RENCANA PRAKTIKUM III A

PERTUMBUHAN DAN PEMBELAHAN SEL :

PERHITUNGAN SEL SECARA LANGSUNG DENGAN
HEMOCYTOMETER

I. Tujuan
Mampu melakukan pengukuran pertumbuhan sel secara langsung dengan
hemocytometer.

II. Alat dan Bahan

Alat : Bahan :
1. Mikroskop 1. Sel bakteri
2. Pipet mikro 2. Cell line mamalia
3. Alat gelas 3. RPMI media
4. Petri dish 4. Trypan blue
5. Hemocytometer 5. PBS
6. Cell counter 6. Trypsin EDTA
7. Eppendorf tubes
8. Falcon tubes

III. Cara Kerja

Menghitung sel bakteri secara langsung dengan hemocytometer

Disiapkan kultur sel bakteri dan diencerkan sampai 10-4.

Dimasukkan 10-15 𝜇𝑙 ke dalam alat hemocytometer secara

hati-hati di dua sisi.

Dihitung jumlah sel yang mati dan sel yang hidup dengan
inverted microscope dengan perbesaran 40x.

Catatan :
Jumlah sel/ml = jumlah sel dalam 5 kotak (1 mm3)/0,02 x faktor pengenceran
 Pemindahan biakan dari media padat ke media padat

Kultur sel mamalia dalam 6 well plate dicuci dengan PBS hangat.

Ditambahkan trypsin-EDTA 1 ml dalam tiap well lalu diinkubasi 1-2

menit.

Dipanen sel dengan cara ‘tapping’, lalu ditambahkan 1 ml PBS

hangat dan dimasukkan dalam tabung 10 ml, disentrifugasi dengan
kecepatan 2000 rpm selama 2 menit.

Dibuang supernatant, resuspend sel dengan 500 𝜇𝑙 PBS

Diambil 50 𝜇𝑙 suspense sel lalu dimasukkan dalam tabung

eppendorf, lalu ditambahkan PBS 100 𝜇𝑙 (atau menyesuaikan
dengan kerapatan sel) dan 50 𝜇𝑙 typan blue dan dihomogenkan.

Dimasukkan 10-15 𝜇𝑙 ke dalam alat hemocytometer hati-hati di dua

sisi.

Dihitung jumlah sel yang mati dan sel yang hidup dengan dengan
inverted microscope dengan perbesaran 10x.

Catatan :
Jumlah sel/ml = jumlah sel dalam 5 kotak (1 mm3)/0,02 x faktor pengenceran

Yogyakarta, 6 September 2017

Praktikan

Zuhra Nur Jauza Ozura

(17/408861/FA/11311)