Full
Full
SKRIPSI
Oleh :
Kristian Bayu Kuncoro
NIM : 068114060
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2010
i
SKRIPSI
Oleh :
Kristian Bayu Kuncoro
NIM : 068114060
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2010
i
ii
SKRIPSI
Oleh :
Kristian Bayu Kuncoro
NIM : 068114060
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2010
ii
iii
iii
iv
iv
v
KAKAKKU,
yang kuat dan bersemangat
YASHINTA WIDYANIGTYAS,
aku bersyukur bisa mengenalmu lebih
v
vi
vi
vii
PRAKATA
Puji dan syukur penulis haturkan kepada Tuhan Yang Maha Kasih atas
segala berkat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang
berjudul “Validasi Metode dan Penetapan Kadar Parasetamol Dalam Jelly Secara
Yogyakarta.
pihak. Pada kesempatan ini penulis ingin menyampaikan penghargaan dan ucapan
1. Rita Suhadi, M.Si., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata
Dharma atas ide awal penelitian yang berawal dari PKM, atas bimbingannya
2. Christine Patramurti, M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing atas ide luar
skripsi ini.
3. Rini Dwiastuti, M.Sc., Apt. selaku dosen penguji atas segala arahan,
vii
viii
penulis.
5. Mas Bimo, Pak Parlan, Mas Kunto, dan Pak Otok atas bantuannya selama
7. Kho Jimmy Iwan Tamara, selaku rekan kerja penulis sebelum penelitian,
kebersamaan yang telah dilalui dalam suka dan duka bersama penulis.
11. Teman-temanku, Aan, Dian, dan semua teman yang telah memberi semangat
viii
ix
ix
x
x
xi
INTISARI
xi
xii
ABSTRACT
xii
xiii
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL.............................................................................................ii
HALAMAN PENGESAHAN...............................................................................iv
PRAKATA............................................................................................................vii
INTISARI..............................................................................................................xi
ABSTRAK ............................................................................................................xii
A. Latar Belakang...............................................................................................1
2. Keaslian Penelitian....................................................................................3
B. Tujuan Penelitian...........................................................................................4
xiii
xiv
A. Parasetamol....................................................................................................5
C. Jelly................................................................................................................10
E. Karagenin.......................................................................................................11
3. Kelarutan ..................................................................................................14
4. Stabilitas pH .............................................................................................15
F. Bubuk Konnyaku...........................................................................................16
G. Asam sitrat.....................................................................................................16
I. Vitamin D ......................................................................................................18
J. Kalsium..........................................................................................................18
L. Spektrofotometri Ultraviolet..........................................................................19
xiv
xv
2. Komponen-komponen HPLC...................................................................23
a. Pompa (Pump).......................................................................................23
b. Injektor (Injector)..................................................................................23
a. Kolom....................................................................................................26
4. Injeksi sampel...........................................................................................27
1. Akurasi .....................................................................................................37
2. Presisi .......................................................................................................38
xv
xvi
4. Spesifisitas ...............................................................................................39
O. Landasan Teori.............................................................................................41
P. Hipotesis.......................................................................................................42
1. Klasifikasi Variabel..................................................................................43
F. Analisis hasil..................................................................................................49
1. Validasi metode........................................................................................49
xvi
xvii
a. Akurasi ..................................................................................................49
b. Presisi ....................................................................................................49
c. Linearitas ...............................................................................................49
d. Spesifisitas ............................................................................................49
1. Akurasi ......................................................................................................65
2. Presisi ........................................................................................................66
3. Spesifisitas ................................................................................................67
4. Linieritas ...................................................................................................71
5. Range ........................................................................................................71
A. Kesimpulan....................................................................................................78
xvii
xviii
B. Saran ..............................................................................................................78
LAMPIRAN..........................................................................................................83
xviii
xix
DAFTAR TABEL
Tabel IV. Kriteria rentang recovery yang dapat diterima (Harmita, 2004) ..........38
Tabel XI. Perbandingan pengamatan waktu retensi seri larutan baku parasetamol
dengan sampel........................................................................................68
xix
xx
DAFTAR GAMBAR
Gambar 13. Perpindahan massa antara fase diam dan fase gerak.........................32
Gambar 15. Cara mengukur tR, σt, Wh/2, Wb suatu puncak kromatogram...............35
Gambar 19. Spektrum serapan parasetamol (λmaks = 247,2 nm) pada konsentrasi
xx
xxi
Gambar 20. Spektrum serapan parasetamol (λmaks = 247,2 nm) pada konsentrasi
Gambar 23. Interaksi antara gugus non polar dari parasetamol (benzen) dengan
Gambar 24. Interaksi antara gugus parasetamol dengan fase gerak campuran
Gambar 26. tR seri baku parasetamol konsentrasi 8,0 ppm = 2,525 menit ...........69
menit....................................................................................................69
Gambar 28. Kromatogram sampel replikasi 6 dengan konsetrasi 7,4587 ppm ....70
xxi
xxii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 11. Data AUC, Kadar parasetamol, % recover, dan CV sampel........ 110
xxii
1
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Obat”. Dalam penelitian ini penulis lebih menekankan pada validasi metode dan
informasi obat yang berkualitas, tetapi juga berupaya untuk menginovasi bentuk
sediaan obat yang praktis, nyaman, manjur dan aman sehingga sediaan obat dapat
diterima oleh pasien, khususnya anak-anak dengan rasa dan bau yang lebih sedap,
bentuk yang lebih menarik, maupun bentuk sediaan yang dapat dikombinasikan
obat oleh pasien atau yang disebut failure to receive drug”. Salah satu bentuk
sediaan obat semi solid yaitu jelly dapat dikembangkan sebagai obat analgesik
Jelly merupakan sistem semipadat terdiri dari suspensi yang dibuat dari
partikel anorganik yang kecil atau molekul organik yang besar terpenetrasi oleh
1
2
fisika, kimia, dan klinis dari zat aktifnya, yaitu parasetamol. Sifat fisika yang
dapat berubah yaitu stabilitas sediaan, sedangkan perubahan sifat kimia dapat
diketahui dengan melakukan pengujian kadar zat aktif yang terdapat dalam
sediaan racikan tersebut. Dari penelitian Novianti P (2004) dan Arisandi W.S.,
Karena adanya pengaruh suhu yang tinggi yaitu 60ºC, di khawatirkan dapat
mendegradasi zat aktif sehingga kadar parasetamol yang ada di dalam sediaan
dapat berkurang.
dalam jelly dengan tujuan untuk mengetahui apakah metode penetapan kadar
parasetamol dalam jelly menggunakan metode HPLC fase terbalik dengan teknik
menjamin keseragaman dosis, serta sebagai upaya pengawasan kualitas dan mutu
terhadap sediaan jelly yang diuji sehubungan dengan keamanan dan khasiatnya
(Tanu, 1985).
3
1. Perumusan Masalah :
sebagai berikut:
linearitas?
jelly?
2. Keaslian Penelitian
banyak dilakukan. Tetapi validasi metode dan penetapan kadar parasetamol dalam
3. Manfaat Penelitian
berikut :
4
a. Manfaat Teoritis
yang sesuai dan nyaman bagi anak, dan untuk membuktikan bahwa kadar
b. Manfaat Metodologis.
HPLC fase terbalik dengan teknik preparasi pemanasan dapat digunakan untuk
persyaratan.
c. Manfaat Praktis.
jelly parasetamol dan perkembangan bentuk sediaan lain yang cocok dan nyaman
bagi anak-anak.
B. Tujuan Penelitian
1. Untuk memberikan informasi bahwa metode HPLC fase terbalik dengan teknik
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Parasetamol
mengandung tidak kurang dari 98,0 % dan tidak lebih dari 101,0 % C8H9NO2,
dihitung terhadap zat anhidrat. Pemerian serbuk hablur putih, tidak berbau, rasa
sedikit pahit, kelarutan : larut dalam air mendidih dan dalam natrium hidroksida 1
N, mudah larut dalam etanol (Anonim, 1995). Struktur kimia dari parasetamol
gram dapat larut kira-kira 70 ml air pada suhu 25oC, 1 g larut dalam 20 ml air
dalam 40 ml gliserin dan dalam 9 ml propilenglikol. Tidak larut dalam benzen dan
eter dan larut dalam alkali hidroksida. Larutan jenuh mempunyai pH kira-kira 6
adalah 254 nm (A 1%, 1cm = 668) dan dalam larutan basa adalah 257 nm (A 1%,
1cm = 715) (Clarke, 1986). A 1%, 1cm atau serapan jenis adalah serapan dari
5
6
larutan 1 % zat terlarut dalam sel dengan ketebalan 1 cm (Anonim, 1995). Serapan
parasetamol pada panjang gelombang maksimum lebih kurang 244 nm, terhadap
telah digunakan sejak tahun 1893. Efek antipiretik ditimbulkan oleh gugus
sebagai analgesik. Efek analgesik dari parasetamol yaitu meredakan rasa nyeri
Dosis untuk nyeri dan demam oral 2-3 dd 0,5-1 g, maksimal 4 g/hari,
pada penggunaan kronis maksimal 2,5 g/hari. Anak-anak: 4-6 dd 10 mg/kg, yakni
rata-rata usia 3-12 bulan 60 mg, 1-4 tahun 120-180 mg, 4-6 tahun 180 mg, 7-12
tahun 240-360 mg, 4-6 kali sehari. Dosis rektal 20mg/ kg setiap kali, dewasa 4 dd
0,5-1 g, anak-anak usia 3-12 bulan 2-3 dd 120 mg, 1-4 tahun 2-3 dd 240 mg, 4-6
dengan cara yang serupa dengan senyawa jenis ester. Pengganti asam dan alkohol
asam dan amida. Langkah penentu laju reaksi pada reaksi yang terkatalisis ion
asam pada amida memerlukan substituen yang efek polarnya lemah, tetapi efek
asam asetat (Connors,et al.,1986). Reaksi hidrolisis parasetamol dapat dilihat pada
gambar 2.
Stabilitas suatu obat perlu di uji untuk mengetahui apakah suatu obat
masih layak untuk dikonsumsi atau tidak. Stabilitas obat tergantung dari beberapa
faktor, antara lain temperatur. Semua obat pada dasarnya akan rusak apabila
disimpan dalam temperatur yang tinggi. Semakin naik suhu penyimpanan maka
waktu paruh (t1/2) dan waktu kadaluwarsa (t90) semakin kecil. Dengan demikian
2. Stabilitas pH Parasetamol
banyak digunakan sehingga perlu dibuat suatu formula yang stabil untuk sediaan
Gel merupakan sistem semipadat terdiri dari suspensi yang dibuat dari
partikel anorganik yang kecil atau molekul organik yang besar terpenetrasi oleh
suatu cairan (Anonim, 1995). Barry (1983) mendefinisikan gel sebagai sistem dua
komponen dari sediaan semipadat yang kaya akan cairan. Pada gel yang polar,
polimer alam atau sintetik yang digunakan pada konsentrasi rendah (biasanya di
bawah 10%) membentuk matriks tiga dimensi melalui cairan hidrofilik. Sistem
yang terbentuk mungkin jernih ataupun keruh, karena gelling agent yang
membagi gel berdasarkan gelling agent-nya, yaitu (i) inorganik yang merupakan
sistem dua fase, (ii) organik yang merupakan sistem satu fase. Klasifikasi kedua
membagi gel berdasarkan solvennya yaitu (i) hidrogel (inorganik, gum alam dan
sintetik, serta organik), (ii) organogel (tipe hidrokarbon, lemak minyak atau
polimer hidrofilik tetapi tidak larut air, merupakan polimer jaringan 3 dimensi,
dan (ii) air (Zatz dan Kushla,1996). Menurut Buchmann (2001), hidrogel adalah
sistem hidrofilik yang utamanya terdiri dari 85-95% air atau campuran aqueous-
9
alcoholic dan gelling agent. Polimer organik yang biasa digunakan adalah asam
lainnya.
Hidrogel mudah diaplikasikan dan memberi kelembaban secara instan tetapi pada
mempunyai kompatibilitas yang baik terhadap jaringan biologis tubuh (Zatz dan
Kushla, 1996).
sistem dispersi dari fase dispers lipofilik medium dispers hidrofilik. Konsentrasi
sistem termodinamik yang tidak stabil sehingga dibutuhkan polimer yang dapat
menstabilkan koloid liofilik dalam medium berair. Ukuran droplet minyak yang
dalam sejumlah besar cairan. Komponen padat dari gel membentuk jaringan tiga
dimensi yang membentuk rigiditas gel. Oleh sebab itu, meskipun sebagian besar
dalam gel adalah polimer meskipun beberapa gel tersusun atas padatan inorganik.
Contoh polimer yang biasa digunakan sebagai gelling agent antara lain carbomer,
disperse dari gel perlu dipisahkan terlebih dahulu. Salah satu cara untuk merusak
sistem gel adalah dengan cara pendidihan. Kenaikan suhu pada sistem
C. Jelly
Jelly merupakan bahan pangan setengah padat yang terdiri dari suspensi
yang dibuat dari partikel anorganik yang kecil atau molekul organik yang besar
terpenetrasi oleh suatu cairan di aplikasikan secara oral dimana jelly mempunyai
tekstur kenyal, bentuk menarik dan beraneka ragam, warnanya mencolok, serta
11
beraroma buah-buahan. Sifat dasar dari makanan ini rendah lemak dan tinggi serat
(Kusumawardini, 2006).
E. Karagenin
polisakarida yang diperoleh melalui ekstraksi alkali (dan modifikasi) dari alga
Gigartina, dan Iridaea. Rumput laut yang berbeda menghasilkan karagenan yang
Karagenan dibuat dari rumput laut yang dikeringkan, rumput laut diayak
sampai kecoklatan bergantung dari bahan mentah dan proses yang digunakan.
Ukuran karagenan umumnya sebesar 60 mesh. Karagenan tidak dapat larut dalam
pelarut organik seperti alkohol, eter dan minyak. Kelarutan dalam air bergantung
pada struktur karagenan, media, dan suhu. Umumya, gel karagenan harus
dipanaskan sementara non-gel karagenan dapat larut dalam air dingin (Kelco,
2007).
Sifat dasar karaginan terdiri dari tiga tipe karaginan yaitu kappa, iota dan
lambda karaginan. Tipe karaginan yang paling banyak dalam aplikasi pangan
pembentukan gel dan stabilitas pH (Towle, 1973). Berikut struktur kimia kappa
suatu jala tiga dimensi bersambungan. Selanjutnya jala ini menangkap atau
mengimobilisasikan air di dalamnya dan membentuk struktur yang kuat dan kaku.
13
Sifat pembentukan gel ini beragam dari satu jenis hidrokoloid ke jenis lain,
tergantung pada jenisnya. Gel mempunyai sifat seperti padatan, khususnya sifat
membentuk gel dalam air dan bersifat reversible yaitu meleleh jika dipanaskan
dan membentuk gel kembali jika di dinginkan. Proses pemanasan dengan suhu
yang lebih tinggi dari suhu pembentukan gel akan mengakibatkan polimer
karaginan dalam larutan menjadi random coil (acak). Bila suhu diturunkan, maka
polimer akan membentuk struktur double helix (pilinan ganda) dan apabila
penurunan suhu terus dilanjutkan polimer-polimer ini akan terikat silang secara
kuat dan dengan makin bertambahnya bentuk heliks akan terbentuk agregat yang
bertanggung jawab terhadap terbentuknya gel yang kuat (Glicksman, 1969). Jika
diteruskan, ada kemungkinan proses pembentukan agregat terus terjadi dan gel
akan mengerut sambil melepaskan air. Proses terakhir ini disebut sineresis
Gambar 4.
pada saat larutan panas yang dibiarkan menjadi dingin karena mengandung gugus
3,6-anhidrogalaktosa. Adanya perbedaan jumlah, tipe dan posisi gugus sulfat akan
mempengaruhi proses pembentukan gel. Kappa karaginan dan iota karaginan akan
membentuk gel hanya dengan adanya kation-kation tertentu seperti K+, Rb+ dan
Cs+. Kappa karaginan sensitif terhadap ion kalium dan membentuk gel kuat
dengan adanya garam kalium, sedangkan iota karaginan akan membentuk gel
yang kuat dan stabil bila ada ion Ca2+, akan tetapi lambda karaginan tidak dapat
membentuk gel (Glicksman, 1983). Potensi membentuk gel dan viskositas larutan
karaginan akan menurun dengan menurunnya pH, karena ion H+ membantu proses
hidrolisis ikatan glikosidik pada molekul karaginan (Angka dan Suhartono, 2000).
3. Kelarutan
antaranya tipe karaginan, temperatur, pH, kehadiran jenis ion tandingan dan zat-
zat terlarut lainnya. Gugus hidroksil dan sulfat pada karaginan bersifat hidrofilik
mudah larut pada semua kondisi karena tanpa unit 3,6-anhidro-D-galaktosa dan
mengandung gugus sulfat yang tinggi. Karaginan jenis iota bersifat lebih
galaktosa yang kurang hidrofilik. Karaginan jenis kappa kurang hidrofilik karena
2004). Daya kelarutan karaginan pada berbagai media dapat dilihat pada Tabel II.
15
Air panas Larut suhu > 60ºC Larut suhu > 60ºC Larut
4. Stabilitas pH
akan terhidrolisis pada pH dibawah 3,5. Pada pH 6 atau lebih umumnya larutan
ApS, 2004). Hidrolisis asam akan terjadi jika karaginan berada dalam bentuk
(Imeson, 2003).
Kappa dan iota karaginan dapat digunakan sebagai pembentuk gel pada
pH rendah, tetapi tidak mudah terhidrolisis sehingga tidak dapat digunakan dalam
pH, temperatur dan waktu. Hidrolisis dipercepat oleh panas pada pH rendah
(Moirano 1977). Stabilitas karaginan dalam berbagai media pelarut dapat dilihat
pH netral
Stabil Stabil Stabil
dan alkali
(Glicksman, 1983)
F. Bubuk konnyaku
Konnyaku berbahan dasar alami dari umbi tanaman konjac yaitu konyaku
potato dan calcium hydroxide atau oxide calcium yang diekstrak dari kulit telur
(Evimeinar, 2006). Konnyaku merupakan makanan alami yang terdiri dari 97%
air dan 3% glukomanan, yaitu serat makanan. Konnyaku juga kaya akan mineral
dan rendah kalori serta tidak mengandung lemak. Konnyaku tidak dapat tercerna
G. Asam sitrat
kristal atau serbuk putih. Asam sitrat ini mudah larut dalam air, spriritus, dan
etanol, tidak berbau, rasanya sangat asam, serta jika dipanaskan akan meleleh,
kemudian terurai yang selanjutnya terbakar sampai menjadi arang. Asam sitrat
juga terdapat dalam sari buah-buahan seperti nanas, jeruk, lemon, markisa. Asam
ini dipakai untuk meningkatkan rasa asam (mengatur tingkat keasaman) pada
berbagai pengolahan minum, produk air susu, selai, jeli, dan lain-lain. Asam sitrat
berfungsi sebagai pengawet pada keju dan sirup, digunakan untuk mencegah
17
proses kristalisasi dalam madu, gula-gula (termasuk fondant), dan juga untuk
Larutan asam sitrat yang encer dapat digunakan untuk mencegah pembentukan
sampai halus, putih tidak berbau, rasa sangat asam. Bentuk hidrat mekar dalam
udara kering.
Kelarutan : sangat mudah larut dalam air, mudah larut dalam etanol, agak
sukar larut dalam eter (Anonim,1995). Struktur kimia dari asam sitrat dapat dilihat
pada gambar 5.
H. Frukto oligosakarida
saat ini. Prebiotik merupakan istilah yang dikaitkan dengan kesehatan saluran
tidak dicerna oleh sistem pencernaan, namun bila dikonsumsi oleh manusia
saluran cerna secara selektif, dan yang terpenting harus memperlihatkan efek
I. Vitamin D
hablur putih, tidak berbau, dapat terpengaruh oleh cahaya dan udara. Kelarutan:
tidak larut dalam air, larut dalam etanol, dalam kloroform, dan dalam minyak
lemak. Titik didih antara 115ºC dan 117ºC (Anonim,1995). Struktur kimia dari
J. Kalsium
Kalsium adalah mineral yang amat penting bagi manusia, antara lain bagi
metabolisme tubuh, penghubung antar syaraf, kerja jantung, dan pergerakan otot.
Zat pewarna sintetis, secara umum dapat dibagi ke dalam dua golongan,
yaitu zat pewarna asam dan zat pewarna dasar. Contoh pewarna dari jenis asam
adalah amaranth dan karmoisin. Karmoisine yang disebut juga azorubine, atau CI
14.720 adalah zat pewarna sintetis berwarna merah yang digunakan untuk
pewarna makanan atau sediaan obat-obatan dan termasuk pewarna azo. Biasanya
berbentuk garam dinatrium dari asam sulfat (Anonim, 2009). Struktur kimia dari
L. Spektrofotometri Ultraviolet
pasangan elektron bebas dan orbital non ikatan tak jenuh atau orbital non ikatan.
demikian terdapat keuntungan yang selektif dari serapan ultraviolet, yaitu gugus-
(Sastrohamidjojo, 2002).
cahaya ini sama dengan getaran molekul tersebut. Elektron terikat dan elektron
yang tidak terikat akan tereksitasi pada suatu daerah frekuensi yang sesuai dengan
cahaya ultraviolet dan cahaya tampak. Spektrum absorbsi daerah ini adalah sekitar
meliputi daerah bagian ultraviolet, spektrum visibel bagian daerah sinar tampak
serapan cahaya oleh substitusi pada daerah panjang gelombang (λ) sekitar 190-
380 nm. Serapan pada daerah tersebut cukup kuat sehingga memungkinkan
21
Sensitifitas yang bagus, hasil yang cukup akurat, serta pengerjaan yang relatif
promosi elektron dari orbital keadaan dasar yang berenergi rendah ke orbital
banyak energi untuk promosi elektron akan menyerap pada panjang gelombang
yang lebih pendek. Molekul yang memerlukan energi lebih sedikit akan menyerap
pada panjang gelombang yang lebih panjang (Fessenden dan Fessenden, 1997).
absorbsi maksimum kurva absorbsi. Jika absorbsi ini untuk penentuan kadar
adalah sangat rendah atau senyawa mula-mula mengabsorbsi dibawah 220 nm,
maka seringkali senyawa diubah menjadi suatu zat warna melalui reaksi kimia dan
Blaschke.,1994).
dalam rentang 180-380 nm, dimana sampel tidak berwarna. Semakin banyak
gugus kromofor, maka akan dapat menggeser pada panjang gelombang yang lebih
tinggi atau dapat menyerap radiasi pada panjang gelombang yang lebih tinggi.
22
menuju kolom secara cepat dengan bantuan tekanan dari pompa dan hasilnya
dapat dideteksi dengan detektor (Hendayana, 2006). Tujuan dari HPLC adalah
memperoleh hasil pemisahan yang baik dalam waktu relatif singkat (Mulja dan
Suharman, 1995).
1. Kelebihan HPLC
kromatografi dengan fasa gerak cairan dan fasa diam cairan atau padat. Banyak
kelebihan metode ini jika dibandingkan dengan metode lainnya (Done dkk, 1974;
Snyder dan Kirkland, 1979; Hamilton dan Sewell, 1982; Johnson dan Stevenson,
1978). Metode HPLC memiliki kelebihan yaitu kolom HPLC dapat dipakai
berkali-kali, resolusi yang didapatkan jauh lebih tinggi daripada metode lain
kriteria USP, waktu analisisnya secara umum lebih singkat, dan preparasi dengan
HPLC dapat dilakukan pada skala besar (Hamilton & Sewell, 1978). Selain itu
HPLC juga dapat menganalisis senyawa yang tidak mudah menguap dan
2. Komponen-komponen HPLC
a. Pompa (Pump). Fase gerak dalam HPLC adalah suatu cairan yang
bergerak melalui kolom. Ada dua tipe pompa yang digunakan, yaitu kinerja
Pemindahan konstan dapat dibagi menjadi dua, yaitu: pompa reciprocating dan
teratur (pulsating), oleh karena itu membutuhkan peredam pulsa atau peredam
elektronik untuk menghasilkan garis dasar (base line) detektor yang stabil, bila
tidak terbatas. Pompa syringe memberikan aliran yang tidak berdenyut, tetapi
kolom, harus dengan disturbansi yang minimum dari material kolom. Ada dua
24
model umum yaitu stopped flow dan solvent flowing. Ada tiga tipe dasar injektor
pada kinerja atmosfir, sistem tertutup, dan aliran dilanjutkan lagi. Teknik ini bisa
digunakan karena difusi di dalam cairan kecil dan resolusi tidak dipengaruhi.
Kedua adalah septum dimana septum yang digunakan pada HPLC sama dengan
yang digunakan pada Kromtografi Gas. Injektor ini dapat digunakan pada kinerja
sampai 60-70 atmosfir. Tetapi septum ini tidak tahan dengan semua pelarut-
pelarut kromatografi cair. Partikel kecil dari septum yang terkoyak (akibat jarum
injektor) dapat menyebabkan penyumbatan. Dan yang ketiga adalah loop valve
dimana tipe injektor ini umumnya digunakan untuk menginjeksi volume lebih
adaptor yang sesuai, volume yang lebih kecil dapat diinjeksikan secara manual).
Pada posisi LOAD, sampel di isi kedalam loop pada kinerja atmosfir, bila
VALVE difungsikan, maka sampel akan masuk ke dalam kolom (Putra, 2004).
gagalnya suatu analisis tergantung pada pemilihan kolom dan kondisi percobaan
yang sesuai. Kolom dapat dibagi menjadi dua kelompok yaitu kolom analitik
dengan diameter dalam 2-6 mm. Panjang kolom tergantung pada jenis material
pengisi kolom. Untuk kemasan pellicular, panjang yang digunakan adalah 50-100
cm. Untuk kemasan poros mikropartikulat, 10-30 cm. Dewasa ini ada yang 5 cm.
Dan kolom preparatif yang umum memiliki diameter 6 mm atau lebih besar dan
pada temperatur kamar, tetapi bisa juga digunakan temperatur lebih tinggi,
tinggi, gangguan (noise) yang rendah, kisar respons linier yang luas, dan memberi
respons untuk semua tipe senyawa. Suatu kepekaan yang rendah terhadap aliran
dan fluktuasi temperatur sangat diinginkan, tetapi tidak selalu dapat diperoleh.
dengan range yang lebih luas. Detektor indeks refraksi juga digunakan secara luas,
cair partisi yaitu perlakuan sampel dalam kondisi cair-cair tergantung pada
dalam kondisi yang terdiri atas dua pelarut yang tidak bercampur dan keseluruhan
kondisi di biarkan seimbang, solut akan tersebar antara kedua fase itu menurut
persamaan :
diam dan Cm adalah konsentrasi solut dalam fase gerak (Skoog et al.,1994). Hal-
hal yang harus diperhatikan dalam pemilihan metode kromatografi partisi fase
balik adalah :
kemasan fase terikat. Fase diam yang biasa digunakan pada kromatografi partisi
fase balik adalah oktadesilsilan (ODS). Selain ODS, dikenal pula silika dengan
b. Fase gerak. Fase gerak pada HPLC sangat berpengaruh pada tambatan
sampel dan pemisahan komponen dalam campuran. Pada fase balik, kandungan
utama fase geraknya adalah air. Pelarut yang dapat campur dengan air seperti
Dalam kasus ini, ukuran kolom sama, tetapi silika di modifikasi menjadi
permukaannya secara sederhana baik berupa atom karbon 8 atau 18. Sebagai
contoh, pelarut polar digunakan berupa campuran air dan alkohol seperti metanol.
Dalam kasus ini, akan terdapat atraksi yang kuat antara pelarut polar dan molekul
27
polar dalam campuran yang melalui kolom. Atraksi yang terjadi tidak akan sekuat
atraksi antara rantai-rantai hidrokarbon yang berlekatan pada silika (fase diam)
dan molekul-molekul polar dalam larutan. Oleh karena itu, molekul-molekul polar
membentuk atraksi dengan gugus hidrokarbon karena adanya dispersi gaya van
der Waals. Senyawa-senyawa ini juga akan kurang larut dalam pelarut karena
akan bergerak lambat dalam kolom. Ini berarti bahwa molekul-molekul polar akan
bergerak lebih cepat melalui kolom. Fase balik HPLC adalah bentuk yang biasa
4. Injeksi sampel
Injeksi sampel seluruhnya otomatis, tidak akan dapat mengetahui apa
yang terjadi pada tingkat dasar. Karena proses ini meliputi tekanan, tidak sama
5. Waktu retensi
Waktu yang dibutuhkan oleh senyawa untuk bergerak melalui kolom
menuju detektor disebut sebagai waktu retensi. Waktu retensi diukur berdasarkan
memiliki waktu retensi yang berbeda. Untuk beberapa senyawa, waktu retensi
akan sangat bervariasi dan bergantung pada tekanan yang digunakan (karena itu
28
akan berpengaruh pada laju alir dari pelarut), kondisi dari fase diam (tidak hanya
terbuat dari material apa, tetapi juga pada ukuran partikel), komposisi yang tepat
dari pelarut, dan temperatur pada kolom. Itu berarti bahwa kondisi harus dikontrol
membentuk profil konsentrasi yang simetri atau dikenal juga dengan profil
Gaussian dalam arah aliran fase gerak. Profil, dikenal juga dengan puncak atau
pita, secara perlahan-lahan akan melebar dan sering juga membentuk profil yang
partikel fase diam yang kecil. Fase gerak lalu melewatinya dan membawa
kolom terlebih dahulu dibanding molekul yang lainnya. Beberapa molekul ada
Eddy (Rohman, 2009). Mekanisme difusi Eddy dapat dilihat pada gambar 9.
29
partikel fase diam dalam suatu gerakan laminer (Gambar 10). Kecepatan alir fase
gerak lebih cepat jika melalui pusat saluran (ditengah-tengah) daripada jika fase
gerak melalui daerah di dekat partikel fase diam. Anak panah dalam gambar 10
panah, maka kecepatan alir lokal semakin besar). Difusi Eddy dan distribusi alir
berukuran rata. Suatu kolom dikatakan bagus apabila kolom tersebut tersusun dari
antara diameter partikel terkecil dan yang terbesar tidak melebihi 2. Jika partikel
terkecilnya berdiameter 1,5 μm dan yang paling besar 7,5 μm maka rasionya
molekul sampel menyebar di dalam pelarut tanpa adanya pengaruh luar apapun
(perhatikan bagaimana suatu gula melarut dalam air secara perlahan-lahan bahkan
tanpa diaduk). Hal ini merupakan difusi longitudinal (gambar 11). Difusi ini
mempunyai pengaruh yang tidak menguntungkan pada tinggi puncak jika partikel-
partikel fase diamnya kecil, kecepatan alir fase gerak terlalu rendah (dihubungkan
Kecepatan alir fase gerak harus dipilih sedemikian rupa sehingga difusi
longitudinal tidak mempunyai efek yang merugikan. Pada gambar 11, pelebaran
pita oleh difusi longitudinal. Kiri : daerah sampel sesaat setelah diinjeksikan.
Sampel akan menyebar dalam ruangan ke 3 arah (arah anak panah). Kanan :
daerah sampel setelah beberapa saat. Daerah sampel saat ini lebih luas disebabkan
oleh difusi. Sampel ini juga akan pindah oleh aliran fase gerak (Rohman, 2009).
yang stagnan, dan fase diam. Gambar 12 menunjukkan struktur partikel fase diam.
Salurannya ada yang sempit dan ada yang luas. Pori-pori itu terisi oleh fase gerak
yang tidak bergerak (stagnan). Suatu molekul sampel yang masuk ke dalam pori
akan berhenti untuk dipindahkan dengan aliran fase gerak dan posisinya berubah
hanya dengan difusi. Meskipun demikian, ada dua kemungkinan yang terjadi yang
pertama molekul sampel berdifusi balik ke aliran fase gerak. Keadaan ini, yang
mana molekul sampel keluar bersama aliran fase gerak, membutuhkan waktu.
Yang kedua molekul berinteraksi dengan fase diam dan akan teradsorbsi. Untuk
sementara waktu, molekul sampel tetap menempel pada fase diam. Sekali lagi,
perpindahan massa ini membutuhkan waktu yang cukup lama (gambar 13). Fase
diam mempunyai pusat adsorbsi C (dalam kerapatan yang luas) yang akan
Gambar 13. Perpindahan massa antara fase diam dan fase gerak
Kurva H/u juga disebut dengan kurva Van Deemter. Kecepatan alir optimum
(Uopt) tergantung pada sifat-sifat analit. Dalam kurva Van Deemter no.1 adalah
difusi Eddy, no.2 adalah difusi longitudinal, no.3 komponen perpindahan massa,
sebagai berikut :
33
Di mana :
alir meningkat, dan hanya akan bermakna jika kecepatan alir fase
difusinya (Ds) dalam fase diam dan tergantung pula pada ketebalan
Cs =
diameter dan bentuk partikel fase diam (d) dan kecepatan difusi
Cm =
34
paling penting adalah efisiensi atau jumlah lempeng teoritis (N). Ukuran efisiensi
kolom adalah jumlah lempeng (plate number, N) yang didasarkan pada konsep
Yang mana :
puncak kromatogram.
35
Gambar 15. Cara mengukur tR, σt, Wh/2, Wb suatu puncak kromatogram.
baik yang nilainya sebanding dengan semakin panjangnya kolom (L) dan semakin
kecilnya nilai (H). Istilah H merupakan tinggi ekivalen lempeng teoritis atau
HETP (High Eqivalent Theoritical Plate), yang mana merupakan panjang kolom
yang dibutuhkan untuk menghasilkan satu lempeng teoritis. Kolom yang baik
akan mempunyai bilangan lempeng yang tinggi dan karenannya kolom yang baik
mempunyai nilai H yang rendah. Semakin kecil ukuran partikel, maka semakin
hubungan antara tinggi lempeng teoritis dan kecepatan alir (kurva Van Deemter).
yang tinggi. Bilangan lempeng (N) akan meningkat dengan adanya beberapa
faktor yaitu : kolom yang dikemas dengan baik, kolom yang lebih panjang,
partikel fase diam yang lebih kecil, viskositas fase gerak yang lebih rendah dan
36
suhu yang lebih tinggi, molekul-molekul sampel yang lebih kecil, pengaruh di
kinerja kromatografi yang kurang baik adalah ketika ditemukan suatu puncak
simetri. Jika puncak yang akan dikuantifikasi adalah asimetri, maka suatu
2004). Validasi metode analisis diartikan sebagai suatu prosedur yang digunakan
seperti yang diharapkan dengan kecermatan dan ketelitian yang memadai. Metode
dianalisis dan kompleksnya matriks sampel yang dianalisis (Mulja dan Suharman,
1995). Untuk itu diperlukan suatu pedoman mengenai kesahihan metode analisis
1. Akurasi
kedekatan hasil analis dengan kadar analit yang sebenarnya. Akurasi dinyatakan
2004). Kriteria rentang recovery yang dapat diterima dapat dilihat pada tabel IV.
38
Tabel IV. Kriteria rentang recovery yang dapat diterima (Harmita, 2004)
2. Presisi
kesesuaian antara hasil uji individual, diukur melalui penyebaran hasil individual
dari rata-rata jika prosedur diterapkan secara berulang pada sampel-sampel yang
memiliki presisi yang baik apabila memiliki KV < 2 % tetapi kriteria ini fleksibel
tergantung dari kondisi analit yang diperiksa, jumlah sampel dan kondisi
Kadar Analit KV
(%)
≥1% 2,5
0,1 % 5
1 ppm 16
1 ppb 32
39
konsentrasi (jumlah) analit di dalam sampel. Rentang adalah jarak antara level
terbawah dan teratas dari metode analisis yang telah dipakai untuk mendapatkan
presisi, linieritas dan akurasi yang bisa diterima (Anonim, 2007). Persyaratan data
linearitas yang bisa diterima jika memenuhi nilai koefisien korelasi (r) > 0,99 atau
4. Spesifisitas
zat tertentu saja secara cermat dan seksama dengan adanya komponen lain yang
senyawa sejenis, senyawa asing lainnya atau pembawa plasebo dengan hasil
kuantitatif sejumlah besar komponen dari serbuk obat atau senyawa aktif
(termasuk preservarif).
sediaan farmasi.
O. Landasan Teori
Gel merupakan sediaan setengah padat yang terdiri dari suspensi yang
dibuat dari partikel anorganik yang kecil atau molekul organik yang besar
terpenetrasi oleh suatu cairan. Dalam sediaan gel terdapat gelling agent yang
membentuk gel pada saat pendinginan dan kembali cair pada saat dipanaskan serta
link) antar rantai polimer gelling agent karagenin sehingga akan mengakibatkan
polimer karaginan dalam larutan menjadi random coil (acak) dengan lepasnya
tambahan dalam jelly mudah untuk diisolasi dari sediaan termasuk senyawa
parasetamol di dalamnya.
sediaan. Karena adanya pengaruh suhu yang tinggi yaitu 60ºC, dikhawatirkan
dapat mendegradasi zat aktif sehingga kadar parasetamol yang ada didalam
suatu sistem kromatografi yang fase geraknya dialirkan dengan cepat dengan
42
memadai.
P. Hipotesis
1. Metode HPLC fase terbalik mempunyai validitas yang baik untuk menetapkan
BAB III
METODE PENELITIAN
manipulasi terhadap subjek uji, yaitu jelly parasetamol. Penelitian ini hanya
1. Klasifikasi Variabel
a. Variabel Bebas
b. Variabel Tergantung
Kadar parasetamol dalam jelly.
2. Definisi Operasional
a. Jelly merupakan sistem semipadat terdiri dari suspensi yang dibuat dari
partikel anorganik yang kecil atau molekul organik yang besar terpenetrasi
43
44
reserved phase C18 dan fase gerak campuran metanol dan aquabides
(90:10).
C. Bahan Penelitian
(Ikapharmindo Pharmaceutical).
D. Alat Penelitian
UV/Vis merk Perkin-Elmer Lambda 20, Kuvet, Sistem HPLC yang terdiri dari :
pompa merk Shimadzu model LC-10 AD No. C20293309457 J2, detector UV-
computer merk Compaq, printer Hewlett Packard Deskjet 670 C, injector jenis
katup suntik model 77251, kolom C18 Merek KNAUER dengan packing Kromasil
100-5, panjang kolom 25 cm, internal diameter 4,6mm, syringe merk Hamilton
penyaring miliphore ukuran pori 0,45 µm, neraca analitik Scaltec SBC 22 max
60/210 g; d = 0,01/0,1 mg; e = 1 mg, seperangkat alat-alat gelas: pipet ukur, pipet
45
volume, beker glass, labu takar, gelas ukur, buret 10,0 ml, kompor listrik beserta
magnetic stirrer.
500,0 ml, campuran tersebut digojog dan disaring dengan kertas Whatman
dengan fase gerak sampai volumenya tepat 10,0 ml (larutan stok). Larutan ini
kemudian dipipet 0,5 ml lalu dimasukkan dalam labu takar 50 ml dan diencerkan
dengan fase gerak hingga volumenya tepat 50,0 ml (larutan intermediet). Dari
larutan intermediet ini kemudian dibuat larutan baru dengan konsentrasi 3,0 ; 4,0
5,0 ; 6,0 ; 7,0 ; 8,0 ppm. Masing-masing seri larutan baku disaring dengan
dengan fase gerak dalam labu takar 10 ml sampai tanda. Larutan ini dibaca
parasetamol.
dibuat pada point 2 disuntikkan dalam injector port pada sistem HPLC
dengan packing Kromasil 100-5 panjang kolom 25 cm, internal diameter 4,6mm,
muncul dan nilai AUC dari masing-masing puncak. Dengan metode regresi linier,
replikasi 3x dan di ambil kurva baku terbaik dengan nilai r > 0,999. Selain itu,
dilihat pula waktu retensi dari masing-masing seri larutan baku parasetamol.
diencerkan dengan fase gerak sampai volumenya tepat 10,0 ml (larutan stok).
Larutan ini kemudian dipipet 0,5 ml lalu dimasukkan dalam labu takar 50 ml dan
intermediet). Dari larutan intermediet ini kemudian dibuat larutan baru dengan
47
konsentrasi 3,0 ; 5,0 ; 8,0 ppm. Masing-masing seri larutan baku direplikasi 3 kali
lalu disaring dengan miliphore dengan ukuran diameter 0,45 μm dan di degassing
serbuk jelly ditimbang, dilarutkan dengan 300 ml aquabides dalam beaker glass
500 ml dan dipanaskan sampai mendidih pada suhu 100ºC selama kurang lebih 5
menit sambil diaduk sampai semua serbuk larut merata dan homogen. Dinginkan
masing cetakan berisi 15 ml jelly, diamkan selama beberapa saat hingga semua
jelly memadat.
bersama 100 ml aquabidest hingga jelly mencair. Pipet larutan jelly sebanyak 0,5
ml dan encerkan dengan fase gerak ad 50,0 ml. Ambil 6,6 ml larutan intermediet
dengan menggunakan buret 10,0 ml dan encerkan dengan fase gerak ad 10,0 ml
(larutan blanko). Kemudian larutan blanko disaring dengan miliphore ukuran pori
sistem HPLC
6,4286 g serbuk jelly ditimbang, dilarutkan dengan 285 ml aquabides lalu diaduk
selama kurang lebih 5 menit sampai semua serbuk larut merata. Setelah itu larutan
parasetamol hingga volumenya tepat 15,0 ml. Suhu saat pencampuran antara jelly
dan parasetamol di atur dan di kontrol pada suhu < 50ºC diamkan selama
beberapa saat hingga semua jelly memadat. Kemudian mengambil secara acak
penetapan kadar.
selama 30 menit dalam 100 ml aquabidest hingga jelly mencair dan di bantu
dengan magnetic stirrer pada kecepatan 500 rpm. Pipet larutan sebanyak 0,5 ml
dan di encerkan dengan fase gerak ad 50,0 ml. Ambil 6,6 ml larutan ini dengan
menggunakan buret 10,0 ml dan encerkan dengan fase gerak ad 10,0 ml. Larutan
Hasil yang diperoleh berupa luas area kromatogram dari berbagai variasi
konsentrasi zat baku dan sampel. Kurva baku dipersiapkan yang menyatakan
hubungan antara kadar vs luas area dapat dihasilkan. Kadar parasetamol dalam
F. Analisis Hasil
1. Validasi metode
a. Akurasi
% recovery =
Metode ini dikatakan memiliki akurasi yang baik jika nilai % recovery berada
pada rentang 98-102 % untuk analit pada matriks sampel 100% (Harmita,
2004).
d. Presisi
x 100%
Suatu metode dapat dinyatakan memiliki presisi yang baik apabila memiliki
e. Linearitas
y = bx + a
Linieritas yang baik ialah nilai r yang lebih besar dari 0,999 untuk minimal 6
d. Spesifisitas
2. Analisis Kuantitatif
dalam jelly berdasarkan analisi data AUC sampel dan kurva baku parasetamol.
Satuan untuk menetapka kadar parasetamol dalam jelly adalah mg/kemasan. Data
berikut :
% recovery =
51
BAB IV
bersifat polar. Pemilihan fase gerak sangat penting karena hal ini dapat
sampel yang akan dianalisis. Fase diam yang digunakan adalah kolom C18 yang
bersifat non polar sehingga sistem kromatografi yang digunakan adalah sistem
kromatografi partisi fase terbalik. Pemilihan sistem kromatografi yang tepat dan
sesuai dengan sampel yang dipisahkan, akan menghasilkan pemisahan yang baik.
Stevenson (1978), dimana parasetamol memiliki BM < 2000 (yaitu 151,16), tidak
larut dalam air, homolog, maka dipilih kromatografi partisi dengan fase diam non
polar dan fase gerak bersifat polar. Selain itu pemilihan kondisi kromatografi juga
didasarkan pada penuntun pemilihan kolom dan sistem HPLC menurut Gritter
kepolaran yang tinggi maka dipilih kolom Oktadekil (C18) dengan sistem fase
terbalik.
dapat memisahkan analit dari sampel dengan waktu analisis yang cepat (waktu
51
52
retensi analit yang singkat) karena analit bersifat polar akan terelusi lebih cepat
besar pada etanol. Pada penelitian ini menggunakan pelarut metanol tidak etanol
karena metanol juga dapat melarutkan parasetamol dengan baik dan metanol juga
memiliki viskositas yang lebih rendah yaitu 0,59 cP pada suhu analisis 20ºC
daripada etanol yaitu 1,22 cP pada suhu analisis 20ºC sehingga dengan viskositas
yang lebih rendah dari metanol dapat mengurangi tekanan pada kolom dan pada
komponen campuran dalam sampel dengan baik. Fase gerak sebelum digunakan
dan kolom dapat dihindari serta kondisi injector port tetap dalam keadaan
menghilangkan gas-gas yang terlarut dalam fase gerak. Adanya gelembung gas ini
palsu/bias bahkan dengan banyaknya gelembung gas yang berukuran besar dapat
spektrofotometer ultraviolet
oleh detektor UV
menggunakan konsentrasi larutan baku dengan konsentrasi 5,0 ppm dan dilakukan
pada konsentrasi yang sama ini perlu dilakukan karena senyawa baku parasetamol
yang dipakai adalah parasetamol kualitas working standard dimana perlu di uji
parasetamol dan dapat memberikan spektrum serapan maksimum yang sama pada
auksokrom dimana kedua gugus ini yang bertanggung jawab dalam penyerapan
54
memiliki gugus kromofor yang merupakan ikatan rangkap yang memiliki elektron
π dimana elektron π ini jika dikenai sinar radiasi elektromagnetik akan mudah
tereksitasi ke tingkat yang lebih tinggi yaitu menuju ke orbital π*. Gugus
kromofor dari senyawa parasetamol dapat dilihat pada gambar dibawah ini
Keterangan : = kromofor
elektron bebas pada elektron n yang dapat berinteraksi dengan elekron π pada
Keterangan : = auksokrom
55
maksimum tersebut tepat atau dalam batas 2 nm dari panjang gelombang yang
Pelarut yang digunakan dalam seri larutan baku adalah campuran antara
mempengaruhi hasil dari pengamatan karena panjang gelombang (λ) dari metanol
dan pada replikasi 2 spektrum serapan maksimum parasetamol adalah 247,4 nm.
Pola absorbansi dari spektrum serapan yang dihasilkan dari dua kali pengamatan
pada konsentrasi 5,0 ppm ini sama. Maka dapat di pastikan analit yang digunakan
adalah parasetamol
campuran pelarut metanol dan air memiliki serapan maksimum pada 244 nm. Dan
panjang gelombang. Pergeseran ini disebabkan oleh perbandingan jumlah air dan
metanol yang digunakan dimana dalam Farmakope Indonesia Edisis IV, jumlah
air yang digunakan lebih banyak daripada metanol. Namun dalam penelitian,
jumlah metanol yang digunakan lebih banyak daripada air. Selain itu
λ 205 nm yang lebih banyak daripada air akan menggeser λmaks teoritis dari
larutan baku parasetamol diinjeksikan pada HPLC dengan kondisi sebagai berikut:
AUFs/Attenuation : 0,01/7
Tujuan dari pengamatan waktu retensi (tR) dari parasetamol adalah untuk
injector sampai keluar dari kolom dan sinyalnya ditangkap oleh detektor. Selain
itu pengamatan tR juga digunakan sebagai analisis kualitatif yang nantinya untuk
retensi memakai seri larutan baku parasetamol dengan konsentrasi tengah yaitu
5,0 ppm. Dipilih konsentrasi tengah karena untuk mewakili seri konsentrasi
rendah dan tinggi dan pemilihan seri konsentrasi tengah ini hanya semata-mata
setting system pada alat HPLC yaitu stop time. Dan tR yang dihasilkan adalah
dengan fase diam dan fase geraknya atau dengan kata lain dipengaruhi oleh
koefisien partisi dari parasetamol terhadap fase diam dan fase geraknya.
Parasetamol memiliki sisi polar dan non polar pada strukturnya. Pada penelitian
ini sistem kromatografi yang digunakan adalah kromatografi partisi fase terbalik
dimana fase diam yang digunakan bersifat non polar dan fase geraknya bersifat
polar. Oleh karena itu, senyawa yang cenderung bersifat non polar atau senyawa
yang mempunyai banyak gugus non polar pada suatu senyawa menyebabkan
senyawa akan lebih lama keluar dari kolom sehingga waktu retensinyapun akan
lebih besar. Interaksi parasetamol dengan fase diam terjadi pada bagian non polar
senyawa yaitu pada benzen. Gugus non polar parasetamol adalah sebagai berikut :
59
Parasetamol memiliki gugus non polar yaitu benzen, namun proses elusi
juga dipengaruhi interaksi dengan fase gerak yang digunakan. Hal ini sesuai
dengan teori koefisien partisi di mana senyawa dengan koefisien partisi kecil akan
lebih cepat keluar dari kolom karena konsentrasi linarut dalam fase gerak lebih
besar sehingga akan lebih cepat terelusi. Berikut kemungkinan interaksi antara
parasetamol dengan dengan fase diam Oktadekil (C18) dan fase gerak metanol:air
(90:10) :
Gambar 23. Interaksi antara gugus non polar dari parasetamol (benzen)
dengan fase diam Oktadekil (C18)
60
Gambar 24. Interaksi antara gugus parasetamol dengan fase gerak campuran
metanol:air (90:10)
Keterangan : -------- = ikatan hidrogen
antara analit dengan fase diam dan fase gerak yang digunakan. Semakin
banyaknya gugus non polar pada suatu senyawa maka senyawa tersebut terikat
lebih kuat dengan fase diamnya yang bersifat non polar dan mengakibatkan waktu
retensinya juga lebih panjang. Dalam penelitian ini, parasetamol lebih sedikit
memiliki gugus non polar daripada gugus polarnya sehingga waktu retensinya
juga lebih singkat. Interaksi parasetamol dengan fase diam merupakan ikatan van
der Waals antara gugus non polar parasetamol yaitu benzen dengan fase diamnya
distribusi dan besarnya distribusi ditentukan oleh afinitas pada fase diam dan fase
yang besar terhadap fase geraknya dibandingkan dengan fase diam yang terlihat
dengan banyaknya interaksi parasetamol dengan fase geraknya (dapat dilihat pada
gambar 24). Sehingga dengan semakin besarnya konsentrasi solut pada fase gerak
dan akibatnya waktu retensi parasetamol menjadi lebih singkat. Selain itu, waktu
retensi parasetamol yang singkat ini juga dipengaruhi oleh kecepatan alir fase
gerak yang cukup besar yaitu 1 ml/menit dimana dengan meningkatnya kecepatan
alir fase gerak maka tekanan fase gerak pada kolom akan meningkat akibatnya
seri konsentrasi yaitu 3,0 ppm; 4,0 ppm; 5,0 ppm; 6,0 ppm; 7,0 ppm; dan 8,0 ppm.
Tiap seri konsentrasi baku parasetamol di injeksikan pada injector port di alat
gerak yang terdiri dari campuran metanol:aquabides (90:10) untuk pelarut seri
larutan baku di dasarkan atas kelarutan parasetamol, karena salah satu syarat yang
harus dipenuhi dalam sistem HPLC adalah pelarut dengan kemurnian yang tinggi
yang dapat bercampur dengan sampel dan fase gerak, serta dapat melarutkan
dengan tujuan untuk mendapatkan persamaan kurva baku yang paling optimal.
AUC dimana dengan meningkatnya konsentrasi maka akan meningkat pula AUC
yaitu didasarkan pada nilai r terhitung, nilai A (intersept), nilai B (slope), dan SE
(standard error). Dalam penelitian ini, parameter utama yang dipilih adalah
didapatkan lebih besar dari nilai r linearitas analisis yaitu > 0,999 untuk minimal 6
Dari data yang didapatkan, dapat dilihat bahwa nilai r yang diperoleh dari
ketiga replikasi memiliki nilai koefisien korelasi (r) yang baik. Namun
apabila nilai r > 0,999 untuk minimal 6 seri konsentrasi (APVMA, 2004).
63
Sehingga persamaan kurva baku yang digunakan adalah penentuan kurva baku
menggunakan teknik preparasi pemanasan ini adalah untuk melihat validitas dari
komponen dari serbuk obat atau senyawa aktif (termasuk preservarif) dalam
sediaan obat jadi. Jumlah parasetamol sebagai zat aktif dalam sediaan obat jadi
cukup besar yaitu 120 mg per satuan jelly. Jadi dapat disimpulkan bahwa validasi
yang dilakukan pada penelitian ini termasuk dalam kategori I menurut USP 28.
macam konsentrasi yaitu konsentrasi rendah 3,0 ppm ; konsentrasi tengah 5,0 ppm
sebanyak 3 kali. Pemilihan konsentrasi rendah, tengah, tinggi ini adalah untuk
mewakili keseluruhan konsentrasi yang di buat yaitu antara konsentrasi 3,0 ppm
1. Akurasi
yang sesungguhnya. Akurasi suatu metode dalam penelitian ini dinyatakan dengan
recovery yang digunakan pada penelitian ini adalah metode simulasi (spiked-
pada matriks sampel sebesar 100% biasanya disepakati 98-102% (Harmita, 2004).
pada tiap level konsentrasi yang berbeda berada pada rentang nilai % recovery
yang disepakati untuk analit pada matriks sampel sebesar 100% yaitu 98-102%.
2. Presisi
Presisi adalah suatu ukuran kedekatan nilai data satu dengan data lainnya
dalam suatu pengukuran pada kondisi analisis yang sama. Presisi seringkali
Variation (CV) untuk sejumlah sampel yang berbeda bermakna secara statistik.
Tabel X. Data CV
Konsentrasi CV
(ppm) (%)
3,0 4,3174
5,0 4,3156
8,0 0,6654
Dari data dan perhitungan yang telah dilakukan, diperoleh nilai CV yang
merupakan nilai CV yang baik dan sudah sesuai dengan nilai CV yang
dipersyaratkan yaitu 2% atau kurang. Namun pada level konsentrasi rendah (3,0
ppm) dan level konsentrasi tengah (5,0 ppm) CV yang didapatkan sebesar
3. Spesifisitas
akurat respon analit parasetamol di antara seluruh komponen sampel yang ada
dalam campuran sampel. Cara menganalisis hasil dari parameter spesifisitas pada
terbalik dalam penelitian ini adalah dengan membandingkan data tR dari baku dan
data tR dari sampel dalam campuran pada kondisi sistem HPLC yang sama.
Tabel XI. Perbandingan pengamatan waktu retensi seri larutan baku parasetamol
dengan sampel
sampel pada metode HPLC. Analisis kualitatif ini juga dapat digunakan pula
sebagai salah satu cara untuk menganalisis parameter validitas yaitu spesifisitas.
parasetamol konsentrasi 8,0 ppm dan sampel pada replikasi 6 dengan konsentrasi
Gambar 26. tR seri baku parasetamol konsentrasi 8,0 ppm = 2, 525 menit
Gambar 27. tR sampel replikasi 6 dengan konsentrasi 7,4587 ppm = 2, 542 menit
Dari dua perbandingan antara larutan seri baku 8,1920 ppm tR = 2,525
menit dan sampel replikasi 6 dengan konsentrasi 7,4587 ppm tR = 2,542 menit
sampel dengan baku, untuk mengetahui spesifisitas dari metode juga dapat
sampel dengan analit yang dapat dilihat pada gambar 28 dan 29.
70
sampel maka akan terdeteksi pula adanya peak dari analit parasetamol. Berbeda
dengan Gambar 29 dimana dengan tidak adanya analit dalam sampel maka tidak
Sehingga dari data ini dapat di simpulkan bahwa metode penetapan kadar
akurat, cermat dan seksama mengukur respon analit parasetamol dalam campuran
4. Linearitas
memperoleh hasil uji yang proporsional dengan konsentrasi analit pada sampel
yang dinyatakan dengan koefisien korelasi (r). Linearitas yang baik ialah nilai r
yang lebih besar dari 0,999 untuk minimal 6 seri konsentrasi (Anonim, 2008).
Dari data yang didapatkan, dapat dilihat bahwa nilai r yang diperoleh dari
kurva baku pada replikasi kedua memiliki nilai koefisien korelasi (r) yang baik.
bahwa terdapat hubungan linier antara konsentrasi dengan AUC dimana dengan
meningkatnya konsentrasi maka akan meningkat pula respon dalam bentuk AUC
yang dihasilkan.
5. Range
penelitian ini sangat ditentukan oleh beberapa hal diantaranya adalah preparasi
sampel dan kondisi instrumen yang digunakan. Tahap preparasi sampel menjadi
tahap yang penting karena tahap preparasi yang cukup panjang akan berpotensi
instrumen juga menentukan hasil dari nilai parameter validasi dimana instrumen
yang dipakai harus terkalibrasi dengan pedoman standar yang berlaku dan
pengukuran konsentrasi sampel dibuat pada kadar tinggi yaitu 8,0 ppm yang
2. Penyiapan Sampel
Pada penelitian ini sampel yang digunakan merupakan bentuk sediaan gel
parasetamol oral (jelly). Prinsip pengambilan sampel yang dipilih adalah secara
random (cuplikan random, cuplikan acak) dimana cara pengambilan sampel ini
73
harus terlebih dulu digerus secara homogen terlebih dahulu (untuk tablet), baru
dilakukan pengambilan sampel satu per satu secara random (Rohman, 2009).
Dipilih prinsip pengambilan sampel secara random agar jumlah analit yaitu
parasetamol bisa diketahui secara pasti tiap kemasannya (tiap cup jelly) dan untuk
karena disesuaikan dengan jumlah sampel minimal untuk analisis yaitu minimal 3
dan persyaratan homogen dalam sampling ini terletak pada proses penimbangan
sampel satu per satu yang dilakukan di timbangan analitik, serta jelly dibuat dalam
sekali jadi.
Karagenin dapat larut dalam air karena adanya ikatan hidrogen. Setelah
terbentuk gel dimana air terjebak di dalam struktur karagenin membentuk struktur
helix (pilinan ganda) yang tidak larut air karena sistem gel yang sudah memadat
membentuk gel dalam air (hidrogel) dan bersifat reversibel yaitu meleleh jika
koloid (Sugianto, 2006). Sehingga teknik preparasi sampel yang digunakan adalah
pada kecepatan 500 rpm. Pemilihan suhu terkontrol 50ºC selama 30 menit ini
didasarkan dari penelitian Tamara K.I., (2009) mengenai Optimasi suhu dan
waktu pemanasan pada proses preparasi jelly dengan aplikasi design faktorial.
Dalam preparasi sampel, destruksi gelling agent perlu dilakukan karena bentuk
sediaan berupa sediaan semi padat yang harus diubah wujudnya menjadi larutan
jernih yang nanti siap untuk diinjeksikan, karena salah satu persyaratan analit
yang dapat diinjeksikan ke dalam port injector dan dianalisis menggunakan HPLC
adalah analit berupa cairan yang jernih dan terbebas dari endapan dan partikel
besar.
link) antar rantai polimer gelling agent karagenin sehingga akan mengakibatkan
polimer karaginan dalam larutan menjadi random coil (acak) dengan lepasnya
ikatan glikosidik α-1,3 dan β-1,4 secara bergantian (FMC Corp 1977)
parasetamol dalam media air dalam matrix tiga dimensi keluar dan ikut terlarut
bersama media air. Suhu pemanasan yang terkontrol ini diharapkan tidak
75
pada sistem menggunakan magnetic stirrer pada kecepatan 500 rpm. Kecepatan
pengadukan dimana dengan mengatur pada kecepatan pengadukan 500 rpm dapat
gel yang lebih merata. Dalam penetapan kadar, karagenin tidak terdeteksi oleh
detektor UV pada sistem HPLC karena monomer dari karagenin yaitu D-galaktosa
dan perhitungan maka diperoleh kadar rata-rata dari 10 sampel yang dianalisis
Akurasi untuk kadar obat yang lebih besar biasanya disepakati 95-105% (Mulja
dan Hanwar, 2003). Hanya terdapat lima sampel yang memenuhi parameter
akurasi yang disepakati, yaitu sampel replikasi 1, 2, 7, 8, dan 10. Data pengukuran
SD = 4,0940
X = 111,1855 mg
CV = 3,6821%
yang di uji ini dapat disebabkan oleh proses preparasi yang cukup panjang
Hal-hal yang perlu diperhatikan yang dapat menjadi faktor penting dalam
validasi metode analisis dan penetapkan kadar parasetamol dalam jelly adalah
77
tersebut, serta mengontrol dengan cermat dan teliti suhu pemanasan untuk
BAB V
A. Kesimpulan
B. Saran
1. Penelitian ini perlu dilanjutkan dengan uji stabilitas sediaan jelly parasetamol
2. Penelitian ini juga perlu dilanjutkan dengan uji disolusi bentuk sediaan jelly
yang mengandung zat aktif parasetamol untuk melihat profil kelarutan obat
78
79
DAFTAR PUSTAKA
Angka SL, Suhartono TS. 2000. Bioteknologi Hasil Laut. Bogor: Pusat Kajian
Sumber Daya Pesisir dan Lautan. Institut Pertanian Bogor, 49-56
Anonim, 1990, The HPLC Applications Book Volume I, 3-6, Hewlett Packard,
California USA
Anonim, 2005, The United States Pharmacopeia 28th edition, 2748-2751, United
States Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville
APVMA, 2004, Guidelines for The Validation of Analytical Methods for Active
Constituent, Agricultural, and Veterinary Chemical Products, APVMA,
http://www.apvma.gov.au, diakses tanggal 5 Juni 2009
Buchmann, S., in Barel, O.A., Paye, and M., Maibach H. I., 2001, Handbook of
Cosmetic Science and Technology, 156, Marcel Dekker inc., United Stated
of America.
Clarke, E.G.C., 1986, Isolation and Identification of Drugs, 2nd edition, 234, 465,
538, The Pharmaceutical Press, London
Connors, K.A., Amidon, G.L. and Stella, V.J., 1986, Chemical Stability of
Pharmaceutical, John Willey and Sons, New York, 3-26, 163-168.
80
Fessenden dan Fessenden, 1997, Kimia Organik, edisi IV, jilid 2, Diterjemahkan
oleh Aloysus Hadyana Pudjaatmaka, 436-443, Penerbit Erlangga, Jakarta
Glicksman M. 1969. Gum Technology in the Food Industr, 214- 224, New
York:.Academic Press
Handajani D., Kusumawardini W., Suryanto B., 2006, Jeli Mengkonsumsi Jelly,
http://www.ayahbunda.com, diakses tanggal 7 Februari 2009
Lachman, L., Lieberman, H. A., Kanig, J. L., 1986, Teori dan Praktek Farmasi
Industri, Edisi ketiga, diterjemahkan oleh: Suyatmi, S., 760-779, 1514 –
1587, Penerbit Universitas Indonesia, Jakarta
Mulja,M. dan Hanwar, D., 2003, Prinsip-Prinsip Cara Berlaboratorim yang Baik
(Good Laboratory Practise), Majalah Farmasi Indonesi Airlangga, Vol.III,
No.2, 71-76, Universitas Airlangga Press, Surabaya
Putra, E.D.L., 2004, Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Dalam Bidang Farmasi,
Fakultas Farmasi Universitas Sumatra Utara, 2, 5-8
Rahardja, Drs. K., 2007, Obat-Obat Penting, edisi IV, 318, PT Elex Media
Komputindo, Jakarta
Rohman, A., 2009, Kromatografi Untuk Analisis Obat, 5-15, Graha Ilmu,
Yogyakarta
Snyder, I.R., dkk, 1997, Practical HPLC Method Development, 2nd ed., 208-209,
252, 695-697, John Willey & Sons Inc., New York
Widyaningtyas Y., Kuncoro K.B., Rahayu V.D., Octa F.D.R., Ramdani E.D.,
Formulasi dan Penetapan Kadar Sediaan Parasetamol Dalam Bentuk
Jelly untuk meningkatkan Kepatuhan Anak Minum Obat, Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta
Zatz, J,L., and Kushla, G.P., 1996, Gels, in Lieberman, H.A., Rieger, M.M., and
Banker, G.S., Pharmaceutical Dosage Forms Disperse Systems, Volume
2, 2nd edition, Marcel Dekker, Inc., USA
83
84
Berat (gram)
Replikasi
Kertas kosong Kertas + zat Kertas + sisa zat
a. Skema pembuatan
Larutkan dalam fase gerak metanol : aquabides (90 : 10) ad 10,0 ml (larutan stok)
Pipet larutan stok sebanyak 0,5 ml dan encerkan dengan fase gerak hingga
volumenya tepat 50,0 ml (larutan intermediet)
Pipet larutan intermediet sebanyak 3,0 ml, 4,0 ml, 5,0 ml, 6,0 ml , 7,0 ml, 8,0 ml
b. Perhitungan seri baku parasetamol (hasil dari penentuan kurva baku ke-2)
C2 = 10,2400 ppm
(LarutanA)
88
Seri Volume
Kadar pemipetan Perhitungan kadar parasetamol
(ml)
1 3,0
2 4,0
3 5,0
4 6,0
5 7,0
6 8,0
89
Berat (gram)
Sampel
Kertas kosong Kertas + zat Kertas + sisa zat
1. 0,1843 0,3043 0,1845 0,1198
2. 0,1833 0,2970 0,1840 0,1130
3. 0,1875 0,3094 0,1879 0,1215
4. 0,1858 0,2985 0,1861 0,1124
5. 0,1853 0,3063 0,1856 0,1207
6. 0,1899 0,3032 0,1902 0,1130
7. 0,1894 0,3028 0,1897 0,1131
8. 0,1869 0,3051 0,1871 0,1180
9. 0,1833 0,3055 0,1835 0,1220
10. 0,1902 0,3064 0,1904 0,1160
107
a. Skema pembuatan
Destruksi sistem gel dilakukan pada suhu terkontrol 50ºC selama 30 menit, di
lakukan di atas heater listrik, dan di bantu dengan pengadukan menggunakan
magnetic stirrer dengan kecepatan 500 rpm
(Larutan induk sampel)
sampel 1)
Memipet 0,5 ml Larutan induk sampel di encerkan dalam 50,0 ml fase gerak ad
hingga batas (Larutan intermediet sampel) dan Ambil 6,6 ml larutan intermediet
(Analit).
2. Kadar parasetamol terukur dalam jelly hasil penelitian pada simulasi sampel (di
simulasikan sampel 1)
nilai koefisien korelasi (r) terbaik yaitu pada penentuan kurva baku ke dua dengan
Contoh :
y = 417154
y = 54646,32x – 2466,39
X = 7,6788 ppm
1163,4545 ppm
% Recovery sampel :
110
SD = 4,0940
X = 111,1855 mg
CV = 3,6821%
111
Sampel 1
112
Sampel 2
113
Sampel 3
114
Sampel 4
115
Sampel 5
116
Sampel. 6
117
Sampel 7
118
Sampel 8
119
Sampel 9
120
Sampel 10
121
BIOGRAFI PENULIS