Disediakan 7 tabung kultur berisi medium nutrien cair, lalu diberi kode A1, A2, A3,
A4, A5, A6, dan A7.
Diinokulasikan 1 ose bakteri E. Coli yang tersedia ke dalam medim NC, lalu
diikubasikan pada suhu 37°C selama 1x24 jam.
Disediakan 2 buah medium lempeng NA, lalu dibuat garis dengan menggunakan
spidol pada bagian luar dari dasar cawan petri sehingga membentuk 4 kuadran.
Diberi kode A1, A2, A3, dan A4 pada keempat kuadran dari cawan 1, serta kode A5,
A6, A7, dan K pada kuadran dari cawan 2.
Dipanaskan 7 tabung kultur yang berisi medium cair dengan menggunakan watter
bath. Tabung A1, dipanaskan sampai suhu 40°C, tabung A2 sampai suhu 50°C,
tabung A3 sampai suhu 60°C, tabung A4 sampai suhu 70°C, tabung A5 sampai suhu
80°C, tabung A6 sampai suhu 90°C, tabung A7 sampai suhu 100°C. pemanasan
dilakukan selama 10 menit.
Diletakkan tabung-tabung kultur tersebut pada rak tabung dan dibiarkan pada suhu
ruang.
Diinkubasian biakan bakteri pada medium lempeng NA tersebtu pada suhu 37°C
selama 1x24 jam.
Diamati pertumbuhan bakteri pada tiap kuadran. Diatat ada atau tidak adanya
pertumbuhan bakteri.