LAPORANPRAKTIKUMBIOLOGIMOLEKULER

PERCOBAAN3

TRANSFORMASIPLASMID
(VirtualExperiment)

Disusunoleh

Nama :ArzhetaNurAziza

NIM :K100180167

Kelas :G

Kelompok :4

Korektor :DenaHerliawan

LaboratoriumBiologiMolekuler
FakultasFarmasi
UniversitasMuhammadiyahSurakarta
SemesterGenap2019/2020
 TRANSFORMASIPLASMID

A.TransformingBacteria
1.BacalahContextdanjawablahpertanyaandibawahinidengansingkat!
a.Apatujuandarisimulasiini?
Jawab:
MengubahbakteriE.colimenggunakanteknikheatshock.Tujuan
transformasibakteridilabadalahuntukmemfasilitasipenyerapanDNAyang
mengandunggenyangmenarik.
b.ApayangdimaksudplasmidpARA-R?
Jawab:
plasmidpARA-R rekombinanyangmengandunggenyangdiminati,
proteinfluorescentmerah(rfp).Setelahditransformasikan,genrfpdapat
diekspresikanmenggunakanmesinbakterisendiri.Plasmid pARA-R juga
mengandunggenuntukresistensiampisilin(ampR),yangmemungkinkankita
untukmengidentifikasibakteriyangdiubaholehkemampuanmerekauntuk
tumbuhdihadapanampisilin.

c.JelaskanmekanismeHeatShock
Jawab:
HeatShockmengacupadainkubasibakteripadasuhutinggi,biasanya
42℃,yangmenciptakanlubangdimembrantempatDNAdapatmemasukisel.

2.BacalahMaterialdanjawablahpertanyaandibawahini
a.Sebutkanalat-alatyangdibutuhkanuntukmelakukantransformasibakteri,
Bahan:
1.LuriaBroth(LB)
2.pARA-R(R)
3.SelKompeten
Alat:
1.PipetP2
2.PipetP20
3.PipetP200
4.PipetP1000
5.TipBoxP2
6.TipBoxP20
7.TipBox200
8.TipBoxP1000
9.PTube
10.P+Tube
11.EmberEs
12.WaterBath
13.RakFloatingTube
14.BiohazardousWaste
15.Timer
3.BacalahPredictiondanjawablahpertanyaandibawahini
a.ApayangdimaksudControlGroup(P-)danExperimentalGroup(P+)
- KelompokkontrolP-berisisel-selE.coliyangkompeten,tetapitidakada
plasmidrekombinan.Sampelinidisebutkontrolnegatifkarenatidakakan
diubah,jadidiharapkantidakadaperubahansifatnya
- KelompokkontrolP+berisisel-selE.coliyangkompetendanplasmid
rekombinan
4.LakukansimulasiTransformasiBakteri!
a.MengatursuhuWaterbath

b.MenambahkanselkompetenketubeP-danP+
c.MenambahkanPlasmidkeP+

d.HeatshockP+danP-

e.InkubasiseldiLB
 5.PadasectionResultbacalahIdealResultdantarikkesimpulan
a.Untuktransformasiyangberhasil,DNAplasmidsirkularperludiangkatke
dalamselbakteri.
b.Kontrolnegatifmengandungsel-selE.coliyangkompeten,tetapitidakada
plasmid,sehinggasel-selbakteritidakdapatdiubah.
Kesimpulan

B.PlatingTransformedBacteria
1.BacalahContextdanjawablahpertanyaandibawahinidengansingkat!
a.Apatujuandarisimulasiini?
Jawab:
Tujuansimulasiinimengetahuicaramenuangdanmembiakkanbakteri
dimediapadatmenggunakanpelapisanuntukmemverifikasibahwabakteri
E.colitelahmemperolehplasmidDNArekombinanmelaluitransformasi.
b.MengapabakteriyangsudahditransformasidenganplasmidpARA-Rdapat
resistenterhadapantibiotik?
Jawab:
KarenakodeampR untukenzim B-laktamase,yangmenonaktifkan
ampisilindanmemungkinkanbakteriuntukterustumbuhdihadapannya.Ini
berartibahwaketikakitamembudidayakanbakteridihadapanampisilin,hanya
merekayangberhasilmemperolehplasmidpARA-Rmelaluitransformasi(dan
dengandemikianmengekspresikangenampR)akandapattumbuh.Bakteriapa
punyangkekuranganplasmidtidakakanresistenterhadapampisilindantidak
akanbertahanhidup,memungkinkanpemilihanselbakteriyanghanyaberhasil
ditransformasi.
2.BacalahMaterialdanjawablahpertanyaandibawahini
a. Sebutkanalat-alatyangdibutuhkanuntukmelakukantransformasibakteri,
Bahan:
a.P-Sel
 b.P+Sel
Alat:
16.PipetP2
17.PipetP20
18.PipetP200
19.PipetP1000
20.TipBoxP2
21.TipBoxP20
22.TipBox200
23.TipBoxP1000
24.LBPlate
25.LB/ampPlate
26.CelSpreader
27.LabTape
28.Refrigenerator
29.Inkubator
30.EmberEs
31.BiohazardousWaste
32.Timer
3.BacalahPredictiondanjawablahpertanyaandibawahini
ApayangdimaksudplateLB,LB/amp,danLB/Amp/Ara?
a.PlateLBadalahsebagianbesarselbakteridapattumbuhdihadapanLB,
kondisiinimemastikanbahwabakteriitulayak.Jikapertumbuhantidakterjadi,
mungkinadamasalahdenganE.coliyangditransformasikan,LB,atauprotokol
yangdikuti.
b.LB/amp adalah Pertumbuhan dalam media inimembutuhkan resistensi
antibiotik,danselyangberhasilditransformasimembawaplasmidakan
memilikigenampRdantumbuhdihadapanantibiotik.
c.LB/Amp/AraPlateadalahpelatLB/amp,hanyaselyangmembawagenampR
yangkebalterhadapantibiotikdanakantumbuhdihadapannya.Selyang
membawagenampRjugaharusmembawagenaraC danrfp.Inidapat
diverifikasidenganmenambahkanarabinose,yangmenghasilkanekspresiRFP,
membuatselmenjadimerah.

4.LakukansimulasiPlatingBakteriyangtelahditransformasi!
a.Melabeliagarplate
b.MenambahkanP-keplateLBdanLB/amp

c.MenambahkanP+keplateLBdanLB/amp
 d.MenambahkanP+keplateLB/amp/ara

e.Inkubasisel

5.PadasectionResultbacalahIdealResultdantarikkesimpulan
- PlateLB:P-danP+tidakterdapatpertumbuhanyangsemestinyaada
- PlateLB/Amp:P-danP+tidakadapertumbuhanyangsemestinyaada
padaP+
- Plate:B/Amp/Ara:P+tidakditemukanpertumbuhanyangsemestinyaada.
Haltersebutmenandakantransformasiberhasil.