TUGAS METEODOLOGI PENELITIAN

RESUME JURNAL

OLEH

NAMA : AMELIANUS ANDIANO SARENG

NIM : 19018058
KELAS : TRANSFER B 2019

PROGRAM STUDI S-1 FARMASI

SEKOLAH TINGGI ILMU FARMASI MAKASSAR
MAKASSAR

2020
 Aktivitas antikanker 23,24-dihydrocucurbitacin B terhadap garis sel
serviks manusia HeLa disebabkan untuk apoptosis dan penangkapan
siklus sel G2 / M

Cucurbitacins adalah metabolit tumbuhan sekunder yang dikategorikan

secara kimiawi sebagai steroid. Cucurbitacin biasanya ada sebagai glikosida
dan membantu tanaman untuk mencegah predator (1). Telah dilaporkan
bahwa cucurbitacins menunjukkan aktivitas antikanker terhadap berbagai
jenis kanker (2-4); Namun, aktivitas antitumor 23,24-cucurbitacin B terhadap
sel kanker serviks masih belum jelas. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan
untuk menyelidiki efek antikanker dari 23,24-dihydrocucurbitacin B terhadap
garis sel kanker serviks HeLa manusia. Kanker serviks adalah kanker ketiga
yang paling sering didiagnosis pada wanita di seluruh dunia.
Kanker serviks merupakan penyakit utama kematian diseluruh dunia.
Pada jurnal ini yang dianalisis adalah cucurbitacins 23,24-
dihydeocucurbitacin B pada sel kanker serviks pada manusia, dimana
cucurbitacins ini merupakan metabolit sekunder yang berfungsi sebagai
steroid yang telah menunjukan aktivitas sebagai antikanker dan 23,24
dihydeocucurbitacin B memiliki mekanisme aksi pada phosphoinositide 3
kinase/ [rotein kinase B.
 Material yang digunakan adalah kultur sel berupa garis sel kanker serviks
C33A, ME-180, C4-1 dan HeLa, sel epitel serviks manusia (HCerEpiC)
yang di[eroleh dari Beijing, cina dan diperoleh dengan modifikasi
penambahan 10% janin sapi dan disimpan dalam incubator pada suhu
37OC dengan 5% CO2,
 Metode I : UJI MTT berupa pengujian efek dari 23,24 dihydeocucurbitacin
B dalam berbagai sel kanker serviks dan sel Fr2 dan HCerEpiC.
 Metode II : Uji Pembentukan Koloni dimana sel Hela dikultur kedalam
fase eksponensial (70% pertemuan) dikumpulkan dan dihitung
menggunakan hemositometer lalu diinkubasi selama 6 hari dan dibilas
dengan PBS.
 Metode III: Deteksi apoptosis dimana sel kultur Hela dipadatkan 2x105
sel/sumur plat dan diperlakukan dengan 23,24 dihydeocucurbitacin B,
setelah itu diwarnai dengan DAPI 20 menit kemudian diperbaiki dengan
methanol 70% dan didiamkan pada suhu -20 oC dan diamati dengan
mikroskop dengan pembesraan 200x.
 Metode IV : Perkiraan ROS dimana sel Hela diunggulkan dengan
kepadatan 2x105 sel dna diinkubasi selama 24 jam dan diperlakukan
dengan 23,24 dihydeocucurbitacin B selama 24 jam pad asuhu kamar
dalam 5% CO2. Kemudian sel dicuci 2x dengan PBS lalu diidentifikasi
menggunakan flow cytometer.
 Metode V : Distribusi siklus Hela menggunakan flow cytometer. Dengan
cara dicuci 2x dengan PBS, kemudian difiksasi dengan 70% selama 1
jam pada suhu -20, dicuci dengan PBS lalu suspensikan dalam larutan PI
dan penyortiran sel yang diaktifkan fluroesensi menggunakan 10.000sel/
kelompok dengan flow cytometer.
 Metode VI : Analisis western blot berupa perawatan dengan berbagai
konsentrasi dari 23,24 dihydeocucurbitacin B.
 Metode VII : Analisis statistik dilakukan dengan rangkap 3 dan disajikan
dengan mean SD. Dilakukan juga perbandingan 2 buah sampel dan
analisis satu arah varians yang diikuti dengan test post hoc tukey. Dimana
jika P <0,01 menunjukan pebedaan yang sangat signifikan.
Hasil menunjukkan bahwa 23,24 dihydrocucurbitacin B menunjukkan
aktivitas antikanker yang signifikan terhadap semua lini sel kanker serviks
yang digunakan dalam penelitian ini. 23,24-dihydrocucurbitacin B
menunjukkan aktivitas tergantung dosis dengan IC50 40 μM terhadap sel
HeLa. 23,24-dihydrocucurbitacin B menunjukkan sitoksisitas yang lebih
rendah secara signifikan dalam sel fR-2 dan HCerEpicCs (IC50, 125 µM)
dibandingkan dengan sel HeLa. Ini juga menyebabkan perubahan yang nyata
pada morfologi sel HeLa; sel menunjukkan membran yang menyusut.
Pengujian pembentukan koloni dilakukan dan hasilnya menunjukkan bahwa
setelah pemberian B 23,24-dihydrocucurbitacin, persentase koloni sel HeLa
menurun tergantung pada dosis. 23,24-dihidrokucurbitacin B menginduksi
apoptosis dalam sel HeLa. Hasil pewarnaan DAPI menunjukkan bahwa
23,24-dihydrocucurbitacin B menyebabkan apoptosis pada sel HeLa.
Lampiranin V-FITC / PI pewarnaan dan aliran cytometry menunjukkan bahwa
persentase sel apoptosis meningkat secara signifikan setelah inkubasi 24 jam
dengan 20, 40 dan 80 μM 23,24-dihydrocucurbitacin B, dibandingkan dengan
sel yang tidak diobati. 23, 24-dihydrocucurbitacin B menurunkan ΔΨm.
ROSgenerasi dikaitkan dengan disfungsi mitokondria, karena mengganggu
potensi mitokondria luar untuk mengeluarkan protein yang mempromosikan
apoptosis. Hasil penelitian menunjukkan bahwa cellsm sel HeLa yang diobati
dengan 23,24 dih dihydrocucurbitacin B menurun secara signifikan dan
penurunan ini terjadi dalam cara yang tergantung pada dosis.
Kesimpulannya, hasil penelitian saat ini menunjukkan bahwa 23,24-
dihydrocucurbitacin B dapat menjadi kandidat potensial untuk pengelolaan
kanker serviks dengan menginduksi apoptosis, menghentikan siklus sel dan
mengatur jalur pensinyalan mTOR / PI3K / Akt. Ada pengobatan efektif
terbatas yang tersedia untuk kanker serviks; toksisitas rendah yang terkait
dengan B, 23,24-dihydrocucurbitacin B yang terjadi secara alami berarti
dapat dikembangkan sebagai pengobatan baru untuk kanker serviks. Namun,
studi lebih lanjut diperlukan untuk memvalidasi efektivitasnya pada kanker
serviks.