DAFTAR ISI

MEDIA BIAKAN CAIR (HEART INFUSION BROTH) ................................................................ 1

MEDIA BIAKAN PADAT (Nutrien Agar) ................................................................................ 5
PENGARUH NaCl TERHADAP PERTUMBUHAN MIKROBA (HITUNG JUMLAH KUMAN) ...... 5
PEMERIKSAAN MIKROBAKTERIUM TUBERKULOSIS .......................................................... 10
PEMBUATAN MEDIA LOWENSTEIN-JENSEN (PADAT) ....................................................... 15
PEMERIKSAAN PLASMODIUM DARAH TIPIS ..................................................................... 20
PEMERIKSAAN PLASMODIUM METODE DARAH TEBAL .................................................... 23
PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS HELMINT DENGAN METODE NATIF .................................. 31
PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS HELMINT DENGAN METODE APUNG ................................ 33
PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS HELMINTH DENGAN METODE HARADA MORI ................. 37
PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS HELMINTH DENGAN METODE KATOKATZ ........................ 40
PENGAMBILAN DAN PEMBUATAN SEDIAAN SAMPEL MAKANAN.................................... 43
PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS MIKROBA KERACUNAN MAKANAN................................... 47
PENGAMBILAN DAN PEMBUATAN SEDIAAN SAMPEL AIR ................................................ 51
PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS MIKROBA AIR (MPN) ......................................................... 54
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................................. 60

i|Panduan Praktikum Mikrobiologi

 MEDIA BIAKAN CAIR (HEART INFUSION BROTH)

A. Tujuan
Mahasiswa dapat melakukan pembuatan media, melakukan inokulasi dan
peremajaan biakan secara goresan maupun tusukan dengan baik pada
media padat maupun cair dengan teknik kerja aseptis.

B. Alat dan Bahan

1. Alat
a. Autoklaf
b. Beaker Glass 250 ml
c. Batang Pengaduk
d. Corong
e. Gelas Ukur 5 ml dan 100 ml
f. Tabung reaksi
g. Rak tabung reaksi
h. Pipet Pasteur
i. Hot plate
j. Ose bulat dan Ose tusuk
k. Kapas
l. Kertas Coklat
m. Karet
n. Benang Kasur
o. Spidol
p. Lampu Spirtus
q. Incubator 37°C
2. Bahan
a. Serbuk media Heart Infusion Broth (HIB) dengan komposisi:
 8 gr/L Brain Heart Infusion
 2 gr/L Dextrose
 13,5 gr/L Agar

1|Panduan Praktikum Mikrobiologi

  16 gr/L Pancreatic Digest of Casein
 2,5 gr/L disodium Phosphate
 5 gr/L Peptic Digest of Animal Tissue
 5 gr/L Sodium Chloride
b. Aquadest
c. Biakan bakteri (staphylococcus aureus, pseudomonas aeruginosa,
bacillus subtilis, dan Escherichia coli).

C. Langkah – Langkah :
D. A. Prosedur Pembuatan media HIB
1. Siapkan alat dan bahan
2. Timbang serbuk media HIB sebanyak 3,7 gram masukkan ke dalam
beaker glass
3. Tambahkan aquadest sebanyak 100 ml, dihomogenkan
4. Apabila larutan tidak jernih, maka panaskan larutan sambil diaduk –
aduk hingga larutan larutan menjadi kuning jernih
5. Setelah jernih, masukkan larutan ke dalam 30 tabung reaksi. Masing –
masing tabung reaksi mempunyai volume yang sama
6. Tutup mulut tabung reaksi dengan kapas
7. Ikatkan tabung – tabung tersebut dengan karet dan tutup dengan kertas
coklat dan ikat dengan benang.
8. Masukkan ke dalam autoklaf
9. Sterilkan pada suhu 121°C selama 15 menit
10. Dinginkan dan Simpan media HIB tersebut pada lemari pendingin
B. Prosedur Penanaman Biakan
1. Siapkan alat dan bahan
2. Panaskan ose diatas lampu spirtus hingga membara merah, dinginkan
beberapa saat
3. Ambil biakan kuman secara aseptis
4. Masukkan ose tersebut pada media HIB
5. Aduk perlahan

2|Panduan Praktikum Mikrobiologi

 6. Panaskan ose yang telah digunakan tersebut diatas lampu spirtus hingga
membara merah
7. Masukkan media HIB yang telah ditanam biakan ke dalam inkubator
pada suhu 37°C selama 18 - 24 jam
8. Amati adanya pertumbuhan kuman dengan adanya kekeruhan pada
media HIB tersebut

Catatan:

E. Hasil dan Pembahasan

Hasil:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
...................................................................................................................................

Pembahasan:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................

3|Panduan Praktikum Mikrobiologi

 Praktikan Dosen Pengampu

(............................................................) (............................................................)

4|Panduan Praktikum Mikrobiologi

 MEDIA BIAKAN PADAT (Nutrien Agar)
PENGARUH NaCl TERHADAP PERTUMBUHAN MIKROBA

A. Tujuan
1. Mengetahui perbedaan mikroba gram positif dan negatif,
2. Mengetahui pengaruh vaksin konsentrasi NaCl terhadap pertumbuhan
mikroba gram positif dan negatif,
3. Mengetahui fungsi larutan NaCl sebagai media pertumbuhan mikroba.

B. Alat dan Bahan

1. Alat
a. Autoklaf
b. Beaker Glass 1000 ml
c. Batang Pengaduk
d. Erlenmayer 1000 ml
e. Gelas Ukur 100 ml
f. Cawan Petri Steril
g. Hot plate
h. Ose bulat dan Ose tusuk
i. Kapas
j. Kertas Coklat
k. Karet
l. Benang Kasur
m. Spidol
n. Lampu Spirtus
o. Incubator 37°C

2. Bahan
a. Suspensi Escherichis coli
b. Suspensi Bacillus careus
c. NaCl (1,2,5%)

5|Panduan Praktikum Mikrobiologi

 d. NaCl 0,85%
e. Medium NA dengan komposisi:
 0,3% ekstrak daging sapi
 0,5% peptone
 5 gr NaCl
 15 gr/L Agar
 1 liter aquadest

C. Langkah – langkah :
Prosedur Pembuatan Media NA
1. Siapkan alat dan bahan
2. Timbang serbuk media NA sebanyak 39 gram masukkan ke dalam
beaker glass
3. Tambahkan aquadest sebanyak 1000 ml, dihomogenkan
4. Apabila larutan tidak jernih, maka panaskan larutan sambil diaduk –
aduk hingga larutan larutan menjadi kuning jernih
5. Tuang ke dalam erlenmayer 1000 ml
6. Tutup mulut erlenmayer dengan kapas
7. Tutup dengan kertas coklat dan ikat dengan benang.
8. Masukkan ke dalam autoklaf
9. Sterilkan pada suhu 121°C selama 15 menit
10. Tuang media NA steril ke dalam cawan petri steril secara aseptis
11. Dinginkan media NA tersebut pada suhu ruang hingga membeku
12. Simpan media NA tersebut pada lemari pendingin

B. Prosedur Penanaman Biakan Pada Media Padat

1. Siapkan alat dan bahan
2. Panaskan ose diatas lampu spirtus hingga membara merah, dinginkan
beberapa saat
3. Ambil biakan kuman secara aseptis

6|Panduan Praktikum Mikrobiologi

 4. Masukkan biakan pada media NA tersebut dengan cara membuat
goresan pada seluruh bidang media NA tersebut
6. Panaskan ose yang telah digunakan tersebut diatas lampu spirtus hingga
membara merah
7. Masukkan media NA yang telah ditanam biakan ke dalam inkubator
pada suhu 37°C selama 18 - 24 jam
8. Amati adanya pertumbuhan kuman dengan adanya koloni kuman pada
media HIB tersebut

D. Prosedur Pemeriksaan Hitung Jumlah Kuman metode Cawan

Tuang (Pour Plate)
1. Siapkan alat dan bahan
2. Siapkan 4 cawan petri steril yang masing-masing diberi tanda 10-1, 10-
2
, 10-3 dan cawan petri ke-4 untuk blangko/kontrol
3. Siapkan 4 tabung reaksi steril yang masing-masing diberi tanda 10-1,
10-2, 10-3 dan tabung reaksi ke-4 untuk blangko/kontrol
4. Pipet NaCl 0,85% steril kedalam tabung reaksi sebanyak 1 ml untuk
blangko dan masing-masing 9 ml untuk pengenceran 10-1, 10-2, 10-3
secara aseptis
5. Untuk sampel cair dipipet 1 ml sampel sedangkan untuk sampel padat
ditimbang 1 gram sampel kemudian dimasukkan kedalam tabung 10-1,
homogenkan dengan cara membilas pipet dengan menghisap larutan
didalam tabung kemudian dikeluarkan kembali secara berulang
sebanyak + 5x
6. Pipet 1 ml larutan tabung 10-1 dimasukkan kedalam tabung 10-2, dari
tabung 10-2 dipipet 1 ml larutan dimasukkan kedalam tabung 10-3
7. Masing-masing larutan didalam tabung reaksi diambil 1 ml kedalam
cawan petri sesuai dengan kode pengenceran 10-1, 10-2, 10-3 dan
blangko secara aseptis

7|Panduan Praktikum Mikrobiologi

 8. Buka tutup erlenmeyer yang berisi nutrien agar cair dengan suhu 45-
500C, panaskan mulut erlenmeyer dan tuang nutrien agar tersebut
kedalam masing-masing cawan petri hingga merata
9. Ratakan dengan cara memutar pada alas meja, ditunggu membeku
10. Inkubasi pada suhu 370C selama 18-24 jam dengan posisi media
diatas/dibalik
Catatan:

11. Hasil dan Pembahasan

Hasil:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................

Pembahasan:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................

8|Panduan Praktikum Mikrobiologi

 Praktikan Dosen Pengampu

(............................................................) (...........................................................)

9|Panduan Praktikum Mikrobiologi

 PEMERIKSAAN MYCOBACTERIUM TUBERKULOSIS

A. Tujuan
Mampu melakukan kegiatan pemeriksaan Mycrobacterium tuberkulosis

B. Alat dan Bahan

1. Alat
a. Pot dahak bersih dan kering, diameter mulut pot ≥ 3,5 cm,
transparan, berwarna bening, dapat menutup dengan erat, bertutup
ulir minimal 3 ulir, pot kuat, tidak mudah bocor. Sebelum diserahkan
kepada pasien, pot dahak harus sudah diberi identitas sesuai
identitas/ nomor register pada form TB
b. Formulir Permohonan Pemeriksaan Laboratorium
c. Label, pensil, spidol
d. Kaca Sediaan yang baru dan bersih
e. Lidi / batang bambu dengan ujung runcing / berserabut
f. Lampu Spirtus / bunsen
g. Wadah Pembuangan berisi desifektan ( Lisol 5% )
h. Wadah pembuangan untuk aplikator
i. Reagen Ziehl Neelsen:
 ZN A (Carbol-fuchsin) :
- Basic fuchsin : 1 gr
- Alkohol 95% : 10 ml
- Phenol 5% dalam air : 100 ml
 ZN B (Alkohol-asam) :
- 3 sampai 5 ml HCl pekat
- Ad 100 ml alkohol 95%
 ZN C (Methylen Blue) :
- Methylen Blue : 1 gr
- Aquadest : 100 ml
2. Bahan

10 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 a. Spesimen Dahak

C. Langkah – langkah / Prosedur

1. Periksa data pasien di pot dahak dan cocokkan dengan yang ada di
formulir permohonan laboratorium TB (Formulir TB 05)
2. Pindahkan data pasien dari formulir permohonan laboratorium TB
(TB 05) ke register laboratorium TB (Formulir TB 04)
3. Tulis nomor identitas sediaan pada kaca sediaan
4. Tulis nomor register laboratorium pada formulir TB 04.
5. Tulis nomor register laboratorium pada formulir permohonan
laboratorium TB (TB 05)
6. Berilah tanda pada kolom yang sesuai di TB 04 mengenai alasan
pemeriksaan dahak sesuai formulir permohonan laboratorium TB.
7. Cara Membuat Sediaan Dahak
a. Spesimen dahak dengan bagian yang purulen di dalam air liur
b. Ambil contoh uji dahak pada bagian yang purulen dengan lidi
c. Apuskan dahak di atas kaca sediaan pada permukaan yang sama
dengan nomor identitas. Apusan bentuk oval 2x3 cm kemudian
ratakan dengan gerakan spiral kecil-kecil. Jangan membuat
gerakan spiral bila sediaan dahak sudah kering karena akan
menyebabkan aerosol. Keringkan di dalam suhu kamar
d. Lidi langsung dibuang ke dalam botol berisi disinfektan
e. Lakukan fiksasi. Gunakan pinset atau penjepit kayu untuk
memegang kaca
f. Pastikan apusan menghadap ke atas .Lewatkan 3 x melalui api
dari lampu spiritus. Pemanasan yang berlebihan akan merusak
hasil
g. Untuk fasyankes yang hanya melakukan fiksasi (tidak
melakukan pewarnaan dan pembacaan mikroskopis) maka
kirimkan sediaan yang telah difiksasi ke laboratorium rujukan
dengan cara : Bungkus sediaan dengan kertas tissue kemudian

11 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 digulung beberapa kali agar tidak pecah atau kirimkan dalam
kotak sediaan bersama Form TB
8. Pewarnaan Metode ZIEHL NEELSEN
a. Letakkan sediaan dengan bagian apusan menghadap ke atas
pada bak pengecatan, antara satu sediaan dengan sediaan lainnya
masing – masing berjarak kurang lebih 1 jari
b. Genangi seluruh permukaan sediaan dengan ZN A (Karbol
Fuchsin).
c. Panasi sediaan tersebut (dari bawah dengan menggunakan sulut
api) dengan hati-hati hingga kelihatan uap tetapi jangan sampai
mendidih, biarkan selama 3 – 5 menit
d. Bilas sediaan dengan air mengalir secara hati-hati dari ujung
kaca sediaan
e. Genangi permukaan sediaan dengan ZN B (Asam Alkohol)
sampai tidak tampak warna merah carbol fuchsin.
f. Bilas sediaan dengan air mengalir secara hati-hati dari ujung
kaca sediaan
g. Genangi permukaan sediaan dengan ZN C (Methylene blue)
selama 20-30 detik
h. Bilas sediaan dengan air mengalir.
i. Keringkan sediaan dengan cara miringkan sediaan pada bengkok
plastik pada suhu ruang. Jangan keringkan dengan tissue
j. Letakkan sediaan di atas meja mikroskop, permukaan sediaan
menghadap ke atas. Gunakan lensa objektif 10 x untuk
menetapkan fokus dan menemukan lapang pandang. Periksa
sediaan untuk menentukan kualitas sediaan. Pada sediaan dahak
umumnya ditemukan lebih banyak sel lekosit atau sel radang
k. Teteskan satu tetes minyak emersi, aplikator minyak emersi
tidak boleh menyentuh kaca objek. Tetesan harus jatuh bebas ke
permukaan sediaan apus agar aplikator minyak emersi tidak
terkontaminasi dengan sediaan.

12 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 l. Putarlah lensa objektif 100x dengan hatihati ke atas sediaan
apus. Jangan sekali-kali lensa menyentuh kaca sediaan.
m. Sesuaikan fokus dengan hati-hati sampai sel terlihat jelas
n. Lakukan pembacaan sediaan apus sepanjang garis tengah dari
ujung kiri ke kanan atau sebaliknya.
o. Laporkan hasil pemeriksaan mikroskopis dengan mengacu
kepada skala International Union Against To Lung Disease
(IUATLD)
p. Setelah selesai pembacaan, bersihkan minyak dari sediaan apus
dengan meletakkan bagian yang berminyak di atas tissue atau
kertas penyerap.
q. Sebelum menguji sediaan apus selanjutnya, bersihkan lensa
objektif dengan menggunakan kertas lensa. Setelah
menyelesaikan pembacaan semua sediaan bersihkan lensa
objektif dengan kertas lensa yang dibasahi eter alcohol (3:7)
r. Sediaan harus disimpan dalam kotak sediaan dengan urutan
sesuai TB 04 untuk uji silang
Catatan :

D. Hasil dan Pembahasan

Hasil:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................

13 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 Pembahasan:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................

Praktikan Dosen Pengampu

(............................................................) (...........................................................)

14 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 PEMBUATAN MEDIA LOWENSTEIN-JENSEN (PADAT)

A. Tujuan :
a. Identifikasi awal mikrobakterium
b. Mengetahui pembuatan media biakan padat berbasis telur

B. Alat dan bahan yang diperlukan untuk membuat media :

1. Alat :

a. Timbangan analitik j. pH meter

b. Spatula / sendok k. Otoklaf

c. Gelas ukur 1000 ml steril l. Inspisator/ Hot Air Oven

d. Gelas beaker 1000 ml steril m. Blender stainless steel

n. Magnetic stirrer & magnetic bar

e. Pipet 10 ml, 25 ml steril steril

f. Labu Erlenmeyer 250 ml, 1000 o. Corong steril

ml steril p. Kain kasa steril

g. Botol McCartney q. Lap pembersih telur

h. Bunsen

i. Power pipet/pipetor

2. Bahan :

a. Bahan dasar Medium LJ dengan komposisi :

1) Potassium dihydrogen phosphate : 2,5 Gr

2) Magnesium sulfate heptahydrate : 0.24 gr

15 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 3) Tri-magnesium dicitrate 14-hydrate : 0.6 Gr

4) L-asparagin : 3.6 Gr

5) Potato meal : 30 Gr

6) Malachite green2 % : 20 ml

b. Aquadest : 600 ml

c. Glyserol : 12 Ml

d. Telur homogen sampai dengan : 1000

C. Cara pembuatan Media LJ :

a. Homogenisasi telur :
1) Bersihkan telur ayam/bebek segar yang berumur tidak lebih 7 hari
dengan cara menggosoknya dengan lap, air dan sabun
2) Bilas dengan air mengalir hingga bersih, kemudian keringkan
3) Rendam dalam alkohol 70% selama 15 menit
4) Cuci dan desinfeksi tangan sebelum memegang telur yang telah bersih
dan kering
5) Pecahkan telur dan tampung dalam gelas ukur steril
6) Homogenisasi dengan blender, atur kecepatan sedemikian rupa agar
tidak terbentuk gelembung.
7) Saring larutan telur menggunakan corong steril yang telah dialasi kasa
steril.
8) Ukur dengan gelas ukur steril sampai didapatkan 1 liter.
9) Catatan :
a) Tidak diperkenankan menggunakan telur dari peternakan yang
menggunakan antibiotika dalam pakannya. Karena umumnya
peternakan bebek dilakukan secara tradisional, telur bebek lebih kecil
kemungkinannya mengandung antibiotika.

16 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 b) Homogenisasi telur agar dilakukan dalam laminar flow/ BSC, untuk
meminimalisasi pencemaran oleh mikroba udara.
b. Pembuatan media LJ :
1) Larutkan garam-garam, L-Asparagine ( dan potato meal ) media LJ
dalam 600 ml aquades, pH 6.8-7.0
2) Tambahkan 12 ml glycerol
3) Tambahkan 20 ml larutan malachite green 2%
4) Setelah tercampur sempurna, sterilkan dalam otoklaf selama 15 menit
pada suhu 1210C
5) Dinginkan sampai suhu + 500C
6) Tambahkan telur homogen 1 liter yang telah dipersiapkan secara steril,
aduk perlahan-lahan, hindari terbentuknya gelembung. Jika ada
gelembung, diamkan beberapa waktu lamanya untuk menghilangkan
gelembung.
a) Tuangkan ke dalam botol McCartney steril sebanyak 6 – 8 ml.
b) Tutup botol dengan longgar dan letakkan pada kemiringan 300dalam
inspisator yang telah dipanaskan sampai suhu 850C selama 45 menit
(lakukan optimasi inspisator) Keluarkan dari inspisator, tutup botol
dikencangkan dan diamkan sampai suhu kamar
c) Bila kualitas media tidak baik : terlalu lembek, terjadi perubahan warna,
berlubang-lubang, atau terdapat gelembung-gelembung pada permukaan,
maka media tersebut tidak dapat dipakai.
Catatan :

1. Media LJ dapat memakai potato meal atau tidak

2. Jika membuat dari media komersial, ikuti petunjuk dari pabrik
3. Untuk membuat larutan malachite green tersendiri. Lakukan sebagai
berikut :
a. Timbang 2 gram Malachite green kristal dalam gelas kimia.
b. Tuang ke dalam mortir, gerus sampai halus, masukkan kembali ke dalam
gelas kimia dan tambah aquadest 100 ml.

17 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 c. Masukkan magnetic stirrer, tempatkan di atas stirring hot plate ,
inkubator selama 2 jam atau suhu kamar semalaman agar larut sempurna
d. Saring dengan kertas saring Whatmann no 4.
e. Simpan dalam botol coklat, catat tanggal pembuatan pada label.
f. Larutan tahan 1 bulan pada suhu kamar, tetapi sebaiknya digunakan
dalam waktu 1 minggu

D. Hasil dan Pembahasan

Hasil:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................

Pembahasan:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................

18 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 Praktikan Dosen Pengampu

(............................................................) (...........................................................)

19 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 PEMERIKSAAN PLASMODIUM DARAH TIPIS

A. Tujuan
Membantu mengidentifikasi spesies Plasmodium setelah ditemukan parasit
malaria dalam sediaan darah tebal.

B. Alat dan Bahan

1. Alat
a. Alat penusuk otomatis (Autoklik)
b. Lancet steril
c. Kapas Alkohol
d. Gelas objek
e. Kaca benda
f. Kaca penutup
g. Gelas ukur 10 ml
h. Pipet Pasteur
i. Beaker glass
j. Bak pengecatan
2. Bahan
a. Oil imersi
b. Aquadest netral
c. Giemsa

C. Langkah-Langkah/Prosedur
1. Pengambilan sampel darah dan pembuatan hapusan
a. Pastikan lancet steril setelah terpasang pada alat
b. Ujung alat di tarik sekali
c. Pilih jari yang akan diambil darah (jari tengah/jari manis), dipijat dan
ditekan beberapa saat hingga darah mengumpul
d. Didesinfeksi daerah tersebut dengan alkohol 70%
e. Ditempelkan autoklik pada jari yang telah dipilih

20 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 f. Tekan tombol untuk memasukkan jarum pada tangan
g. Darah yang keluar pertama dibersihkan dengan tisu
h. Darah yang keluar selanjutnya ditempelkan pada ujung kaca benda
i. Buat apusan darah tipis dengan cara mendorong darah ke depan dengan
bantuan gelas objek yang lain, tunggu hingga kering kemudian genangi
methanol selama 5 menit, buang cairan tersebut
j. Buat apusan darah tebal dengan cara meletakkan tetesan darah diatas kaca
benda, lebarkan tetesan tersebut menggunakan ujung pipet, tunggu hingga
menggering kemudian genangi aquadest hingga eritrosit lisis, buang cairan
tersebut perlahan.
2. Pewarnaan
Apusan darah tipis dan tebal diwarnai dengan Giemsa
Berikut merupakan cara pembuatan Giemsa 5%:
1. Mengambil giemsa 5% sebanyak 0.5 ml
2. Encerkan dengan aquadest netral sebanyak 9.5 ml
3. Di aduk sampai rata
4. Hapusan darah tersebut diletakkan pada rak pewarna
3. Pemeriksaan
a. Menghidupkan mikroskop
b. Letakkan sediaan pada meja mikroskop
c. Periksa dengan perbesaran 10x
d.Periksa dengan perbesaran 100x untuk memeriksa sel-sel darah yang
dicurigai parasit malaria dengan menambahkan minyak imersi diatas kaca
sediaan.

Catatan:

21 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
D. Hasil dan Pembahasan

Hasil:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................

Pembahasan:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................

Praktikan Dosen Pengampu

(............................................................) (.........................................................)

22 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 PEMERIKSAAN PLASMODIUM METODE DARAH TEBAL

A. Tujuan
1. Tujuan Umum
Mahasiswa dapat mengidetifikasi Plasmodium Metode Darah Tebal.
2. Tujuan Khusus
a. Mahasiswa dapat mengetahui pemeriksaan darah tebal.
b. Mahasiswa melakukan pemeriksaan darah menggunakan mikroskop.
c. Mahasiswa menjadi terampil dalam melakukan pengambilan darah
tepi.

B. Alat dan Bahan

1. Alat :
a. Mikroskop Binokuler
b. Pembersih lensa mikroskop
c. Alat hitung
d. Pulpen dan kertas
e. Pipet
2. Bahan :
a. Slide/Kaca sediaan (Object Glass)
1). Slide yang sudah tergores tidak boleh dipakai. Yang terbaik adalah
menggunakan object glass yang baru, dan tidak boleh
menggunakan slide bekas pakai. Semua object glass direndam
dalam air sabun selama 30 menit – 1 jam kemudian dibilas dengan
air mengalir.
2). Membersihkan object glass: Dilap dengan kasa atau kain bersih.
Setelah kaca sediaan dibersihkan, tidak boleh memegang pada
bagian permukaan kaca sediaan, dan langsung dipakai atau
disimpan pada slide box.
3). Menyimpan object glass: Slide box yang yang dianjurkan adalah
terbuat dari bahan plastik/fiber yang tahan pecah. Slide box

23 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 sebaiknya tidak terbuat dari bahan kayu karena dapat berpengaruh
pada SD yang disimpan. Ketebalan object gelas 1,1 – 1,3 mm,
ukurannya 25 x 75 x 1 – 1,5 mm.
b. Lancet steril, digunakan hanya untuk 1x pakai.
c. Kapas, jika tidak tersedia kapas, dapat digunakan bahan halus.
d. Alkohol 70 %, lebih baik lagi jika menggunakan swab alkohol siap
pakai.
e. Minyak imersi (immersion oil) bila tidak tersedia dapat menggunakan
anisol
f. Larutan buffer (pH 7.2)
Larutan buffer dapat dibuat dengan cara mencampurkan satu tablet
buffer (pH 7,2) dalam 1 liter aquades atau air mineral (air kemasan
dalam botol) yang jernih, tidak berbau dan tidak berasa. Larutan ini
dapat dipakai untuk mengencerkan larutan giemsa stock.
g. Kertas lakmus untuk mengukur pH
h. Larutan Giemsa
Beberapa hal yang harus diperhatikan :
1) Giemsa stock harus disimpan dalam botol kaca berwarna gelap dan
hindari dari sinar matahari langsung.
2) Sebaiknya giemsa stock disimpan dalam botol berwarna gelap
berukuran 100 ml. Hal ini untuk menghindari rusaknya giemsa
stock karena oksidasi dan penguapan akibat seringnya membuka
tutup botol.
3) Botol giemsa stock yang akan digunakan tidak boleh dikocok atau
diaduk karena endapan/kristal giemsa akan naik ke permukaan
larutan dan dapat menjadi artefak dalam SD yang diwarnai.
4) Pengambilan giemsa stock harus menggunakan pipet yang kering,
agar giemsa stock di botol tidak tercemar dengan air.
5) Sisa larutan giemsa yang telah dicampur dengan larutan buffer bila
tidak digunakan lagi harus dibuang dan dimasukkan kembali ke
dalam botol giemsa stock.

24 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 6) Larutan giemsa dibuat segera sebelum digunakan dan tidak boleh
disimpan/digunakan setelah 6 jam.

C. Langkah-langkah/Prosedur
1. Pengambilan Sediaan Darah (SD) Malaria
a. Untuk bahan pemeriksaan yang terbaik adalah darah dari ujung jari.
b. Bila menggunakan darah vena, sebaiknya darah yang digunakan
adalah darah yang belum tercampur dengan anti koagulan (darah
yang masih ada dalam\ spuit). SD harus segera dibuat sebelum
darah membeku.
c. Bila menggunakan darah dengan anti koagulan harus segera dibuat
SD malaria, karena bila sudah lebih dari 1 jam, jumlah parasit
berkurang dan morfologi dapat berubah.
d. Untuk darah yang dimasukkan ke dalam tabung yang berisi anti
koagulan, tabung tersebut harus diisi penuh dengan darah yang
akan diperiksa.
2. Pembuatan Sediaan Darah (SD) Tebal Malaria
a. Pegang tangan kiri pasien dengan posisi telapak tangan menghadap
keatas.

b. Pilih jari tengah atau jari manis (pada bayi usia 6-12 bulan darah
diambil dari ujung ibu jari kaki dan bayi <6 bulan darah diambil
dari tumit).
c. Bersihkan jari dengan kapas alkohol untuk menghilangkan kotoran
dan minyak yang menempel pada jari tersebut.

25 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 d. Setelah kering, jari ditekan agar darah banyak terkumpul di ujung
jari.

e. Tusuk bagian ujung jari (agak di pinggir, dekat kuku) secara cepat
dengan menggunakan lancet.

f. Tetes darah pertama yang keluar dibersihkan dengan kapas kering,

untuk menghilangkan bekuan darah dan sisa alkohol.
g. Tekan kembali ujung jari sampai darah keluar, ambil object glass
bersih (pegang object glass di bagian tepinya). Posisi object glass
berada di bawah jari tersebut.
h. Teteskan 2-3 tetes kecil darah (+ 6µl) di bagian ujung SD tebal.

i.
i. Bersihkan sisa darah di ujung jari dengan kapas.
j. Letakkan object glass yang berisi tetesan darah diatas meja atau
permukaan yang rata.
k. Untuk membuat SD tipis, ambil object glass baru (object glass
kedua) tetapi bukan cover glass. Tempelkan ujungnya pada tetes
darah kecil sampai darah tersebut menyebar sepanjang object
glass.

26 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 i.
l. Dengan sudut 45 geser object glass tersebut dengan cepat ke arah
yang berlawanan dengan tetes darah tebal, sehingga didapatkan
sediaan hapus (seperti bentuk lidah).
m. Untuk SD tebal, ujung object glass kedua ditempelkan pada ke
tiga tetes darah tebal. Darah dibuat homogen dengan cara memutar
ujung object glass searah jarum jam, sehingga terbentuk bulatan
dengan diameter 1 cm.

i.
n. Pemberian label/etiket pada bagian ujung object glass dekat
sediaan darah tebal, bisa menggunakan kertas label atau object
glass frosted.Pada label dituliskan KODE/INISIAL
NAMA/TANGGAL PEMBUATAN.

i.
o. Proses pengeringan SD harus dilakukan secara perlahan-lahan di
tempat yang datar. Tidak dianjurkan menggunakan lampu
(termasuk lampu mikroskop), hair dryer. Hal ini dapat

27 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 menyebabkan SD menjadi retak-retak sehingga mempengaruhi
hasil pemeriksaan. Kipas angin dapat digunakan untuk
mengeringkan SD.
p. Selama proses pengeringan, SD harus dihindarkan dari gangguan
serangga (semut, lalat, kecoa dll), debu, panas, kelembaban yang
tinggi dan getaran.
q. Setelah kering, darah tersebut harus segera diwarnai. Pada keadaan
tidak memungkinkan selambat-lambatnya dalam waktu 24 jam SD
harus sudah diwarnai.

3. Pewarnaan Sediaan Darah

a. SD tipis yang sudah kering difiksasi dengan methanol. Jangan
sampai terkena SD tebal.
b. Letakkan pada rak pewarna dengan posisi darah berada di atas.
c. Siapkan 3% larutan Giemsa dengan mencampur 3 cc giemsa stock
dan 97cc larutan buffer.
d. Tuang larutan Giemsa 3% dari tepi hingga menutupi seluruh
permukaan object glass. Biarkan selama 30-45 menit.
e. Tuangkan air bersih secara perlahan-lahan dari tepi object glass
sampai larutan Giemsa yang terbuang menjadi jernih. Angkat dan
keringkan SD. Setelah kering, SD siap diperiksa.
f. Pada keadaan darurat dapat dipakai pewarnaan cepat dengan
perbandingan 2 tetes giemsa stock ditambah 1 ml larutan buffer
selama 15 menit. Dalam hal ini pewarnaan standar tetap dilakukan.
g. Lalu lakukan pemeriksa SD tebal dengan lensa objektif 100x dan
okuler 7x (Mikroskop)

28 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 Positif (+) : bila di dalam sediaan darah ditemukan plasmodium malaria.
Negative (-) : bila di dalam sediaan darah tidak ditemukan plasmodium malaria

Catatan :

D. Hasil dan Pembahasan

Hasil:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
...................................................................................................................................
....................................................................................................................................

Pembahasan:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................

29 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 ....................................................................................................................................

Praktikan Dosen Pengampu

(............................................................) (............................................................)

30 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS HELMINT DENGAN METODE NATIF

A. Tujuan
1. Mengidentifikasi telur cacing pada feses
2. Mengetahui jenis cacing pada feses
3. Mengetahui cara pemeriksaan telur cacing dengan metode natif

B. Alat dan Bahan

1. Alat
a. Pot plastik untuk penampung feses
b. Mikrospkop
c. Timbangan analik digital
d. Lidi/gelas sendok untuk mengambil feses
e. Kaca objek
f. Deck glass
g. Pipet tetes
2. Bahan
a. Feses
b. LurutanNaCL 0,9%
c. Larutan eosin 1%

C. Langkah-langkah/Prosedur
1. Feses ditimbang sebanyak 2 gram kemudian ditambahkan 7-10 ml dengan
NaCL 0,9 % kemudian homogenkan
2. Ambil 1 tetes dan letakkan pada kaca objek
3. Teteskan larutan eosin 1% sebanyak 1 tetes,
4. Tutup menggunakan kaca penutup
5. Periksa dan amati di bawah mikroskop dengan pembesaran 10x objektif
dan kemudian dilanjutkan dengan lensa 40 x objektif.

31 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 Catatan:

D. Hasil dan Pembahasan

Hasil:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
...................................................................................................................................
....................................................................................................................................

Pembahasan:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................

Praktikan Dosen Pengampu

(............................................................) (............................................................)

32 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS HELMINT DENGAN METODE
APUNG

A. Tujuan
Mengetahui pemeriksaan feses kualitatif dengan metode apung.

B. Alat dan Bahan

1. Alat dan bahan yang digunakan dalam pemeriksaan metode apung
dengan disentrifugasi, antara lain:
a. Mikroskop
b. Objek glass
c. Cover glass
d. Beker glass
e. Lidi
f. Penyaring teh
g. Jarum ose
h. Tabung sentrifugasi
i. Sentrifugator
j. 10 gram tinja
k. 200 ml larutan NaCl jenuh (33%)
2. Alat dan bahan yang digunakan dalam pemeriksaan metode apung
tanpa disentrifugasi, antara lain:
a. Mikroskop
b. Objek glass
c. Cover glass
d. Beker glass
e. Tabung Reaksi
f. Rak tabung reaksi
g. Lidi
h. Penyaring teh
i. Jarum Ose

33 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 j. 10 gram tinja
k. 200 ml larutan Nacl jenuh (33%)

C. Langkah-langkah/Prosedur
1. Metode apung dengan sentrifugasi
a. 200 ml NaCljenuh (33%) di masukan ke dalam beker glass.
b. 10 gram feses sampel diambil menggunakan lidi dan di masukan
kedalam larutan NaCl jenuh (33%) kemudian di aduk sehingga
larut.
c. Bila terdapat serat-serat selulosa disaring menggunakan penyaring
teh.
d. Hasil saringan dituangkan kedalam tabung sentrifugasi.
e. Di masukkan kedalam sentrifugato rselama 5 menit.
f. Permukaan sampel pada tabung sentrifugasi diambil dengan
menggunakan jarum ose dan di oleskan pada objek glass,
kemudian di tutup dengan menggunakan cover glass.
g. Diamati di bawah mikroskop.
2. Metode apung tanpa sentrifugasi
a. 200 ml NaCljenuh (33%) dimasukan kedalam beker glass.
b. 10 gram feses sampel diambil menggunakan lidi dan di masukan
kedalam larutan NaCl jenuh (33%) kemudian di aduk sehingga
larut.
c. Bila terdapat serat-serat selulosa disaring menggunakan penyaring
teh.
d. Hasil saringan dituangkan kedalam tabung reaksi sampai cembung
pada permukaan tabung reaksi.
e. Diamkan selama 5-10 menit kemudian ditutu pdengan cover glass
dan segera diangkat.
f. Cover glass diletakkan di atasobjek glass dengan cairan berada
diantara objek glass dan cover glass.
g. Diamati di bawah mikroskop.

34 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 Catatan:

D. Hasil dan Pembahasan

Hasil:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
Pembahasan:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................

Praktikan Dosen Pengampu

(............................................................) (............................................................)

35 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
36 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS HELMINTH DENGAN METODE
HARADA MORI

A. Tujuan
1. Mengetahui pemeriksaan feses dengan metode Harada Mori.
2. Mengetahui adanya telur dan larva cacing parasit dalam semple fese.
3. Mendiagnosa infeksi cacing parasit dalam tubuh orang yang diperiksa
fesesnya.

B. Alat dan Bahan

1. Alat:
a. Tabung reaksi
b. Kantung plastik ukuran 30x200 mm
c. Kertas saring ukuran 3x15cm
d. Lidi
e. Pipet tetes
f. Tempat menggantung plastik
g. Spidol
2. Bahan:
a. Tinja
b. Aquades

C. Langkah-langkah/Prosedur
1. Tabung reaksi diisi akuades steril ±5 ml.
2. Dengan menggunakan lidi, feses dioleskan pada kertas saring sampai
mengisi sepertiga bagian tengahnya.
3. Kertas saring dilipat membujur kemudian kertas saring di masukkan ke
dalam tabung reaksi dengan ujung kertas menyentuh permukaan
akuades dan tinja tidak sampai tercelup akuades.
4. Kertas saring di masukkan ke dalam plastik yang sudah berisi akuades
±1 ml.

37 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 5. Nama penderita, tanggal penamaan, dan kelompok pengamat ditulis
kemudian ditempel di plastik.
6. Plastik digantung dan disimpan selama 7 hari.
7. Setelah 7 hari digantung, plastik dimiringkan dan digunting ujungnya
kemudian air dalam plastik di tuang ke beaker glass.
8. Air dalam beaker glass diambil menggunakan pipet tetes kemudian 1-3
tetes air diteteskan ke atas objek glass.
9. Cover glass diletakkan di atas objek glass.
10. Diamati di bawah mikroskop.

Catatan :

D. Hasil dan Pembahasan

Hasil:
...........................................................................................................................................
...........................................................................................................................................
...........................................................................................................................................
...........................................................................................................................................
...........................................................................................................................................
...........................................................................................................................................
...........................................................................................................................................
Pembahasan:
.........................................................................................................................
...........................................................................................................................................
...........................................................................................................................................
...........................................................................................................................................
...........................................................................................................................................
...........................................................................................................................................

38 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
...........................................................................................................................................

Praktikan Dosen Pengampu

(........................................................) (........................................................)

39 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS HELMINTH DENGAN METODE
KATOKATZ

A. Tujuan
Mengetahui adanya infeksi cacing parasit dan untuk mengetahui berat
ringannya infeksi cacing parasit usus.

B. Alat dan Bahan

1. Alat:
a. Penyaring teh
b. Tabung reaksi
c. Rak tabung
d. Gelas ukur
e. Batang pengaduk (Lidi)
f. Object glass
g. Cover glass
h. Mikroskop
i. Beaker glass
2. Bahan:
a. Sampel tinja sebanyak 10 gram atau sebesar biji kacang
b. NaCl jenuh 33%

C. Langkah-Langkah/Prosedur
1. Siapkan alat dan bahan
2. Tuangkan NaCl 33% jenuh kedalam beaker glass sebanyak 100 ml.
3. Campurkan 100 ml NaCl jenuh dengan 10 gram tinja kemudian diaduk
sehingga larut.
4. Selanjutnya disaring dengan menggunakan penyaring teh.
5. Masukkan campuran tinja dan larutan NaCl yang telah disaring tersebut ke
dalam tabung reaksi hingga penuh dan terlihat cembung.

40 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 6. Didiamkan selama 5-10 menit kemudian ditutup dengan cover glass, lalu
letakkan cover glass pada obyek glass.
7. Selanjutnya letakkan preparat pada meja spesimen kemudian amati
menggunakan mikroskop.

Catatan :

D. Hasil dan Pembahasan

Hasil:
.........................................................................................................................................
.........................................................................................................................................
.........................................................................................................................................
.........................................................................................................................................
.........................................................................................................................................
.........................................................................................................................................
...........................................................................................................................

Pembahasan:
.........................................................................................................................
.........................................................................................................................................
.........................................................................................................................................
.........................................................................................................................................
.........................................................................................................................................
.........................................................................................................................................
...........................................................................................................................

41 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 Praktikan Dosen Pengampu

(............................................................) (............................................................)

42 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 PENGAMBILAN DAN PEMBUATAN SEDIAAN SAMPEL MAKANAN

A. Tujuan
Mengetahui jumlah kuman yang terdapat dalam sampel makanan

B. Alat dan Bahan

1. Alat
a. Tabung alkali steril
b. Rak tabung reaksi
c. Kantong plastik sampel
d. Cawan porselin
e. Blender
f. Pipet ukur steril
g. Spin Ball (bola isap)
h. Lampu Spirtus
i. Korek Api
j. Gelas ukur steril
k. Incubator
l. Neraca analitik
m. Vortex mixer
n. Erlenmeyer steril
o. Pemotong pisau
p. Coloni Counter
2. Bahan
a. Sampel makanan
b. Pepton steril
c. NaCl Steril
d. Nutrient agar
e. Aquades

43 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
C. Langkah-langkah/Proses
1. Pembuatan sampel
a. Tangan, meja, pisau disterilkan dengan alkohol
b. Cawan porselin ditimbang pada neraca analitik sampai menunjukkan
angka 0
c. Sampel dipotong dan ditimbang sebanyak 10 gr dimasukkan kedalam
cawan porselin lalu masukkan kedalam blender
d. Masukkan Larutan NaCl 0,9% steril sebanyak 90 ml di masukkan
kedalam blender
e. Haluskan sampel
f. Siapkan 3 buah tabung alkali steril berisi NaCl masing – masing 9 ml
g. Tandai masing-masing tabung 10-1,10-2,10-3
h. Ambil sampel 1 ml kemudian dimasukkan dalam tabung 10-1,
dihomogenkan
i. Ambil 1 ml sampel pada tabun 10-1 kemudian dimasukkan pada
tabung 10-2 dihomogenkan lagi.
j. Ambil 1 ml sampel pada tabung 10-2 kemudian dimasukkan pada
tabung 10-3 dihomogenkan
k. Masukkan masing – masing sampel dari tabung 10-2 dan tabung 10-3
kedalam cawan petri. Kemudian tuangkan media NA cair steril
dengan suhu 45°C. Tutup cawan petri dengan penutup cawan.
Homogenkan dengan cara memutar cawan petri tersebut. Biarkan
membeku pada suhu ruang
l. Masukkan media NA kedalam incubator untuk diinkubasi pada suhu
37˚C dalam jangka waktu 18 - 24 jam
2. Pembuatan kontrol
a. Tangan dan meja disterilkan
b. Siapkan cawan petri steril
c. Ditambahkan nutrient agar sampai menutup permukaan cawan petri
d. Ditutup dengan penutup cawan, biarkan membeku pada suhu ruang

44 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 e. Masukkan kedalam incubator untuk diinkubasi pada suhu 37˚C dalam
jangka waktu 18-24 jam

Catatan :

D. Hasil dan Pembahasan

Hasil:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................

Pembahasan:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................

45 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 Praktikan Dosen Pengampu

(............................................................) (............................................................)

46 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS MIKROBA KERACUNAN MAKANAN

A. Tujuan
1. Melakukan perhitungan jumlah bakteri pada tempe, jamu, saos, dan
susu dengan perhitungan langsung.
2. Mengetahui kelebihan dan kekurangan perhitungan langsung.

B. Alat dan Bahan

1. Alat:
a. Pemanas bunsen
b. Cawan petri
c. Gelas penutup
d. Haemocytometer
e. Handcounter
f. Inkubator
g. Label
h. Mikropipet
i. Pipet ukur
j. Mikroskop
k. Rak tabung reaksi
l. Tabung reaksi
m. Timbangan elektrik
n. Vortex
2. Bahan:
a. Akuades steril
b. Alkohol 70%
c. Sampel tempe, jamu,
susu, dan saos

47 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 C. Langkah-langkah/Prosedur
1. Pengenceran sampel
a. Susu, jamu dan saos diambil sebanyak 0,1 ml dengan
menggunakan timbangan elektrik dan dimasukkan ke tabung
reaksi yang berisi 9,9 ml aquades steril, untuk pengenceran 10-2.
b. Tabung reaksi kemudian divortex.
c. Susu, jamu dan saos pada pengenceran 10-2 diambil sebanyak 0,1
ml dengan menggunakan pipet ukur dan propipet kemudian
dimasukkan ke tabung reaksi yang berisi 9 ml aquades steril,
untuk pengenceran 10-3.
d. Tabung reaksi kemudian di vortex.
e. Susu, jamu dan saos pada pengenceran 10-3 diambil sebanyak 0,1
ml dengan menggunakan pipet ukur dan propipet kemudian
dimasukkan ke tabung reaksi yang berisi 9 ml aquades steril,
untuk pengenceran 10-4.
f. Tabung reaksi kemudian di vortex.
g. Susu, jamu dan saos pada pengenceran 10-4 diambil sebanyak 0,1
ml dengan menggunakan pipet ukur dan propipet kemudian
dimasukkan ke tabung reaksi yang berisi 9 ml aquades steril,
untuk pengenceran 10-5.
h. Tempe ditumbang dengan menggunakan timbangan elektrik
sebanyak 0,1 ml. Setelah ditimbang, lakukan pengenceran sampel
seperti pada susu, jamu dan saos
2. Perhitungan langsung
a. Haemocytometer dan gelas penutup disterilkan dengan
menggunakan alkohol 70% kemudian di panaskan diatas api
bunsen.
b. Haemocytometer kemudian ditutup dengan mengunakan gelas
penutup.

48 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 c. Suspensi sampel Saos, susu, tempe dan jamu dengan pengenceran
10-3, 10-4,dan 10-5 diteteskan pada haemocytometer sebanyak 0,1
ml pada kedua sisi yang berbeda.
d. Haemocytometer diletakkan pada meja benda kemudian diamati
dibawah mikroskop dengan perbesaran 45 x 10.
e. Jumlah bakteri yang terdapat pada 5 kotak dalam bilik hitung
diamati kemudian dihitung dengan menggunakan hand counter.
f. Cara penghitungannya dari kiri ke kanan kemudian kebawah lalu
kekiri, begitu seterusnya. Rumus yang digunakan yaitu :
1
∑bakteri = ∑ bakteri rata − rata × 25 × 10 × 103 ×
faktor pengenceran

Catatan :

49 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 D. Hasil dan Pembahasan

Hasil:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................

Pembahasan:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................

Praktikan Dosen Pengampu

(............................................................) (............................................................)

50 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 PENGAMBILAN DAN PEMBUATAN SEDIAAN SAMPEL AIR

A. Tujuan
1. Dapat menerapkan teknik pengambilan sampel air.
2. Dapat melaksanaan pengambilan sampel air.

B. Alat dan Bahan

1. Alat
a. Lampu spirtus
b. Botol sampel
c. Kapas
d. Lidi kapas steril
e. Kertas label
2. Bahan
a. Sampel air
b. Alkohol 70%

C. Langkah-langkah/Prosedur
1. Pengambilan contoh air keran :
a. Pilih kran yang paling sering digunakan.
b. Kran dibuka selebar mungkin selama 2-3 menit.
c. Setelah 2-3 menit kran dimatikan kemudian mulut kran
disterilkan dengan cara dibakar dengan kapas yang telah diberi
alkohol beberapa saat.
d. Bila kran dari plastik maka kran cukup disterilkan dengan
alkohol 70%.
e. Setelah disterilkan kran dibuka dengan aliran yang sedang, lau
ditampung di dalam botol sampel. Jangan lupa mulut botol
disterilkan terlebih dahulu.
f. Air ditampung kira-kira 2/3 volume botol.
g. Sebelum ditutup, botol disterilkan kembali baru ditutup.

51 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 h. Untuk pemeriksaan minimal diambil 100 ml.
i. Botol sampe tidak boleh diisi penuh karena :
1). Memberi kesempatan bakteri untuk tetap hidup.
2). Memudahkan dalam penggojokan sampel.
j. Setelah selesai lalu bobot diberi kertas label yang telah
disiapkan. Labe berisi data-data : nama pengirim, alamat
pengirim, tanggal dan jam pengembilan, tempat pengambilan,
jenis sampel dan jenis pemeriksaan.

Catatan :

D. Hasil dan Pembahasan

Hasil:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................

Pembahasan:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................

52 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 ....................................................................................................................................

Praktikan Dosen Pengampu

(............................................................) (............................................................)

53 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS MIKROBA AIR
MPN (MOST PROBABLE NUMBER)

A. Tujuan
Untuk mengetahui kandungan mikroba yang ada dalam suatu sampel air
secara mikroskopis.

B. Alat dan Bahan

1. Alat
a. Lampu spirtus h. Tabung alkali
b. Kertas coklat i. Tabung durham
c. Kapas j. Pipet ukur 1 ml dan
d. Tabung reaksi 10 ml steril
e. Rak tabung reaksi k. Inkubator
f. Ose l. Spin Ball
g. Spidol
2. Bahan
a. Alkohol 70%
b. Aquades
c. Sampel air
d. Lactosa Broth (LB) Single
e. Lactosa Broth (LB) Double
f. Brillian Green Lactosa Bile Broth (BGLB)
C. Langkah-langkah
a. Ragam I

511 (5x10 ml; 1x1 ml; 1x0,1 ml) : Untuk sampel yang sudah diolah atau angka
kumannya diperkirakan rendah

 Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan

 Disiapkan 5 buah media laktosa broth triple strenght, 1 buah media laktosa
broth single strenght dan 1 buah media laktosa broth single strenght

54 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
  Dimasukkan kedalam masing-masing 5 media laktosa broth triple strenght
sebanyak 10 ml sampel air secara aseptis
 Dimasukkan kedalam 1 media laktosa broth single strenght sebanyak 1 ml
sampel air secara aseptis
 Dimasukkan kedalam 1 media laktosa broth single strenght (media
terakhir) sebanyak 0,1 ml sampel air secara aseptis
 Dihomogenkan, inkubasi 370C selama 24-48 jam
 Hasil positif (+) = Media berubah dari merah menjadi kuning dan timbul
gas
 Tiap-tiap tabung laktosa broth yang menunjukkan hasil positif, ditanam
kedalam media Brillian Green Lactosa Bile Broth (BGLB)
 Diinkubasi 370C selama 24-48 jam
 Hasil positif (+) = Media berubah keruh dan timbul gas, jika hanya timbul
gas tetap dilaporkan positif
 Tabung yang menunjukkan hasil positif dibaca dengan tabel MPN

b. Ragam II :

555 (5x10 ml; 5x1 ml; 5x0,1 ml) : Untuk sampel yang belum diolah atau angka
kumannya diperkirakan tinggi misalnya air sumur, air mata air, air hujan, air
sungai, air kolam renang, dsb.

 Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan

 Disiapkan 5 buah media laktosa broth triple strenght, 5 buah media laktosa
broth single strenght dan 5 buah media laktosa broth single strenght
 Dimasukkan kedalam masing-masing 5 media laktosa broth triple strenght
sebanyak 10 ml sampel air secara aseptis
 Dimasukkan kedalam masing-masing 5 media laktosa broth single strenght
sebanyak 1 ml sampel air secara aseptis
 Dimasukkan kedalam masing-masing 5 media laktosa broth single strenght
(media terakhir) sebanyak 0,1 ml sampel air secara aseptis
 Dihomogenkan, inkubasi 370C selama 24-48 jam

55 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
  Hasil positif (+) = Media berubah dari merah menjadi kuning dan timbul
gas
 Tiap-tiap tabung laktosa broth yang menunjukkan hasil positif, ditanam
kedalam media Brillian Green Lactosa Bile Broth (BGLB)
 Diinkubasi 370C selama 24-48 jam
 Hasil positif (+) = Media berubah keruh dan timbul gas, jika hanya timbul
gas tetap dilaporkan positif
 Tabung yang menunjukkan hasil positif dibaca dengan tabel MPN

c. Ragam III :

333 (3x10 ml; 3x1 ml; 3x0,1 ml) : Adalah ragam alternatif untuk ragam II
apabila jumlah tabung dan media terbatas

 Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan

 Disiapkan 3 buah media laktosa broth triple strenght, 3 buah media laktosa
broth single strenght dan 3 buah media laktosa broth single strenght
 Dimasukkan kedalam masing-masing 3 media laktosa broth triple strenght
sebanyak 10 ml sampel air secara aseptis
 Dimasukkan kedalam masing-masing 3 media laktosa broth single strenght
sebanyak 1 ml sampel air secara aseptis
 Dimasukkan kedalam masing-masing 3 media laktosa broth single strenght
(media terakhir) sebanyak 0,1 ml sampel air secara aseptis
 Dihomogenkan, inkubasi 370C selama 24-48 jam
 Hasil positif (+) = Media berubah dari merah menjadi kuning dan timbul
gas
 Tiap-tiap tabung laktosa broth yang menunjukkan hasil positif, ditanam
kedalam media Brillian Green Lactosa Bile Broth (BGLB)
 Diinkubasi 370C selama 24-48 jam
 Hasil positif (+) = Media berubah keruh dan timbul gas, jika hanya timbul
gas tetap dilaporkan positif
 Tabung yang menunjukkan hasil positif dibaca dengan tabel MPN

56 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
d. Tes Lanjutan

 Dari hasil tes ketiga ragam diatas, hasil dari tabung Brillian Green Lactosa
Bile Broth (BGLB) yang positif diinokulasi pada media Endo /
EMBA(Eosin Methyleen Blue Agar / MC(Mac Conkey Agar)
 Diinkubasi 370C selama 24-48 jam
 Pada media Endo koloni E. coli berwarna merah metalik, pada media
EMBA berwarna hijau metalik dan pada media MC berwarna merah
jambu
 Hasil inokulasi ditanam pada media uji biokimia dan diinkubasi 370C
selama 24-48 jam
 Hasil diamati dan ditentukan spesies coliform yang ada didalam sampel

Apabila dalam pembacaan BGLB, semua tabung menunjukkan hasil positif (+)
gas, penanaman dapat diteruskan dengan mengencerkan sampel 10x atau 100x
lebih rendah dari ragam LB yang sudah dikerjakan. Hasil MPN yang diperoleh
dikalikan 10x atau 100x.

Penghitungan index MPN dapat pula dilakukan dengan formula Thomas :

(A + B + C) x (√(S x N)-1 x 100 = …

A = Jumlah tabung positif (+) gas penanaman kelompok pertama

B = Jumlah tabung positif (+) gas penanaman kelompok kedua

C = Jumlah tabung positif (+) gas penanaman kelompok ketiga

S = Jumlah ml sampel yang ditanam

N = Jumlah ml sampel yang negatif

57 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
Tabel MPN 511 Menurut Formula Thomas

Jumlah Tabung yang Menunjukkan Hasil Positif (+) Gas

Pada Inokulasi BGLB Index MPN

5x10 ml 1x1 ml 1x0,1 ml

per 100 ml

0 0 0 0

0 0 1 2

0 1 0 2

0 1 1 4

1 0 0 2

1 0 1 4

1 1 0 4

1 1 1 7

2 0 0 5

2 0 1 8

2 1 0 8

2 1 1 10

3 0 0 9

3 0 1 12

3 1 0 12

3 1 1 6

4 0 0 17

4 0 1 21

58 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
4 1 0 22

4 1 1 27

5 0 0 67

5 0 1 84

5 1 0 265

5 1 1 > 979

Catatan :

D. Hasil dan Pembahasan

Hasil:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
Pembahasan:
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................
....................................................................................................................................

59 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 DAFTAR PUSTAKA

1. http://framesti.wordpress.com/2010/11/18/inokulasi-dan-peremajaan-
biakan-dalam-media-padat-dan-cair/
2. Departemen pendidikan dan kebudayaan, ilmu gizi, purokerto 2012
dokumen.tips/dokumen/laporan-praktikum-mikrobiologi-2-yaaaaa-.html
3. Standar Prosedur Operasional Pemeriksaan Mikroskopis TB
KEMENTERIAN KESEHATAN RI DIREKTORAT JENDERAL BINA
UPAYA KESEHATAN DIREKTORAT JENDERAL PENGENDALIAN
PENYAKIT DAN PENYEHATAN LINGKUNGAN 2012
4. Kementrian Kesehatan Republik Indonesia. Petunjuk Teknis Pemeriksaan
Biakan, Identifikasi, dan Uji Kepekaan Mycobacterium Tubercolosis
dengan Media Padat. Kemenkes : Jakarta. 2012.
Indahwaty, dkk. Perbandingan Angka Positivitas dan Waktu Deteksi
Pertumbuhan Mycobacterium Tubercolosis anatara Media Biakan Cair
Khlorometrik dan Media Padat Ogawa pada Spesimen Sputum, Cairan
Pluera, dan Cairan Serebrospinal. Bagian Patologi Klinik Fakultas
Kedokteran universitas Padjajaran/ Rumah Sakit Hasan Sadikin.
Bandung.2012.
5. Anonim. Pemeriksaan plasmodium darah tipis:
http://dokumen.tips/documents/sediaan-plasmodium-tebal-dan-tipis.html.
Semarang. Diakses tanggal 14 September 2016.
6. Pedoman Teknis Pemeriksaan Parasit Malaria. Direktorat Pengendalian
Penyakit Bersumber Binatang. Direktorat Jendral PP & PL Kementrian
Kesehatan R.I. 2011.
7. Riska Triani, Tjiptoharyono, Ulfifaizah. Identifikasi Telur Endoparasit.
ISSN : 2252-3979. Lentera Bio Vol. 3 No. 3. September 201
8. Athiroh, N.Petunjuk Praktikum Parasitologi. Malang: JurusanBiologi
FMIPA Universitas Islam Malang. 2005.

60 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i
 9. Setyaningrum Adi Kusuma. Laporan Praktikum Mata Kuliah
Parasitologi. Fakultas Kedokteran dan Ilmu-Ilmu Kesehatan Jurusan
Kesehatan Masyarakat. Universitas Jenderal Soedirman. 2014.
10. Hardidjaja, Pinardi & TM. Penuntun Laboratorium Parasitologi
Kedokteran. FKUI, Jakarta. 1994.
11. Laporan praktikum II. pemeriksaan bakteriologis sampel nasi kuning di
warung sahabat. Andi Muh,Arfah saputra samad. Makassar.2011
12. Anonymous. Laporan Mikrobiologi : Enumerasi Bakteri.
Humairah, Anida. Laporan Tetap : Praktikum Mikrobiologi Umum Teknik
Perhitungan Mikroba. Universitas Sriwijaya, Fakultas Pertanian. Tahun
2014.
Departemen Kesehatan. Modul Pelatihan Pemeriksaan Laboratorium
Dalam Kewaspadaan Dini Penyakit Menular. Direktorat Jenderal Bina
Pelayanan Medik dan Direktorat Bina Pelayanan Penunjang Medik. Tahun
2009.
13. Juni Purwati, Neni Purwandari, Niken Kriswandari, Yusuf Toto Purwoto.
2011. https://www.scribd.com/doc/127500477/Laporan-Praktikum-
Pengambilan-Sampel-Air-dan-Usap-Alat-Makan. Diakses pada 16, 2016.
14. http://www.academia.edu/7150509/Laporan_praktikum_mikrobiologi_uji_
kuantitatif_mikroba

61 | P a n d u a n P r a k t i k u m M i k r o b i o l o g i