Buletin Tanaman Tembakau, Serat & Minyak Industri 6(1), April 2014:23−31

ISSN: 2085-6717

Potensi Beberapa Isolat Bakteri Pelarut Fosfat Asal Lahan Tebu di

Jawa Timur Berdasarkan Aktivitas Enzim Fosfatase
Potency of Phosphate Solubilizing Bacteria Isolates Based on Phosphatase Activity

Farida Rahayu, Mastur, dan Budi Santoso

Balai Penelitian Tanaman Pemanis dan Serat
Jln. Raya Karangploso Kotak Pos 199, Malang
E-mail: balittas@litbang.deptan.go.id
Diterima: 5 Juli 2013 disetujui: 3 Maret 2014

ABSTRAK

Fosfor (P) merupakan hara esensial untuk pertumbuhan tanaman karena P berperan penting dalam banyak ak-
tivitas metabolisme tanaman. Tanaman memperoleh P dari larutan tanah dalam bentuk anion. Namun, anion P
sangat reaktif dan dapat mudah terikat oleh unsur Al, Fe, Mg, dan Ca. Dalam bentuk tersebut, P sangat tidak
terlarut sehingga tidak tersedia bagi tanaman. Bakteri pelarut fosfat (BPF) berperan penting dalam meningkatkan
ketersediaan P dalam tanah sehingga potensi BPF yang diisolasi dari lahan tebu perlu diidentifikasi. Kegiatan
identifikasi potensi bakteri pelarut fosfat dilakukan mulai Januari–Desember 2012 di Laboratorium Bioprosesing
Balai Penelitan Tanaman Pemanis dan Serat, Malang. Tujuan dari kegiatan ini adalah untuk melakukan eksplorasi
bakteri pelarut fosfat dan seleksi berdasarkan kemampuan bakteri dalam melarutkan fosfat. Isolat dieksplorasi
dari lahan tebu di Jawa Timur yaitu di Kabupaten Sidoarjo, Blitar, Kediri, Malang, Lumajang, Bondowoso, dan
Situbondo. Dari 65 isolat bakteri yang berhasil diisolasi, 22 isolat bakteri di antaranya berpotensi sebagai bakteri
pelarut fosfat (BPF). Setelah dilakukan uji lebih lanjut, diperoleh 9 isolat unggul bakteri pelarut fosfat yaitu SD-
10, Bl-1, KD-5, ML-2, LJ II-3 yang menunjukkan aktivitas fosfatase tinggi di hari pertama, sedangkan LJ I-3 dan
BD-2 menunjukkan aktivitas fosfatase pada hari kedua dan SD-7 serta BL-4 termasuk dalam 9 besar isolat
dengan diameter zona bening terbesar. Luas daerah zona bening secara kualitatif menunjukkan besar kecilnya
kemampuan bakteri dalam melarutkan fosfat. Isolat BPF tersebut diharapkan dapat membantu memperbaiki
ketersediaan P di tanah dan mampu memperbaiki kualitas pertumbuhan dan perkembangan tanaman tebu.

Kata kunci: Bakteri pelarut fosfat, fosfatase

ABSTRACT

Phosphorus (P) is an essential nutrient for plant growth, because it plays an important role in many metabolisms
activities. Plants obtain P from soil solution as anion. However, phosphate anions are very reactive and can be
immobilized through precipitation with Al, Fe, Mg, and Ca. In these form, phosphate is insoluble and unavailable
to plants. Phosphate solubilizing bacteria (PSB) plays important role in dynamics and availability of P in soil. So,
the potency of PSB isolates which were explored from sugar cane soil of East Java might be important to be
identified. Identification based on activity of phosphatase enzyme was conducted from January–December 2012
in Bioprocessing Laboratory Indonesian Sweetener and Fiber Crops Research Institute, Malang. The aim was to
explore and select PSB based on their ability to dissolve of P. Isolation of PSB was collected from sugar cane land
of East Java included Sidoarjo, Blitar, Kediri, Malang, Lumajang, Bondowoso, and Situbondo. Among 65 bacterial
isolates, 22 bacterial isolates were potentially as PSB. After a further test, we obtained 9 isolate had high enzyme
activities, ie. SD-10, BL-1, KD-5, ML-2 and LJ II-3 had phosphatase activity on the first day, whereas LJ I-3 and
BD-2 had an activity at the second day, while SD-7 and BL-4 had largest diameter of clear zones. Phosphate

23
 Buletin Tanaman Tembakau, Serat & Minyak Industri 6(1), April 2014:23−31
solubilizing bacteria isolate is expected to increase improve availability of P in the soil, quality and development
of plants.
Keywords: Phosphate solubilizing bacteria, phosphatase
PENDAHULUAN
F OSFOR (P) merupakan unsur hara esensial
dalam pertumbuhan dan perkembangan ta-
naman. Tanaman memperoleh fosfor dari larutan
tanah sebagai bentuk anion fosfat yang sangat
reaktif. Ion fosfat akan berikatan dengan kation
seperti Ca2+, Mg2+, Fe3+, Al3+, dan dalam bentuk
ini fosfat sangat terikat dan tidak tersedia bagi
tanaman. Akibatnya, jumlah P yang tersedia
untuk tanaman biasanya dalam proporsi kecil
(FNCA Biofertilizer Project Group 2006). Fosfat
diperlukan dalam transfer energi, aktivasi pro-
tein, dan pengaturan proses-proses metabolis-
me kimiawi (Mikkelsen 2005). Fosfat bereaksi
kuat dengan komponen tanah yang sebagian
besar diserap tanaman melalui difusi. Dibanding
hara yang lain, P merupakan unsur yang tidak
mudah bergerak dan sedikit tersedia untuk ta-
naman. Menurut Ludwick (1998), P dalam tanah
pada pH < 4 diikat oleh Fe, pada pH 5,0–5,5
akan diikat oleh Al, dan pada pH alkali akan di-
ikat oleh Ca.
Tanaman menyerap P dalam bentuk ion
ortofosfat (H2PO4-) dan ion ortofosfat sekunder
(HPO4=). Unsur P masih dapat diserap dalam
bentuk lain, yaitu bentuk pirofosfat dan meta-
fosfat, dan kemungkinan unsur P diserap dalam
bentuk senyawa organik yang larut dalam air,
misalnya asam nukleat dan fitin. P yang diserap
tanaman dalam bentuk ion anorganik cepat ber-
ubah menjadi senyawa P organik yang mudah
bergerak antarjaringan tanaman. Kadar optimal
P dalam tanaman pada saat pertumbuhan vege-
tatif adalah 0,3–0,5% dari berat kering tanaman
(Rosmarkam & Yuwono 2002). Meskipun P di-
perlukan dalam jumlah yang lebih rendah dari-
pada nutrisi penting lainnya, P sangat penting
dalam tahap perkembangan dan pertumbuhan,
serta berperan dalam pembentukan energi bagi
24
tanaman sepanjang musim tanam. Fungsi lain P
adalah untuk merangsang perkembangan akar
muda dan dalam mempercepat proses pembu-
ahan. Selain itu, P berperanan dalam mengon-
trol fotosintesis, respirasi, dan pembelahan sel.
P sangat mempengaruhi pembentukan biji dan
terkonsentrasi dalam benih maupun buah.
Fungsi utama P berkaitan dengan ketersediaan
energi dalam pertumbuhan, sehingga kekurang-
an P dapat mempengaruhi pertumbuhan vege-
tatif suatu tanaman (Hodges 2013).
Ketersediaan P-organik bagi tanaman di-
pengaruhi antara lain oleh aktivitas mikroba.
Namun seringkali hasil mineralisasi oleh mikro-
ba, langsung bersenyawa dengan bagian-bagian
anorganik dalam tanah untuk membentuk senya-
wa yang relatif sukar larut. Enzim fosfatase ber-
peran utama dalam melepaskan P dari ikatan P-
organik. Enzim ini banyak dihasilkan oleh mikro-
ba tanah, terutama yang bersifat heterotrof. Ak-
tivitas fosfatase dalam tanah meningkat dengan
meningkatnya C-organik, tetapi juga dipengaruhi
oleh pH, kelembapan, temperatur, dan faktor la-
innya. Dalam kebanyakan tanah, total P-organik
sangat berkorelasi dengan C-organik tanah, se-
hingga mineralisasi P meningkat dengan mening-
katnya total C-organik. Semakin tinggi C-organik
dan semakin tinggi P-organik, maka semakin
meningkat immobilisasi P. P-anorganik dapat di-
immobilisasi menjadi P-organik oleh mikroba
(Havlin et al. 1999).
Mikroorganisme tanah berperan penting
dalam dinamika dan ketersediaan P dalam tanah
(Richardson 2001). Komunitas mikroba mempe-
ngaruhi kesuburan tanah melalui proses dekom-
posisi, mineralisasi, dan penyimpanan/melepas-
kan nutrisi. Mikroorganisme mampu meningkat-
kan ketersediaan P untuk tanaman melalui mi-
neralisasi P organik di tanah dan membantu
melarutkan fosfat (Chen et al. 2006; Kang et al.
2002; Pradhan & Sukla 2005). Di antara mikroba
tanah, potensi bakteri lebih efektif dalam mela-
 F Rahayu et al.: Potensi beberapa isolat bakteri pelarut fosfat asal lahan tebu di Jawa Timur berdasarkan aktivitas enzim fosfatase
rutkan fosfat dibandingkan jamur (Alam et al.
2002). Di antara seluruh populasi mikrobia di
tanah, 1–50% mikroorganisme yang potensial
adalah bakteri pelarut fosfat (BPF), sedangkan
jamur pelarut fosfat (JPF) hanya sekitar 0,1–0,5%
(Chen et al. 2006). Beberapa strain bakteri pela-
rut fosfat yang unggul dari genus Pseudomonas,
Bacillus, Rhizobium, dan Enterobacter, sedang-
kan dari kelompok jamur adalah Penicillium dan
Aspergillus (Whitelaw 2000).
Tiap bakteri memiliki kemampuan yang
berbeda seperti kemampuan dalam mineralisasi
maupun melarutkan P organik maupun anorga-
nik (Hilda & Fraga 2000; Khiari & Parent 2005).
Bakteri pelarut fosfat mempunyai kemampuan
untuk melarutkan P organik menjadi bentuk
fosfat terlarut yang dapat diserap oleh tanaman.
Adanya produksi asam organik seperti asam
asetat, asam format, asam laktat, asam oksalat,
asam malat, dan asam sitrat merupakan efek
pelarutan P oleh mikroba tersebut. Mikroba
tersebut juga memproduksi asam amino, vita-
min, dan growth promoting substance seperti
IAA dan asam giberelin yang dapat meningkat-
kan pertumbuhan tanaman (Richardson 2001;
Gyaneshwar et al. 2002; Ponmurugan & Gopi
2006). Aktivitas enzimatis fosfomonoesterase
(PME), sebagai substrat fosfat dapat berasal
dari hasil mineralisasi esterfosfat organik alami
atau koponen organik buatan seperti fenilfosfat
dan p-nitrofenilfosfat (p-NPP). Penggunaan fenil
fosfat dan p-nitrofenilfosfat (p-NPP) sebagai
substrat secara potensial akan menginduksi pro-
duksi enzim fosfomonoesterase serta mengindi-
kasikan kemampuan hidrolisis bentuk P organik
oleh enzim fosfomonoesterase (Tabatabai &
Bremner 1969). Dalam percobaan ini dilakukan
eksplorasi bakteri pelarut fosfat dan seleksi ber-
dasarkan kemampuan bakteri dalam melarutkan
fosfat dengan mengukur PME dari isolat bakteri
pelarut fosfat hasil eksplorasi.
BAHAN DAN METODE
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium
Bioprosesing Balai Penelitian Tanaman Pemanis
dan Serat, Malang dimulai pada bulan Januari–
Desember 2012. Isolat mikroba dikumpulkan
dari lahan tebu di Jawa Timur yaitu di Kabupa-
ten Sidoarjo, Blitar, Kediri, Malang, Lumajang,
Bondowoso, dan Situbondo.
Isolasi Bakteri Pelarut Fosfat (BPF)
Isolasi bakteri dilakukan dengan mengum-
pulkan sampel tanah dari lahan tebu. Sampel
tanah diambil secara acak dari kedalamam 0–15
cm. Sampel tanah dikeringanginkan dan dihalus-
kan kemudian disaring dengan ayakan berdia-
meter 2 mm. Sepuluh gram tanah yang telah
dikeringanginkan dimasukkan ke dalam erlen-
meyer 250 ml berisi 90 ml akuades steril, kemu-
dian dikocok selama 1 jam dengan shaker ber-
kecepatan 120 rpm (sampai homogen). Larutan
sampel dibuat seri pengenceran 10-1–10-7 dari
ekstrak tanah, kemudian masing-masing peng-
enceran diambil 0,1 ml dan dituangkan ke dalam
cawan petri steril, setelah itu dituangkan media
agar Pikovskaya yang terdiri dari (0,5 g (NH4)2
SO4; 0,5 g MgSO4.7H2O; 0,3 g NaCl; 0,3 g KCl;
0,03 g FeSO4.7H2O; 0,02 g MnSO4.H2O; 10 g
Ca3(PO4)2; 10 g glukosa; dan 20 g agar) yang
dilarutkan dalam akuades 1.000 ml (Pikovskaya
1948), selanjutnya diinkubasi pada suhu sekitar
30oC. Pengamatan dilakukan setiap hari selama
15 hari dengan mengamati pertumbuhan koloni
dan menghitung jumlah koloni yang tumbuh.
Keberadaan mikroorganisme pelarut fosfat di-
tunjukkan dengan terbentuknya koloni yang di-
kelilingi daerah bening (clear zone). Pada ke-
giatan ini, mikroba jenis bakteri pelarut fosfat
dimurnikan dan diuji lebih lanjut, sehingga perlu
dipisahkan dengan koloni jamur.
Uji Kemampuan Bakteri dalam Mela-
rutkan P
A. Media Pikovskaya Padat
Bakteri pelarut fosfat selanjutnya dikultur-
kan di cawan petri yang berisi media agar Pi-
kovskaya. Bakteri pelarut fosfat yang memben-
tuk zona bening paling cepat dan berdiameter
25
 Buletin Tanaman Tembakau, Serat & Minyak Industri 6(1), April 2014:23−31

paling besar (diameter > 1 cm) akan digunakan HASIL DAN PEMBAHASAN
sebagai inokulum pada percobaan selanjutnya.
Pengamatan dilakukan setiap hari untuk me- Hasil dari kegiatan isolasi bakteri dari 7
ngetahui mulai terbentuknya zona bening. Pem- sampel tanah yang berasal dari Kabupaten Sido-
bentukan zona bening yang lebih cepat mengin- arjo, Blitar, Kediri, Lumajang, Pasirian, Situbon-
dikasikan kemampuan mikroorganisme pelarut do, dan Bondowoso diperoleh 65 isolat bakteri,
fosfat yang cepat pula. 22 isolat di antaranya menunjukkan adanya zona
B. Media Pikovskaya Cair bening yang mengindikasikan kemampuannya
Pengujian dilakukan menurut metode Gaur sebagai pelarut P (Tabel 1). Sampel tanah dari
(1981). Isolat bakteri yang diuji, dikulturkan masing-masing daerah diisolasi dengan meng-
pada erlenmeyer 250 ml yang berisi 100 ml me- gunakan media selektif yaitu media Pikovskaya
dia Pikovskaya cair yang berisi Ca3(PO4)2 5 g/l. yang mengandung Ca3(PO4)2 (tricalcium fosfat).
Masing-masing erlenmeyer yang telah diberi
Tabel 1. Hasil isolasi mikroba pelarut P dari berbagai
bakteri pelarut fosfat dikocok dalam shaker de-
daerah di Jawa Timur
ngan kecepatan putar 120 rpm selama 1 ming- Jumlah
gu. Sebanyak 20 ml kultur bakteri cair diukur No Asal sampel Jenis BPF
koloni
pH-nya. Sebanyak 0,5 ml sampel kultur bakteri 1 Sidoarjo (SD) Bakteri 11 5
2 Blitar (BL) Bakteri 11 6
diencerkan dengan 7 ml air destilasi, digunakan 3 Kediri (KD) Bakteri 10 4
untuk pengukuran optical density (OD) dengan 4 Malang (ML) Bakteri 6 1
5 Lumajang (LJ) Bakteri 18 2
spektrofotometer dengan panjang gelombang 6 Bondowoso (BD) Bakteri 5 3
600 nm dan sisanya disentrifugasi selama 30 7 Asembagus (ASB) Bakteri 4 1
Total 65 22
menit dengan kecepatan 6000 rpm. Supernatan
yang dihasilkan digunakan untuk uji aktivitas
Kecepatan aktivitas fosfatase 22 isolat bak-
PME-ase lebih lanjut.
teri pelarut fosfat (BPF) dalam membentuk zona
bening sangat bervariasi, ada yang mulai terben-
Uji Aktivitas Enzim Fosfomonoesterase
tuk pada hari ke-1 ada pula baru terbentuk pada
(PME-ase) hari ke-11 (Tabel 2), seperti pada penelitian yang
Sebanyak 1 ml supernatan sampel ditam- telah dilakukan oleh Azziz et al. (2011), penga-
bah dengan 1 ml substrat paranitrofenol fosfat matan zona bening baru dilakukan pada hari
(p-NPP fosfat) dan 4 ml bufer asetat pH 6,5 dan ke-8. Variasi besarnya diameter zonasi menun-
diinkubasi selama 1 jam pada suhu 38oC. Pada jukkan isolat BPF memiliki kemampuan yang
hasil inkubasi ditambahkan 1 ml CaCl2 0,5 M tinggi dalam melarutkan fosfat. Isolat BPF yang
dan 4 ml NaOH lalu dikocok dan disaring de- memiliki diameter terbesar selama pengamatan
ngan kertas saring Whatman No. 40. Kontrol di- 15 hari adalah isolat ML-2 sebesar 1,7 cm dan
buat dengan prosedur yang sama pada sampel, yang terkecil adalah isolat BL-8 dengan diame-
tetapi penambahan 1 ml larutan supernatan di- ter sebesar 0,6 cm. Berdasarkan diameter zona
lakukan setelah penambahan 1 ml CaCl2 0,5 M bening mengindikasikan kemampuan dalam me-
dan NaOH. Sampel dan kontrol diukur absorban- larutkan P, isolat ML-2, BL-1, LJ-3, SD-10, dan
nya dengan menggunakan spektrofotometer KD-5 pada hari pertama telah membentuk zona
pada panjang gelombang 410 nm. Standar dan bening. Aplikasi isolat BPF didasarkan pada ke-
blanko mendapat perlakuan yang sama seperti mampuannya dalam melarutkan fosfat baik di-
sampel. Standar menggunakan larutan parani- lihat dari kecepatan dan diameter zona bening
trofenol dengan konsentrasi 1–6 ppm, sedang- terbesar diharapkan dapat memperbaiki tanam-
kan untuk blanko menggunakan air destilasi. an yang mengalami defisiensi P. Luas daerah

26
 F Rahayu et al.: Potensi beberapa isolat bakteri pelarut fosfat asal lahan tebu di Jawa Timur berdasarkan aktivitas enzim fosfatase

zona bening secara kualitatif menunjukkan be-
sar kecilnya kemampuan bakteri dalam melarut-
kan fosfat. Berdasarkan Tabel 2, isolat unggul
sebagai bakteri pelarut fosfat adalah ML-2, LJ
II-3, BL-1, BD-2, SD-10, LJ I-3, BL-4, KD-5, dan
SD-7. Beberapa penelitian serupa juga telah di-
lakukan, seperti Nopparat et al. (2007); Gunadi
& Saraswati (1993); Gunadi et al. (1993) yang
mengisolasi dan mengukur kemampuan bakteri
dan fungi pelarut P yang memiliki kemampuan
berbeda-beda tergantung jenis strain dan dapat
diidentifikasi dari waktu terbentuk dan luas zona
bening. Mikroorganisme pelarut P yang unggul
akan menghasilkan diameter zona bening yang
paling besar dibandingkan koloni lainnya.

Tabel 2. Potensi isolat BPF dalam melarutkan fosfat

Diameter zona bening (cm)/Hari ke-
No Nama Isolat
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
1 SD-4 0 0 0 0 0,2 0,22 0,25 0,29 0,3 0,3 0,3 0,5 0,6 0,7 0,7
2 SD-7 0 0 0 0,55 0,57 0,6 0,65 0,7 0,75 0,95 0,96 0,98 1,1 1,2 1,3
3 SD-8 0 0 0 0 0 0 0 0 0,7 0,85 0,9 0,95 0,98 1,1 1,15
4 SD-10 0,35 0,4 0,45 0,5 0,55 0,6 0,6 0,65 0,69 0,7 0,8 1 1,2 1,35 1,45
5 SD-12 0 0 0 0 0 0,6 0,7 0,75 0,8 0,95 1,1 1,15 1,2 1,2 1,22
6 BL-1 0,3 0,35 0,41 0,51 0,59 0,65 0,69 0,75 0,78 0,85 0,95 1,15 1,25 1,35 1,5
7 BL-3 0 0 0 0 0 0 0 0 0,35 0,4 0,45 0,65 0,75 0,85 0,95
8 BL-4 0 0 0 0 0 0 0 0 0,75 0,85 0,95 1,15 1,25 1,35 1,4
9 BL-6 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0,3 0,45 0,5 0,6 0,65 0,7
10 BL-8 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0,1 0,1 0,3 0,4 0,5 0,6
11 BL-10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0,3 0,5 0,6 0,7 0,8
12 KD-1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0,1 0,15 0,35 0,45 0,55 0,65
13 KD-4 0 0 0 0 0 0 0 0 0,65 0,75 0,8 0,85 0,9 1,0 1,0
14 KD-5 0,2 0,25 0,3 0,3 0,35 0,4 0,45 0,56 0,56 0,6 0,65 0,8 0,87 1,05 1,35
15 KD-7 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0,1 0,15 0,35 0,45 0,55 0,65
16 ML-2 0,3 0,4 0,6 0,7 0,75 0,8 0,85 0,9 1 1,1 1,2 1,4 1,5 1,6 1,7
17 LJ I-3 0 0,6 0,65 0,65 0,66 0,7 0,7 0,75 0,8 0,85 0,9 1,1 1,2 1,3 1,4
18 LJ II-3 0,3 0,4 0,4 0,45 0,5 0,6 0,65 0,7 0,75 0,8 0,85 1,15 1,35 1,45 1,55
19 BD-1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0,3 0,35 0,55 0,65 0,75 0,85
20 BD-2 0 0,1 0,25 0,35 0,4 0,5 0,55 0,6 0,66 0,7 0,78 0,98 1,08 1,28 1,48
21 BD-5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0,4 0,6 0,8 0,9 1 1,1
22 ASB-4 0 0 0 0 0 0 0 0 0,3 0,5 0,55 0,75 0,85 0,95 1,05

Sembilan isolat BPF unggul selanjutnya di-

Gambar 1. Pola grafik konsentrasi fosfat terlarut
masing-masing isolat BPF unggul
uji dalam melarutkan P menggunakan media Pi-
kovskaya cair. Gambar 1 menunjukkan adanya
perbedaan kemampuan 9 isolat BPF dalam me-
larutkan P, meskipun memiliki pola yang hampir
sama. Aktivitas pelarutan fosfat mulai terlihat
12 jam setelah inkubasi dengan konsentrasi P
terlarut tertinggi 17,23 ppm yang dihasilkan
oleh isolat ML-2 dan terendah 13,34 ppm yang
dihasilkan oleh isolat SD-7. Kultur isolat BPF
mulai memasuki fase log pertumbuhan dan me-
ngeluarkan asam organik sehingga aktivitas pe-

27
 Buletin Tanaman Tembakau, Serat & Minyak Industri 6(1), April 2014:23−31
larutan menjadi tinggi. Menurut Rao (1994) da-
lam Fitriatin et al. (2009) bahwa mikroba pela-
rut fosfat menyekresikan sejumlah asam orga-
nik sehingga berpengaruh terhadap pelarutan
fosfat yang efektif. Penurunan konsentrasi P pa-
da waktu 24 jam setelah inokulasi diduga dise-
babkan adanya pemakaian kembali fosfat terla-
rut oleh kultur isolat BPF sebagai nutrisi untuk
aktivitas metabolismenya. Adanya fosfat terlarut
yang tinggi dalam medium dapat meningkatkan
pertumbuhan isolat BPF karena dimanfaatkan
untuk aktivitas metabolisme sel bakteri yaitu
untuk melakukan respirasi dan pertumbuhannya.
Dalam penelitian ini dilakukan pengukuran pH
media, karena isolat BPF dalam bermetabolisme
mengekskresikan sejumlah asam organik yang
dapat mempengaruhi perubahan pH media. Pe-
ningkatan asam-asam organik tersebut diikuti
dengan penurunan pH. Perubahan pH inilah
yang berperanan penting dalam meningkatkan
kelarutan fosfat. Aktivitas isolat BPF sangat ter-
gantung pada pH lingkungan. Kemasaman atau
pH sangat mempengaruhi aktivitas fosfatase
(Vepsalainen & Niemi (2002) dalam Fitriatin et
al. 2009). Kecepatan mineralisasi akan mening-
kat seiring dengan nilai pH yang sesuai bagi mi-
kroorganisme dan pelepasan fosfat akan me-
ningkat dengan meningkatnya nilai pH dari asam
ke netral. Aktivitas pelarutan P oleh isolat BPF
meningkat pada waktu 48 jam setelah inokulasi,
karena adanya pembentukan kembali asam or-
ganik (Fitriatin et al. 2009; Ginting et al. 2001).
Pengamatan aktivitas pelarutan P yang dilaku-
kan hanya sampai 48 jam (2 hari), sebenarnya
kurang dapat memberi gambaran jelas tentang
kemampuan isolat BPF dalam pelarutan P, ka-
rena masa inkubasi 1–2 hari masih merupakan
masa adaptasi isolat BPF dalam medium yang
kaya akan fosfat. Hal ini dapat diketahui seperti
pada Gambar 3, sampai dengan jam ke-72 se-
telah inokulasi kurva pertumbuhan masih terus
meningkat dan belum pada kondisi stasioner. Se-
perti penelitian yang telah dilakukan oleh Ra-
harjo et al. (2007) dan Qian et al. (2010), peng-
28
amatan dilakukan selama minimal 180 jam (1
minggu) atau lebih, sehingga dapat memberikan
gambaran jelas dan lengkap saat isolat BPF me-
ngalami aktivitas tertinggi dan terendah dalam
fase pertumbuhannya.
Aktivitas enzim dapat digambarkan oleh
aktivitas pelarutan fosfat oleh isolat BPF karena
proses pelarutan fosfat berkorelasi dengan pro-
duksi enzim PME-ase. Secara garis besar, pola
aktivitas enzim PME-ase tidak akan jauh berbeda
dengan pola aktivitas pelarutan fosfat. Berdasar-
kan pola aktivitas pelarutan P dapat diketahui
bahwa setelah masa inkubasi 48 jam peningkat-
an aktivitas enzim masih terus meningkat.
Gambar 2. Perubahan pH medium masing-masing
isolat BPF
Berdasarkan Gambar 2 di atas, diketahui
bahwa penurunan nilai pH dimulai dari awal
masa inkubasi. Hal ini terjadi karena menurun-
nya pH media sebelum inokulasi isolat BPF lebih
menuju pada kondisi masam. Sebagai akibat
pemanasan pada saat sterilisasi menyebabkan
rusaknya ikatan Ca-fosfat menjadi bentuk fosfat
terlarut. Selain itu, penurunan pH media selama
masa inkubasi disebabkan karena isolat BPF
menghasilkan asam-asam organik dalam aktivi-
tasnya, sehingga menurunkan pH media. Hasil
penelitian Yasmin & Bano (2011) menunjukkan
bahwa pH medium mempengaruhi aktivitas fos-
fatase dan dijelaskan lebih lanjut bahwa aktivitas
fosfatasenya lebih dominan pada pH masam.
Berdasarkan Gambar 2 diketahui bahwa sampai
dengan waktu 48 jam setelah inokulasi, isolat
 F Rahayu et al.: Potensi beberapa isolat bakteri pelarut fosfat asal lahan tebu di Jawa Timur berdasarkan aktivitas enzim fosfatase
BPF masih melakukan metabolisme secara aktif
dan belum menunjukkan terjadinya perubahan.
Gambar 3. Kurva pertumbuhan masing-masing isolat
BPF unggul
Berdasarkan Gambar 3 kurva pertumbuh-
an isolat BPF tampak sangat lambat dikarena-
kan media, sampai dengan jam ke-72 isolat BPF
masih mengalami pertumbuhan dan belum men-
capai fase logaritmik. Hal ini dapat disebabkan
karena media pertumbuhan yang digunakan
merupakan media kaya akan P yang membutuh-
kan bakteri untuk melakukan metabolisme lebih
berat, dibanding jika media pertumbuhan yang
digunakan adalah media Nutrient Broth (NB).
Kemampuan isolat BPF dalam melarutkan fosfat
tampak adanya korelasi hingga waktu 48 jam
setelah inokulasi, isolat BPF masih beraktivitas
secara terus-menerus dan belum melalui fase
log dan fase stasioner. Pada awal masa inkubasi
hingga pada jam ke-12, isolat baru mulai mema-
suki fase lag atau fase adaptasi. Hal ini juga di-
tunjukkan dari jumlah konsentrasi P terlarut
yang tidak jauh berbeda dengan awal inkubasi.
Penurunan konsentrasi P terlarut yang terjadi
dapat disebabkan karena pemakaian kembali
unsur P oleh kultur isolat BPF untuk bermetabo-
lisme.
KESIMPULAN DAN SARAN
Isolat unggul bakteri pelarut fosfat adalah
SD-10, BL-1, KD-5, ML-2, LJ II-3 yang menunjuk-
kan aktivitas fosfatase di hari pertama, sedang-
kan LJ I-3 dan BD-2 menunjukkan aktivitas fos-
fatase pada hari kedua dan SD-7 serta BL-4 ter-
masuk dalam 10 besar isolat dengan diameter
zona bening terbesar. Luas daerah zona bening
secara kualitatif menunjukkan besar kecilnya
kemampuan bakteri dalam melarutkan fosfat.
Isolat BPF tersebut diharapkan dapat membantu
memperbaiki ketersediaan P di tanah dan mam-
pu memperbaiki kualitas pertumbuhan dan per-
kembangan tanaman.
Untuk penelitian selanjutnya, diharapkan
pengamatan isolat BPF seharusnya diamati hing-
ga hari ke-15, sama seperti pengamatan aktivi-
tas pada media Pikovskaya padat sehingga rit-
me aktivitas isolat BPF dapat diketahui dengan
jelas.
Berdasarkan hasil kegiatan penelitian ini,
9 isolat BPF unggul merupakan isolat yang me-
miliki potensi untuk dikembangkan sebagai bio-
aktivator dalam pembuatan pupuk hayati yang
dapat meningkatkan ketersediaan fosfat terlarut
yang secara langsung dapat diserap oleh tanam-
an. Perlu adanya penelitian lebih lanjut untuk
mengetahui seberapa besar pengaruh positif
terhadap pertumbuhan tanaman yang disebab-
kan penambahan isolat BPF.
UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih penulis haturkan kepada Ir.
Mastur, M.Si.Ph.D. dan Ir. Budi Santoso, MP.
yang telah banyak memberikan masukan atas
kesempurnaan tulisan ini. Penulis juga mengha-
turkan terima kasih kepada Prof. Ir. Nurindah,
Ph.D., Ir. Budi Hariyono, MP., dan Ir. Prima D.
Riajaya, M.Phil. yang banyak memberikan du-
kungan hingga terselesaikannya tulisan ini,
serta Suminar D.N., STP. dan adik-adik teknisi
yang ada di Laboratorium Bioprosesing Balai
Penelitian Tanaman Pemanis dan Serat atas
bantuannya hingga kegiatan penelitian ini dapat
29
 Buletin Tanaman Tembakau, Serat & Minyak Industri 6(1), April 2014:23−31
terselesaikan dengan baik. Semoga karya ilmiah
ini bermanfaat.
DAFTAR PUSTAKA
Azziz, G, Bajsa, N, Haghjou, T, Taule, C, Valverde, A,
Igual, JM & Arias, A 2011, Abundance, diversity,
and prospecting of culturable phosphate solubi-
lizing bacteria on soils under crop-pasture rota-
tions in a no-tillage regime in Uruguay, Appl.
Soil. Ecol. (2011): 0929–1393, doi:10.1016/j.
apsoil.2011.10.004.
Alam, S, Khalil, S, Ayub, N & Rashid, M 2002, In vitro
solubilization of inorganic phosphate by phos-
phate solubilizing microorganism (PSM) from
maize rhizosphere, Intl. J. Agric. Biol. 4:454–
458.
Chen, YP, Rekha, PD, Arunshen, AB, Lai, WA &
Young, CC 2006, Phosphate solubilizing bac-
teria from subtropical soil and their tricalcium
phosphate solubilizing abilities, Appl. Soil Ecol.
34:33–41.
FNCA Biofertilizer Project Group 2006, Biofertilizer
manual, Forum for Nuclear Cooperation in Asia
(FNCA), Japan Atomic Industrial Forum, Japan.
Fitriatin, BN, Yuniarti, A, Mulyani, O, Fauziah, FS &
Tiara, MD 2009, Pengaruh mikroorganisme pe-
larut fosfat dan pupuk P terhadap P tersedia,
aktivitas fosfatase, populasi mikroorganisme
pelarut fosfat, konsentrasi P tanaman dan hasil
padi gogo (Oryza sativa L.) pada Ultisols, Jurnal
Agrikultura 20(3):210–215.
Gaur, AC 1981, Phospho-microorganism and varians
transformation in compost technology, Project
Field Document No. 13 FAO. p. 106–111.
Gunadi, DH, Saraswati, R & Lestari, Y 1993, Kemam-
puan melarutkan fosfat dari beberapa isolat bak-
teri asal tanah dan pupuk kandang sapi, Mena-
ra Perkebunan 61(2):44–49.
Gunadi, DH & Saraswati, R 1993, Kemampuan mela-
rutkan fosfat dari beberapa isolat fungi pelarut
fosfat, Menara Perkebunan 61(3):61–66.
Ginting, RCB, Saraswati, R & Husen, E 2001, Mikro-
organisme pelarut fosfat, diakses pada 29 De-
sember 2009 (http://balittanah.litbang.deptan.go.
id/eng/dokumentasi/buku/pupuk/pupuk7.pdf).
30
Gyaneshwar, P, Kumar, GN, Parekh, LJ & Poole, PS
2002, Role of soil microorganisms in improving
P nutrition of plants, Plant Soil 245:83–93.
Havlin, JL, Beaton, JD, Tisdale, SL & Nelson, WL
1999, Soil fertility and fertilizers: an introduc-
tion to nutrient management, Prentice Hall, New
York, 499 p.
Hilda, R & Fraga, R 2000, Phosphate solubilizing
bacteria and their role in plant growth pro-
motion, Biotech. Adv. 17:319–359.
Hodges, SC 2013, Soil fertility basics, Soil Science
Extension North Carolina State University, diak-
ses pada 23 Juli 2012 (http://www.plantstress.
com/articles/min_deficiency_i/soil_fertility.pdf.).
Kang, SC, Hat, CG, Lee, TG & Maheshwari, DK 2002,
Solubilization of insoluble inorganic phosphates
by a soil-inhabiting fungus Fomitopsis sp. PS
102, Curr. Sci. 82:439–442.
Khiari, L & Parent, LE 2005, Phosphorus transfor-
mations in acid light-textured soils treated with
dry swine manure, Can. J. Soil Sci. 85:75–87.
Ludwick, AE 1998, Phosphorus mobility in pers-
pective, Potash & Phosphate Institute (PPI) and
The Potash & Phosphate Institute of Canada
(PPIC).
Mikkelsen, RI 2005, A closer look at phosphorus
uptake by plants, Potash & Phosphate Institute
(PPI) and The Potash & Phosphate Institute of
Canada (PPIC).
Nopparat, C, Jatupornpipat, M & Rittiboon, A 2007,
Isolation of phosphate solubilizing fungi in soil
from Kanchanaburi, Thailand, KMITL Sci. Tech.
J. 7(S2):137–146.
Pikovskaya, RI 1948, Mobilization of phosphorus in
soil in connection with vital activity of some
microbial species, Microbiology 17:362–370.
Ponmurugan, P & Gopi, C 2006, Distribution pattern
and screening of phosphate solubilizing bacteria
isolated from different food and forage crops, J.
Agron. 5:600–604.
Pradhan, N & Sukla, LB 2005, Solubilization of in-
organic phosphate by fungi isolated from agri-
culture soil, African J. Biotechnol. 5:850–854.
Qian, Y, Shi, J, Chen, Y, Lou, L, Cui, X, Cao, R, Li, P
& Tang, J 2010, Characterization of phosphate
solubilizing bacteria in sediment from a shallow
eutrophic lake and a wetland: Isolation, mole-
 F Rahayu et al.: Potensi beberapa isolat bakteri pelarut fosfat asal lahan tebu di Jawa Timur berdasarkan aktivitas enzim fosfatase
cular identification and phosphorus release abi-
lity determination, Molecules 15:8518–8533.
Raharjo, B, Suprihadi, A & Agustina, DK 2007,
Pelarutan fosfat anorganik oleh kultur campur
jamur pelarut fosfat secara in vitro, Jurnal Sains
& Matematika (JSM) 15(2):45–54.
Rosmarkam, A & Yuwono, NW 2002, Ilmu kesuburan
tanah, Kanisius, Yogyakarta.
Richardson, AE 2001, Prospects for using soil micro-
organisms to improve the acquisition of phos-
phorrus by plants, Aust. J. Plant Physiol. 28:
897–906.
Tabatabai, MA & Bremner, JM 1969, Use of p-nitro-
phenyl phosphate assay of soil phosphatase ac-
tivity, Soil. Biol. Biochem. 1:301–307.
Whitelaw, MA 2000, Growth promotion of plants ino-
culated with phosphate solubilizing fungi, Adv.
Agron. 69:99–151.
Yasmin, H & Bano, A 2011, Isolation and characteri-
zation of phosphate solubilizing bacteria from
rhizosphere soil of weeds of khewra salt range
and attock, Pak. J. Bot., 43(3):1663–1668.
31