BAB 1

PENDAHULUAN

A. LATAR BELAKANG
Dalam mengembangbiakan mikroba, diperlukan berbagai teknik dan
persyaratan fisik. Mulai dari mempersiapkan mediumnya hingga urutan tata cara yang
benar dalam menumbuhkan mikroba tersebut. Proses inilah yang biasanya dikenal
dengan istilah kultivasi mikroba.
Istilah pertumbuhan umumnya dipergunakan bakteri dan mikroorganisme
yang lainnya dan biasanya lebih mengacu pada perubahan di dalam hasil panen sel
dan bukanlah dilihat dari pertambahan jumlah individu mikroorganisme tersebut.
(Volk, 1993).
Untuk memelihara suatu mikroorganisme yaitu bakteri atau jamur, dari media
yang ada serta membedakan bahwa setiap mikroorganisme memiliki peranan yang
berbeda dalam kehidupan, baik yang merugikan maupun yang menguntungkan. Setiap
sel tunggal mikroorganisme memiliki kemampuan untuk melangsungkan aktivitas
kehidupan dan tidak memerlukan tempat yang besar, mudah ditumbuhkan dalam
media buatan yang dilakukan dalam percobaan ini, dan tingkat pembiakannya relatif
cepat saat inkubasi (Schlegel, 1994).
Saat ini media agar merupakan media yang sangat umum digunakan dalam
penelitian-penelitian mikrobiologi. Media agar ini memungkinkan untuk
dilakukannya isolasi bakteri dari suatu sampel, karakterisasi morfologi, sampai
penghitungaan bakteri yang dikenal dengan nama total plate count. Bentuk koloni
bakteri dan warna-warninya mudah sekali dikenali dengan media ini dengan cara
mengubah komposisi nutrien atau menambahkan indikator (Achmad, 2007).

B. RUMUSAN MASALAH
1. Apa yang dimaksud kultivasi bakteri
2. Apa pentingnya kultivasi
3. Hal apa saja yang harus diperhatikan dalam kultivasi
4. Apa persyaratan bakteri
5. Bagaimana kondisi fisik bakteri

1
 6. Macam macam jenis media
7. Bagaimana cara reproduksi bakteri
8. Bagaimana kurva pertumbuhan bakteri

C. TUJUAN
Tujuan dari penyusunan makalah ini antara lain:
1. Untuk memenuhi tugas Mata Kuliah Mikrobiologi
2. Untuk menambah pengetahuan tentang kultivasi mikrobiologi
3. Untuk mengetahui reproduksi bakteri

2
 BAB II

PEMBAHASAN

A. Kultivasi mikroba
Mikroorganisme sebagai makhluk hidup sama dengan organisme hidup
lainnya sangat memerlukan energi dan bahan-bahan untuk membangun tubuhnya,
seperti dalam sintesis protoplasma dan bagian-bagian sel lainnya. Bahan-bahan
tersebut disebut nutrien. Untuk memanfaatkan bahan-bahan tersebut, maka sel
melakukan suatu kegiatan-kegiatan, sehingga menyebabkan perubahan kimia di
dalam selnya. Semua reaksi yang teratah yang berlangsung di dalam sel ini disebut
metabolisme. Metabolisme yang melibatkan berbagai macam reaksi di dalam sel
tersebut, hanya dapat berlangsung atas bantuan dari suatu senyawa organik yang
disebut juga biokatalisator yang dinamakan enzim (Buckle, 1985)).
Metode kultivasi merupakan metode untuk melipatgandakan jumlah mikroba
dengan membiarkan mereka berkembang biak dalam media biakan yang telah
disiapkan di bawah kondisi laboratorium terkendali. Kultur mikroba digunakan untuk
menentukan jenis organisme dengan kelimpahan dalam sampel yang diuji, atau
keduanya. Ini adalah salah satu metode mikrobiologi yang digunakan sebagai metode
diagnosis untuk menentukan penyebab penyakit infeksi dengan membiarkan agen
infeksi berkembang biak dalam media yang telah disiapkan, seperti yang tertuang
dalam Postulat Koch.

B. Pentingnya Kultivasi
Mikroba merupakan organisme yang menarik untuk diteliti kehidupannya karena
materi genetiknya yang cukup sederhana dan perannya yang besar dalam kehidupan
manusia. Oleh karena itu, diciptakanlah suatu metode kultivasiatau metode
pembiakan mikroba secara in vitro di laboratorium. Hal ini bertujuan untuk
mengetahui atau mempelajari pertumbuhan,morfologi,dan sifat fisiologis mikroba.
Beberapa indikasi kultivasi atau pe,biakan pada laboratorium mikrobiologi meliputi :
a. Pengasingan (isolasi) mikroba pada biakan bakteri
b. Menunjukan sifat khas mikroba
c. Untuk menentukan jenis mikroba yang diisolasi dengan cara-cara tertentu

3
 d. Mendapatkan bahan biakan yang cukup untuk membuat antigen dan percobaan
mikrobiologi lainnya
e. Menentukan kepekaan mikroba, khususnya yang bersifat patogenik terhadap
antibiotic
f. Menghitung jumlah mikroba.
g. Mempertahankan biakan mikroba,khususnya biakan murni

C. Hal-hal yang harus diperhatikan dalam kultivasi

Berbagai jenis mikroba terdapat dalam makanan, tanah, air, udara, sampah, limbah dan
sebagainya. Untuk mempelajari sifat pertumbuhan, morfologi dan sifat fisiologinya, masing-
masing mikroba tersebut harus dipisahkan satu dengan yang lainnya, sehingga terbentuk
suatu kultur murni yaitu suatu biakan yang terdiri dari sel-sel dari satu spesies atau satu galur
mikrobia. Salah satu faktor yang perlu diperhatikan dalam kultivasi mikroorganisme adalah
faktor kebutuhan nutrien, disamping faktor-faktor lain yang diperlukan untuk kehidupannya.
Hal-hal yang perlu diperhatikan dalam isolasi dan kultivasi yaitu sebagai berikut :

1. Semua peralatan dan sarana dalam keadaan steril (bebas mikroorganisme hidup) atau bebas
kontaminan (mikrooganisme yang tidak dikehendaki).
2. Dilakukan secara aseptik (tidak memberi kesempatan untuk terjadinya kontaminasi)

D. Persyaratan nutrisi / media bakteri

Media adalah suatu bahan terdiri atas campuran nutrisi dan zat-zat hara yang
digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme di atas atau didalamnya. Selain itu
medium dapat dipergunakan pula untuk isolasi,perbanyakkan,pengujian sifat-sifat
fisiologis,dan perhitungan jumlah mikroorganisme . Hal ini erat kaitannya dengan istilah
koch untuk menetapkan suatu jenis mikroba sebagai penyebab penyakit harus terlebih
dahulu mendapatkan mikroba dalam keadaan murni (pure culture) untuk diselidiki sifat-
sifatnya. Untuk tujuan tersebut sangat diperlukan suatu medium (perbenihan) sebagai
tempat tumbuh dan isolasi mikroorganisme.
Media juga adalah suatu substrat dimana mikroba dapat tumbuh yang disesuiakan
dengan lingkungan hidupnya . Substrat tersebut merupakan makanan bagi mikroba yang
mengandung penyubur ,vitamin, mineral, dan pH tertentu.

4
  Media yang digunakan harus dalam keadaan steril dan bebas dari campuran media /
medium lainnya.
 Media yang digunakan benar-benar masih dalam keadaan baik dan tidak melewati masa
kadaluarsa atau biasa disebut dengan EXP.
 Perlu memperhatikan jenis media yang akan digunakan apakah media itu bersifat umum
ataukah media tersebut bersifat khusus terhadapa satu jenis mikroorganisme.
 Jika media atau medium tersebut adalah medium agar perlu diperhatikan cara
penggunaannya pada botol media tersebut karena ada beberapa jenis media yang
penggunaannya harus melewati proses pemanasan terlebih dahulu dan ada pula yang
tidak melalui proses pemanasan.
 Anda juga harus memperhatikan setiap keterangan jenis media berdasarkan logo kimia
yang melekat pada botol media, dan pastikan keamanan diri anda terlindungi (safety).

 Nutrisi yang diperlukan mikroba

Mikroba memerlukan nutrien sebagai sumber materi dan energy untuk
menyusun komponen sel seerti genom, membrane plasma dan dinding sel. Bentuk
nutrient yang diperlukan bermacam-macam, tergantung jenis mikrobanya, misalnya
kebutuhan karbon untuk jasad fotoautotrof dalam bentuk CO2, sedangkan bagi jasad
kemoorganotrof dalam bentuk bahan organik. Dengan mengetahuia keperluan nutrien
mikroba para ilmuwan dapat melakukan penelitian untuk menentukan peranan
mikroba di alam dan kegunaannya dalam kehidupan manusia. Uraian berikut akan
membahas mengenai tipe nutrisi yang dijumpai diantara mikroba.
1. Kegiatan sel seperti biosintesis komponen sel, transport nutrient ke dalam sel dan
motilitas memerlukan energy. Berdasarkan sumber energy, mikroba dibagi atas
jasad fototrof yang menggunakan oksidasi senyawa kimia sebagai sumber energy.
Dan jasad kemotrof yang menggunakan oksidasi senyawa kimia sebagai sumber
energy. Terleas dari sumber energy yang digumakan, mikroba akan mengubah
energy yang diperoleh menjadi senyawa pembawa energy yaitu ATP yang dapat
dipakai untuk kegiatan sel. Ada 2 kelompok bakteri fototrof yaitu sianobakteri dan
bakteri fotosintetik. Kedua kelompok ini mengubah energy cahaya menjadi ATP
melalui proses fotosintesis. Mikroba khemotrof mengoksidasi senyawa kimia
seperti glukosa atau ammonium, kemudian energy yang dilepaskan diubah menjadi
ATP dalam proses fermentasi atau respirasi.

5
2. Semua jasad hidup memerlukan karbon sebab unsurmkarbon terdapat dalam semua
mikromolekul penyusun sel seperti rotein, karbohidrat, asam nukleat dan lipid.
Berdasarkan sumber karbon, mikroba dapat digolongkan atas jasad heterotrof dan
autotrof. Jasad autotrof bila menggunakan karbondioksida sebagai sumber karbon,
bila jasad tersebut memperoleh energinya dari cahaya disebut fotoautotrof, dan bila
jasad tersebutmemperoleh energinya dengan cara mengoksidasi senyawa kimia
maka disebut kemoautotrof. Jasad heterotrof menggunakan bahan organic sebagai
sumber karbon.
3. Semua jasad hidu memerlukan sulfur (blerang) dan fosfor. Sulfur dipergunakan
untuk membentuk asam amino metionin dan sistein serta koensim. Mikroba
memperoleh sulfur dalam bentuk garam sulfat, H2S, granula sulfur, thiosulfat atau
dalam bentuk bahan organic (sistein dan metionin). Fosfor dipergunakan
membentuk asam nukleat, fosfolipid dan koensim. Mikroba dapat mengambil
fosfor dalam bentuk organic dan anorganik. Garam fosfat adalah yang paling
sering digunakan sebagaisumber fosfat meskiun dapat pula memakai nukleotida.
4. Semua jasad hidup memerlukan nitrogen sebab nitrogen dipergunakan untuk
mensintesis asam amino, nukleotida dan vitamin. Keerluan akan nitrogen dapat
dipenuhi dalam berbagai bentuk seperti protein atau polipeptida, garam nitrat atau
amonium bahkan ada mikroba yang dapat mengambil dalam bentuk N 2 seperti
Rhizobium dan Azotobacter.
5. Semua jasad hidup memerlukan beberapa unsure logam, natrium, kalium, kalsium,
magnesium, mangan, besi, seng, tembaga dan kobalt untuk pertumbuhannya yang
normal. Mineral ini diperlukan untuk aktivitas enzim dan molekul yang lain
misalnya Mg sebagai penyusun klorofil, Co untuk aktivitas enzim nitrogenase, dan
Fe merupakan komponen sitokrom.
6. Semua jasad hidup memerlukan vitamin (senyawa organik yang penting untuk
pertumbuhan). Kebanyakan vitamin berfungsi membentuk substansi yang
mengaktivasi enzim.meskipun semua bakteri membutuhkan vitamin di dalam
proses metaboliknya yang normal, beberapa mampu mensintesis seluruh keperluan
vitaminnya dari senyawa-senyawa lain di dalam medium. Yang lain tidak akan
tumbuh kecuali bila ditambahkan satu atau lebih vitamin ke dalam mediumnya,
seperti Leuconostoc mesentroides tidak mampu mensintesis beberapa asam amino
dan vitamin sehingga harus ditambahkan dalam keadaan jadi ke dalam
mediumnya.

6
 7. Oksigen merupakan unsure yang terdaat dalam molekul hayati seperti asam amino,
nukleotida, gliserida dan molekul lain. Keperluan akan oksigen dipenuhi
bersamaan dangan masuknya nutrient lain sepertirotein dan lipid. Disamping itu,
oksigen dalam bentuk O2 juga diperlukan untuk menjalankan respirasi aerobic.
8. Semua jasad hidu memerlukan air bagi kehiduan karena semua aktivitas
metabolism terjadi dalam lingkungan air. Ketersediaan air yang dapat digunakan
dalam mikroba sering dinyatakan dengan aktivitas aair (Aw). Aktivitas air suatu
bahan dapat dihitung dengan menentukan kelembaban relatifnya (RH). Untuk
bakteri, semua nutrient harus ada dalam bentuk larutan sebelum dapat memasuki
bakteri tersebut.
Untuk berhasilnya kultivasi mikroba diperlukan suatu kombinasi nutrisi serta
lingkungan fisik yang sesuai. Ada beberapa lingkungan fisik yang perlu diperhatikan
dalam menumbuhkan mikroba yaitu temperatur, kadar oksigen, pH, dan tekanan
osmosis.

E. Kondisi fisik atau lingkungan yang mendukung kultivasi

Selain menyediakan nutrisi yang sesuai untuk kultivasi bakteri, juga perlu disediakan
kondisi fisik yang memungkinkan pertumbuhan optimum. Mikroba tidak hanya bervariasi
dalam persyaratan nutrisinya, tetapi menunjukan respon yang berbeda terhadap kondisi
fisik di lingkungannya. Untuk berhasilnya kultivasi mikroba diperlukan suatu kombinasi
nutrisi serta lingkungan fisik yang sesuai. Ada 5 arameter lingkungan yang utama yang
perlu diperhatikan dalam menumbuhkan mikroba yaitu temperature, kelembaban (RH),
kadar oksigen, pH dan osmosis.
 Temperatur
Semua proses pertumbuhan bergantung pada reaksi kimiawi dank arena laju reaksi-
reaksi ini dipengaruhi oleh temperature, maka pola pertumbuhan mikroba sangat
dipengaruhi oleh temperature. Temperature juga mem pengaruhi laju pertumbuhan dan
penambahan jumlah sel. Keragaman suhu dapat juga mengubah proses-proses metabolic
serta morfologi sel. Setiap mikroba tumbuh pada suatu kisaran suhu tertentu. Atas dasar
ini maka mikroba ada yang bersifat psikrofilik yang tumbuh pada 00 dampai 200 C,
mesofilik yang tumbuh pada 200 sampai 450 C dan termofilik yang tumbuh pada
temperature 450 sampai 800 C. Temperature inkubasi yang memungkinkan pertumbuhan
7
tercepat selama periode waktu yang singkat (12 sampai 24 jam) dikenal sebagai
temperature pertumbuhan optimum.
 Kondisi atmosfer seperti kadar oksigen, RH dan tekanan udara
Mikroba memperlihatkan keragaman yang luas dalam hal respons terhadap oksigen
bebas dan atas dasar ini maka mikroba dibagi menjadi empat yaitu aerobik (memerlukan
oksigen), anaerobik (tumbuh tanpa oksigen molekuler), anaerobic fakultatif (tumbuh pada
keadaan aerobic dan anaerobik), dan mikroaerofilik (tumbuh bila ada sedikit oksigen
atmosferik). Beberapa mikroba bersifat anaerobik obligat, bila terkena oksigen akan
terbunuh, oleh karena itu untuk menumbuhkan mikroba anaerobic diperlukan teknik
khusus agar tercapai keadaan anaerob. Keperluan penumbuhan jasad anaerob obligat dapat
dipenuhi dengan menggunakan alat yang disebut anaerobic jar.
 Konsentrasi ion hydrogen (pH)
pH optimum bagi kebanyakan mikroba terletak antara 6.5 sampai 7,5. Bagi
kebanyakan mikroba pH minimum dan maksimum antara 4 sampai 9. Pertumbuhan
mikroba sangat dipengaruhi oleh pH karena nilai pH sangat menentukan aktivitas enzim.
Bila mikoba di kultivasi di dalam suatu medium yang mula-mula pH-nya 7 maka
kemungkinan pH ini akan berubah. Pergeseran pH ini dapat sedemikian besar sehingga
menghambat pertumbuhan. Pergeseran pH dapat dicegah dengan menggunakan larutan
penyangga atau bufer dalam medium. Bufer merupakan senyawa yang dapat menahan
perubahan pH misalnya KH2PO4 dan K2HPO4. Beberapa bahan nutrisi medium seperti
pepton mempunyai kapasitas bufer. Perlu atau tidaknya suatu medium diberi bufer
tergantung kepada maksud penggunaannya dan dibatasi oleh kapasitas bufer yang dimiliki
senyawa-senyawa yang digunakan.
 Tekanan osmosis
Tekanan osmosis adalah besarnya tekanan minimum yang dierlukan untuk
mencegah aliran air yang menyebrangi membrane di dalam larutan. Contohnya : jika
larutan 10 % sukrosa di dalam kantong membrane dialysis diletakkan dalam air dalam
gelas maka molekul air yang ada dalam gelas akan mengalir ke dalam kantong analisis.
Besarnya tekanan yang diperlukan untuk mencegah aliran molekul air dalam gelas ke
dalam kantong dialisis merupakan nilai tekanan osmosis larutan sukrosa tersebut.
Berdasarkan tekanan osmosanya maka larutan tempat pertumbuhan mikroba dapat
digolongkan atas larutan hipotonis, isotonis dan larutan hipertonois. Mikroba biasanya
hidup di lingkungan yang bersifat agak hipotonis sehingga air akan mengalir dari

8
 lingkungannya ke dalam sel sehingga sel menjadi mengembang kaku. Adanya dinding sel
dapat mencegah pecahnya sel mikroba.
F. Jenis-jenis media
1. Media pertumbuhan dan penggunaannya di laboratorium
Untuk menumbuhkan dan mengembangbiakkan mikroba, diperlukan suatu substrat
yang disebut media. Keragaman yang luas dalam hal tipe nutrisi di antara mikroba
diimbangi oleh tersedianya berbagai media yang banyak macamnya untuk kultivasi.
Agar mikroba dapat tumbuh dan berkembang dengan baik di dalam media, diperlukan
persyaratan tertentu,yaitu:
a. Media mengandung semua unsur hara yang diperlukan untuk pertumbuhan dan
perkembangbiakkan mikroba.
b. Media mempunyai tekanan osmosa , dan PH yang sesuai untuk mikroba.
c. Media harus dalam keadaan steril.

Bentuk, susunan, dan sifat media

Bentuk media
Bentuk media ditentukan oleh ada tidaknya penambahan zat pemadat seperti agar,
gelatin. Berdasarkan bentuk dikenal tiga jenis media :
1. Media Padat
Yaitu media berbentuk padat yang mengandung agar 1-1.5%, misalnya nutrien
agar. Kalau ke dalam media ditambahkan agar. Jumlah agar yang ditambahkan
tergantung kepada jenis atau kelompok mikroba yang ditumbuhkan. Ada yang
memerlukan kadar air tinggi sehingga penambahan agar harus sedikit tetapi ada
pula yang memerlukan kandungan air rendah sehingga penambahan agar harus
lebih banyak. Media padat umumnya dipergunakan untuk menumbuhkan bakteri,
jamur, dan kadang-kadang mikroalga terutama dalam peremajaan dan pemeliharaan
kultur murni dalam bentuk agar miring.
2. Media Cair
Yaitu media berbentuk cair yang tidak mengandung agar, misalnya nutrien
broth. Umumnya media cair digunakan untuk menambah biomassa sel . Kalau ke
dalam media tidak ditambahkan zat pemadat. Media cair dipergunakan untuk
penumbuhan bakteri, ragi dan mikroalga.
3. Media Semi Padat

9
 Yaitu media yang berbentuk padat pada suhu dingin, dan berbentuk cir bila
suhu panas, misalnya media SIM (media yang digunakan untuk uji produksi sulfur,
indol, motilitas). Kalau penambahan zat pemadat hanya setengah atau kurang dari
seharusnya. Ini umumnya diperlukan untuk pertumbuhan mikroba yang banyak
memerlukan kandungan air dan hidup anaerobic atau fakultatif untuk menambah
biomassa sel.

Susunan media
Media dapat berbentuk :
1. Media alami yaitu media yang disusun oleh bahan-bahan alami seperti kentang,
telur, daging. Pada saat ini media alami yang banyak digunakan adalah dalam
bentuk kultur jaringan tanaman atau hewan. Contoh penggunaan media alami
adalah telur yang digunakan untuk pertumbuhan dan perkembangbiakan virus.
2. Media sintetik yaitu media yang disusun oleh senyawa kimia. Misalnya media
untuk pertumbuhan dan perkembangbiakkan Clostridium.
3. Media semi sintetis yaitu media yang tersusun oleh campuran bahan-bahan alami
dan bahan-bahan sintesis. Misalnya kaldu nutrisi, wortel agar.

Sifat media
Penggunaan media bukan hanya untuk pertumbuhan dan perkembangbiakkan
mikroba tetapi juga untuk tujuan isolasi, seleksi, evaluasi, dan diferensiasi. Sehingga tiap
media mempunyai spesifikasi sesuai dengan maksudnya. Berdasarkan sifatnya, media
dibedakan menjadi :
1. Media umum : media yang dipergunakan untuk pertumbuhan dan perkembangbiakkan
satu atau lebih kelompok mikroba secara umum misalnya : agar kaldu nutrisi untuk
bakteri, agar kentang dekstrosa untuk jamur.
2. Media pengaya : media dimana suatu jenis mikroba diberi kesempatan untuk tumbuh
dan berkembang lebih cepat dari jenis lainnya yang sama-sama berada di dalam satu
media. Misalnya : kaldu selenit atau kaldu tetrationat untuk memisahkan Salmonella
typhi dari mikroba lain yang ada dalam feses.
3. Media selektif : media yang hanya dapat ditumbuhi oleh satu atau lebih jenis mikroba
tertentu tetapi akan menghambat atau mematikan jenis-jenis lainnya. Misalnya : media
SS ( Salmonella-Shigella ) agar untuk menumbuhkan Salmonella dan Shigella.

10
4. Media diferensial : media yang dipergunakan untuk penumbuhan mikroba tertentu serta
penentuan sifat-sifatnya seperti media agar darah untuk penumbuhan bakteri hemolitik.
5. Media Penguji : media yang dipergunakan untuk pengujian senyawa tertentu dengan
bantuan mikroba. Misalnya media penguji vitamin, antibiotika, residu pestisida.
Secara kebetulan seorang peneliti Jerman melihat bahwa koloni yang tumbuh
pada kentang yang telah direbus pada akhirnya dapat menemukan jalan untuk memisah
menjadi individu-individu. Caranya; mereka mengembangkan media spesifik untuk
menumbuhkan mikroorganisme. Media adalah substansi yang memenuhi kebutuhan
nutrisi mikroorganisme. Koch dan koleganyanya juga menunjukkan bahwa senyawa
dari alga yang disebut agar dapat membuat media menjadi padat. Richard J.Petri (1852 –
1921) membuat piringan kaca bertutup untuk menempatkan media agar alat tersebut
selanjutnya disebut Petri dish yang masih digunakan sampai sekarang. Pada tahun 1892,
dengan menggunakan teknik biakan murni Koch dan anggotanya menemukan agen-agen
penyebab typus, dipteri,tetanus, pneumonia dan lain sebagainya. Koch mengenalkan
penggunaan binatang model untuk penyakit manusia dengan cara menginjeksikan
bakteri ke dalam mencit,kelinci, babi atau domba. Ia bahkan menempelkan kamera pada
mikroskopnya untuk mengambil gambar dan menggunakannya sebagai bukti untuk
menghilangkan keraguan. Membiakkan bakteri dapat dilakukan dengan berbagi cara,
salah satunya pengembangbiakan dalam media cawan petri. Pengembangbiakan dalam
cawan ini ada beberapa metode, yaitu :
1. Metode cawan gores (streak plate)
Metode cawan gores cukup sulit bagi pemula, kesulitan dari metode ini,
yaitu proses penggoresan yang cukup lama dan sulit, sehingga memudahkan
terjadinya kontaminasi dan kegagalan. Prinsip metode ini, yaitu mendapatkan
koloni yang benar-benar terpisah dari koloni yang lain, sehingga mempermudah
proses isolasi.
2. Metode cawan tuang (pour plate)
Metode cawan tuang sangat mudah dilakukan. Metode ini dilakukan dengan
mengencerkan sumber isolat yang telah diketahui beratnya ke dalam 9 ml garam
fisiologis (NaCl 0.85%) atau larutan buffer fosfat. Larutan ini berperan sebagi
penyangga pH agar sel bakteri tidak rusak akibat menurunnya pH lingkungan. Sekitar
1 ml suspensi dituang ke dalam cawan petri steril, dilanjutkan dengan menuangkan
media penyubur (nutrien agar) steril hangat (40-50oC) kemudian ditutup rapat dan
diletakkan dalam inkubator (37oC) selama 1-2 hari.

11
 3. Metode cawan sebar (spread plate)
Metode ini cukup sulit terutama saat meratakan suspensi dengan batang
drygalski. Alih-alih koloni tumbuh merata, biakan justru terkontaminasi. Oleh karena
itu, batang drygalski harus benar-benar steril, yaitu dengan mencelupkannya terlebih
dahulu dalam alkohol kemudian dipanaskan dengan api bunsen. Perlu diingat, batang
drygalski, yang masih panas akibat pemanasan dengan api bunsen, dapat merusak
media agar, sehingga harus didinginkan terlebih dahulu dengan meletakkannya di
sekitar api bunsen (±15 cm) dengan metode ini, satu sel bakteri akan tumbuh dan
berkembang menjadi satu koloni bakteri.

G. Cara Reproduksi Bakteri

Bakteri dapat melakukan reproduksi dengan dua cara yakni reproduksi secara
aseksual dan reproduksi secara seksual. Reproduksi bakteri secara seksual dibagi menjadi
tiga jenis yaitu, reproduksi dengan transformasi, reproduksi dengan transduksi, dan
reproduksi dengan konjugasi. Berikut uraian lengkap mengenai macam-macam
reproduksi bakteri.

1. Reproduksi aseksual
Yang termasuk di dalam reproduksi secara aseksual ini adalah pembelahan,
pembentukan tunas/ cabang, dan pembentukan filamen.
 Pembelahan
Pada umumnya bakteri berkembang biak dengan pembelahan biner, artinya
pembelahan terjadi secara langsung, dari satu sel membelah menjadi dua sel anakan.
Masing-masing sel anakan akan membentuk dua sel anakan lagi, demikian seterusnya.
Proses pembelahan biner diawali dengan proses replikasi DNA menjadi dua DNA
identik, diikuti pembelahan sitoplasma dan akhirnya terbentuk dinding pemisah di
antara kedua sel anak bakteri. Perhatikan gambar skematik pembelahan biner sel
bakteri dibawah!

12
 Skema pembelahan biner pada Streptococcus faecalis

 Pembentukan tunas atau cabang

Bakteri membentuk tunas yang akan melepaskan diri dan membentuk bakteri
baru. Reproduksi dengan pembentukan cabang didahului dengan pembentukan tunas
yang tumbuh menjadi cabang dan akhirnya melepaskan diri. Dapat dijumpai pada
bakteri family Streptomycetaceae.
 Pembentukan Filamen
Pada pembentukan filament, sel mengeluarkan serabut panjang sebagai
filament yang tidak bercabang. Bahan kromosom kemudian masuk ke dalam filament,
kemudian filament terputus-putus menjadi beberapa bagian. Tiap bagian membentuk
bakteri baru. Dijumpai terutama dalam keadaan abnormal, misalnya bila bakteri
Haemophilus influenza dibiakan pada pembenihan yang basah.

2. Reproduksi Seksual
Bakteri berbeda dengan eukariota dalam hal cara penggabungan DNA yang datang
dari dua individu ke dalam satu sel. Pada eukariota, proses seksual secara meiosis dan
fertilisasi mengkombinasi DNA dari dua individu ke dalam satu zigot. Akan tetapi, jenis
kelamin yang ada pada ekuariota tidak terdapat pada prokariota. Meiosis dan fertilisasi
tidak terjadi, sebaliknya ada proses lain yang akan mengumpulkan DNA bakteri yang
13
datang dari individu-individu yang berbeda. Proses-proses ini adalah pembelahan
transformasi, transduksi dan konjugasi.

 Transformasi
Dalam konteks genetika bakteri, transformasi merupakan perubahan suatu genotipe sel
bakteri dengan cara mengambil DNA asing dari lingkungan sekitarnya. Misalnya, pada
bakteri Streptococcus pneumoniae yang tidak berbahaya dapat ditransformasi menjadi
sel-sel penyebab pneumonia dengan cara mengambil DNA dari medium yang
mengandung sel-sel strain patogenik yang mati. Transformasi ini terjadi ketika sel
nonpatogenik hidup mengambil potongan DNA yang kebetulan mengandung alel
untuk patogenisitas (gen untuk suatu lapisan sel yang melindungi bakteri dari sistem
imun inang) alel asing tersebut kemudian dimasukkan ke dalam kromosom bakteri
menggantikan alel aslinya untuk kondisi tanpa pelapis. Proses ini merupakan
rekombinasi genetik – perputaran segmen DNA dengan cara pindah silang (crossing
over). Sel yang ditransformasi ini sekarang memiliki satu kromosom yang
mengandung DNA, yang berasal dari dua sel yang berbeda.

Reproduksi bakteri dengan jalan transformasi

Bertahun-tahun setelah transformasi ditemukan pada kultur laboratorium, sebagian
besar ahli biologi percaya bahwa proses tersebut terlalu jarang dan terlalu kebetulan,
sehingga tidak mungkin memainkan peranan penting pada populasi bakteri di alam.
Tetapi, para saintis sejak saat itu telah mempelajari bahwa banyak spesies bakteri
dipermukaannya memiliki protein yang terspesialisasi untuk mengambil DNA dari
larutan sekitarnya. Protein-protein ini secara spesifik hanya mengenali dan
mentransfer DNA dari spesies bakteri yang masih dekat kekerabatannya. Tidak semua
bakteri memiliki protein membran seperti ini. Seperti contohnya, E. Coli sepertinya
sama sekali tidak memiliki mekanisme yang tersepesialisasi untuk menelan DNA
asing. Walaupun demikian, menempatkan E. Coli di dalam medium kultur yang
mengandung konsentrasi ion kalsium yang relatif tinggi secara artifisial akan

14
 merangsang sel-sel untuk menelan sebagian kecil DNA. Dalam bioteknologi, teknik
ini diaplikasikan untuk memasukkan gen gen asing ke dalam E. Coli, gen-gen yang
mengkode protein yang bermanfaat, seperti insulin manusia dan hormon
pertumbuhan.
 Transduksi
Pada proses transfer DNA yang disebut transduksi, faga membawa gen bakteri dari
satu sel inang ke sel inang lainnya. Ada dua bentuk transduksi yaitu transduksi umum
dan transduksi khusus. Keduanya dihasilkan dari penyimpangan pada siklus
reproduktif faga.

Reproduksi bakteri dengan jalan transduksi

Diakhir siklus litik faga, molekul asam nukleat virus dibungkus di dalam
kapsid, dan faga lengkapnya dilepaskan ketika sel inang lisis. Kadangkala sebagian
kecil dari DNA sel inang yang terdegradasi menggantikan genom faga. Virus seperti
ini cacat karena tidak memiliki materi genetik sendiri. Walaupun demikian, setelah
pelepasannya dari inang yang lisis, faga dapat menempel pada bakteri lain dan
menginjeksikan bagian DNA bakteri yang didapatkan dari sel pertama. Beberapa
DNA ini kemudian dapat menggantikan daerah homolog dari kromosom sel kedua.
Kromosom sel ini sekarang memiliki kombinasi DNA yang berasal dari dua sel
sehingga rekombinasi genetik telah terjadi. Jenis transduksi ini disebut dengan
transduksi umum karena gen-gen bakteri ditransfer secara acak. Untuk transduksi
khusus memerlukan infeksi oleh faga temperat, dalam siklus lisogenik genom faga
temperat terintegrasi sebagai profaga ke dalam kromosom bakteri inang, di suatu
tempat yang spesifik. Kemudian ketika genom faga dipisahkan dari kromosom,
genom faga ini membawa serta bagian kecil dari DNA bakteri yang berdampingan

15
 dengan profaga. Ketika suatu virus yang membawa DNA bakteri seperti ini
menginfeksi sel inang lain, gen-gen bakteri ikut terinjeksi bersama-sama dengan
genom faga. Transduksi khusus hanya mentransfer gen-gen tertentu saja, yaitu gen-
gen yang berada di dekat tempat profaga pada kromosom tersebut.
 Konjugasi dan Plasmid
Konjugasi merupakan transfer langsung materi genetik antara dua sel bakteri
yang berhubungan sementara. Proses ini, telah diteliti secara tuntas pada E. Coli.
Transfer DNA adalah transfer satu arah, yaitu satu sel mendonasi (menyumbang)
DNA, dan “pasangannya” menerima gen. Donor DNA, disebut sebagai “jantan”,
menggunakan alat yang disebut pili seks untuk menempel pada resipien (penerima)
DNA dan disebut sebagai “betina”. Kemudian sebuah jembatan sitoplasmik sementara
akan terbentuk diantara kedua sel tersebut, menyediakan jalan untuk transfer DNA.
Plasmid adalah molekul DNA kecil, sirkular dan dapat bereplikasi sendiri,
yang terpisah dari kromosom bakteri. Plasmid-plasmid tertentu, seperti plasmid f,
dapat melakukan penggabungan reversibel ke dalam kromosom sel. Genom faga
bereplikasi secara terpisah di dalam sitoplasma selama siklus litik, dan sebagai bagian
integral dari kromosom inang selama siklus lisogenik. Plasmid hanya memiliki sedikit
gen, dan gen-gen ini tidak diperlukan untuk pertahanan hidup dan reproduksi bakteri
pada kondisi normal. Walaupun demikian, gen gen dari plasmid ini dapat memberikan
keuntungan bagi bakteri yang hidup di lingkungan yang banyak tekanan. Contohnya,
plasmid f mempermudah rekombinasi genetik, yang mungkin akan menguntungkan
bila perubahan lingkungan tidak lagi mendukung strain yang ada di dalam populasi
bakteri. Plasmid f , terdiri dari sekitar 25 gen, sebagian besar diperlukan untuk
memproduksi piliseks. Ahli-ahli genetika menggunakan simbol f+ (dapat diwariskan).
Plasmid f bereplikasi secara sinkron dengan DNA kromosom, dan pembelahan satu sel
f+ biasanya menghasilkan dua keturunan yang semuanya merupakan f+. Sel-sel yang
tidak memiliki faktor f diberi simbol f-, dan mereka berfungsi sebagai recipien DNA
(“betina”) selama konjugasi. Kondisi f+ adalah kondisi yang “menular” dalam artian
sel f+ dapat memindah sel f- menjadi sel f+ ketika kedua sel tersebut berkonjugasi.
Plasmid f bereplikasi di dalam sel “jantan”, dan sebuah salinannya ditransfer ke sel
“betina” melalui saluran konjugasi yang menghubungkan sel-sel tersebut. Pada
perkawinan f+ dengan f- seperti ini, hanya sebuah plasmid f yang ditransfer. Gen-gen
dari kromosom bakteri tersebut ditransfer selama konjugasi ketika faktor f dari donor
sel tersebut terintegrasi ke dalam kromosomnya. Sel yang dilengkapi dengan faktor f
16
 dalam kromosomnya disebut sel Hfr ( high frequency of recombination atau
rekombinasi frekuensi tinggi). Sel Hfr tetap berfungsi sebagai jantan selama konjugasi,
mereplikasi DNA faktor f dan mentransfer salinannya ke f- pasangannya. Tetapi
sekarang, faktor f ini mengambil salinan dari beberapa DNA kromosom bersamanya.
Gerakan acak bakteri biasanya mengganggu konjugasi sebelum salinan dari
kromosom Hfr dapat seluruhnya dipindahkan ke sel f-. Untuk sementara waktu sel
resipien menjadi diploid parsial atau sebagian, mengandung kromosomnya sendiri
ditambah dengan DNA yang disalin dari sebagian kromosom donor. Rekombinasi
dapat terjadi jika sebagian DNA yang baru diperoleh ini terletak berdampingan dengan
daerah homolog dari kromosom F-, segmen DNA dapat dipertukarkan. Pembelahan
biner pada sel ini dapat menghasilkan sebuah koloni bakteri rekombinan dengan gen-
gen yang berasal dari dua sel yang berbeda, dimana satu dari strain-strain bakteri
tersebut sebenarnya merupakan Hfr dan yang lainnya adalah F.

H. Kurva pertumbuhan Bakteri

Secara umum, tumbuh atau pertumbuhan suatu jasad diartikan sebagai penambahan
massa ukuran, maupun jumlah sel jasad. Secara singkat hubungan antara pertumbuhan
dan perbanyakan sel sebagai berikut:

1. Pertumbuhan dengan pembelahan atau budding yang menghasilkan perbanyakan

jasad, seperti halnya terjadi pad bakteri dan ragi
2. Pembelahan yang menyebabkan adanya pertumbuhan, tetapi tidak
menghasilkan perbanyakan jasad ini terjadi pada jasad tingkat tinggi.
3. Pertumbuhan yang memanjang, tetapi tidak menghasilkan perbanyakan jasad.
Ini terjadi pada jamur dengan tipe filament coenocitik (phikomycetes).
4. Pertumbuhan yang memanjang dengan pembentukan sekat (septa) dan fragmentasi,
yang menghasilkan perbanyakan jasad. Ini terjadi pada jamur yang mempunyai tipe
filament bersepta.

Fase pertumbuhan mikroba

Jika sejumlah sel mikroba (contohnya:Bakteri) ditanam kembali kedalam suatu medium baru,
maka sel-sel bakteri tersebut tidak akan segera membelah diri. Bila pada waktu-waktu
tertentu jumlah populasi bakteri tersebut tidak akan segera membelah diri.

17
Bila pada waktu-waktu tertentu jumlah populasi bakteri tersebut dihitung dan hasilnya di plot
dalam grafik hubungan antara jumlah sel dengan waktu generasi (waktu yang
dibutuhkan sampai populasi selnya menjadi dua kali lipat) yang sangat pendek, lazimnya
jumlah populasi selnya dinyatakan dalam logaritma jumlah. Dari profil garis grafik
pertumbuhan sel bakteri tersebut, dapat dikenal fase-fase pertumbuhan populasi sel bakteri
tersebut (gambar 16)

Ilustrasi pertumbuhan mikroorganisme

KURVA PERTUMBUHAN MIKROORGANISME

Kurva yang menunjukkan logaritma dari kerapatan populasi sel. Titik vertikal menunjukkan
batas-batas setiap fase pertumbuhan: 1. Fase permulaan; 2. Fase pertumbuhan di percepat; 3.

18
Fase logaritma; 4. Fase pertumbuhan mulai terhambat; 5. fase stationer maksimum; 6.fase
kematian dipercepat; dan 7. fase kematian logaritma.

Fase pertama yaitu Fase permulaan:

Dikenal pula dengan initial phase atau lag phase atau laten phase. Dalam fase ini bakteri
belum mengadakan perbanyakan sel, bahkan sebagian sel bakteri mati, hingga hanya sel yang
kuat saja yang bertahan hidup. Ukuran sel membesar yang disebabkan oleh adanya
pemasukan air imbibisi ke dalam sel. Secara teoritis, keadaan laten atau lag dari populasi
bakteri ini diakibatkan oleh pasokan metabolit yang tidak mencukupi, atau oleh tidak
aktifnya suatu enzim hingga keseluruhan metabolisme terhambat. Ini disebabkan oleh
keberadaan sel bakteri dalam lingkungan baru sehingga sel harus menyesuaikan diri dalam
lingkungan yang baru tersebut.

Disamping itu, secara khusus ada dua peristiwa lain yang memungkinkan terjadinya fase ini,
yaitu:

1. Fase lag yang terjadi karena pembentukan enzim induktif

2. Fase lag yang terjadi karena germinasi spora

Fase kedua Fase Pertumbuhan

Fase pertumbuhan yang dipercepat (Accelarated Growth Phase) Selama fase ini, sel bakteri
belum memperbanyak diri. Kecepatan pertumbuhan makin lama makin meningkat, seperti
terlihat pada gambar 21.

Bila kecepatan pertumbuhan diberikan dalam term waktu generasi (doubling time, td, yaitu
waktu yang dibutuhkan populasi sel untuk melipatkan jumlahnya menjadi dua kali lipat,
maka waktu generasinya makin lama makin pendek). Sedangkan kecepatan pertumbuhan
dinyatakan dalam kecepatan tumbuhnya makin lama x dt tinggi. Secara individual makin
lama ukuran sel makin mendekati maksimum. Ini disebabkan oleh adanya kemasukan air
imbibisi dan adanya permulaan aktivitas metabolisme.

19
Fase Ketiga Fase Logaritma

Fase logaritma (Logaritmic phase atau exponensial phase) Selama fase ini kecepatan
pertumbuhan populasi sel berjalan maksimum dan konstan seperti terlihat pada gambar
sinstesis bio massa, sangat tepat bila digambarkan dengan term logaritma, apabila kecepatan
sintesisnya dinyatakan dengan kecepatan pertumbuhan spesifik, μ seperti dinyatakan diatas.

X= XoOμt

X dan Xo adalah konsentrasi sel (g/l) pada waktu 0 dan t jam nilai μ sangat tergantung pada
spesies dan strain mikroba, serta kondisi lingkungan kultur mikroba tersebut. Dalam kondisi
kultur yang optimum, sel mikroba mengalami kecepatan reaksi metabolisme yang
maksimum. Ditinjau dari sel bakteri secara individual, ukuran sel justru pada waktu ukuran
yang minimum, dengan ketebalan dinding sel yang minimum. Ini disebabkan oleh sangat
aktifnya sel membelah diri. hingga sintesis makromolekul dari komponen sel pun berlomba
dengan waktu.

Bila populasi sel yang sedang mengalami fase ini dipindahkan ke dalam medium baru,
dengan komposisi nutrient yang sama dengan kondisi lingkungan yang sama, maka dalam
medium baru populasi ini akan langsung mengalami fase logaritma. Jadi tidak mengawali
pertumbuhan dengan fase permulaan dan fase pertumbuhan dipercepat.

Fase Keempat Fase pertumbuhan terhambat

Fase Pertumbuhan yang mulai terhambat (Phase of negative accelerated growth) Dimulai dari
awal fase ini, kecepatan pertumbuhan makin lama makin menurun.

Penghambatan pertumbuhan diakibatkan oleh berbagai sebab. DAlam banyak hal. penurunan
kecepatan pertumbuhan ini diakibatkan oleh kehabisan nutrisi. Tetapi sering terjadi walaupun
pasokan nutrisi diberikan dengan cukup, penurunan kecepatan pertumbuhan tetap berjalan.

Umumnya ini disebabkan oleh akumulasi substansi toksik hasil metabolisme sel
yang menghambat dapat menghambat pertumbuhan sel. Substansi ini memungkinkan pula
menyebabkan represi terhadap kerja sistem sintesis enzim, yang mengakibatkan terhentinya
transkripsi kode genetik dari gen tertentu hingga pembentukan enzim baru terhenti sama
sekali. Selanjutnya perubahan kondisi lingkungan, seperti perubahan pil yang tajam

20
sebagai akibat metabolisme sel, dapat mengakibatkan penghambatan terhadap pertumbuhan
sel.

Fase stasioner

Selama fase ini kecepatan pertumbuhan adalah nol. Walaupun demikian, tidak berarti tidak
terjadi pertumbuhan sel. Jumlah pembentukan sel baru sebagai hasil reproduksi, seimbang
dengan jumlah sel yang mati selama fase ini.

Oleh karena itu, ekspresi dalam grafik linear dan sejajar selama fase ini, menggunakan
cadangan makanan yang ada di dalam protoplasma sebagai building blocks pembangun sel
yang baru.

Fase kematian dipercepat dan fase kematian logaritma

Kedua fase ini biasanya dijadikan satu menjadi fase yang menurun (phase of decline). Selama
fase ini jumlah sel yang hidup makin lama makin menurun, sedangkan jumlah kematian sel
makin banyak. Kematian ini, disebabkan oleh kondisi lingkungan yang makin memburuk,
terutama sekali oleh makin banyaknya akumulasi hasil metabolisme yang toksik terhadap sel.
Lamanya fase ini tergantung pada kondisi lingkungannya sendiri.

21
 BAB III
A. KESIMPULAN
Reproduksi berarti ‘perkembangbiakan bakteri’. Bakteri dapat berkembang
biak dengan cara membelah diri. Perkembangbiakan bakteri dilakukan dengan dua
cara, yaitu secara aseksual dan seksual. Pembiakan secara aseksual dilakukan dengan
pembelahan, yaitu dengan pembelahan biner, sedangkan pembiakan secara seksual
yang dilakukan bakteri tidak merupakan pembiakan yang sebernarnya, seperti yang
terjadi pada makhuk hidup eukariot. Hal ini karena pada bakteri tidak terjadi
penyatuan sel kelamin. Perkembangbiakan paraseksual yang dapat terjadi pada bakteri
yaitu dengan cara transformasi, transduksi , dan konjugasi.
Kultivasi merupakan metode untuk melipatgandakan jumlah mikroba dengan
membiarkan mereka berkembang biak dalam media biakan yang telah disiapkan di
bawah kondisi laboratorium terkendali. Kultivasi bakteri memerlukan nutrisi dan
media untuk pembentukan bakteri.

B. SARAN
Untuk lebih memperkaya pengetahuan, ada baiknya diperbanyak referensi
mengenai kultivasi dan reproduksi bakteri ini.

22
 DAFTAR PUSTAKA

http://matakuliahbiologi.blogspot.co.id/2012/04/kultivasi-mikroba.html

https://artikelbermutu.com/2014/04/kurva-pertumbuhan-mikroorganisme.html

http://www.ujangarisman.com/2017/01/makalah-tentang-reproduksi-bakteri.html

23