 Penggunaan Klinis Vektor-Nonvirus

Tidak dimungkinkan, dengan teknologi nonvirus saat ini, untuk mencocokkan efisiensi
transduksi yang tinggi dan tingkat ekspresi yang tinggi terapi gen nonviral dapat memberikan
cara untuk mencapai ekspresi jangka pendek dari produk gen terapeutik di jaringan tertentu
dengan tingkat keamanan yang tinggi.

untuk menilai kemurnian persiapan DNA plasmid akhir, keamanan, dan potensi terapi gen
dan aplikasi vaksin DNA tercantum pada berikut:

Saat ini ada 333 uji klinis menggunakan DNA plasmid untuk mengobati sejumlah penyakit

Banyak uji coba ini masih dalam tahap I pengujian sejauh ini yang secara kolektif,
memberikan "prinsip pembuktian" .
 Juga harus disebutkan bahwa sebagian besar uji coba ini tidak terkontrol, label terbuka,
terutama fase I untuk menyelidiki keselamatan dan kelayakan.Hasil efikasi dari studi ini harus
ditafsirkan dengan hati-hati dan hanya dapat dinilai dengan melakukan uji coba fase II / III lebih
lanjut.

TERAPI GEN BERBASIS STEM-CELL

Terapi gen berbasis stem-cell muncul dalam terapi sel dan terapi gen. Terapi sel
menggambarkan proses memasukkan sel-sel baru ke dalam jaringan untuk mendorong
terobosan regeneratif dalam kedokteran.

Terapi gen berbasis sel punca adalah proses multistep, dimulai dengan isolasi sel punca
dari pasien.Akhirnya, sel-sel induk yang ditransfusikan diinfuskan kembali ke pasien untuk
mengobati penyakit tertentu.

TERAPI STEM-CELL

Sel induk ada di semua organisme multisel dan berbagi dua sifat karakteristik.Sel induk
paling awal dalam kehidupan manusia adalah embryonic stem cells (ESC), yang berasal dari
massa sel blastocyst dan mampu berdiferensiasi menjadi turunan tiga lapisan utama: ektoderm,
endoderm, dan mesoderm.

Selain ESC, ada jenis sel punca lain di jaringan dewasa mamalia yang dapat diisolasi dari
yaitu, sel punca dewasa. Sel induk dewasa memiliki kapasitas pembaruan diri dan potensi
diferensiasi yang lebih terbatas.Sel punca dewasa yang paling terkenal adalah hematopoietic
stem cells (HSCs) sumsum tulang,Sumsum tulang juga mengandung sel punca dewasa yang
bernama mesenchymal stem cells (MSC).

Di antara semua jenis sel induk, MSC telah menarik perhatian khusus karena penerapannya
yang luas dalam regeneratif bidang kedokteran.MSC kurang potensial untuk menginduksi
teratoma atau transformasi ganas lainnya karena mereka hanya memiliki potensi diferensiasi
terbatas.

Dibandingkan dengan sel punca dewasa lainnya seperti HSC, sel punca mammae, atau sel
punca saraf, MSC memiliki efek trofik dan sifat imunomodulator yang dikarakterisasi dengan
baik, sehinggs, menjadikannya kandidat yang baik dalam mengobati penyakit degeneratif. MSC
primer atau MSC yang dimodifikasi secara genetik juga telah digunakan dalam regenerasi
hematosit, tendon, sumsum tulang, otot, dan jaringan ikat lainnya.
 Ada dua arah utama terapi gen berbasis sel induk:

(1) sel induk digunakan sebagai vehicles pengiriman

(2) sel punca diprogram ulang dengan modifikasi genetik
STEM CELL SEBAGAI VEHICLES PENGIRIMAN GEN
Kemajuan dalam terapi gen dalam dua dekade terakhir memiliki dampak besar
bagaimana sel induk dapat digunakan untuk mengobati penyakit tertentu. Sejak kasus terapi
gen pertama yaitu gen ADA, beberapa kelompok memiliki tujuan untuk memperbaiki defisiensi
ADA secara permanen.
Meskipun hasil keseluruhan mengecewakan, ekspresi transgen dalam sel progenitor
hematopoietik mampu memberikan kelangsungan hidup, pertumbuhan, dan diferensiasi
keturunan limfosit.
Terapi gen berbasis sel punca juga menunjukkan hasil yang menjanjikan dalam uji klinis
X SCID pada tahun 1999.
Pada empat dari lima pasien, infus sel CD34+ yang ditransduksi menyebabkan generasi
sel T transduksi periferal. Terapi gen tradisional berfokus pada pengenalan materi genetik
dalam sel dewasa untuk mengobati penyakit genetik bawaan, sedangkan terapi gen berbasis
sel punca dapat mewakili pengobatan permanen untuk penyakit genetik.
Studi praklinis baru-baru ini menunjukkan masa depan yang menjanjikan untuk
menggunakan sel induk yang dimodifikasi secara genetic tidak hanya membalikkan
ketidakmampuan MSC primer tetapi juga memberikan MSC fungsi baru untuk menargetkan
berbagai penyakit.
STEM CELL SEBAGAI OBAT REGENERATIF
Sel induk dapat diprogram ulang atau ditransdiferensiasikan dengan modifikasi
genetik untuk mengisi sel atau jaringan yang rusak.Vektor virus secara efisien mentransduksi
sel punca dan mengarahkan diferensiasinya.
Peng dan rekan kerja menunjukkan bahwa sel-sel punca otot yang secara
genetik direkayasa dengan retrovirus untuk mengekspresikan tulang-morfogenetik protein-4
(BMP4) dan VEGF mempromosikan pembentukan tulang dan penyembuhan tulang dalam
model tikus.
Hal ini lebih lanjut didukung oleh temuan Tsuda dan rekan kerja bahwa MSC
yang direkayasa secara genetik dengan adenovirus untuk mengekspresi protein morfogenetik
tulang, meningkatkan pembentukan tulang ektopik pada tikus.
 Studi praklinis lainnya menunjukkan bahwa sel punca dapat melakukan
transdiferensiasi menjadi berbagai jenis sel melalui modifikasi genetik menggunakan vektor
virus atau nonviral.
Karnieli dan Li melaporkan pembalikan hiperglikemia pada tikus diabetes yang
diinduksi streptozotocin setelah transplantasi sel penghasil insulin dari Pdx-1 yang dimodifikasi
secara genetik mengekspresikan MSC.
Vektor virus adalah alat yang paling populer untuk mengarahkan diferensiasi sel
induk dalam pengobatan regeneratif. Namun, karena risiko mutagenesis insersi dan generasi
virus yang kompeten replikasi, vektor nonviral juga dipelajari dalam terapi gen berbasis
stemcell.
Corsi et al., menjelaskan cara mentransfeksi MSC menggunakan nanopartikel
kitosan-DNA dan memperkenalkan sistem ekspresi transgen nonviral untuk memprogram ulang
sel somatik ke iPSC.
Sumber sel punca adalah masalah lain untuk terapi gen berbasis sel punca.
iPSC yang diinduksi dari sel somatik menawarkan alternatif potensial untuk ESC dan sel induk
dewasa lainnya yang pasokannya terbatas saat ini.
Perlu dicatat bahwa sebagian besar terapi gen berbasis sel induk, terutama yang
menggunakan retrovirus/lentivirus sebagai vektor pengiriman gen, tidak menyediakan
mekanisme.
Sistem yang dapat diinduksi dapat ditambahkan ke struktur vektor untuk
mencapai kontrol temporal dan spasial dari ekspresi transgen.Untuk membersihkan kelebihan
sel punca ketika jaringan yang rusak sembuh sepenuhnya, dapat dilakukan dengan rekayasa
secara genetika untuk mengekspresikan gen "bunuh diri" secara in vivo dengan pemberian obat
gansiklovir yang disetujui FDA.
SASARAN PENYAKIT BAGI TERAPI GEN

Saat ini ada 1786 uji klinis terapi gen aktif di seluruh dunia.Pengobatan penyakit neurologis,
yang telah berkembang sangat cepat dalam 5 tahun terakhir, adalah tujuan dari 2% uji klinis
aktif.
Distribusi geografis uji klinis terapi gen dirangkum dalam Gambar 24.11

Indikasi umum untuk semua uji coba terapi gen di klinik dirangkum dalam Tabel 24.4.