BAGAN UJI VERIFIKASI HPC (MEMBRAN FILTRASI)

Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater

23RD EDITION (APHA)

UJI PENDAHULUAN

PEMBUATAN SUSPENSI 0,5 Mc Farland

Dibuat kekeruhan hingga 0,5 Mc

Farland menggunakan
Nephelometer.

 Lakukan uji ALT E. coli

NA
 Catat jumlah koloni
Stock NA Saline yang diperoleh
kutur E. coli 0,85-0,9%

PERSIAPAN SAMPEL UJI DAN KONTROL

 Sampel yang dibutuhkan sesuai metode: 100 ml

/ konsentrasi (x 6 untuk pengulangan)
 *Sampel sesuai dengan ruang lingkup pada
metode uji, misal: air kolam renang, air spa, dll
 Kontrol: Aquadest steril

SAMPEL SAMPEL SAMPEL KONTROL KONTROL KONTROL

POSITIF POSITIF SAMPEL KONTROL
POSITIF POSITIF POSITIF POSITIF
10 cfu/100 1000 cfu/100 10 cfu/100 100 cfu/100 1000 cfu/100 NEGATIF NEGATIF
100 cfu/100
(LOW) (MEDIUM) (HIGH) (LOW) (MEDIUM) (HIGH)

DILAKUKAN 6 KALI PENGULANGAN

PERHITUNGAN
SPIKING

V1 x N1 = V2 x N2

V1 = volume sampel
N1 = konsentrasi kuman yang diinginkan
V2 = volume inokulum yang diinginkaN
N2 = konsentrasi kuman yang didapat dari
uji pendahuluan

V1 = 800 ml (600 ml untuk 6x pengulangan, 200 ml cadangan)

N1 = konsentrasi 10 cfu/100 (LOW), 100 cfu/100

(MEDIUM),1000 cfu/100 (HIGH)
 UJI VERIFIKASI

PEMBUATAN SUSPENSI 0,5 Mc Farland

Dibuat kekeruhan hingga 0,5 Mc

Farland menggunakan
Nephelometer.

10-1
10-2
NA 10-3
10-4
Stock NA Saline
10-5
kutur bakteri 0,85-0,9%
10-...dst

PENGUJIAN SAMPEL POSITIF &

KONTROL POSITIF

PENGULANGAN

100 ml
MEDIA: HPC / R2A

100 ml

100 ml

Suspensi
bakteri sesuai 100 ml
perhitungan

 Untuk sample positif: 100 ml Dilakukan pengujian HPC

800 ml air kolam
renang* meggunakan membran
 Untuk kontrol positif: filtrasi sesuai instruksi kerja
800 ml aquadest

100 ml

 Hitung jumlah koloni yang

tumbuh
 Catat pada lembar kerja
verifikasi
PENGUJIAN SAMPEL NEGATIF

PENGULANGAN

100 ml MEDIA: HPC / R2A

100 ml

100 ml

100 ml

100 ml
Dilakukan penguian HPC
 Untuk sample meggunakan membran
negatif, 800 ml air filtrasi sesuai instruksi kerja
kolam renang* 100 ml
tanpa cemaran

 Hitung jumlah koloni yang

tumbuh
 Catat pada lembar kerja
verifikasi

PENGUJIAN KONTROL NEGATIF

PENGULANGAN

100 ml MEDIA: HPC / R2A

100 ml

100 ml

100 ml

100 ml

 Untuk kontrol Dilakukan penguian HPC

negatif, 800 ml meggunakan membran
aquadest tanpa 100 ml filtrasi sesuai instruksi kerja
cemaran

 Hitung jumlah koloni yang

tumbuh
 Catat pada lembar kerja
verifikasi
Kebutuhan media:

NA miring:

NaCl steril:

PCA:

BPW:

HPC / R2A:

Membran:

Kebutuhan alat:

Ose

Botol cokelat steril

Beaker glass 1000 L

Gelas ukur 100 ml