Abstrak

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk merancang nanopartikel gelatin

biokompatibel, mampu melepaskan obat sitarabin dengan cara dikontrol dengan
mengatur tingkat swelling nanopartikel. Dalam rangka mencapai tujuan yang
diusulkan, gelatin (Tipe A, berasal dari jaringan asam sembuh) telah diubah
dengan crosslinking dengan genipin dan nanopartikel dari gelatin crosslinking
disusun menggunakan air tunggal dalam minyak (W / O) teknik emulsi.
Nanopartikel yang ditandai dengan teknik seperti FTIR, SEM, TEM, analisis
ukuran partikel, dan permukaan potensial pengukuran. Arsitektur nanopartikel
kimia ditemukan untuk mempengaruhi kapasitas narkoba melepaskan.
Pengaruh kondisi eksperimental seperti pH dan cairan fisiologis simulasi
sebagai media pers juga diselidiki pada profil pelepasan sitarabin. Hal ini
dimungkinkan untuk membuat bahan kinerja tinggi, dengan merancang dari
terkontrol nanopartikel ukuran gelatin dengan sifat biokompatibel yang baik
bersama dengan profil pelepasan obat yang diinginkan

1. Pendahuluan
Dalam beberapa tahun terakhir, nanoteknologi telah menunjukkan
potensi besar untuk digunakan sebagai alat yang menjanjikan untuk beberapa
aplikasi in vitro dan in vivo. Dalam pengobatan, nanopartikel telah diterapkan
untuk diagnosis dan terapi dan menawarkan aplikasi yang beragam seperti
pemisahan sel magnetik, dan penghantaran terapi magnetis yang ditargetkan.
Selain itu, mereka juga digunakan dalam magnetic resonance imaging (MRI)
dan secara magnetis memicu hipertermia yang dikenal pendekatan klinis
modern relevansi besar. Bahan struktur nano telah menjanjikan dalam
mengobati penyakit kompleks seperti tumor dan kanker. Penyelidikan baru-
baru ini telah memicu variabilitas struktur mikro dan nano dengan bahan yang
berbeda, ukuran, dan permukaan kimia yang spesifik. Pada dasarnya, bahan
struktur nano yang mempunyai sifat unik sebagaimana kinerja di farmasi dan
aplikasi biomedis.
Kimia organik sintetik modern telah membuka jalan baru untuk
merancang Nanomaterial berbagai arsitektur kimia menggunakan sumber
bahan yang berbeda. Meskipun berbagai macam polimer sintetik telah
digunakan untuk merancang nanopartikel, bagaimanapun, polimer
biodegradable dan alami, seperti pati, chitosan, dan liposom ini juga telah
mendalam digunakan dalam fabrikasi Nanomaterials untuk aplikasi biomedis.
Di antara berbagai biopolimer yang digunakan untuk mempersiapkan
nanopartikel, nanocarriers gelatin telah banyak dievaluasi sebagai pembawa
obat dalam teknologi penghantaran obat terkontrol. Nanopartikel Gelatin
merupakan sistem carrier menjanjikan untuk aplikasi penghantaran obat
dikontrol karena memiliki sejumlah keunggulan dibandingkan bahan
nanopartikel lainnya. Gelatin dikenal sebagai biomacromolecule alami dan
benar-benar tidak beracun dan non karsinogenik di alam, dan memiliki
antigenisitas rendah. Telah banyak digunakan dalam formulasi parenteral.
Aplikasi biomedis dan farmasi dari nanopartikel gelatin yang kaya
didokumentasikan dalam literatur. Selain menggunakan gelatin sebagai
nanopartikel dalam teknologi penghantaran obat, penggunaannya dalam
biomineralization merupakan daerah yang signifikan dalam kimia bioorganik.
 Baru-baru ini, genipin, agen crosslinking alami dari gelatin telah diusulkan
yang dilaporkan benar-benar tidak beracun dan efektif dan telah digunakan
untuk merancang mikrosfer gelatin crosslinking sebagai sistem penghantaran
obat biodegradable untuk administrasi intramuskular.
Hal ini diketahui bahwa sifat obat tidak hanya faktor yang
mempengaruhi desain sebuah sistem penghantaran obat, tapi bagaimana obat
tersebut dimasukkan ke dalam pembawa obat juga banyak hal. Tujuan utama
dalam penggabungan obat adalah untuk mengintegrasikan cukup obat ke dalam
perangkat untuk memberikan dosis efektif obat. Pertimbangan penting lainnya
adalah bahwa obat tidak boleh kehilangan aktivitas biologisnya pada saat
penggabungan. Dari beberapa pendekatan yang diadopsi selama
penggabungan obat, salah satu metode melibatkan penambahan obat untuk
campuran selama penyiapan atau sintesis dari sistem penghataran obat. Metode
lain yang lebih dalam praktek adalah bahwa obat ini hadir dalam proses emulsi
selama pembentukan nanopartikel atau dilarutkan di bagian sol dari hidrogel
responsif termal sebelum gelasi. Atau, obat dapat dimasukkan ke dalam
perangkat setelah fabrikasi. Untuk tujuan ini nanopartikel dapat direndam
dalam larutan obat berkonsentrasi untuk penyerapan obat. Luasnya loading
obat tergantung pada sifat obat, desain perangkat, dan konsentrasi yang
diinginkan dari obat dalam perangkat.
Sitarabin (ara-C) adalah obat yang paling efektif leukemia akut yang
mengganggu replikasi DNA. Namun, obat-obatan seperti meningkatkan
sumsum insufisiensi tulang dan menyebabkan efek sekunder drastis. Ketika
ara-C dosis yang sangat tinggi, komplikasi seperti neurotoksisitas dan convul-
keputusan-diamati. Pemberian dosis tinggi ara-C hasil sebagian dari paruh
hidup singkat senyawa. Dengan demikian, tampaknya berguna untuk
mengembangkan sistem penghantaran obat yang dapat mengurangi toksisitas
ara-C dengan menjaga tingkat obat yang memadai dalam tubuh.
Dengan demikian, termotivasi oleh kemungkinan aplikasi nanopartikel
degradable sebagai pembawa untuk obat antikanker pelepasan tertarget,
penyelidikan fokus diusulkan untuk mempelajari dinamika penghantaran
swelling terkendali sitarabin (ara-C) dari genipin nanopartikel crosslinking
gelatin (tipe A).

2. Eksperimental
2.1. Material
Sitarabin (ara-C) diperoleh dari Dabur Research Foundation (New
Delhi, India) dan digunakan sebagai diterima. Asam diproses gelatin (Tipe
A, isoelektrik titik 7,6) dalam bentuk granular kekuningan, dipasok oleh
Loba Chemie, Mumbai, India, dan digunakan tanpa pretreatment apapun.
Tipe B gelatin (Bloom No. 240, isoelektrik titik 4,8) diekstrak dari tulang
manusia dibeli dari E.Merck, India. Genipin diperoleh dari Sigma Aldrich,
USA. Polimetil metakrilat (PMMA) (SigmaAldrich Co, USA, rata MW ~
120.000 Da, viskositas lekat 0.20) digunakan untuk mempersiapkan fase
minyak. Bahan kimia dan pelarut lain adalah kelas reagen analitik. Air
Bidistillasi digunakan di seluruh percobaan.
2.2. Metode
2.2.1. Preparasi nanopartikel
 Metode preparasi nanopartikel untuk keperluan farmasi dibagi luas
menjadi dua kategori, yang didasarkan pada sifat fisikokimia seperti
pemisahan fase dan penguapan pelarut, dan berdasarkan reaksi kimia
seperti polimerisasi dan polikondensasi. Dalam penelitian ini, teknik
emulsi crosslinking diikuti yang mungkin secara singkat dapat
digambarkan sebagai berikut: 'fase air' dibuat dengan melarutkan sejumlah
tertentu gelatin (A) dalam air suling sedangkan untuk minyak fasa minyak,
digunakan parafin. Kedua dicampur dengan adukan kuat (dengan
kecepatan 300 RPM, kapasitas motor 0,5 HP) (Toshniwal, India) selama
30 menit. Setelah itu, suspensi genipin disiapkan di 9 mL etana diol dan 1
mL minyak parafin dan volume tetap suspensi ini ditambahkan ke
suspense gelatin dengan pengadukan konstan. Reaksi cross linking
diizinkan untuk mengambil tempat untuk jangka waktu yang telah
ditentukan. Nanopartikel siap dipisahkan menggunakan sentrifugasi.
Nanopartikel gelatin dipisahkan kembali dan dilakukan tiga kali dalam
toluena dan dua kali di aseton untuk pembersihan. Produk akhir
dikeringkan pada suhu kamar (25°C) untuk memperoleh serbuk kebiruan
halus yang disimpan di kantong polietilen kedap udara pada suhu 4°C.
Skema reaksi keseluruhan dan mekanisme yang terlibat dalam
crosslinking dari gelatin dengan genipin dapat digambarkan seperti
ditunjukkan pada Gambar 1.

Gambar 1. Reaksi crosslinking antara gelatin dan genipin. Skema Ι. Reaksi

crosslinking dari gelatin oleh genipin dengan: (A) Reaksi utama melalui
penambahan Michael untuk membentuk stabil intermediate; dan (B) reaksi
sekunder dengan substitusi nukleofilik molekul amina lisin bebas ke ester aktivasi
genipin.
2.2.2 Karakterisasi
2.2.2.1. Spektrum FTIR.
IR spektrum sitarabin load gelatin (A) nanopartikel tercatat pada
FTIR Spektrofotometer (Shimadzu 8201 PC). Sampel untuk analisis
spektral disiapkan dengan mencampur nanopartikel dan KBr di 01:10
proporsi dan spektrum diperoleh di kisaran 4000-400 cm-1 dengan resolusi
2 cm-1.

2.2.2.2. Scanning electron mikrokopi.

Studi morfologi nanopartikel gelatin dilakukan dengan
menggunakan SEM, Philips 515, fine coater (Philips, Eindhoven, Belanda).
Tetes suspensi nanopartikel polimer ditempatkan pada permukaan grafit dan
beku kering. Proses freeze-dried dengan adanya krioprotektan, seperti
sukrosa, mencegah agregasi nanopartikel dan mempertahankan bentuk dan
ukurannya. Sampel kemudian dilapisi dengan emas dengan ion sputter pada
20 mA selama 4 menit, dan pengamatan dilakukan di 10 kV.

2.2.2.3. Studi mikroskop elektron transmisi.

Ciri-ciri morfologi genipin crosslinking gelatin nanopartikel
diselidiki dengan merekam mikrograf elektron transmisi (TEM) (Hitachi
Hu-11 B) dengan tegangan percepatan 80 kV. Sampel untuk pengukuran
TEM disiapkan dengan mendispersikan setetes suspensi sampel di C grid
Formvar-coated.

2.2.2.4. Pengukuran potensi permukaan.

Dalam rangka untuk memahami sifat dari interaksi nanopartikel
cisplatin gelatin dan stabilitas nanopartikel gelatin di suspensi, studi
dilakukan dengan pH meter digital (Systronics Model No Digital pH meter
MK VI, Ahmadabad, India). Dalam percobaan 0,2 g nanopartikel tersebar
ke 20 mL larutan pH masing-masing dan emf direkam menggunakan sistem
compound elektroda. Sebuah percobaan yang sama juga diulang untuk
nanopartikel obat muatan. Pengukuran potensial permukaan juga dilakukan
pada suhu yang berbeda sehingga pengaruh suhu terhadap stabilitas
suspensi nanopartikel gelatin juga bisa dinilai.

2.2.2.5. Analisis ukuran partikel.

Ukuran partikel rata-rata (mean intensitas diameter tertimbang, z
rata-rata) dan indeks polidispersitas (distribusi ukuran lebar, PI) oleh foton
korelasi spektroskopi (PCS), dideterminasi untuk karakterisasi Genipin
nanopartikel crosslinking gelatin menggunakan Zetasizer Nano ZS
(Malvern Instrumen , UK). Untuk determinasi ukuran, semua sampel
diencerkan lima kali lipat dengan air MilliQ.

2.2.3. Loading sitarabin

Loading sitarabin dilakukan dengan memungkinkan 0,1 g swelling
nanopartikel dalam larutan obat baru disiapkan sampai keseimbangan, dan
 kemudian pengeringan untuk mendapatkan perangkat pelepasan. Persen
loading obat dihitung dengan persamaan berikut.

dimana Wd dan Wo adalah bobot dari nanopartikel yang load dan

unload masing-masing.

2.2.4. Percobaan pelepasan obat in vitro

Percobaan pelepasan dilakukan di buffer fosfat saline (PBS) (pH
7,4, 1,2 mM KH2PO4, 1,15 mM Na2HPO4, 2,7 mM KCl, 1,38 mM NaCl)
Dalam rangka untuk menentukan jumlah pelepasan sitarabin, ke 100 mg
obat load nanopartikel 8 mL buffer fosfat saline (PBS) ditambahkan sebagai
pelepasan media (pH 7.4) dan suspensi yang dihasilkan dikocok pelan
selama jangka waktu yang telah ditentukan. Setelah pengocokan selesai,
suspensi disentrifugasi; 3 mL suspensi ditarik, dan diuji untuk sitarabin
secara spektrofotometri.

2.2.5. Kinetika proses pelepasan

Untuk memantau kemajuan proses pelepasan, 3 mL aliquot ditarik
dari suspensi pada interval waktu yang diinginkan dan langsung segar 3 mL
PBS ditambahkan ke suspensi untuk mempertahankan volumekonstan.
Dalam aliquot ditarik, jumlah sitarabin ditentukan secara spetrofotometri.
Untuk mencapai wawasan mekanistik ke dalam proses pelepasan sitarabin,
persamaan berikut digunakan,

dimana Wt/W∞ adalah fraksi pelepasan pada waktu t dan k adalah laju
konstan. Eksponen n, disebut sebagai eksponen difusi, merupakan indikator
penting dari mekanisme transportasi obat dan, secara umum, memiliki nilai
antara 0,5 dan 1. Ketika n = 0,43, pelepasan diambil untuk menjadi Fickian.
Ketika n = 0,86, pelepasan adalah nol order (Case II transportasi), dan di
antara nilai-nilai ini, yaitu 0,43< n < 0.86, pelepasan digambarkan sebagai
anomali. Ketika Wt / W∞ = 0,43, t menjadi waktu paruh, parameter lain
yang sangat berguna dalam membandingkan sistem.

2.2.6. Integritas kimia obat

Integritas kimia obat di media asam (pH-1.8) dinilai oleh UV
metode spektrofotometri (Double Beam UV-VIS Spectrophotometer 2201,
Ahmadabad, India).

2.2.7. Analisis statistik

 Semua pengukuran dilakukan setidaknya tiga kali dan angka-angka
dan data yang telah disajikan bersama dengan masing-kesalahan bar dan
S.D., masing-masing.

3. Hasil dan Diskusi

3.1 Karakterisasi nanopartikel

3.1.1. FTIR analisis spektral

FTIR analisis spektral adalah alat sederhana untuk memastikan
konfirmasi struktural material. Dalam penelitian ini, spektrum FTIR dari
gelatin asli (A), genipin crosslinking nanopartikel gelatin dan obat
(sitarabin) load genipin nanopartikel gelatin crosslinking ditunjukkan pada
Gambar 2 (a), (b) dan (c), masing-masing. Spektrum masing-masing
mengkonfirmasi kehadiran gelatin, genipin, dan sitarabin dalam load obat
nanopartikel crosslinking gelatin.

Gambar 2. Spektrum FTIR (a) native gelatin, (b) Genipin crosslinked native
gelatin, dan (c) cytarabine-loaded gelatin nanopartikel.

Dalam spektrum (a) puncak yang tajam di 3300 cm-1 dapat dikaitkan
dengan N-H peregangan kelompok amida dari gelatin dan merupakan
sebuah ikatan Amida karakteristik seperti yang dilaporkan di tempat lain
juga, sedangkan ikatan Amida II di 1531 cm-1 dapat dikaitkan dengan N-H
peregangan dan C-N vibrasi menekuk. Puncaknya diamati pada 2928 cm-1
mungkin sebagai ikatan Amide B karakteristik protein dan itu hasil dari
asimetris peregangan kelompok CH2 dari gelatin. Dalam spektrum (b)
semua ikatan yang disebutkan sebelumnya yang hadir dan mengkonfirmasi
 kehadiran gelatin dalam genipin crosslinking nanopartikel gelatin. Namun,
dalam spektrum (b), ikatan Amida II juga muncul di 1454 cm-1 yang dapat
bekerja untuk CH2 lentur asimetris. Selanjutnya, spektrum juga
menunjukkan puncak yang kuat pada 1080 cm-1 yang dapat bekerja untuk
cincin C-H dalam mode pesawat lentur dan CO peregangan alkohol primer
pada molekul genipin, masing-masing [33]. Sebuah puncak yang kuat di
1370 cm-1 dapat dikaitkan dengan obligasi baru dibentuk antara genipin dan
amina primer lisin, hidroksilisin, atau residu arginin dari gelatin [34].
puncak lain yang signifikan telah diamati pada 1740 cm-1 yang dapat
bekerja untuk CO peregangan kelompok keton dalam cincin aromatik dari
genipin.
Dalam spektrum (c) ikatan Amida II muncul di 1399 cm-1 yang
dapat dikaitkan dengan COO peregangan asimetris. Spektrum (c) tidak
hanya menunjukkan puncak yang disebutkan di atas dari gelatin dan genipin
tetapi juga menunjukkan puncak kuat pada 3477 cm-1 dan 798 cm-1 yang
mungkin karena peregangan N-H dan O-H, dan C-H menekuk molekul
sitarabin.

3.1.2. Analisis SEM

Ciri-ciri morfologi nanopartikel gelatin siap telah diselidiki oleh
analisis scanning electron microscopy (SEM) seperti ditunjukkan pada
Gambar. 3 (a). Hal ini jelas dari citra pengamatan yang membentuk partikel
seragam dan ukuran nanopartikel diperkirakan di kisaran 25 sampai 75 nm.

3.1.3. Analisis TEM

Dalam rangka untuk melihat ke dalam morfologi yang lebih tepat
dari nanopartikel gelatin, studi TEM juga dilakukan dan gambar yang
diperoleh ditunjukkan pada Gambar. 3 (b). Hal ini jelas dari gambar yang
partikel hampir teratur dan berbentuk bulat dan memiliki ukuran di kisaran
75-150 nm. Dimensi lebih besar dari nanopartikel gelatin diperoleh dari
pengukuran TEM yang dapat dikaitkan dengan agregasi nanopartikel.

Gambar 3. (a) scanning electron micrograph (SEM) dan (b) transmission electron
micrograph (TEM) gambar dari genipin crosslinked gelatin nanopartikel.
3.1.4. Analisis ukuran partikel
Distribusi ukuran partikel genipin nanopartikel gelatin crosslinking
telah dilakukan oleh pengukuran hamburan cahaya dinamis. Hasilnya
digambarkan dalam Gambar. 4 yang jelas mengungkapkan bahwa ukuran
nanopartikel bervariasi antara 50 dan 150 nm dengan mayoritas partikel
yang memiliki ukuran sekitar 80 nm.

Gambar 4. Analisis ukuran partikel dari genipin crosslinked gelatin

nanopartikel

3.1.5. Permukaan potensial pengukuran

Nilai-nilai potensial ξ untuk unload, dan obat load nanopartikel
dirangkum dalam Tabel 1. Hal ini jelas dari data bahwa setelah loading
molekul obat ke nanopartikel, potensi positif jaringan dari partikel
permukaan meningkat pada pH 1,8, 7,4 dan 8.6. Karena titik isoelektrik
gelatin adalah sekitar 6,8, gelatin beruang muatan positif bersih pada pH 1,8
dan muatan negatif sedikit pada pH 7,4.
Di sisi lain pada pH 8,6 molekul gelatin memiliki muatan negatif
seperti pH 8.6 jauh di atas titik isoelektrik. Namun, setelah loading sitarabin,
keseluruhan bergerak ke arah baik biaya atau kurang negatif nilai-nilai yang
lebih positif yang menyarankan untuk kenaikan keseluruhan muatan positif
pada permukaan nanopartikel. Peningkatan muatan permukaan positif pada
pH 1,8 dapat dikaitkan dengan alasan bahwa pada pH 1,8, molekul sitarabin
memperoleh muatan positif karena pembentukan NH3+ kelompok pada
molekul sitarabin.
Namun, pada pH 7,4 dan 8,6, ketika molekul gelatin menanggung
biaya sedikit dan lebih negatif, masing-masing, loading sitarabin
menyebabkan pengurangan muatan negatif karena sifat bermuatan positif
molekul sitarabin.

Tabel 1. Potensi permukaan dari obat unloaded and loaded gelatin nanoparticles.
4. Hasil pada pelepasan sitarabin
Tujuan utama dari percobaan pelepasan adalah menentukan bagaimana
berbagai parameter eksperimental mempengaruhi pelepasan sitarabin dari
genipin crosslinked gelatin nanopartikel. Pengaruh crosslinker, gelatin, pH
media pelepasan, cairan fisiologis simulasi, dan jenis gelatin dipelajari pada
profil pelepasan sitarabin.

4.1. Mekanisme pelepasan obat

Dalam sistem penghantaran obat swelling dikendalikan, jumlah
serapan air menentukan jumlah obat dilepaskan. Jika kita memvisualisasikan
nanopartikel mengembang dari gelatin crosslinking genipin, mereka dapat
dianggap seperti tiga dimensi struktur makromolekul gelatin crosslinking
antara strand yang merupakan saluran peresapan air masuk [35]. Ketika obat
load nanopartikel kontak dengan pelarut termodinamika yang cocok, seperti
air, air menyerang rantai gelatin dan melarutkan molekul obat yang berdifusi
keluar ke media reseptor.
Dalam penelitian ini, molekul gelatin crosslinking genipin membangun
jaringan nanopartikel dan molekul obat yang hadir dalam struktur nanopartikel.
Ketika obat load nanopartikel gelatin hubungi air, suhu transisi gelas gelatin
meningkat dan gelatin menjadi lembut dan kenyal di alam. Sifat kenyal dari
gelatin memungkinkan relaksasi rantai dan akibatnya molekul air masuk
jaringan. Air yang masuk melarutkan molekul obat dan obat keluar masuk ke
media pelepasan.

4.2. Pengaruh persen pembebanan pada pelepasan sitarabin

Dalam penelitian ini, loading fisik diikuti yang melibatkan swelling
prapenimbangan nanopartikel ke dalam larutan sitarabin dari berbagai
konsentrasi sehingga menghasilkan nanopartikel obat load 48,5-88,4%.
Nanopartikel load dapat melepaskan obat sitarabin yang terperangkap ke dalam
volume medium. Profil pelepasan nanopartikel load sampai batas yang berbeda
ditunjukkan pada Gambar.5, yang jelas menunjukkan bahwa jumlah sitarabin
dilepas secara bertahap meningkat dengan meningkatnya persen pembebanan.
Peningkatan yang diamati dalam pelepasan sitarabin dengan meningkatnya
persen loading berdasarkan alasan karena swelling nanopartikel gelatin lebih
besar obat yang dilepaskan.
Gambar 5. Efek dari %loading cytarabine pada profil pelepasan komposisi
nanopartikel definit [gelatin] = 1.0 g, [genipin] = 0.1326 mM, pH = 7.4, Temp. =
25 ± 0.2 °C.

4.3. Pengaruh gelatin pada pelepasan sitarabin

Profil pelepasan obat sering sensitif terhadap struktur kimia dan sifat
dari operator serta kondisi eksperimental. Pengaruh gelatin pada sitarabin telah
diteliti oleh memvariasikan jumlah gelatin 1,0-7,0 g. Gambar 6. jelas
menunjukkan bahwa pelepasan kumulatif sitarabin menurun dengan
meningkatnya jumlah gelatin. Penurunan dalam kumulatif sitarabin dengan
meningkatnya gelatin adalah karena fakta bahwa ketika gelatin adalah 1,0 g,
molekul gelatin sangat crosslinking dan, oleh karena itu, nanopartikel gelatin
yang cukup berpori di alam. Karena porositas tinggi, jumlah yang lebih besar
dari molekul air memasuki jaringan dan sejumlah besar obat dilepaskan karena
swelling.

4.4. Efek genipin

Reagen tertentu telah digunakan untuk gelatin crosslinking seperti
glutaraldehid, tripolifosfat, formalin dan hidroklorida carbodiimide,
bagaimanapun, penelitian telah menunjukkan bahwa reagen crosslinking
sintetis lebih atau kurang sitotoksik dan dapat mempengaruhi
biokompatibilitas sistem penghantaran obat. Oleh karena itu, diperlukan untuk
menggunakan reagen crosslinking untuk aplikasi biomedis yang memiliki
sitotoksisitas rendah dan membentuk produk crosslinking yang stabil dan
biokompatibel. Dengan demikian, genipin bisa menjadi pilihan yang relevan
sebagai crosslinker dari gelatin. Perlu untuk menyebutkan bahwa selain data
empiris dari obat tradisional; baru-baru ini beberapa informasi tentang efek
menguntungkan dari genipin tersedia dalam hal biokimia.
 Pengaruh crosslinker pada profil pelepasan sitarabin telah diteliti
dengan memvariasikan konsentrasi genipin di kisaran 0,1-0,6 wt.% Dari
gelatin. Hasilnya ditunjukkan pada Gambar.7, yang jelas mengungkapkan
bahwa pelepasan pecahan dari sitarabin meningkat dengan meningkatnya
genipin hingga 0,3 wt.% Sedangkan di luar itu jatuh dalam jumlah pelepasan
sitarabin. Hasil crosslinker pada jumlah sitarabin yang dilepaskan dapat
dijelaskan oleh fakta bahwa sejak genipin adalah crosslinker hidrofilik, jumlah
hubungan dalam nanopartikel meningkatkan hidrofilisitas mereka yang, yang
pada gilirannya, akan memungkinkan peningkatan jumlah molekul air untuk
masuk ke dalam nanopartikel dan jelas rasio swelling akan meningkat. Dengan
demikian, peningkatan swelling akan mengizinkan lebih banyak molekul
sitarabin untuk berdifusi keluar dan pelepasan sitarabin meningkat. Namun,
ketika konsentrasi genipin luar 0,3wt%, ukuran nanopartikel akan berkurang
karena kepadatan crosslinking disempurnakan nanopartikel dan sebagai
hasilnya; baik swelling dan pelepasan akan jatuh. Penjelasan lain untuk
penurunan yang diamati dalam pelepasan sitarabin mungkin bahwa
peningkatan konsentrasi crosslinker menurunkan berat molekul antara ikatan
crosslinking dan ini, akibatnya, mengurangi volume bebas untuk diakses oleh
molekul air penetran.

Gambar 7. Efek dari sejumlah variasis of genipin (crosslinker) pada

pelepasan obat dari sitarabin untuk komposisi nanopartikel definit [gelatin] =
1.0 g, pH = 7.4, Temp. = 25 ± 0.2 °C, %Loading = 88.4.

4.5. Pengaruh pH pada pelepasan sitarabin

Dalam penyelidikan ini, dinamika pelepasan sitarabin telah diamati di
bawah kondisi pH yang bervariasi seperti yang ditemukan di saluran
pencernaan (GIT) misalnya, lambung (gastric juice) 1.0, dan usus kecil (7,5-
8,6). Beragam pH memungkinkan obat tertentu yang akan dikirimkan ke situs
target saja. Sebagai contoh, pH dalam perut sangat berbeda dari pH netral usus
dan perbedaan pH ini dapat digunakan untuk mencegah pelepasan obat
mencicipi busuk ke dalam lingkungan pH netral mulut saat menggunakan
hidrogel polikationik sebagai pembawa obat. Demikian pula hidrogel
 polyanion, yang menunjukkan swelling minimal pada pH asam (seperti dalam
perut), bisa menjadi potensi untuk digunakan sebagai peningkatan pH akan
menyebabkan ionisasi kelompok karboksilat.
Hasil yang diperoleh dalam penelitian ini digambarkan pada Gambar.8,
yang jelas menunjukkan bahwa pelepasan kumulatif adalah 12,4 mg / ml pada
pH 1,8, 8,3 mg / mL pada pH 7,4 dan 9,7 pada pH 8,5. Dengan demikian,
pelepasan kumulatif minimum pada pH 7,4 yang sangat dekat dengan titik
isoelektrik gelatin (B). Hal ini jelas dari hasil yang pelepasan kumulatif
sitarabin secara signifikan berbeda pada nilai pH dari percobaan.
Ketika sitarabin load nanopartikel ditempatkan pada pH 1,8, molekul
sitarabin terperangkap dalam nanopartikel tetap dalam keadaan terprotonasi
seperti yang ditunjukkan di bawah ini:

Gambar 8. Variasi dalam sejumlah pelepasan sitarabin dengan berbagai pH

medium pelepasan untuk komposisi nanopartikel definit [gelatin] = 1.0 g,
[genipin] = 0.3 wt.% of gelatin, Temp. = 25 ± 0.2 °C, %Loading = 88.4.

Pada pH ini, molekul gelatin juga memiliki muatan positif bersih

karena dominasi kelompok amina terprotonasi (NH3+) lebih ion karboksilat
(COO-) dari asam amino dan menyebabkan tolakan antara molekul obat
terperangkap dalam nanopartikel. Hal ini menyebabkan pelebaran ukuran mesh
 jaringan nanopartikel, yang akibatnya memfasilitasi pelepasan molekul
sitarabin ke dalam media pelepasan. Demikian pula, pada pH 8.6, yang cukup
atas titik isoelektrik gelatin, rantai gelatin akan memperoleh muatan negatif
karena ionisasi gugus asam karboksilat hadir sepanjang rantai gelatin dan akan
mencabut karena tolakan elektrostatik. Hal ini jelas akan membawa
peningkatan pelepasan obat sitarabin.
Namun, pada pH 7,4, yang dekat ke titik isoelektrik gelatin,
makromolekul gelatin akan netral dan tidak akan menyebabkan tolakan pun di
antara rantai gelatin. Dengan demikian, molekul sitarabin tidak akan
dilepaskan banyak dan kumulatif akan minimum.

4.6. Integritas kimia obat

Dalam rangka untuk memastikan integritas kimia sitarabin di media
yang sangat asam seperti jus lambung, obat yang tersisa di media asam
lambung da;a, simulasi dan spektra UV-nya di-scan dan dibandingkan dengan
yang dari sitarabin di media berair. Spektrum ditunjukkan pada Gambar. 9
yang jelas menunjukkan bahwa mereka hampir identik satu sama lain.

Gambar 9. Spectrum UV menunjukkan stabilitas kimia dari sitarabin dalam (a)

larutan murni, (b) media pelepasan

Hasil integritas kimia obat menunjukkan bahwa bahkan setelah tersisa

media yang sangat asam, sifat kimia sitarabin tidak berubah. Selain itu,
ditemukan juga bahwa bahkan nanopartikel gelatin tidak mengalami apapun
pembelahan atau pembubaran dalam medium asam lambung. Ini jelas
menjelaskan integritas kimia sistem pembawa obat di media yang sangat asam.

4.7. Pengaruh jenis gelatin pada pelepasan sitarabin

Gelatin merupakan biopolimer alami yang diekstraksi dari kolagen oleh
pretreatment alkali atau asam dan denaturasi termal. Tergantung pada
pretreatment dua jenis gelatin dapat dibedakan, A dan B. Gelatin A diekstrak
dari kulit babi, dan diproses oleh pretreatment asam, sedangkan gelatin B
diekstrak dari kulit sapi, dan diproses oleh pretreatment alkali. Pretreatment
alkali mengkonversi glutamin dan asparagina residu menjadi asam glutamat
dan asam aspartat, yang menghasilkan kandungan asam karboksilat yang lebih
tinggi untuk gelatin B (118/1000 asam amino) daripada gelatin A (77/1000
 asam amino) [43]. Pengaruh jenis gelatin pada profil pelepasan sitarabin telah
diteliti dengan menggunakan nanopartikel gelatin tipe A dan B dan
menentukan jumlah sitarabin dilepaskan. Hasil jelas menunjukkan bahwa obat
pelepasan kumulatif cukup tinggi dalam hal jenis gelatin B (9,6 mg / mL)
dibandingkan dengan A (8,4 mg / mL) (Gambar. 10).

Gambar 10. Efek dari tipe gelatin pada sejumlah pelepasan sitarabin
komposisi nanopartikel definit [gelatin] = 1.0 g, [genipin] = 0.3 wt.% of
gelatin, pH = 7.4, Temp. = 25 ± 0.2 °C, %Loading = 88.4.

Jenis gelatin memberikan pengaruh nyata pada profil pelepasan

sitarabin tersebut. Hasil yang diperoleh dapat dijelaskan oleh fakta bahwa pada
pH eksperimental (7,4) (yang berada di atas titik isoelektrik 4.8) molekul
gelatin B akan memiliki muatan negatif bersih karena -COO- kelompok dalam
molekul. Dengan demikian, molekul sitarabin, yang hampir sepenuhnya
terionisasi pada pH 7,4, akan melampirkan ke pusat-pusat bermuatan negatif
hadir sepanjang molekul gelatin dan menghasilkan persen pembebanan lebih
besar. Ketika sitarabin load tipe nanopartikel B ditempatkan di media
pelepasan, -COO- kelompok ini sepanjang rantai gelatin saling tolak, sehingga
menghasilkan relaksasi yang lebih besar dari rantai jaringan di nanopartikel.
Ini jelas menyebabkan swelling lebih besar dari nanopartikel load yang, pada
gilirannya, menghasilkan pelepasan yang lebih besar dari sitarabin dari jenis
nanopartikel B gelatin.

4.8. Pengaruh cairan fisiologis simulasi pada pelepasan sitarabin

Selama pemerintahan nanocarriers obat load, nanopartikel menemukan
beberapa cairan biologis di berbagai bagian tubuh. Oleh karena itu, perlu untuk
mempelajari pengaruh biofluids pada jumlah pelepasan sitarabin ketika obat
load nanopartikel gelatin menghubungi biofluids ini. Pengaruh sifat media
pada jumlah pelepasan sitarabin telah diteliti dengan melakukan eksperimen
pelepasan di berbagai cairan fisiologis simulasi seperti garam, larutan glukosa,
urea dan urin buatan. Hasilnya digambarkan dalam Gambar. 11 yang
 mengungkapkan bahwa jumlah pelepasan sitarabin secara signifikan ditekan
dalam cairan fisiologis dibandingkan dengan yang di PBS.

Gambar 11. Pengaruh dari alam dari media pelepasan pada sejumlah
pelepasan sitarabin.

Dalam kasus biofluids kemungkinan alasan untuk pelepasan yang lebih

rendah dan swelling sitarabin mungkin bahwa kehadiran ion garam dalam
media pelepasan menurunkan tingkat penetrasi molekul air menjadi
nanopartikel load, sehingga mengakibatkan penurunan jumlah dipelepasan
sitarabin. Dalam kasus urea, kapasitasnya untuk memecah ikatan hidrogen
antara molekul air dan rantai gelatin mungkin bertanggung jawab untuk
penyerapan air yang lebih rendah dan akibatnya, lebih rendah dari sitarabin.

5. Kesimpulan
Crosslinking dari emulsi gelatin B oleh bentuk genipin ukuran kecil
nanopartikel yang bertindak sebagai sistem pelepasan obat swelling terkendali.
Obat antikanker sitarabin yang memadai load ke nanopartikel dan pelepasan
yang dikendalikan sesuai keinginan. Crosslinking rantai gelatin oleh genipin
telah dikonfirmasi oleh FTIR analisis spektral. Analisis nanopartikel SEM dan
TEM menyarankan untuk nanopartikel bentuk reguler dengan ukuran rata-rata
75 nm. Analisis ukuran partikel juga menegaskan bahwa sebagian besar
nanopartikel berkisar di bawah 100 nm. Pengukuran muatan permukaan
mengungkapkan bahwa setelah loading sitarabin muatan negatif dari
nanopartikel berkurang. Hal ini ditemukan bahwa profil pelepasan sitarabin
sangat dipengaruhi oleh %loading sitarabin dan ketika persen pembebanan
meningkat 48,5-88,4, kumulatif sitarabin juga meningkat. Dalam kasus gelatin,
jumlah pelepasan sitarabin menurun ketika jumlah gelatin meningkat dari 1,0 g
menjadi 7,0 g. Jumlah pelepasan sitarabin tersebut meningkat dengan
meningkatnya konten genipin sampai 0. 3 wt.% dari gelatin sedangkan jumlah
pelepasan sitarabin menurun melampaui 0,3 wt.%. Hal ini menjelaskan bahwa
pelepasan secara langsung diatur oleh luasnya swelling nanopartikel gelatin.
Jenis gelatin juga memiliki efek mendalam pada potensi pelepasan nanopartikel
dan ditemukan bahwa nanopartikel tipe B gelatin menunjukkan penghantaran
obat yang lebih besar dari tipe nanopartikel A. Pelepasan obat yang optimal
diperoleh pada dekat pH fisiologis (7,4) sementara lebih rendah dalam kisaran
pH dasar. Cairan fisiologis menekan tingkat pelepasan sitarabin. Studi UV
spektral menunjukkan bahwa obat load nanopartikel gelatin yang cukup stabil
dalam medium bahkan sangat asam dan integritas kimia obat ini cukup terjaga.