Kemanjuran in vitro dari lima minyak esensial terhadap Pediculus humanus capitis

Kerdalidec Candy1,2 & Patrick Nicolas3 & Valérie Andriantsoanirina1 & Arezki Izri1,2,4 &
Rémy Durand1,4,5,6

Abstrak

Pengobatan utama kutu biasa menggunakan insektisida topikal. Saat ini, pedikulisida topikal
konvensional telah kehilangan aktivitas yang cukup besar di seluruh dunia. Ada peningkatan minat
dalam penggunaan produk alami seperti minyak esensial untuk mengendalikan kutu kepala, dan
banyak dari produk sekarang mengandung pedikulosida, dan seringkali tanpa evaluasi yang tepat.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menilai kemanjuran in vitro dari lima minyak esensial
terhadap orang dewasa dari Pediculus humanus capitis menggunakan bioassay toksisitas kertas
saring kontak. Komposisi kimiawi minyak esensial dari bergamot liar, cengkeh, lavender, pohon
teh, dan Yunnan verbena dianalisis dengan kromatografi gas massa spektrometri. Semua
perawatan dan kontrol direplikasi tiga kali pada waktu yang berbeda selama 11 bulan. Secara
keseluruhan, 1.239 kutu hidup dikumpulkan dari kulit kepala 51 subjek, berusia 1 hingga 69 tahun.
Minyak cengkeh, diencerkan baik dalam minyak kelapa atau minyak bunga matahari,
menunjukkan aktivitas adulticidal terbaik, mencapai mortalitas> 90% dalam waktu 2 jam terhadap
kutu yang kontak selama 30 menit. Minyak Yunnan verbena yang diencerkan dalam minyak kelapa
juga menunjukkan khasiat yang signifikan. Minyak esensial lainnya menunjukkan khasiat yang
lebih rendah. Komponen utama minyak berbeda menurut minyak yang diuji dan nampak beragam
secara kimia. Dalam kasus minyak cengkeh, eugenol muncul sebagai komponen utama. Studi ini
mengkonfirmasi potensi dari beberapa minyak esensial yang diuji, tetapi tidak semua, sebagai
produk yang mungkin dimasukkan dalam formulasi pediculicidal.

Kata kunci : Pediculus humanus capitis, Kutu kepala, Minyak esensial, Saring kertas,
Bioassay

Pendahuluan

Kutu kepala yang disebabkan oleh Pediculus humanus capitis (De Geer) merupakan penyakit
ektoparasit manusia yang paling umum di seluruh dunia (Falagas et al. 2008). Kutu adalah
hematofagus, serangga tak bersayap yang termasuk dalam ordo Anoplura (Chosidow 2000).
Mereka adalah ektoparasit yang makan secara khusus pada darah manusia. Parasit ini menyerang
lebih dari 100 juta orang di seluruh dunia setiap tahun. Meskipun semua kelompok umur mungkin
terpengaruh, hal ini sering terjadi pada anak-anak usia 3 hingga 11 tahun. Kutu kepala, Pediculosis
capitis, umumnya dianggap sebagai kondisi jinak. Pediculosis capitis dapat menyebabkan iritasi
kulit, infeksi sekunder akibat garukan, stigmatisasi sosial, dan tekanan psikologis. Implikasi
ekonomi juga penting bagi keluarga yang ingin menyingkirkan diri dari masalah.
 Selama 50 tahun terakhir, pengobatan telah bergantung terutama pada penggunaan insektisida
topikal, seperti piretroid topikal atau malati (Burgess 2009). Penggunaan insektisida secara luas
terutama pda produk o insektisida neurotoksik menyebabkan munculnya dan penyebaran resistensi
terhadap organoklorin, piretroid, dan senyawa organofosorfor di banyak bagian dunia (Durand et
al. 2012; Koch et al. 2016). Memang, data klinis, parasitologis, dan molekuler menunjukkan bahwa
pedikulisida topikal konvensional telah kehilangan aktivitas di seluruh dunia. Pilihan lain sekarang
tersedia, termasuk agen non-neurotoxic topikal seperti dimeticone (Burgess 2009). Ada juga
peningkatan minat dalam penggunaan produk alami untuk pengendalian kutu kepala. Minyak
esensial adalah campuran dari banyak metabolit tanaman berbeda yang biasanya diekstraksi dari
tanaman melalui destilasi uap (Bakkali et al. 2008). Metabolit ini merupakan molekul yang mudah
menguap dengan berat molekul rendah. Minyak esensial biasanya mengandung dua atau tiga
komponen terpene atau terpenoid utama (Bakkali et al. 2008). Mereka dapat bertindak di beberapa
situs target baru, sehingga mengurangi potensi resistensi (Choi et al. 2010). Ada beberapa laporan
yang menunjukkan aktivitas pediculicidal dari beberapa minyak esensial, digunakan sendiri atau
dalam kombinasi dengan produk lain, baik dalam uji in vitro atau uji klinis (Yang et al. 2004; Yang
et al. 2005; Heukelbach et al. 2006; Priestley dkk. 2006; Gonzalez-Audino dkk. 2007; Williamson
dkk. 2007; Heukelbach dkk. 2008; Barker dan Altman 2010; Choi dkk. 2010; Bagavan dkk. 2011;
Barker dan altman 2011; Gonzalez - Audino dkk. 2011; Di Campli dkk. 2012; Gallardo dkk.
2012a; Gallardo dkk. 2012b; Yones dkk. 2016). Di Prancis, seperti halnya di banyak negara, kutu
kepala tidak lagi dianggap sebagai penyakit, dan status pedikulisida berubah dari produk obat
menjadi produk medis atau produk alami, yang regulasinya kurang ketat. Dengan demikian,
banyak minyak esensial sekarang dimasukkan ke dalam berbagai produk bebas yang diberikan
sebagai pediculicides tanpa evaluasi yang tepat. Mereka umumnya ditoleransi dengan baik, tetapi
mereka mungkin memiliki efek yang tidak diinginkan. Misalnya, minyak lavender dan minyak
pohon teh telah dicurigai mengganggu endokrin (Henley et al. 2007).

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menilai kemanjuran in vitro dari lima minyak esensial,
yang sudah termasuk atau tidak dalam produk yang dipasarkan sebagai pediculicides, terhadap
orang dewasa dari Pediculus humanus capitis.

Bahan dan metode

Kelayakan etik

Protokol ini ditinjau dan disetujui oleh Comite de Protection des Personnes (dewan peninjau
kelembagaan) dari komite etika CPP-Ile-de-France X (2017-02). Informed consent diperoleh dari
semua pasien.
Pasien

Kutu dewasa dikumpulkan dari pasien yang berkonsultasi di Rumah Sakit Avicenne atau dari anak
sekolah di Bobigny, Prancis, antara Januari dan November 2015. Para pasien belum pernah diobati
dengan produk anti-kutu selama setidaknya 2 minggu sebelum tes. Sisir anti-kutu bergigi halus
digunakan untuk mengumpulkan kutu. Kutu disimpan dalam cawan Petri (diameter 8,5 cm). Kutu
dewasa yang tidak terluka dari kedua jenis kelamin dikumpulkan dan didistribusikan secara acak
untuk tes yang berbeda. Eksperimen dimulai dalam 2 jam setelah pengumpulan kutu kepala.

Minyak esensial yang diuji

Minyak esensial dan minyak pengencer dibeli dari pemasok yang berbeda (Tabel 1). Semua
minyak dijamin murni dan bebas dari zat pemalsuan. Semua minyak esensial diencerkan dengan
masing-masing minyak pengencer dengan konsentrasi kerja pada hari percobaan. Minyak
pengencer (bunga matahari dan minyak kelapa) dipilih karena terdapat dalam kandungan berbagai
pedikulisida yang sudah tersedia bebas di pasar (Tabel 2).

Kromatografi gas / spektrometri massa

Komponen utama minyak esensial dianalisis dengan kromatografi gas / spektrometri massa (GC /
MS) dengan sistem Agilent 5977A Series GC / MSD. Kemampuan kolom untuk memisahkan
senyawa tergantung pada fase diam mereka. Menurut prinsip ini dan mempertimbangkan potensi
komposisi minyak, kami menggunakan kolom DB-1 MS (30 m × 0,25 mm × 0,25 μm) atau kolom
HP-INNOWax (30 m × 0,25 mm × 0,25 m) untuk menganalisis minyak yang berbeda. Helium
adalah gas pembawa. Struktur kimia dari masing-masing komponen diidentifikasi dengan
membandingkan pola fragmentasi yang terlihat dalam spektrum massa dengan data perpustakaan
standar. Persentase relatif dari komponen minyak dihitung dari puncak GC.

Kertas saring kontak toksisitas bioassay

Sebuah kertas saring kontak bioassay digunakan untuk mengevaluasi toksisitas bergamot liar,
cengkeh, lavender, pohon teh, dan minyak esensial Yunnan verbena yang diuji terhadap P.
humanus capitis. Kutu dipaparkan terhadap konsentrasi (1,75 mg / cm2) dari masing-masing
minyak esensial. Secara singkat, 100 μL minyak esensial diencerkan dalam 900 μL minyak kelapa
atau bunga matahari, dan campuran dikocok (vortex) agar dispersi. Kemudian, campuran minyak
disebarkan secara merata di seluruh permukaan kertas saring (Whatman No. 1, diameter 8,5 cm)
yang ditempatkan di bagian bawah cawan Petri plastik (diameter 8,5 cm, tinggi 1,5 cm). Kertas
saring kontrol pengencer hanya menerima 1 mL minyak kelapa atau minyak bunga matahari. Kutu
kontrol negatif ditempatkan langsung pada kertas saring yang dibasahi dengan 1 mL air suling.
Kelompok ~ 30 kutu yang tidak terluka (dewasa, kedua jenis kelamin) ditempatkan di bagian
bawah kertas saring di setiap kelompok minyak esensial dan dalam kelompok kontrol. Setelah
waktu kontak selama 30 menit dan untuk mensimulasikan pengobatan inang yang terinfeksi, kutu
kepala dicuci dengan sampo netral, NeutrapharmTM, Laboratoire Gilbert, Hérouville Saint-Clair,
Prancis; dibilas dengan air ledeng; dan dikeringkan dengan kertas penyerap. Kutu kemudian
diperiksa di bawah mikroskop stereo, dan kematian dicatat setiap 30 menit selama 3 jam. Jika ada
tanda-tanda kecil kehidupan, seperti gerakan antena atau gerakan kaki minimal, diamati (dengan
atau tanpa stimulasi dengan forsep), kutu tersebut dikategorikan hidup. Kutu itu dinilai mati jika
tidak ada tanda-tanda vital sama sekali. Kutu kepala yang dirawat dan kontrol ditahan pada kondisi
yang sama yaitu 25 ± 2 ° C dan kelembaban relatif 20-50%. Semua perawatan dan kontrol
direplikasi tiga kali pada kesempatan terpisah selama periode 11 bulan, dan rata-rata dianggap

Analisis statistik

Data dianalisis oleh kurva survival Kaplan-Meier, dan median waktu letal (LT50) kutu dihitung
menggunakan perangkat lunak JMP 13.0. Perbedaan statistik antara data yang diperoleh dengan
masing-masing minyak esensial dan kontrol untuk setiap percobaan diukur dengan uji log-rank.
Nilai P ≤ 0,05 dianggap signifikan. Untuk pengujian perbandingan ganda, koreksi Bonferroni
digunakan untuk menghindari inflasi risiko nominal α. Di sini, risiko nominal dipilih sebagai α /
k, di mana k adalah jumlah perbandingan 2 × 2 dan α adalah 0,05.

Hasil

Secara keseluruhan, 1.239 kutu hidup dikumpulkan dari kulit kepala dari 51 subjek berusia 1-69
tahun. Komponen utama minyak esensial yang dianalisis oleh GC / MS disajikan pada Tabel 3.
Kurva kelangsungan hidup kutu dewasa yang terpapar minyak esensial atau minyak pengencer
melalui kontak langsung ditunjukkan pada Gambar. 1. Semua minyak esensial encer menunjukkan
aktivitas mematikan yang signifikan dibandingkan dengan aktivitas pengencer sendirian, minyak
kelapa atau minyak bunga matahari (Gbr. 2). Nilai LT50 diperkirakan dari langsung kontak
toksisitas bioassay minyak esensial, pada konsentrasi 1,75 mg / cm2 dalam dua pengenceran yang
berbeda, diberikan dalam Tabel 4. Minyak cengkeh, diencerkan baik dalam minyak kelapa atau
minyak bunga matahari, menunjukkan aktivitas adulticidal terbaik, mencapai mortalitas> 90%
dalam waktu 2 jam terhadap kutu yang dikumpulkan ke kontak selama 30 menit. Minyak Yunnan
verbena yang diencerkan dalam minyak kelapa juga menunjukkan khasiat yang signifikan. Minyak
lain menunjukkan kemanjuran yang lebih rendah, diencerkan baik dalam minyak kelapa atau
minyak bunga matahari. Lavender dan teh trea dalam minyak coco, dan lavender, bergamot liar
dan pohon teh pada minyak bunga matahari membunuh kurang dari 50% dari kutu dewasa pada
masa observasi, dan dengan demikian, nilai LT50 tidak bisa dinilai dalam bioassay. Semua minyak
esensial menunjukkan aktivitas pediculicidal yang lebih tinggi ketika diencerkan dalam minyak
kelapa dibandingkan dengan minyak bunga matahari (Gbr. 1). Minyak bunga matahari dan minyak
kelapa menunjukkan aktivitas pediculicidal yang lemah, bila digunakan sendiri dibandingkan
dengan kelompok kontrol (bunga matahari vs kontrol, p = 0,0165; coco vs kontrol, p <0,0001).
Aktivitas itu lebih tinggi untuk minyak kelapa daripada minyak bunga matahari (p = 0,0141).

Diskusi

Kami memilih menggunakan kutu kepala yang diambil pada pasien karena uji laboratorium
terhadap kutu pada tubuh kurang representatif dikarenakan tidak adanya indetifikasi variaso
suseptibilitas obat pada individu. Metodologi yang digunakan, termasuk kontak waktu 30 menit
dengan minyak esensial yang diencerkan, sampo, dan pembasuhan kutu dengan air ledeng,
dirancang untuk mensimulasikan apa yang mungkin dihadapi kutu kepala selama perawatan nyata.
Hasil yang kami peroleh mengonfirmasi potensi minyak cengkeh untuk mengendalikan kutu
kepala. Nilai LT50 yang diamati dalam penelitian kami sebanding dengan yang ditemukan dalam
dua penelitian terbaru lainnya di mana kutu diletakkan di atas kertas saringan yang diresapi selama
semua percobaan (Bagavan et al. 2011; Yones et al. 2016). Minyak esensial kedua yang paling
aktif diekstraksi dari Litsea cubeba (Yunnan verbena), menunjukkan nilaiLT50 dari 30 menit di
kedua minyak pengencer. Sepengetahuan kami, minyak esensial dari Litsea cubeba belum pernah
diteliti sebelumnya untuk aktivitas pediculicidal. Minyak lain menunjukkan kemanjuran yang
lebih rendah, gagal membunuh lebih dari 50% kutu dalam kondisi yang diuji, kecuali minyak
bergamot liar yang dilarutkan dalam minyak kelapa. Dalam penelitian sebelumnya, minyak teh
mungkin telah menunjukkan kemanjuran yang lebih baik daripada apa yang kami amati dalam
penelitian kami, meskipun hasilnya bervariasi menurut formulasi yang diuji (Heukelbach et al.
2008). Dapat digarisbawahi bahwa hasil terbaik dengan minyak pohon teh diperoleh ketika etanol
atau alkohol lain hadir dalam formulasi, yang tidak terjadi dalam penelitian kami sebelumnya Studi
menunjukkan bahwa etanol dan alkohol mungkin memiliki efek pada kutu karena toksisitasnya
(Gonzalez-Audino et al. 2007; Meinking et al. 2010; Mougabure Cueto dan Picollo 2010;
Gonzalez-Audino et al. 2011). Telah dilaporkan bahwa formulasi partikel mungkin meningkatkan
kemanjuran pedukuisida. Sebenarnya, formulasi yang mengandung minyak pohon teh saat ini
sering dipasarkan termasuk beberapa alkohol dan minyak esensial lainnya seperti minyak laven-
der, contohnya.
Demikian pula, minyak lavender tidak menunjukkan efek in vitro yang besar dalam penelitian
kami. Hasil menarik yang dilaporkan sebelumnya untuk minyak esensial diperoleh dari minyak
esensial lain (Barker dan Altman 2010) atau dilarutkan dalam etanol ± isopropanol (Gonzalez-
Audino et al. 2007).
Data tentang kemanjuran in vitro minyak bergamot liar kurang dalam literatur saat ini. Dalam
penelitian kami, minyak bergamot liar menunjukkan kemanjuran yang tidak dapat diabaikan,
terutama dalam minyak kelapa, lebih tinggi dari pohon teh atau lavender tetapi lebih rendah dari
minyak cengkeh dan minyak Yunnan verbena. Pasar farmasi untuk produk kutu di banyak negara
dibanjiri dengan produk yang diuji dan / atau tidak efektif. Karena minyak esensial dapat menjadi
alternatif yang menarik untuk pilihan perawatan insektisida, ada kebutuhan mendesak untuk
mendokumentasikan kemanjuran berbagai produk. Di antara minyak esensial yang diuji dalam
penelitian ini, minyak cengkeh, pohon teh, bergamot liar, dan minyak lavender, tetapi bukan
minyak Yunnan verbena, sudah dimasukkan, bersama dengan produk lain, dalam formulasi yang
dipasarkan sebagai pediculicides. Menurut penelitian kami, lavender, bergamot liat, dan pohon teh
mungkin bukan minyak esensial terbaik untuk dimasukkan dalam formulasi pediculicidal. Minyak
cengkeh dan, pada tingkat lebih rendah, minyak Yunnan verbena tampak lebih menarik.
Cara kerja banyak minyak esensial atau komponennya sebagian besar tidak diketahui. Khasiat
insektisida dari minyak esensial sering dikaitkan dengan komponen utama minyak, dan ada juga
bukti bahwa berbagai komponen minyak dapat bekerja secara sinergis (Yang et al. 2004). Seperti
ditunjukkan dalam penelitian ini oleh CPG-MS, komponen utama minyak berbeda menurut
minyak yang diuji dan menimbulkan keberagaman secara kimiawi. Dalam kasus minyak cengkeh,
komponen, eugenol, nampak dominan. Eugenol sebelumnya juga dilaporkan sebagai komponen
utama minyak Mentha spicata (spearmint), salah satu minyak esensial paling manjur yang diuji
oleh penulis lain (Yones et al. 2016). Dalam penelitian kami, minyak lain lebih seimbang dalam
komposisinya dan tampaknya sulit untuk mengidentifikasi komponen aktif utama.
Sebagai kesimpulan, penelitian ini mengkonfirmasi minat potensial dari beberapa minyak
esensial yang diuji, tetapi tidak semua, sebagai produk untuk dimasukkan dalam formulasi
pediculicidal. Kemanjuran minyak esensial terhadap Pediculus humanus capitis adalah variabel
dan sangat tergantung pada tanaman aromatik dari mana mereka diekstraksi dan pada kualitas
ekstraksinya (Bakkali et al. 2008). Studi lebih lanjut dibutuhkan untuk memilih produk terbaik
dan juga untuk mengevaluasi toksisitasnya pada manusia.