3.2.

Hubungan tidak langsung dengan DNA

Mekanisme pensinyalan ER yang dibahas sampai sekarang memberikan penjelasan untuk

pengaturan gen di mana urutan fungsional seperti ERE dapat didokumentasikan dalam
promotor. Kategori lain dari promotor gen, yang tidak memiliki urutan seperti ERE,
membutuhkan faktor transkripsi pengikat DNA kedua untuk menengahi hubungan ER dengan
DNA. Mekanisme ini umumnya disebut sebagai "transkrip-silang". Sekitar 35% dari gen
responsif E2 primer manusia yang dikategorikan ditranskrip melalui asosiasi DNA tidak
langsung ER.

Stimulating protein-1 (Sp-1) adalah mediator utama pengikatan tidak langsung ER-DNA dan
semakin banyak gen yang ditemukan diinduksi oleh E2 melalui mekanisme ini termasuk
reseptor lipoprotein densitas rendah (LDL), endotelial nitric oxide sinthase (eNOS), c-fos,
cyclin D1, dan gen reseptor-1 asam retinoid. Menanggapi stimulasi estrogenik, ER
meningkatkan pengikatan Sp-1 ke situsnya, yang mengandung urutan promotor kaya akan GC
dan berkontribusi pada rekrutmen co-aktivator. Domain pengikat DNA dari ER dapat
digunakan untuk aktivasi tersebut.

Contoh lain adalah interaksi antara ER dan subunit c-rel dari kompleks faktor-kB (NF-kB).
Interaksi ini mencegah NF-kB dari mengikat dan merangsang ekspresi dari promotor
interleukin-6 (IL-6). Dengan cara ini, E2 menghambat ekspresi sitokin IL-6.

Faktor perantara lain di mana E dapat berhubungan dengan promotor / peningkat termasuk:
mengaktifkan faktor transkripsi (ATF) -2 / c-jun atau ATF-2 / cAMP protein elemen pengikat
(CREB) untuk gen D1 cyclin, ATF-1 / CREB untuk gen Bcl-2, dan faktor transkripsi nuclear-
Y untuk gen E2F1 tikus.

ERs memanfaatkan interaksi protein-protein juga untuk meningkatkan transkripsi gen yang
mengandung aktivator situs protein-1 (AP-1) terkait, tetapi tidak identik, dengan yang untuk
faktor transkripsi ATF / CREB. Kompleks AP-1, terdiri dari dimer protein Jun dan eterodimer
Jun / Fos, memainkan peran penting dalam proliferasi sel. Khususnya, aktivasi ER dari IGF-
1 dan ekspresi kolagenase dimediasi melalui interaksi reseptor dengan Fos dan Jun di situs
pengikatan AP-1. Collagenase, insulin-like growth factor (IGF) -1 reseptor, ovalbumin, dan
cyclin D1 adalah contoh gen yang diaktifkan oleh kompleks ER-E2 melalui AP-1.

ER dan ER telah ditunjukkan memberi sinyal dengan cara yang berlawanan di situs AP-1.
ER mengaktifkan transkripsi di hadapan E2, sedangkan ER-E2 menghambat transkripsi
yang bergantung pada AP-1. Studi menunjukkan bahwa aktivasi ER-E2 dari elemen-elemen
responsif AP-1 membutuhkan domain AF-1 dan AF-2 dari reseptor, yang mengikat dan
meningkatkan aktivitas komponen p160 (misalnya SRC-1 dan SRC-2) dari kompleks co-
activator direkrut ke situs oleh Fos / Jun. Menariknya, ER manusia, yang tidak memiliki AF-
1 fungsional, tidak dapat mengaktifkan transkripsi gen yang diatur AP-1 ketika diikat dengan
agonis ER, menunjukkan kemungkinan tindakan fisiologis yang berbeda dari dua ER melalui
regulasi dari himpunan bagian unik dari gen. Mirip dengan AP-1, E2 yang mengikat ER
menginduksi aktivasi transkripsional ketika dikaitkan dengan Sp-1 di daerah GC-rich. Namun,
interaksi E2 dengan ER tidak menghasilkan pembentukan kompleks transkripsi aktif pada
promotor yang mengandung elemen Sp-1. Sebagai contoh ER dan ER, di hadapan E2,
menentang fungsi masing-masing dalam regulasi promotor D1 cyclin. Ada bukti yang cukup
bahwa cyclin D1, penting untuk perkembangan sel melalui fase G1 dari siklus sel, adalah target
yang jelas untuk tindakan ER-E2 dalam sel karsinoma mammae, meskipun tidak ada
“sempurna” yang dapat dideteksi atau urutan seperti ERE dalam promotor gen D1 cyclin telah
dilaporkan. Penghapusan motif elemen responsif AP-1 dan Sp-1 pada promotor gen Cyclin D1
mengakibatkan pelemahan responsifitas promotor terhadap E2. Tidak seperti ER, ER terikat
E2 menekan ekspresi cyclin D1 dan memblokir induksi yang dimediasi ER-E2 ketika kedua
isoform reseptor hadir. Akibatnya, perbedaan dalam aktivitas transkripsi antara ER dan ER
dapat menjelaskan perbedaan utama dalam tindakan biologis spesifik jaringan mereka.
Kompleksitas ini semakin ditingkatkan dengan adanya berbagai bentuk penyambungan ER,
oleh kemampuan ERs untuk membentuk homodimer dan heterodimer, dan oleh kapasitas
mereka untuk berinteraksi dengan co-regulator yang berbeda.

3.3. Transcriptional Co-Factors

Baik dalam mode aksi langsung dan tidak langsung, ligand di aktifkan ERs bukan pengontrol
transkripsi. Faktanya, ERS perlu berinteraksi dengan protein pengatur bersama (coactivators
atau co-repressors) untuk membentuk platform di mana protein tambahan dikumpulkan. Co-
factors berinteraksi dengan ERs melalui motif Leu mereka yang kaya (yaitu, Leu-Xxx-Xxx-
Leu-Leu, di mana Xxx adalah asam amino apa pun). Beberapa kelas kofaktor ER telah
diidentifikasi. Keluarga co-aktivator pertama yang diidentifikasi dan ditandai dengan baik
terdiri dari tiga anggota terkait SRC-1, yang merupakan anggota pendiri keluarga, SRC-2, dan
SRC-3. Kompleks ko-aktivator besar, yang disebut sebagai kompleks reseptor pengintegrasian
hormon protein / reseptor hormon tiroid (TRAP / DRIP), dapat menghubungkan ERs langsung
ke mesin transkripsi basal melalui fungsi remodeling kromatin intrinsiknya. Selain itu, histone
asetil transferase (misalnya, CBP / p300), histone metil transferase (misalnya, CARM1 dan
PRMT1) dan kompleks remodeling nukleosom (misalnya, SWI / SNF) diperlukan untuk
melepaskan penghambatan transkripsi gen yang bergantung pada kromatin.

Meskipun ada jauh lebih sedikit co-represor reseptor nuklir, molekul-molekul (makro) ini
memainkan peran penting dalam mengatur ekspresi gen yang bergantung pada ER secara
negatif. Dua protein yang berinteraksi dengan AF-2, protein yang berinteraksi-reseptor-140
dan pasangan hetero-dimer pendek, menunjukkan fungsi pengaturan-negatif karena mereka
dapat memusuhi rekan-rekan aktivator SRC-1 in vivo dan bersaing untuk ikatan AF-2 in vitro
[84- 86]. Di sisi lain, ER juga dapat dikaitkan dengan represi transkripsi tertentu seperti
korepresor reseptor nuklir dan kompleks histone deacetylase spesifik.

Ekspresi relatif co-aktivator dan co-repressors, di dalam sel, memengaruhi kemampuan ligan
ER (mis., E2 dan modulator ER selektif (SERMs)) untuk mengatur ekspresi gen.

Karena homologi dalam domain AF-2 mereka (lihat Gambar. (1A)), ER dan ER harus
serupa dalam rekrutmen co-aktivator, tetapi perbedaan tertentu telah dilaporkan. Untuk
reseptor yang terikat E2, ER, tetapi bukan ER, berikatan dengan baik dengan komponen
yang berinteraksi reseptor dari kompleks mediator mamalia, TRAP220. Ada perbedaan antara
afinitas relatif ER dan ER untuk anggota keluarga coactivator p160. Perbedaan yang lebih
jelas diamati dalam kasus SERMs-terikat ERs. Untuk ekspresi gen yang bergantung pada ERE,
SERM 4-hydroxytamoxifen adalah agonis parsial ER, tetapi umumnya tidak dapat
merangsang aktivitas transkripsi ER. Sebaliknya, ketika menilai aktivitas ER pada AP-1 yang
mengandung gen reporter, 4-hydroxytamoxifen akan merangsang aktivitas transkripsi ER
dan ER dengan cara yang tergantung pada sel.

Suatu mekanisme untuk menghentikan transkripsi melibatkan modifikasi kovalen pasca-

translasi ERs dan koaktivator (misalnya, asetilasi lisin dan metilasi arginin), yang dapat
menghambat ikatan ko-aktivator dengan reseptor nuklir atau aktivator transkripsi lainnya
dengan mengubah interaksi protein-protein kritis dengan mengubah interaksi protein-protein
kritis permukaan. Dengan demikian, asetilasi SRC-3 oleh p300 telah terbukti menyebabkan
gangguan kompleks reseptor-ko-aktivator, yang menyebabkan penurunan aktivasi gen yang
dimediasi reseptor. Menggunakan berbagai tes biokimia dan berbasis sel, Krauss dan rekan
kerja menunjukkan ER, tetapi bukan ER, adalah target untuk asetilasi oleh p300 dan telah
mengidentifikasi asetilasi sebagai modulator aktivitas pengatur gen yang bergantung pada
ligand dari ER.

Sejumlah jalur pensinyalan seluler juga memengaruhi ekspresi gen dependen-ER yang
memodulasi perubahan konformasi ER atau rekrutmen co-regulator. Baru-baru ini diketahui
bahwa ko-aktivator dan korepresor juga merupakan substrat untuk kinase, fosforilasi mereka
memengaruhi kemampuan mereka untuk berinteraksi dengan reseptor steroid.

4. ESTROGEN RECEPTOR AKTIVITAS NON-GENOMIK

“Aksi genomik” hormon steroid terjadi setelah jeda waktu minimal 2 jam setelah stimulasi E2
dan menjelaskan beberapa fungsi hormon dalam situasi fisiologis dan patologis. Gambar ini
ditantang ketika dosis fisiologis E2 dilaporkan meningkatkan kadar cAMP uterus pada tikus
yang diovariektomi dalam waktu 15 detik, efek yang terlalu cepat untuk diperhitungkan sebagai
tindakan genomik. Acara ini tidak dibatalkan oleh inhibitor transkripsional dan disebut "cepat
atau non-genomik". Sebenarnya istilah "non-genomik" tidak memadai ketika merujuk pada
perubahan cepat yang juga dapat memulai transkripsi gen baru.

Berbagai jalur pensinyalan diaktifkan saat E2 mengikat ERs. Peristiwa cepat ini dapat
diklasifikasikan menjadi empat kaskade pensinyalan utama: fosfolipase C (PLC) / protein
kinase C (PKCs), Ras / Raf / MAPK, phosphatidyl inositol 3 kinase (PI3K) / AKT, dan cAMP
/ protein kinase A (PKA).

Jalur ini menghadirkan banyak interaksi dengan beberapa jalur lainnya. Kompleks ER-E2
berinteraksi dengan reseptor IGF-1, yang mengarah pada aktivasi reseptor IGF-1 dan
karenanya ke aktivasi jalur pensinyalan MAPK. Selain itu, kompleks ER-E2 mengaktifkan
reseptor EGF dengan mekanisme yang melibatkan aktivasi protein penukar nukleotida guanin
(G-protein), Src, dan matrix metalloproteinases, yang mengarah pada peningkatan kinase yang
diatur ekstraseluler (ERK) dan PI3K / Aktivitas AKT. Dalam sel endotel, jalur Src / PI3K /
AKT memediasi aktivasi cepat E2 yang bergantung pada eNOS dan pelepasan oksida nitrat.
AKT dan PKC juga dapat memodulasi jalur MAPK melalui fosforilasi Raf.

Penting untuk dicatat bahwa aktivasi jalur pensinyalan oleh E2 adalah tipe sel khusus.
Memang, efek E2 pada aktivitas PKC telah diamati di daerah preoptic irisan otak tikus betina,
tetapi tidak di hipotalamus atau korteks. Aktivasi jalur G-protein / Src / PI3K / MAPK oleh E2
terbukti pada akhir, tetapi tidak awal, pre-adiposit tikus yang dibedakan. Persyaratan
diferensial Src / PI3K atau kalsium intraseluler untuk aktivasi MAPK juga diamati dalam
berbagai jenis sel. Isoform PKC yang berbeda diaktifkan dengan cepat oleh E2 dalam sel
HepG2 dan MCF7. Secara keseluruhan, penelitian ini menunjukkan bahwa tindakan cepat E2
bergantung pada sejumlah kondisi seperti set molekul transduksi sinyal dan target hilir yang
ada di sel target, sehingga responsnya cenderung beragam.

Semua hasil ini mengarah pada konsep bahwa ER adalah mediator endogen utama dari
tindakan E2 yang cepat. Lebih sedikit informasi yang tersedia tentang peran yang dimainkan
oleh kompleks ER-E2 untuk mengaktifkan mekanisme non-genomik yang cepat. Subpopulasi
ER yang ditransfusikan menjadi sel ovarium Chinese Hamster mampu mengaktifkan inositol
tris-fosfat, ERK dan JNK fosforilasi. Geraldes dan rekan kerjanya melaporkan bahwa E2
mengurangi aktivitas ERK melalui stimulasi ER pada sel otot polos babi. Kami baru-baru ini
melaporkan kemampuan kompleks ER-E2 untuk mengaktifkan anggota p38 dari keluarga
MAPK, tetapi bukan ERK atau AKT, dalam sel kanker usus besar manusia. Meskipun
informasi yang langka tidak memungkinkan diskusi lengkap tentang kontribusi ER dalam
sinyal cepat yang diinduksi E2, data ini menunjukkan bahwa ER juga dapat berasal kaskade
transduksi sinyal spesifik sel.

Kecepatan di mana E2 menginduksi sinyal cepat serta lokalisasi kompleks pensinyalan

meningkatkan kebutuhan ER membran plasma. Perdebatan terus berlanjut apakah perubahan
struktural menargetkan ERs nuklir di kolam terpisah yang melokalkannya ke membran, atau
apakah membran ER mewakili reseptor baru [137-142]. Selain data ini, banyak bukti
mendukung gagasan bahwa ER yang terlokalisasi membran adalah protein yang sama dengan
reseptor yang terlokalisasi-nuklir. Sekalipun bukti definitif bahwa membran dan ER nuklir
adalah protein yang sama memerlukan isolasi dan "pengurutan" dari dua kolam reseptor, ER
dan ER harus dianggap sebagai populasi protein yang lokalisasi dalam sel mampu secara
dinamis berubah, bolak-balik dari membran ke sitosol dan ke nukleus, tergantung pada
pengikatan ligan.

Bukti saat ini menunjukkan bahwa populasi kecil ER dan ER terlokalisasi pada membran
plasma ada di dalam rakit caveolar. Di membran plasma inilah ER yang berikatan ligan E2
berasosiasi dengan protein perancah caveolin-1 dan berbagai aktivasi kaskade transduksi sinyal
terjadi [mis., PLC, PKC, ERK, PI3K, dan nitric oxide synthase (NOS)]. ERs tidak mengandung
domain trans-membran, sehingga kemampuan ER dan ER untuk berasosiasi dengan
membran plasma dapat disebabkan oleh hubungannya dengan protein membran dan / atau
dengan penambahan lipid pasca-translasi ke ER.
Asam lemak dan isoprenoid adalah dua bagian lipid yang paling umum ditemukan pada protein
termodifikasi pasca-translasi yang terikat pada membran. Tidak ada urutan konsensus untuk N-
acylation (mis., Miristoylation) atau S-prenilation telah ditemukan dalam ER dan ER.
Sebaliknya, S-asilasi (mis., Palmitoylation) tidak memerlukan urutan konsensus, tetapi hanya
residu Cys reaktif.

Residu Cys yang ada di ER dan ER LBD dapat menjalani S-asilasi. Secara khusus, urutan
asam amino yang meliputi residu Cys447 dari ER dan Cys399 dari ER sangat homolog
dengan yang mengelilingi residu Cys132 Spalmitoylated dari manusia caveolin-1. Berdasarkan
pengamatan ini kami menunjukkan bahwa ER menjalani S-palmitoylasi yang mewakili
penentu utama untuk tinggal di membran plasma dan dalam hubungannya dengan caveolin-1.
Patut dicatat bahwa ER juga merupakan protein palmitoylable [Marino M., hasil yang tidak
dipublikasikan].

Karena ER tidak memiliki domain kinase intrinsik, lokalisasi ERs pada membran plasma
memfasilitasi hubungan antara ER dan protein pensinyalan yang memungkinkan aktivasi
peristiwa yang cepat. Src, Shc, proline-, asam glutamat, protein kaya leusin / modulator
aktivitas non-genomik reseptor estrogen (PELP1 / MNAR), subunit PI3K p85, reseptor
tirosin kinase (yaitu reseptor EGF dan IGF-1) ), serta isoform G-protein (yaitu, Gs dan Gq)
semuanya telah dilaporkan berfungsi sebagai komponen kompleks besar protein yang
berinteraksi. Melalui mediasi molekul-molekul ini, E2 mengaktifkan jalur MAPK dan PI3K /
AKT.

Meskipun daftar protein pensinyalan dan adaptor yang berinteraksi dengan ER bertambah,
pembentukan protein-protein kompleks terjadi hanya 5 hingga 15 menit setelah stimulasi E2.
Dengan demikian, perubahan konformasi domain ER LBD, yang mengikuti masuknya E2 ke
dalam sel, tampaknya penting dalam memungkinkan kompleks ER-E2 terlepas dari membran
dan mengalokasikan dengan reseptor faktor pertumbuhan atau protein adaptor untuk
mengaktifkan sinyal hilir.