UJI HEMAGGLUTINASI (HA) DAN UJI HAMBATAN HEMAGGLUTINASI (HI)

PENYAKIT TETELO (NEWCASTLE DISEASE)

1. Tujuan
Untuk mengukur derajad kekebalan terhadap penyakit Tetelo dengan cara uji HA dan HI
2. Alat dan Bahan
a. Alat
Mikropipet 25, 100, 1000
Microplate 96 well v/u shape
Microtip
Tabung reaksi

b. Bahan
Sampel: Darah ayam (Eritrosit dan Sera)
PBS
Larutan alsever
Antigen ND
3. Prosedur
a. Pembuatan Larutan Alsever
1) Sebanyak 2,05 gram dekstrosa; 0,8 gram natrium sitrat; 0,055 gram asam sitrat ;
0,42 gram NaCl ditimbang dan siapkan.
2) Bahan dilarutkan kedalam 100 ml aquades kemudian disterilkan dengan autoclave
suhu 110° C 10 menit.
b. Persiapan Sampel
a. Pembuatan Eritrosit 1 %
1) Sebanyak 5 ml sampel darah ayam ditambahkan 5 ml larutan alsever
2) Sentrifuge 3000 rpm selama 20 menit
3) Pisahkan supernatannya (Serum)
4) Endapan ditambahkan PBS dengan perbandingan 1:1 kemudian sentrifuge 3000
rpm selama 20 menit, buang supernatan.
5) Prosedur no 4 lakukan sebanyak 3 kali.
6) Endapan dibuat suspense 1 % (1 µl dalam 99 µl)
7) Sebanyak 30 µl endapan ditambah 2970 µl PBS, homogenkan setiap kali
dipipet.
b. Pembuatan Sera
1) Sebanyak 5 ml sampel darah ayam disentrifuge 3000 rpm selama 20 menit
2) Supernatannya (Serum) diambil dan dipisahkan
3) Sera diinaktifasi dengan pemanasan 56° C selama 30 menit. Sera dapat
disimpan pada suhu beku sampai digunakan.
c. Uji HA
1) Microplate 96 well u/v shape disiapkan
2) Masukkan PBS pada lubang A1-A12 masing-masing sebanyak 25 µl.
 3) Masukkan antigen sebanyak 25 µl pada A1, homogenkan.
4) Ambil/ Pipet larutan pada lubang A1 sebanyak 25 µl kemudian masukkan pada
lubang A2 dan lakukan pengenceran sampai seterusnya.
5) Pada lubang A12 buang larutan sebanyak 25 µl.
6) Tambahkan sampel eritrosit 1 % pada lubang A1-A12 masing-masing sebanyak 25
µl.
7) Homogenkan dengan cara digoyang kemudian diinkubasi di refrigerator (suhu 2-
8°C) selama 1 jam

d. Kontrol HA
1) Microplate 96 well u/v shape disiapkan
2) Masukkan PBS pada lubang C1-C6 masing-masing sebanyak 25 µl.
3) Masukkan antigen sebanyak 25 µl pada C1, homogenkan.
4) Ambil/ Pipet larutan pada lubang C1 sebanyak 25 µl kemudian masukkan pada
lubang C2 dan lakukan pengenceran sampai C6.
5) Pada lubang C6 buang larutan sebanyak 25 µl.
6) Tambahkan sampel eritrosit 1 % pada lubang C1-C6 masing-masing sebanyak 25
µl.
7) Homogenkan dengan cara digoyang kemudian diinkubasi di refrigerator (suhu 2-
8°C) selama 1 jam

e. Uji HI
1) Microplate 96 well u/v shape disiapkan
2) Masukkan PBS pada lubang A1-A12 masing-masing sebanyak 25 µl.
3) Masukkan Sera sebanyak 25 µl pada A1, homogenkan.
4) Ambil/ Pipet larutan pada lubang A1 sebanyak 25 µl kemudian masukkan pada
lubang A2 dan lakukan pengenceran sampai seterusnya.
5) Pada lubang A12 buang larutan sebanyak 25 µl.
6) Tambahkan antigen pada lubang A1-A10 masing-masing sebanyak 25 µl.
7) Homogenkan dengan cara digoyang kemudian diinkubasi pada incubator suhu 37
derajad C selama 30 menit
8) Tambahkan eritrosit 1% pada lubang A1-A12 masing-masing sebanyak 25 µl tiap
lubang.
9) Homogenkan dengan cara digoyang kemudian diinkubasi di refrigerator (suhu 2-
8°C) selama 1 jam.