. Komponen-komponen utama ini
dipilih sedemikian rupa sehingga komponen utama
pertama memiliki variasi terbesar dalam gugus data,
sedangkan komponen utama kedua tegak lurus
terhadap komponen utama pertama dan memiliki
variasi terbesar berikutnya (Miller & Miller 1984).
Kedua komponen utama pertama ini pada umumnya
digunakan sebagai bidang proyeksi untuk
pemeriksaan visual data multivariat. Jika jumlah
varians dari komponen utama satu (KU1) dan dua
(KU2) lebih besar dari 70%, maka plot skor Kode Persentase Campuran (%)
komponen utama memperlihatkan visualisasi dua Komposisi
Campuran A B C
dimensi yang baik (Varmuza 2002).
1 0.00 0.00 100.00
BAHAN DAN METODE 2 0.00 33.33 66.67
3 0.00 66.67 33.33
Untuk mendapatkan model otentikasi komposisi
obat bahan alam berdasarkan pola karakteristik 4 0.00 100.00 0.00
komposisi kimia menggunakan spektra IR 5 16.67 16.67 66.67
diperlukan data spektra FTIR dari ekstrak penyusun 6 16.67 66.67 16.67
Tensigard®, bahan pengisi, obat sintetis resepin, 7 33.33 0.00 66.67
ekstrak sambiloto dan campurannya, serta metode 8 33.33 33.33 33.33
kemometrik yang tepat. 9 33.33 66.67 0.00
10 66.67 0.00 33.33
Persiapan Sampel dan Pembuatan Ekstrak
Setiap sampel dikeringkan dan ditentukan 11 66.67 16.67 16.67
beberapa parameter simplisia seperti kadar air, 12 66.67 33.33 0.00
kadar abu, dan komponen kualitatif kimia (hasil uji 13 100.00 0.00 0.00
fitokimia). Ekstraksi dilakukan dengan cara A = Seledri, B = Kumis Kucing / Reserpin / Sambiloto, C = Bahan Pengisi
maserasi menggunakan pelarut etanol. Sampel
kering sebanyak 500g direndam dengan etanol
Gambar 1. Segitiga rancangan komposisi campuran
sambil dikocok. Cairan yang dihasilkan
untuk semua kombinasi.
dikumpulkan. Ampasnya direndam lagi dengan
etanol baru dan cairannya dikumpulkan dengan
cairan hasil perendaman pertama. Begitu seterusnya Pengukuran Spektra IR
Serbuk ekstrak kering ditimbang sebanyak 1
hingga air rendamannya tidak berwarna. Cairan
mg, dicampurkan dengan 200 mg KBr, dihaluskan
ekstrak yang didapat dikeringkan dengan
dan dibuat pelet. Spektra IR dicatat di daerah mid-
rotarievaporator. Ekstrak kering siap untuk
IR pada bilangan gelombang 400-4000 cm-1.
digunakan untuk uji.
Pengukuran dilakukan dengan FTIR Tensor 37
Bruker pada resolusi 4 cm-1 dengan kecepatan
Desain Kombinasi Formula untuk Membentuk
pengamatan 30. Spektra FTIR yang dihasilkan
Diagram Kontrol
ditransfer menjadi bentuk file ASCII untuk
Ekstrak sendiri-sendiri atau kombinasinya yang
dianalisis lebih lanjut
akan diukur spektra FTIRnya didesain dengan
desain campuran tipe kisi menggunakan perangkat
lunak Minitab Versi 14. Parameter yang digunakan Analisis Data
Interpretasi data spektra FTIR untuk
adalah desain campuran tipe kisi 3. Dengan cara ini
menghasilkan nilai Komponen Utama (KU)
jumlah sampel untuk membentuk diagram kontrol
dilakukan dengan bantuan piranti lunak R.
yang harus diukur spektra FTIRnya adalah 13.
Spektrum FTIR sebelumnya diseleksi terlebih
Masing-masing diulang sebanyak tiga kali.
dahulu kemudian dirata-ratakan. Diagram kontrol
Komposisi dari ketiga campuran disajikan dalam
dibuat dengan cara membuat plot antara skor
Gambar 1. Selain itu diukur pula fomula yang
3
Model Otentikasi Komposisi Obat Bahan Alam Berdasarkan Spektra Forum Statistika dan Komputasi
Infra Merah dan Komponen Utama
Studi Kasus : Obat Bahan Alam/Fittofarmaka Penurun Tekanan Darah
komponen utama pertama (KU1) dengan skor digunakan. Plot antara KU1 dan KU2 hasil analisis
komponen utama kedua (KU2) berdasarkan segitiga PCA disajikan pada Gambar 3 berikut.
komposisi.
diseleksi dari kombinasi Ekstrak Seledri dan memiliki kedekatan titik plot, kecuali untuk
Sambiloto. komposisi campuran no 9, 10.
Hasil yang tidak berbeda jauh didapatkan
dengan menggabungkan data spektrum inframerah
Diagram Kontrol Model Otentikasi
dari kombinasi ekstrak seledri-kumis kucing dan
Hasil penggabungan spektrum inframerah dari adulterasi dari ekstrak seledri – reserpin. Total
ekstrak seledri-kumis kucing (SDKK) dengan proporsi kumulatif dari komponen utama pertama
ekstrak seledri-sambiloto (SDSBL) menghasilkan dan kedua menujukkan nilai sebesar 93,43%. Plot
proporsi kumulatif yang diterangkan oleh antara skor KU1 dan skor KU2 disajikan pada
komponen utama pertama dan kedua sebesar Gambar 6 di bawah ini.
93,40%. Plot antara skor kedua komponen ini
disajikan pada Gambar 5 di bawah ini.
Untuk dapat meningkatkan presisi model otentikasi Christian GD. 1986. Analytical Chemistry. Ed ke-4.
yang dibuat diperlukan adanya pengolahan lebih New York: J Wiley.
lanjut pada spektra IR tiap kombinasi seperti Fessenden & Fessenden. 1986. Kimia Organik jilid
derivatisasi spektra karena derivatisasi akan 1. Ed ke-3. Pudjaatmaka AH, penerjemah.
menghilangkan pergeseran garis dasar dan tumpang Jakarta: Erlangga. Terjemahan dari Organic
tindih puncak, sehingga informasi spektrum yang Chemistry
berguna untuk analisis komponen utama akan George B & McIntyre. 1987. Infrared
meningkat (Stchur et al. 2002) sehingga titik-titik Spectroscopy. London: J Wiley.
pada segitiga komposisi yang dibentuk oleh nilai Hollas JM. 2004. Modern Spectroscopy. Ed ke-4.
komponen utama akan mendekati nilai teoretis yang New York: J Wiley.
ada saat membuat desain kombinasi komposisi. Jajang 2004. Penerapan Analisis Artificial Neural
Networks (ANN) Dalam Pengelompokan
Ekstrak Daun Jati Belanda (Guazuma ulmifolia
KESIMPULAN DAN SARAN Lamk). Tesis Sekolah Pasca Sarjana IPB,
Bogor
Kesimpulan Kirschner C et al. 2001. Classification and
Diagram kontrol model otentikasi dari Identification of Enterococci: a Comparative
kombinasi ekstrak seledri-kumis kucing, seledri – Phenotypic, Genotypic, and Vibrational
reserpin dan seledri – sambiloto yang dihasilkan Spectroscopic Study. J Clin Microbiol 39(5):
belum dapat digunakan untuk melakukan deteksi 1763-1770
adanya adulterans pada komposisi obat fitofarmaka Miller JC. 2000. Statistics and Chemometrics for
yang diuji. Tetapi diagram ini dapat digunakan Analytical Chemistry. Ed Ke-4. Harlow:
untuk melakukan deteksi terhadap komposisi Pearson Education.
campuran obat fitofarmakanya. Murad AA, M Lin, AG Cavinato, BA Rasco. 2006.
The use of Fourier transform infrared
Saran spectroscopy to differentiate Escherichia coli
Untuk memperoleh diagram kontrol otentikasi O157:H7 from other bacteria inoculated into
fitofarmaka, desain campuran dengan tipe kisi perlu apple juice. J Food Microb 23: 162-168.
diperbanyak sehingga meningkatkan ketelitian dari Naes T, T Isaksson, T Fearn, T Davies. 2002. A
diagram. Selain itu juga untuk meningkatkan User-Friendly Guide to Multivariate
presisi model otentikasi yang dibuat diperlukan Calibration and Classification. Chichester:
adanya pengolahan lebih lanjut pada spektra IR tiap NIR Publications
kombinasi seperti derivatisasi spektra sehingga Skoog DA, FJ Holler, TA Nieman. 1998. Principles
titik-titik pada segitiga komposisi yang dibentuk of Instrumental Analysis. Ed ke-5.
oleh nilai komponen utama akan mendekati nilai Philadelphia: Harcaurt Brace.
teoretis yang ada saat membuat desain kombinasi Stchur, P., D Cleveland, J Zhou, RG Michel. 2002.
komposisi. A review of recent applications of near infrared
spectroscopy, and the characteristics of a novel
DAFTAR PUSTAKA PbS CCD array-based near infrared
spectrometer. Appl Spect Rev 37:383-428.
Sim, CO., M. R. Hamdan, Z. Ismail & M. N. Varmuza, K. 2002. Applied chemometrics: from
Ahmad. 2004. Assesment of herbal medicines chemical data to relevant information. 1st
by chemometriccs- Assisted interpretation of Converence on Chemistry. Kairo, Mesir.
FTIR spectra. Universiti Sains Malaysia,
Penang