DHEA RUSLITA

Jalur fenilpropanoid oleh P-450 ini sangat penting dalam biosintesis coumarin (Skema 5).
Demikian pula, mutan homozigot dari caffeoyl-CoA O-methyltransferase 1 (CCoAOMT1)
mengandung cukup tingkat yang lebih rendah dari 26 (30%) dan 27 (15%) dibandingkan
dengan akar tipe liar. Oleh karena itu, enzim dan ini produk enzim, feruloyl-CoA (21),
harus terlibat dalam biosintesis senyawa 26 dalam A. thaliana. Berdasarkan temuan ini, gen
kandidat menyandi oksigenase yang mengkatalisis orto-hidroksilasi feruloyl-CoA (21)
dipilih, dan gen 2-ODD (At3g13610) ditemukan secara dominan diekspresikan pada akar
dan mutannya. Tanaman hanya mengandung kadar koumarin yang sangat rendah dalam
akar.1 Memang, enzim rekombinan ditranskripsi dari gen F69H1 dan homolognya F69H2
menunjukkan aktivitas feruloyl-CoA 69-hidroksilase yang menghasilkan 69-hidroksiferuloil
CoA (28) (Skema 5). Spesifitas substrat dari enzim-enzim ini adalah serupa: 21 berfungsi
sebagai yang utama substrat dan 4-coumaroyl-CoA (4) menghasilkan sejumlah kecil
produk, tetapi cinnamoyl-CoA dan caffeoyl-CoA (7) dan asam bebas tidak bertindak
sebagai substrat. Sangat menarik sekali, campuran reaksi enzim di bawah gelap terkandung
tingkat signifikan scopoletin (26), yang harus dihasilkan melalui enolisasi nonenzimik CoA
tioester,isomerisasi trans-cis dari anion enolat, dan pembentukan cincin lakton dengan
CoAS? sebagai kelompok yang pergi. Mekanisme biosintesis scopoletin di A. thaliana
dengan demikian sekarang dipahami dengan baik, menunggu lebih karakterisasi rinci
isomerisasi geometrik dan proses laktonisasi. Apakah ini 2-ODD-dependent ortho-
hydroxylation dari phenylpropanoid CoA-thioester adalah mekanisme umum untuk
konstruksi kerangka kumarin pada tanaman lain juga membutuhkan penelitian lebih lanjut,
tetapi tidak diragukan lagi temuannya dilaporkan di atas adalah terobosan dalam mekanisme
biosintesis coumarin

1.24.2.4.2 biosintesis Furanocoumarin: Identifikasi psoralen sintase

Furanocoumarin linier dan angular seperti psoralen (29) dan angelicin (30) disentesiskan
dengan awal prenilasi pada 6- atau 8-posisi umbelliferone (31), dan produk masing-masing,
demethylsuberosin (6-dimethylallylumbelliferone, 32) dan osthenol (8-
dimethylallylumbelliferone), dikenakan P-450-oksidasi dikatalisasi (Skema 6). Seri linier
telah menjadi target penelitian, dan memisahkan P-450, (þ) -marmesin synthase, psoralen
synthase, dan psoralen 5-monooxygenase telah diasumsikan untuk menghasilkan bergaptol
(33), yang akhirnya O-methylated untuk menghasilkan bergapten (25). Kultur sel Ammi
majus telah menjadi bahan yang sangat baik untuk mempelajari biosintesis furanocoumarin
linear, karena enzim biosintesis dengan cepat diinduksi dalam sel yang ditimbulkan. Baru-
baru ini, sintase psoralen P-450 yang baru diidentifikasi pada tingkat molekuler.44 Total
RNA dari sel yang diobati dengan elisitor selama 3-5 jam digunakan untuk template
tampilan diferensial RT-PCR amplifikasi sekuen P-450, dan CYP71AJ1 dikloning. Ekspresi
heterolog yang sukses dari ini P-450 membutuhkan modifikasi dari residu asam amino N-
terminal 37 dan penggunaan strain ragi spesifik WAT11, dan CYP71AJ1mut rekombinan
menghasilkan psoralen (29) dari marmesin (34) yang membutuhkan
(nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate (NADPH) mengurangi bentuk) sebagai
kofaktor. Ragi yang menyimpan CYP71AJ1 tipe liar juga menghasilkan 29 ketika prekursor
diumpankan ke kultur. Dengan demikian, CYP71AJ1 diidentifikasi sebagai psoralen
synthase, yang pertama abstrak syn-hidrogen di C-39 ke kelompok isopropiloksi dan,
setelah pembelahan rantai karbon, melepaskan aseton sebagai produk sampingan. Enzim
spesifik untuk (þ) -marmesin (34) dengan a
aktivitas kecil ke 5-hydroxymarmesin, dan transkripnya terkumpul hingga maksimum 4 jam
setelah elisitasi diikuti oleh maksimum 29 level pada 9-10 jam. Yang menengah dari
furanocoumarin sudut, (þ) –columbianetin (35), aktivitas psoralen synthase yang dihambat
secara kompetitif, dan studi pemodelan pada struktur situs aktifmenyarankan bahwa
sejumlah mutasi mungkin telah mengubah psoralen synthase menjadi angelicin synthase.

1.24.2.4.3 Modifikasi rangka kumarin

1.24.2.4.3 (i) Daphnetin 8-O-methyltransferase Daphnetin (7,8-dihydroxycoumarin,
36) adalah coumarin yang dapat disintesis oleh 8-hidroksilasi umbelliferone (31), coumarin
sederhana yang berasal dari Fenilpropanoid tersubstitusi 4-coumarate-type (Skema 7).
Selama aklimatisasi dingin tanaman gandum, beberapa gen berhubungan dengan
meningkatnya tekanan eksitasi fotosistem II, dan di antara gen-gen ini, ScOMT1
memamerkan homologi untuk menanam gen OMT. Karakterisasi biokimia dari ScOMT1
rekombinan ditampilkan aktivitas enzim baru, menghasilkan 7-hidroksi-8-
methoxycoumarin (37) .45 Spesifitas substratnya terbatas pada daphnetin, tidak
menggunakan esculetin (6,7-dihydroxycoumarin, 38) sebagai substrat, dan regiospecificity
reaksi methyltransfer juga hanya terhadap 8-hydroxyl kelompok. Seperti daphnetin dikenal
sebagai inhibitor protein kinase, peningkatan regulasi OMT ini sebagai respons terhadap
tekanan eksitasi PSII dan rendah suhu dianggap terlibat dalam sinyal suhu rendah.

1.24.2.4.3 (ii) O-Methyltransferases terlibat dalam biosintesis furanocoumarin The 5- atau

8-hydroxylated furanocoumarin (bergaptol (33) atau xanthotoxol) adalah O-methylated
untuk menghasilkan bergapten (25) atau xanthotoxin, dan OMT yang terlibat dalam reaksi
telah dicirikan pada sel P. crispum dan Ruta graveolens yang dibiakkan. Bergaptol 5-O-
methyltransferase (BMT) cDNA dikloning dari sel-sel Ammi majus yang tumbuh gelap
diobati dengan elicitor jamur kasar.46 BMT terbukti menjadi enzim labil elisitor-inducible
yang sangat spesifik untuk bergaptol dikontras dengan OMT konkret yang diekspresikan
secara ekspresif (COMT) dengan spesifisitas yang lebih luas terhadap turunan-turunan
kafein termasuk esculetin (38) dan daphnetin (36).
1.24.2.4.3 (iii) Coumarin glycosyltransferases dan pertahanan tanaman pada
tembakau. Tembakau memiliki tanaman tradisional digunakan sebagai sistem
eksperimental untuk resistensi patogen dan metabolisme fenilpropanoid. Uridine
diphosphate (UDP) -glucose: phenylpropanoid glucosyltransferase (TOGT) tembakau
menghasilkan scopolin (27) dari scopoletin (26). Downregulation TOGT oleh metodologi
antisense menghasilkan penurunan yang signifikan 27 dan, secara tak terduga, juga 26,
terkait dengan resistensi yang melemah terhadap infeksi dengan virus mosaik tembakau
(TMV) .47 Hasil ini dikaitkan dengan efek antivirus langsung dan oksigen reaktif
menengah (ROI) buffering dari coumarin. Phenylpropanoid glucosyltransferase -expresi
tembakau
tanaman menunjukkan peningkatan fluoresensi biru terang di sekitar respon hipersensitif
(HR)
lesi nekrotik di bawah sinar UV pada infeksi TMV dan menyarankan HR dipercepat,
meskipun tidak jelas perbedaan konten viral di setiap lesi terdeteksi, 48 sedangkan
peningkatan resistensi TOGT
overexpressing tembakau untuk infeksi virus kentang Y (PVY) telah dilaporkan.49 cDNA
untuk stres baru terkait glucosyltransferases dengan spesifitas substrat luas termasuk 26
sebagai substrat dan lainnya glucosyltransferase yang bereaksi pada 7-hidroksil flavonol
dan 3-hidroksil kerangka kumarin telah dikloning dari sel tembakau budidaya.50,51

1.24.3 Flavonoid
1.24.3.1 Chalcones
Chalcone adalah pigmen kuning, dan kerangkanya (1,3-difenil-2-propen-1-satu) adalah
intermediet awal struktur yang digunakan dalam biosintesis semua flavonoid. Chalcones,
paling sering 29,49,69,4-tetrahydroxychalcone (THC atau naringenin chalcone, 39),
disintesis in vivo oleh CHS dari satu molekul fenilpropanoididihut CoA-ester, 4-coumaroyl-
CoA (4) menjadi substrat yang paling umum, dan tiga molekul malonyl-CoA (Skema 8) .52
Kondensasi berurutan dari tiga unit asetat dari malonyl-CoA dan selanjutnya
1.24.2.4.3 (ii) O-Methyltransferases terlibat dalam biosintesis furanocoumarin The 5- atau
8-hydroxylated furanocoumarin (bergaptol (33) atau xanthotoxol) adalah O-methylated untuk
menghasilkan bergapten (25) atau xanthotoxin, dan OMT yang terlibat dalam reaksi telah
dicirikan pada sel P. crispum dan Ruta graveolens yang dibiakkan. Bergaptol 5-O-
methyltransferase (BMT) cDNA dikloning dari sel-sel Ammi majus yang tumbuh gelap
diobati dengan elicitor jamur kasar.46 BMT terbukti menjadi enzim labil elisitor-inducible
yang sangat spesifik untuk bergaptol dikontras dengan OMT konkret yang diekspresikan
secara ekspresif (COMT) dengan spesifisitas yang lebih luas terhadap turunan-turunan kafein
termasuk esculetin (38) dan daphnetin (36).

1.24.2.4.3 (iii) Coumarin glycosyltransferases dan pertahanan tanaman pada tembakau.

Tembakau memiliki tanaman tradisional digunakan sebagai sistem eksperimental untuk
resistensi patogen dan metabolisme fenilpropanoid. Uridine diphosphate (UDP) -glucose:
phenylpropanoid glucosyltransferase (TOGT) tembakau menghasilkan scopolin (27) dari
scopoletin (26). Downregulation TOGT oleh metodologi antisense menghasilkan penurunan
yang signifikan 27 dan, secara tak terduga, juga 26, terkait dengan resistensi yang melemah
terhadap infeksi dengan virus mosaik tembakau (TMV) .47 Hasil ini dikaitkan dengan efek
antivirus langsung dan oksigen reaktif
menengah (ROI) buffering dari coumarin. Phenylpropanoid glucosyltransferase -expresi
tembakau
tanaman menunjukkan peningkatan fluoresensi biru terang di sekitar respon hipersensitif
(HR)
lesi nekrotik di bawah sinar UV pada infeksi TMV dan menyarankan HR dipercepat,
meskipun tidak jelas perbedaan konten viral di setiap lesi terdeteksi, 48 sedangkan
peningkatan resistensi TOGT
overexpressing tembakau untuk infeksi virus kentang Y (PVY) telah dilaporkan.49 cDNA
untuk stres baru terkait glucosyltransferases dengan spesifitas substrat luas termasuk 26
sebagai substrat dan lainnya glucosyltransferase yang bereaksi pada 7-hidroksil flavonol dan
3-hidroksil kerangka kumarin telahdikloning dari sel-sel tembakau berbudaya

1.24.3 Flavonoid
1.24.3.1 Chalcones
Chalcone adalah pigmen kuning, dan kerangkanya (1,3-difenil-2-propen-1-satu) adalah
intermediet awal struktur yang digunakan dalam biosintesis semua flavonoid. Chalcones,
paling sering 29,49,69,4-tetrahydroxychalcone (THC atau naringenin chalcone, 39), disintesis
in vivo oleh CHS dari satu molekul fenilpropanoididihut CoA-ester, 4-coumaroyl-CoA (4)
menjadi substrat yang paling umum, dan tiga molekul malonyl-CoA (Skema 8) .52
Kondensasi berurutan dari tiga unit asetat dari malonyl-CoA dan selanjutnya