Stimulator dan Aktivitas Terapi Kekebalan Tubuh dari Tinospora cordifolia: Pedang

Bermata Dua melawan Salmonellosis

Penelitian ini bertujuan untuk menentukan aktivitas ekstrak air dan metanol Tinospora cordifolia
(AETC dan METC) terhadap Salmonella typhimurium. Aktivitas anti-Salmonella in vitro dari T.
cordifolia ditentukan melalui pengenceran kaldu dan uji distribusi well agar. Potensi yang
merangsang kekebalan dari AETC atau METC ditentukan dengan mengukur kadar sitokin dalam
supernatan kultur dari makrofag murine J774 yang diobati. Aktivitas antibakteri AETC atau
METC ditentukan dengan mengobati makrofag yang terinfeksi S. typhimurium dan tikus BALB /
C. Toksisitas AETC atau METC ditentukan dengan mengukur kadar penanda peradangan hati
aspartate transaminase (AST) dan alanine transaminase (ALT) dan enzim antioksidan. Makrofag
yang diobati dengan AETC atau METC mengeluarkan tingkat IFN-γ, TNF-α, dan IL-1β yang lebih
besar. METC menunjukkan aktivitas yang lebih besar terhadap infeksi S. typhimurium pada
makrofag dan tikus juga. Pengobatan dengan METC menghasilkan peningkatan kelangsungan
hidup dan mengurangi beban bakteri pada tikus yang terinfeksi S. typhimurium. Selain itu,
pengobatan METC atau AETC mengurangi peradangan hati dan menyelamatkan tingkat enzim
antioksidan pada tikus yang terinfeksi S. typhimurium. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa
penggunaan T. cordifolia dapat bertindak sebagai pedang bermata dua dalam memerangi
salmonellosis.

1.) Introduction
Antibiotik dalam sistem terapi modern telah banyak digunakan dalam mengendalikan
penyakit menular [1]. Karena penggunaan antibiotik yang ekstensif, telah muncul jenis-jenis
patogen yang kebal terhadap beberapa obat yang menjadi tantangan serius bagi para dokter [2].
Ada kebutuhan mendesak untuk menemukan pengganti yang cocok untuk beberapa antibiotik yang
saat ini digunakan [3-5]. Selain itu, beberapa agen antibakteri dan antijamur menunjukkan efek
serius yang tidak diinginkan pada orang yang diobati [6-8].
Infeksi Salmonella merupakan masalah kesehatan masyarakat yang penting di seluruh
dunia [9]. Salmonella spp. menyebabkan berbagai penyakit, dari enteritis hingga infeksi fatal pada
hewan, dan infeksi yang ditularkan melalui makanan hingga demam tifoid pada manusia. Tifoid
adalah salah satu penyakit paling menular di India [4]. Laporan terbaru tentang penurunan
kerentanan Salmonella terhadap beberapa antibiotik merupakan masalah besar di antara para
dokter dan ilmuwan [4]. Kelangsungan hidup intraseluler Salmonella menghambat eliminasi dari
inang dan dengan demikian pengobatan tifus. Selain itu, Salmonella mengadopsi banyak strategi
untuk menghindari sistem kekebalan tubuh inang [10, 11].
T. cordifolia, umumnya dikenal sebagai Guduchi atau Giloy, digunakan sebagai obat
selama berabad-abad dalam sistem pengobatan Ayurvedic dan Unani. Ekstrak T. cordifolia
mengandung banyak konstituen seperti alkaloid, steroid, glikosida, dan polikarida [12]. Telah
terbukti memiliki sifat antidiabetes, antioksidan, antihepatotoksik, dan imunomodulator [13, 14].
Ekstrak air dari T. cordifolia telah terbukti melindungi terhadap infeksi Escherichia coli dan
Staphylococcus aureus [15, 16]. T. cordifolia meningkatkan aktivitas bakterisida fagositik dan
intraseluler makrofag dan neutrofil terhadap peritonitis yang diinduksi E. coli [15]. Bahan aktif, G
1-4A, dari batang kering tikus T. cordifolia yang dilindungi terhadap lipopolisakarida- (LPS-)
diinduksi syok endotoksik dengan memodulasi respon makrofag [17]. Telah terbukti
mengendalikan infeksi Mycobacterium tuberculosis yang resistan terhadap obat dengan
menginduksi Th1 respon imun [18]. Ekstrak T. cordifolia menunjukkan potensi anti tumor
terhadap karsinogenesis kulit pada model tikus [19].
Dalam penelitian ini, kami menentukan aktivitas ekstrak air dan metanol dari T. cordifolia
terhadap S. typhimurium. Hasil penelitian menunjukkan bahwa T. cordifolia efektif dalam
mengendalikan pertumbuhan S. typhimurium dalam makrofag, juga pada tikus.
2. Bahan-bahan dan metode-metode
2.1. Materi.
Nutrient Broth dibeli dari Hi Media Pvt. Ltd. Mumbai, India. S. typhimurium (nomor
ATCC 23564) diperoleh dari American Type Culture Collection (ATCC), Rockville, AS. Metanol
grade kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) dibeli dari Thermo-Fisher Scientific (Waltham,
MA, USA). Kit sitokin IFN-γ, TNF-α, dan IL-1β dan ELISA dibeli dari PeproTech (Rocky Hill,
NJ, USA). Kit estimasi Superoksida dismutase (SOD) dan katalase (CAT) dibeli dari Biovision
Inc. (Milpitas, CA, USA). Kit penanda peradangan hati, ALT dan AST, dibeli dari Quimica Clinica
Aplicada (Amposta, Tarragona, Spanyol).
2.2. Tikus
Tikus BALB / C pada usia 12 minggu (masing-masing dengan berat 24 ± 4g) diperoleh
dari fasilitas rumah hewan dari College of Applied Medical Sciences, Universitas Qassim. Teknik
yang digunakan untuk pendarahan, injeksi, dan pengorbanan hewan telah disetujui oleh komite
etika hewan di kampus.
2.3. Garis Sel Makrofag
Garis sel makrofag murine J 774 dipertahankan dalam Dulbecco dimodifikasi media Eagle
(DMEM) seperti yang dijelaskan sebelumnya [20].
2.4. Persiapan Ekstrak dari Batang T. cordifolia
Batang kering dari T. cordifolia diperoleh dari toko herbal Hakeem Ajmal Khan Unani
Tibbiya College, Universitas Muslim Aligarh, Aligarh, India. Batangnya bubuk, dan ekstrak air
dan metanol dari T. cordifolia (AETC dan METC) disiapkan seperti yang dijelaskan sebelumnya
[21]. Secara singkat, 25 gram bubuk direndam dalam 250 ml metanol selama 12 jam sambil diaduk
terus menerus. Suspensi direfluks di bawah tekanan yang dikurangi selama 6 jam dan disaring
melalui kertas Whatmanfilter (nomor 1). Serat yang mengandung metanol dipekatkan
menggunakan rotary evaporator, sedangkan ekstrak air dikeringkan menggunakan water bath.
2.5. Penentuan Aktivitas Antibakteri Ekstrak T. cordifolia
 Aktivitas anti-Salmonella dari AETC atau METC dilakukan dengan metode penyebaran
agar-agar [21]. Kultur S. typhi-murium diseka di atas lempeng agar nutrien menggunakan cotton
swab steril dan sumur dibuat menggunakan pemotong sumur steril (6 mm). Berbagai konsentrasi
(25, 50, dan 100 μg / sumur) AETC atau METC dipindahkan secara aseptik ke sumur dan
diinkubasi pada suhu 37 ° C. Setelah 24 jam, diameter zona hambatan diukur.
2.6. Minimum Inhibitory Concentration (MIC) dari ekstrak T. cordifolia
Metode agar diion adalah metode kualitatif yang berguna untuk mendeteksi sifat
antimikroba. Tetapi ini bukan metode yang tepat untuk menentukan aktivitas antimikroba relatif
karena ekstrak yang kurang aktif dan lebih dapat digunakan dapat menunjukkan zona
penghambatan yang meningkat dibandingkan dengan ekstrak yang lebih aktif dan kurang dapat
digunakan. Dengan demikian, penting untuk menentukan konsentrasi hambat minimum (MIC)
dari ekstrak dalam larutan. MIC ditentukan dengan menggunakan metode dilusi kaldu [22]. AETC
dan METC kering ditimbang dan disuspensikan dalam air untuk menghasilkan konsentrasi 20 mg
/ ml. Berbagai konsentrasi AETC atau METC (1 μg / ml hingga 2000 μg / ml) diambil pada pelat
mikrotiter 96-baik yang mengandung media kaldu. Setelah itu, 100 μl inokulum yang mengandung
1 × 105 CFU S. typhimurium ditambahkan ke masing-masing sumur. Sumur yang mengandung S.
typhimurium (tidak ada obat atau ekstrak) digunakan sebagai kontrol negatif. Konsentrasi (0,01-
100 μg / ml) dari standar obat antibakteri juga digunakan sebagai kontrol positif. Pelat mikrotiter
diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 ° C. Konsentrasi ekstrak terendah yang tidak menunjukkan
pertumbuhan yang terlihat setelah inkubasi dianggap sebagai nilai MIC ekstrak.
2.7. Efek Pengobatan AETC atau METC pada Produksi Sitokin
Garis sel makrofag Murine (J774) diunggulkan ke dalam piring kultur sel 24-sumur pada
kepadatan 2 × 105 sel per sumur dan diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 jam. Sel dicuci dan
diobati dengan berbagai dosis (0, 100, 200, dan 500 μg / ml) AETC atau METC. Setelah 24 jam
perawatan, suplementasi dikumpulkan dan jumlah interferonma (IFN-γ), tumor necrosis factor-
alpha (TNF-α), dan interleukin-1 beta (IL-1β) ditentukan oleh ELISA seperti yang dijelaskan
sebelumnya [23].
2.8. Pengaruh AETC dan METC pada Penggandaan Intraseluler S. typhimurium
Aktivitas anti-Salmonella dari AETC atau METC ditentukan terhadap pertumbuhan
intraseluler dari S. typhimurium dalam makrofag seperti yang dijelaskan sebelumnya [24].
Makrofag diunggulkan dalam rangkap tiga dalam 24-well, pelat kultur steril rata di bawah dengan
1 × 105 sel / baik dalam DMEM dengan 10% panas serum janin janin (FBS) yang dilemahkan
dengan panas dan diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam 5% CO2 selama 24 jam .
Sel dicuci dan DMEM segar ditambahkan. Setiap sumur terinfeksi dengan S. typhimurium
(5 × 105 CFU / baik) dalam volume minimum DMEM. Setelah 4 jam inkubasi, sel-sel dicuci untuk
menghilangkan bakteri yang tidak berfagositosis. Berbagai konsentrasi AETC atau METC
ditambahkan ke masing-masing sumur seperti yang dijelaskan pada bagian di atas. Setelah 24 jam
inkubasi, makrofag dilisiskan dengan 0,1% Tween-20 dan bakteri dipulihkan setelah sentrifugasi.
Jumlah unit pembentuk koloni (CFU) S. typhimurium ditentukan dengan kultur pada media agar
Luria setelah inkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 jam.
2.9. Infeksi BALB / C Tikus dengan S. typhimurium.
Sel S. typhimurium dicuci dengan salin normal steril pada sentrifugasi kecepatan rendah
(2000 rpm) dan diencerkan ke konsentrasi yang sesuai dalam salin sesaat sebelum injeksi. Setiap
tikus terinfeksi secara intravena dengan dosis yang mematikan dari 5 × 105 bakteri S. typhimurium
yang layak seperti yang dijelaskan sebelumnya [21].
2.10. Pengobatan tikus yang terinfeksi S. typhimurium dengan
T. cordifolia. Tikus diperlakukan dengan dua dosis berbeda (50) dan 100 mg / kg) AETC
atau METC secara oral selama 7 hari (hari 1 ke hari 7) setelah infeksi S. typhimurium (hari 0).
Standar sefiksim antibiotik digunakan dengan dosis 5 mg / kg. Tikus dibagi menjadi beberapa
kelompok berikut: (1) saline, (2) AETC-50, (3) AETC-100, (4) METC-50, (5) METC-100, dan (6)
sefiksim-5 mg / kg, dan masing-masing kelompok mengandung 10 tikus Tikus diamati setiap hari
untuk morbiditasnya dan kematian.
2.11. Analisis Kuantitatif S. typhimurium di Limpa.
Kemanjuran pengobatan ditentukan dengan menilai kelangsungan hidup dan beban bakteri
dalam limpa tikus yang tidak diobati atau diobati dengan ekstrak T. cordifolia. Tiga tikus dari
masing-masing kelompok dikorbankan pada hari ke 5 pasca infeksi S. typhimurium, dan limpa
diambil secara aseptik seperti yang dijelaskan sebelumnya [21, 22]. Bagian jaringan limpa yang
ditimbang sama dihomogenisasi dalam 5 ml larutan garam normal steril, dan beragam
Pengenceran suspensi dilapisi pada pelat agar NB. Pelat diinkubasi pada suhu 37 ° C
selama 24-36 jam. Itu jumlah koloni S. typhimurium yang layak dihitung dan beban bakteri
ditentukan dengan mengalikan dengan faktor pengenceran.
2.12. Analisis Biokimia
Pada hari ke 5 pasca perawatan, level enzim antioksidan seperti superoksida dismutase
(SOD) dan katalase (CAT) ditentukan dalam jaringan limpa homogenat seperti yang dijelaskan
sebelumnya [25]. Jaringan limpa dari kelompok tikus yang tidak diobati atau diobati dibilas dalam
keadaan dingin saline fosfat-buffered (PBS) dan jaringan ikat telah dihapus. Sampel jaringan
kemudian dihomogenisasi dengan PBS dan disentrifugasi pada 5000g selama 15 menit pada suhu
4 ° C untuk dikumpulkan fraksi supernatan, yang digunakan untuk pengujian
Kegiatan SOD dan CAT. Untuk menentukan toksisitas hati, kadar aspartate transaminase
(AST) dan alanine transaminase (ALT), yang tanda-tanda peradangan hati, ditentukan dalam darah
dari kelompok tikus yang tidak diobati atau diobati [25].
2.13. Analisis statistic
Analisis kelangsungan hidup tikus itu dilakukan menggunakan kurva Kaplan-Meier, dan
berbagai kelompok dibandingkan dengan uji log-rank. Beban bakteri (CFU) di Indonesia limpa
dianalisis dengan ANOVA satu arah menggunakan Grafik-Perangkat lunak Pad Prism versi 5.0.
3. Hasil
3.1. AETC dan METC Ditampilkan Di Vitro Anti-Salmonella Aktivitas. AETC atau METC
menunjukkan aktivitas yang kuat melawan strain S. typhimurium saat ini yang diukur dengan zona
penghambatan. Aktivitas anti-Salmonella dari METC adalah lebih tinggi dibandingkan dengan
AETC. Zona hambatan ditemukan 4, 6, dan 12mm dalam sumur yang mengandung 25, 50, dan
100 μg METC, masing-masing, sedangkan ada 1, 3, dan 5mm zona hambatan dalam sumur yang
mengandung hal yang sama jumlah AETC.
Konsentrasi hambat minimum (MIC) AETC atau METC ditentukan terhadap S. typhimurium
dengan melihat kekeruhan media pertumbuhan. S. typhimurium melakukannya tidak
menunjukkan pertumbuhan yang terlihat pada konsentrasi 32 μg / ml METC atau 64 μg / ml AETC.
Padahal obat standar sefiksim menunjukkan MIC pada konsentrasi 0,20 μg / ml.
3.2. Perawatan dengan AETC atau METC Merangsang Sekresi dari Sitokin Proinflamasi oleh
Makrofag.
Efek dari AETC atau METC pada produksi sitokin oleh makrofag dinilai dengan
menentukan tingkat proinflamasi sitokin, termasuk IFN-γ, TNF-α, dan IL-1β in supernatan kultur
dari makrofag yang tidak diobati atau diobati. Tingkat IFN-γ, TNF-α, dan IL-1β lebih tinggi di
supernatan makrofag diperlakukan dengan AETC atau METC bila dibandingkan dengan makrofag
yang tidak diobati (Gambar 1 (a)). Makrofag diobati dengan AETC pada dosis tersebut 100, 200,
dan 500 μg / ml menghasilkan 38,33 ± 6,888, 75,00 ± 8,660, dan 86,67 ± 13,48 pg / ml IFN-γ,
masing-masing, sedangkan makrofag diperlakukan dengan dosis serupa METC menghasilkan
56,00 ± 5,292, 124,0 ± 16,65, dan 144,0 ± 11,02 pg / ml IFN-γ (Gambar 1 (a)). Makrofag di control
kelompok mengeluarkan jumlah yang hampir tidak terdeteksi (0–9 pg / ml) IFN-γ (Gambar 1 (a)).
Tingkat TNF-α, sitokin proinflamasi yang penting, juga diukur dalam supernatan makrofag
tidak diobati atau diobati dengan AETC atau METC. Makrofag diobati dengan AETCat pada dosis
100, 200, dan 500 μg / ml yang diproduksi 175,3 ± 44,46, 859,0 ± 93,63, dan 1123 ± 164,1 pg /
ml TNF-α, masing-masing, sedangkan makrofag diperlakukan dengan dosis serupa dari METC
menghasilkan 559,7 ± 38,77, 1591 ± 94,03, dan 2185 ± 131,1 pg / ml TNF-α (Gambar 1 (b)). Itu
sekresi TNF-α tidak terdeteksi di supernatant kelompok kontrol makrofag (Gambar 1 (b)). Seperti
IFN-γ dan TNF-α, tingkat IL-1β juga signifikan lebih tinggi pada supernatan makrofag dirawat
dengan AETC atau METC. Makrofag dirawat dengan AETC pada dosis 100, 200, dan 500 μg / ml
diproduksi 132,7 ± 29,36, 313,3 ± 19,72, dan 667,7 ± 127,1 pg / ml IL-1β, sedangkan pengobatan
dengan dosis serupa dari METC menghasilkan produksi 222,3 ± 56,91, 676,3 ± 47,01, dan 978,3
± 111,6 pg / ml IL-1β (Gambar 1 (c)). Makrofag dalam kelompok kontrol mengeluarkan IL-1β
dalam kisaran 4–12 pg / ml (Gambar 1 (c)).
3.3. Perawatan dengan AETC atau METC Menghambat Multiplikasi intraseluler dari S.
typhimurium
Efeknya AETC atau METC pada kelangsungan hidup intraseluler S. typhimurium dinilai
dengan mengobati makrofag yang terinfeksi. Pengobatan dengan AETC atau METC secara
substansial mengurangi beban bakteri dalam makrofag yang dirawat. Ada pengurangan yang lebih
besar dalam beban bakteri dalam makrofag yang dirawat dengan METC dibandingkan dengan
yang ada di makrofag yang diobati dengan AETC (Gambar 2). Beban bakteri dalam makrofag
yang terinfeksi, tidak diobati dengan AETC atau METC, tidak ditemukan menjadi 635475 ±
96803. Unit pembentuk koloni (CFU) dari S. typhimurium dalam makrofag diobati dengan METC
di dosis 100, 200, dan 500 μg / ml ditemukan 2,9 × 105, 1,44 × 105, 4,5 × 104, masing-masing,
dibandingkan dengan 5,78 × 105, dari 5 × 105

Gambar 2: Pengobatan dengan AETC atau METC menghambat intraseluler

kelangsungan hidup S. typhimurium di makrofag. Makrofag adalah
terinfeksi dengan S. typhimurium pada MOI = 5. Setelah 4 jam
inkubasi, sel-sel dicuci untuk menghilangkan bakteri yang tidak berfositosis.
Sel diperlakukan dengan berbagai konsentrasi (100, 200, dan
500 μg / ml). Setelah 24 jam inkubasi, makrofag dilisis dengan
0,1% Tween-20 dan bakteri pulih setelah sentrifugasi.
CFU S. typhimurium ditentukan dengan mengkulturkan Luria
media agar pada suhu 37 ° C selama 24 jam. Hasil yang ditampilkan representatif
dari tiga percobaan independen dan disajikan di sini sebagai mean ±
SD. ∗∗ p <0 01 dan ∗∗∗ p <0 001 dibandingkan dengan yang tidak diobati
kontrol yang terinfeksi.
3,32 × 105, dan 1,76 × 105 CFU di makrofag diobati dengan
masing-masing dosis AETC yang sama (Gambar 2).
3.4. Administrasi AETC atau METC Meningkatkan Kelangsungan Hidup
dari tikus yang terinfeksi S. typhimurium. Efek terapi AETC
atau METC ditentukan dengan mengobati S. typhimurium yang terinfeksi
tikus dengan dosis 50 dan 100 mg / kg selama 7 kali berturut-turut
hari. Tikus diamati selama 50 hari untuk memantau
bertahan hidup. Tingkat kematian pada kelompok tikus yang tidak diobati
ditemukan 100% pada hari ke 15 pasca infeksi, sedangkan semuanya
tikus dalam kelompok yang diobati dengan dosis AETC 50 mg / kg meninggal
pada hari ke 40 pasca infeksi (Gambar 3 (a)). Namun, tikus di
kelompok yang diobati dengan dosis 100 mg / kg AETC menunjukkan
Tingkat kelangsungan hidup 20% pada hari ke-50 pasca infeksi (Gambar 3 (a)). Itu
kelangsungan hidup rata-rata tikus dalam kelompok yang tidak diobati ditemukan
menjadi 7 hari, sedangkan tikus dalam kelompok diperlakukan dengan AETC
pada dosis 50 mg / kg dan 100 mg / kg memiliki kelangsungan hidup rata-rata
masing-masing 12 dan 18 hari. Tingkat kelangsungan hidup tikus
pada kelompok yang diobati dengan AETC dengan dosis 100 mg / kg adalah
ditemukan secara signifikan lebih besar dibandingkan dengan tikus
dalam kelompok yang tidak diobati (p <0 01).
Di sisi lain, tikus dalam kelompok dirawat di
dosis 50 dan 100 mg / kg METC menunjukkan 20% dan 50%
tingkat kelangsungan hidup, masing-masing. Median kelangsungan hidup tikus di
kelompok yang diobati dengan METC pada dosis 50 mg / kg dan
100 mg / kg ditemukan 21,5 dan 45 hari, masing-masing,
yang secara signifikan lebih besar dari itu (6 hari) dari
kelompok tikus yang tidak diobati (p <0 001). Tikus dalam kelompok
diobati dengan cefixime dengan dosis 5 mg / kg menunjukkan 60%
tingkat kelangsungan hidup dengan kelangsungan hidup rata-rata> 45 hari (Gambar 3 (a)).
Tingkat keparahan infeksi S. typhimurium ditentukan
dengan membiakkan homogenat jaringan limpa dari yang tidak diobati
atau tikus yang diberi perlakuan pada pelat agar NB. Ada yang tertinggi
jumlah CFU (221688 ± 34067) di jaringan limpa
homogenat dari tikus yang tidak diobati (Gambar 3 (b)). Tikus di dalam
kelompok yang diobati dengan dosis AETC 50 dan 100 mg / kg
menunjukkan beban bakteri yang lebih rendah (189892 ± 24147 dan 65057 ±
23096, resp.) Dalam limpa mereka (Gambar 3 (b)). Perawatan dengan
AETC dengan dosis 100 mg / kg menunjukkan penurunan yang signifikan
dalam beban bakteri dibandingkan dengan tikus di yang tidak diobati
grup (p <0 001). Selain itu, tikus dalam kelompok dirawat di
dosis 50 dan 100 mg / kg METC menunjukkan lebih besar
pengurangan beban bakteri (60876 ± 16656 dan 20357 ±
8156, resp.) (Gambar 3 (b)) dan pengurangan ini ditemukan
signifikan bila dibandingkan dengan tikus yang tidak diobati (p <0 001).
Hasil ini menunjukkan bahwa METC menunjukkan anti-Salmonella
aktivitas lebih baik daripada AETC pada dosis yang sama. Namun demikian
pengobatan dengan cefixime (5 mg / kg) menghasilkan yang tertinggi
pengurangan beban bakteri (14455 ± 7864) dibandingkan
untuk semua kelompok lain dalam penelitian ini (Gambar 3 (b)).
Gambar 3: Pengobatan dengan AETC atau METC meningkatkan kelangsungan hidup tikus yang
terinfeksi S. typhimurium dan mengurangi beban bakteri dalam limpa.
tikus yang terinfeksi. (a) Tikus terinfeksi dengan 5 × 105 CFU S. typhimurium melalui rute
intravena. Setelah 24 jam infeksi, tikus diberi
diobati secara oral dengan AETC atau METC pada dosis 50 dan 100 mg / kg selama 7 hari berturut-
turut pasca infeksi. Sekelompok tikus diobati dengan
sefiksim antibiotik standar dengan dosis 5 mg / kg. Tikus diamati selama 50 hari untuk memeriksa
kelangsungan hidup mereka. Kontrol yang tidak diobati (●), AETC-
50 mg / kg (□), METC-50 mg / kg (▽), AETC-100 mg / kg (■), METC-100 mg / kg (▼), dan
cefixime-5 mg / kg (○). Kontrol yang tidak diobati versus
AETC-100 mg / kg (p <0 01), kontrol yang tidak diobati versus METC-100 mg / kg (p <0 001),
kontrol yang tidak diobati versus sefiksim-5 mg / kg (p <0 001).
(B) Pada hari 5 pasca infeksi S. typhimurium, tiga tikus dari kelompok yang tidak diobati atau
diobati dikorbankan dan limpa mereka diambil
untuk homogenisasi. Homogenat jaringan limpa dikultur untuk menentukan beban bakteri seperti
yang dijelaskan dalam bagian metode.
∗∗∗ p <0 001 dibandingkan dengan kontrol yang tidak diobati.
3.5. Perawatan dengan AETC atau METC Mengurangi Hati
Peradangan pada tikus yang terinfeksi S. typhimurium. Tingkat
AST dan ALT diukur dalam sampel serum
Tikus yang terinfeksi Salmonella tidak diobati atau diobati dengan AETC atau
METC. Tikus yang terinfeksi Salmonella menunjukkan tingkat ALT
90,67 ± 11,62, yang secara signifikan lebih tinggi ke level ALT
dari 20,33 ± 4.096 pada tikus normal (Gambar 4 (a)) (p <0 05). Itu
tingkat ALT pada tikus yang terinfeksi Salmonella secara signifikan
berkurang dari 90,67 ± 11,62 menjadi 48,67 ± 8,819 pada yang diobati dengan AETC
tikus dan dari 90,67 ± 11,62 hingga 44,00 ± 5,29 di METCtreated
tikus dengan dosis 100 mg / kg (p <0 05).
Seperti tingkat ALT, tingkat AST juga signifikan
meningkat pada tikus yang terinfeksi Salmonella (67,33 ± 7,513) dibandingkan
untuk tikus normal (15,33 ± 2,028) (p <0 05) (Gambar 4 (b)).
Pengobatan dengan AETC dengan dosis 100 mg / kg dikurangi
kadar AST dari 67,33 ± 7,513 hingga 43,33 ± 9,262
(Gambar 4 (b)). Lebih penting lagi, perawatan dengan METC
pada dosis yang sama secara signifikan mengurangi tingkat AST
dari 67,33 ± 7,513 hingga 36,67 ± 7,688 (p <0 05).
3.6. Perawatan dengan AETC atau METC
Tingkatan Kadar Enzim Antioksidan pada Salmonella-
Tikus yang terinfeksi. Kadar enzim antioksidan seperti
SOD dan CAT diukur dalam homogenat jaringan limpa
tikus normal atau terinfeksi Salmonella yang tidak diobati atau
dirawat dengan AETC atau METC. Gambar 5 (a) menunjukkan SOD itu
tingkat dalam homogenat limpa tikus yang terinfeksi Salmonella
sekitar 70% dari tikus normal yang tidak terinfeksi yang secara signifikan
berkurang (p <0 05). Perawatan dengan AETC dan METC
membalikkan tingkat SOD yang berkurang pada yang terinfeksi Salmonella
tikus Efek ini ditemukan signifikan (dari 70% menjadi 92%) in the group of mice treated with AETC at a
dose of
100 mg/kg (p < 0 05). Although the treatment with METC
increased SOD level from 70% to 83%, cefixime treatment
resulted in an increase of SOD from 70% to 78%, which
was statistically insignificant (Figure 5(a)).
Similar to SOD, the level of catalase was also found to
be reduced in Salmonella-infected mice (Figure 5(b)).
Although the CAT level was not significantly decreased in
Salmonella-infected mice as compared to uninfected mice,
treatment with AETC or METC or cefixime also reversed
the depleted levels of CAT in Salmonella-infected group of
mice (Figure 5(b)).
3.7. T. cordifolia Treatment Polarizes the Macrophages. Macrophages
treated with AETC or METC secreted higher
amounts of IFN-γ, TNF-α, and IL-1β that are characteristics
of classically activated macrophages (M1). This shows that
treatment with T. cordifolia extract polarizes the macrophages
in favour of M1 type.
4. Discussion
Plants and their derived extracts have been used for many
hundreds of years in pharmaceuticals as the alternative medicines
and natural therapies. Plant extracts are potential
sources of novel antimicrobial compounds, especially against
bacterial pathogens [26]. The emergence of microbial resistance
to many presently available antibiotics has resulted in
morbidity and mortality from treatment failure and
increased health care costs [27, 28]. There is a dire need to
find for new, safe, and effective bioactive agents that can

Gambar 4: Tingkat ALT dan AST dalam serum tikus yang terinfeksi Salmonella yang tidak diobati
atau diobati dengan AETC atau METC. Darah diambil dari
tikus dari berbagai kelompok pada hari ke 5 pasca perawatan. Tingkat (a) ALT dan (b) AST
ditentukan dalam serum tikus. Hasil yang ditunjukkan adalah
mewakili tiga percobaan independen dan disajikan di sini sebagai mean ± SD. ∗ p <0 05
dibandingkan dengan tikus yang terinfeksi yang tidak diobati.
Gambar 5: Tingkat SOD dan CAT dalam homogenat jaringan limpa tikus yang terinfeksi
Salmonella yang tidak diobati atau diobati dengan AETC atau
METC. Limpa diambil dari tikus dari berbagai kelompok pada hari ke 5 pasca perawatan. Jaringan
limpa dibilas dengan phosphatebuffered dingin
saline (PBS) dan dihomogenisasi dalam PBS diikuti oleh sentrifugasi pada 5000g untuk
mengumpulkan supernatan. Kegiatan (a) SOD
dan (b) CAT ditentukan dalam supernatan. Hasil yang ditampilkan adalah perwakilan dari tiga
percobaan independen dan disajikan di sini
sebagai mean ± SD. p <0 05 dibandingkan dengan tikus terinfeksi yang tidak diobati.
melawan masalah resistensi multi-obat. Pada saat ini
bekerja, kami menunjukkan kemanjuran ekstrak T. cordifolia
terhadap S. typhimurium baik in vitro dan in vivo.
Batang T. cordifolia telah digunakan sebagai konstituen
dalam banyak persiapan Ayurvedic dan Unani untuk perawatan
dari kelemahan umum, pencernaan yg terganggu, demam, dan kemih
penyakit [29]. Batang digunakan sebagai diuretik, merangsang empedu
sekresi, dan menyembuhkan penyakit kuning [30]. Ekstrak batang
juga bermanfaat dalam penyakit kulit dan dikombinasikan dengan yang lain
obat bertindak sebagai penangkal gigitan ular [31]. Kulit kayu kering
T. cordifolia telah terbukti memiliki antipiretik, anti alergi,
sifat anti-inflamasi, dan antileprotik [32-35].
Selain itu, T. cordifolia telah terbukti efektif melawan
diabetes mellitus [36].
T. cordifolia dan konstituennya telah terbukti
memiliki sifat merangsang kekebalan. T. cordifolia
dan konstituennya α-D-glukan merangsang sel NK, sel B,
dan sel T dengan berbagai produksi simultan
sitokin imun-stimulator [37, 38]. Polisakarida
dari T. cordifolia, G1-4A, telah terbukti menghambat
pertumbuhan intraseluler Mycobacterium tuberculosis melalui
pensinyalan yang bergantung pada toll-like receptor 4- (TLR4-) [18].
Salmonella spp. gunakan beberapa strategi untuk menghindari kekebalan tubuh
sistem untuk memantapkan dirinya di host [39]. Makrofag adalah
Gambar 6: T. cordifolia menentang efek S. typhimurium dan mempolarisasi makrofag terhadap
M1. Pengobatan makrofag dengan
T. cordifolia menghasilkan sekresi IFN-γ, TNF-α, dan karakteristik IL-1β dari makrofag M1.
bagian penting dari kekebalan bawaan dan memainkan peran penting
dalam mempertahankan tuan rumah terhadap invasi mikroba. Secara klasik
M1 yang diaktifkan ditandai oleh peningkatan sekresi
sitokin seperti TNF-α, IL-1β, IFN-γ, IL-12, dan IL-6
dan menunjukkan aktivitas mikrobisida yang kuat, sedangkan alternatifnya
makrofag teraktivasi atau M2 ditandai dengan peningkatan
sekresi IL-4, IL-10, dan TGF-β dan dipertimbangkan
mikrobisida buruk [40, 41]. Hasil penelitian ini
menunjukkan aktivitas AETC yang merangsang kekebalan
dan METC sebagai makrofag diobati dengan mereka disekresikan
tingkat IL-1β, IFN-γ, dan TNF-α yang lebih tinggi. Ini menunjukkan hal itu
Ekstrak T. cordifolia mempolarisasi makrofag dalam
arah M1 (Gambar 6).
Dalam karya ini, kami menguji aktivitas AETC dan
METC melawan S. typhimurium. In vitro dan intraseluler
penghambatan S. typhimurium oleh AETC dan METC didorong
kita menggunakannya melawan S. typhimurium di murine
model. Salmonella spp. memanipulasi kekebalan tubuh bawaan
menandakan untuk menghindari pertahanan tuan rumah dan tinggal di makrofag M2
[39]. Pengakuan Salmonella spp. oleh TLR2 dan
TL4 bermanfaat bagi tuan rumah karena tikus tidak memiliki salah satu atau keduanya
ini menunjukkan peningkatan beban bakteri di
kelenjar getah bening mesenterika [42]. G1-4A, konstituen dari
T. cordifolia, menginduksi pensinyalan TLR-2 yang penting bagi
menghambat patogen intraseluler [18]. Ini juga didukung
oleh hasil penelitian ini yang menunjukkan Salmonellainfected
makrofag diobati dengan AETC atau METC menunjukkan
mengurangi beban bakteri dibandingkan dengan makrofag yang tidak diobati.
Terlebih lagi, tikus yang terinfeksi S. typhimurium menunjukkan
peningkatan kelangsungan hidup dan lebih sedikit beban bakteri pada pengobatan dengan
AETC atau METC. METC ditemukan lebih efektif sebagai
tikus yang diobati dengan METC menunjukkan kelangsungan hidup yang lebih besar
dibandingkan
untuk mereka yang dirawat dengan AETC pada dosis yang sama. Ini sesuai
dengan hasil studi in vitro di mana METC menunjukkan
aktivitas yang lebih besar untuk AETC melawan S. typhimurium. Aktivitasnya
METC setara dengan sefiksim antibiotik standar
melawan murine salmonellosis.
Penggunaan antibiotik yang luas menyebabkan toksisitas sistemik dan
penekanan kekebalan pada pasien yang diobati dan predisposisi
mereka untuk infeksi oportunistik. Untuk memahami apakah
penggunaan AETC atau METC dikaitkan dengan toksisitas apa pun, the
parameter peradangan hati dan kadar antioksidan
Enzim ditentukan dalam darah dan jaringan
tikus yang tidak dirawat atau dirawat. Infeksi S. typhimurium disebabkan
peradangan hati sebagai tikus yang terinfeksi menunjukkan tingkat yang lebih tinggi
ALT dan AST dalam darah mereka, sedangkan Salmonella terinfeksi
tikus yang diobati dengan AETC atau METC menunjukkan tingkat penurunan
ALT dan AST. Dengan demikian, T. cordifolia tidak memberikan toksisitas,
tetapi melindungi hati terhadap S. typhimurium yang diinduksi
toksisitas. Enzim antioksidan seperti SOD dan CAT adalah
bagian penting dari respon imun bawaan. Tingkat
SOD dan CAT ditemukan berkurang pada Salmonellainfected
tikus, sedangkan pengobatan dengan AETC atau METC
menyelamatkan level mereka. Temuan ini mendukung penggunaan
T. cordifolia sebagai hepatoprotektif, antiinflamasi, dan
agen antioksidan [43, 44].
Perangsang kekebalan, antimikroba, anti-inflamasi,
dan aktivitas antioksidan dari T. cordifolia mungkin memainkan peran penting
peran terapeutik melawan salmonellosis, meskipun lebih
studi ekstensif diperlukan sebelum mempertimbangkan T. cordifolia
sebagai pilihan yang menarik dan aman dalam pengobatan untuk salmonellosis.
Selanjutnya, persiapan ini dapat dipelajari lebih lanjut
untuk implikasinya untuk mengobati infeksi oportunistik di immunocompromised
orang karena imunopotensiasinya
properti.
5. Kesimpulan
Dalam terang hasil di atas, dapat disimpulkan
ekstrak air dan metanol (AETC atau METC)
T. cordifolia memiliki stimulan kekebalan, antimikroba,
sifat hepatoprotektif, dan antioksidan. Menariknya,
AETC atau METC menghambat multiplikasi intraseluler dari
S. typhimurium di makrofag. Apalagi pengobatan dengan
AETC atau METC juga efektif dalam menghilangkan S. typhimurium
infeksi dari tikus yang terinfeksi. Terapi dengan AETC
atau METC melindungi tikus terhadap yang diinduksi Salmonella
kerusakan hati dan menyelamatkan tingkat SOD dan
CAT pada tikus yang terinfeksi. Namun, studi lebih lanjut diperlukan
untuk mengeksplorasi implikasinya yang potensial untuk mengobati penyakit menular
dalam populasi manusia.
Konflik kepentingan
Penulis tidak memiliki konflik kepentingan
Ucapan Terima Kasih
Para penulis sangat berterima kasih kepada College of Applied
Ilmu Kedokteran, Universitas Qassim, untuk menyediakan
fasilitas yang diperlukan untuk persiapan ekstrak dan untuk
Mohammad Masihuzzaman Khan, Departemen Farmakognosi,
Sekolah Tinggi Farmasi Unaizah, Unaizah, Qassim,
Arab Saudi, untuk identifikasi dan karakterisasi
T. cordifolia.