Laporan Praktikum Mikrobiologi Farmasi

STERILISASI

Ahmad Fakhry Ziyanulqays, Amma Makhdoroh, Syifaa Nur Rahmawati, Regalia Nur’aini
putri, Dea Aufani Putri, Rinda Nurul Fatimah, Indriyani Wijayanti

Fakultas Farmasi – Institut Sains dan Teknologi Nasional

Juni 2020

Abstrak
Sterilisasi adalah suatu proses untuk membunuh semua jasad renik yang ada, sehingga jika
tumbuh didalam medium tidak ada lagi jasad renik yang dapat berkembang biak. Sterilisasi
harus dapat membunuh jasad renik yangbpaling tahan panas yaitu spora bakteri
(Fardiaz,1992).
Ada berbagai macam metode kerja sterilisasi yaitu sterilisasi kering, sterilisasi basah,
sterilisasi uap, penyaringan/filtrasi, sterilisasi dengan desinfektan.
Metode kerja aseptis merupakan usaha untuk menghindari setiap kontak antara kultur murni ,
sedium steril, wadah steril serta permukaan meja kerja kejadari mikroorganisme kontaminan
atau competitor.

Pendahuluan berkembang biak. Sterilisasi harus dapat

Sterilisasi adalah suatu proses untuk membunuh jasad renik yang paling tahan
membunuh semua jasad renik yang ada, panas yaitu spora bakteri (Fardiaz, 1992).
sehingga jika tumbuh didalam medium Sterilisasi juga bisa dikatakan proses atau
tidak ada lagi jasad renik yang dapat kegiatan menghancurkan/ memusnahkan
semua mikroorganisme termasuk spora, basah, sterilisasi uap dan penyaringan/
dari sebuah benda atau lingkungan. filtrasi.
Proses sterilisasi tidak sempurna jika 1. Sterilisasi panas kering
adanya pertumbuhan bakteri yang masih Biasanya dilakukan dengan cara
berlangsung. Jika sterilisasi berlangsung menggunakan alat oven. Sterilisasi dengan
sempurna, maka spora bakteri yang panas kering sering kali digunakan untuk
merupakan bentuk paling resisten dari mensterilkan perangkat kaca, seperti
kehidupan mikroba akan di luluhkan (Lay, peralatan gelas dan alat-alat yang akan
1992). digunakan untuk percobaan. Dalam
Sterilisasi yang paling sering digunakan keadaan kering, struktur protein bersifat
biasanya berupa sterilisasi fisik, seperti lebih labil dan tidak mudah rusak sehingga
pemanasan, penggunaan sinar gelombang untuk mematikan organisme diperlukan
pendek yang dapat dilakukan selama suhu panas yang jauh lebih tinggi dan
senyawa kimia yang akan disterilkan tidak lebih lama bila dibandingkan dengan suhu
akan berubah atau terurai karena pemanasan lembab (Gunawan A.W, 2008).
temperature yang tinggi. Dan untuk Sterilisasi kering dapat diterapkan
sterilisasi mekanik digunakan untuk dengan cara pemanasan langsung sampai
beberapa bahan yang ketika pemanasan merah, melayangkan diatas api,
tinggi atau tekanan tinggi akan mengalami pembakaran dan sterilisasi dengan udara
perubahan, misalkan dengan saringan/ panas (oven).
filtrasi (Suriawiria,2005). a. Dilayangkan diatas api (Bunsen)
Metode kerja aseptis merupakan usaha Api digunakan untuk mensterilisasi
untuk menghindari setiap kontak antara peralatan seperti jarum inokulais, kaca
kultur murni, sedium steril, wadah steril objek, pinset, mulut tabung biakan, spatel
serta permukaan meja kerja dari dan lainnya. Sesudah disterilkan peralatan
mikroorganisme kontaminan atau compe- tersebut harus di dinginkan terlebih dahulu
titor. Teknik aseptic harus dilakukan untuk sebelum digunakan, khususnya jarum
mencegah terjadinya kontaminasi oleh inokulasi dan pinset, lalu dipijarkan atau
mikroorganisme pada kultur mikroba yang dipanaskan diatas api. Selanjutnya
digunakan dalam suatu percobaan serta dinginkan dalam larutan alcohol 70%
pada media dan perlatan yang sudah steril. kemudian bakar kembali untuk meng-
Metode kerja sterilisasi ada berbagai hilangkan sisa alkoholnya.
macam seperti sterilisasi kering, sterilisasi b. Oven
 Memerlukan suhu 160°C, selama 2 jam
(unit bidang farmakologi, 2019).
2. Sterlisasi basah
Biasanya dilakukan dalam autoklaf uap
yang mulai diangkat dengan menggunakan
uap air jenuh pada suhu 121°C selama 15-
20 menit. Autoklaf adalah alat yang
essenisal dalam setiap laboratorium
mikrobiologi, ruang sterlisasi dirumah
sakit serta tempat lainnya yang
memproduksi produk steril.
Pada umumnya autoklaf tidak selalu
dijalankan pada tekanan kira kira 15-16
per 5kg/cm3 pada suhu 121°C. waktu yang
perlukan tergantung pada sifat bahan yang
ingin disterilkan (Pelczar, 1986).
3. Sterilisasi uap
Menggunakan alat uap suhu 100°C dan
harus diulang 3 kali berturut turut dengan
selang waktu satu hari. Cara ini disebut
juga dengan sterilisasi diskontinyu atau
sterilisasi bertingkat.
4. Penyaringan/ filtrasi.
Cara ini diperlukan jika bahan yang
akan disterilkan berupa larutan yang
bersiat termolabil, larutan ini akan rusak
atau terurai oleh suhu tinggi, seperti
antibiotik, asam amino, vitamin dan
senyawa gula lainnya. Sterilisasi larutan
tersebut dilakukan dengan penyaringan
menggunakan filter yang mempunyai pori
sangat halus, pompa vakum digunakan
untuk menyedot sehingga larutan akan
melewati filter dengan lancar.
Ada beberapa macam filter yang biasa
digunakan, seperti Filter chamberland-
pasteur, yang berbentuk seperti lilin yang
terbuat dari porselen berpoi halus; Filter
gelas, yang berupa piringan yang terdiri
dari butiran-butiran gelas yang berpori
sangat halus; Filter seitzh, yang terbuat
dari asebes dengan ukuran pori tertentu
(Unit Bidang Ilmu Faframkologi, 2019).
Sterilisasi dengan desinfektan adalah
salah satu bahan kimia berupa larutan yang
mempunyai sifat membunuh sel vegetative
mikroogranisme tetapi tidak membunuh
endospore.
Metode kerja aseptis merupakan usaha
untuk menghindari setiap kontak antara
kultur murni, sedium steril, wadah steril
serta permukaan meja kerja dari
mikroorganisme kontaminan atau compe-
titor. Teknik aseptik harus dilakukan untuk
mencegah terjadinya kontaminasi oleh
mikroorganisme pada kultur mikroba yang
digunakan dalam suatu percobaan serta
pada media dan perlatan yang sudah steril.
Teknik transfer aseptis adalah suatu
metode atau teknik yang memindahkan
atau mentransfer kultur bakteria dari satu
tempat ke tempat lain secara aseptis agar
tidak terjadi kontaminasi oleh mikroba lain
ke dalam kultur. Teknik transfer aseptis ini
sangat esensial dan kunci keberhasilan
prosedur mikrobial yang harus diketahui Siapkan cawan petri dan gelas objek.
oleh seorang yang hendak melakukan Cuci hingga bersih lalu keringkan
analisis mikrobiologi. peralatan yang akan digunakan dengan
Teknik aseptis sangat penting dalam kain lap halus. Siapkan larutan alcohol
pengerjaan mikrobiologi yang memerlukan 70% dan siapkan kapas steril. Tuangkan
ketelitian dan keakuratan disamping larutan alcohol secukupnyan pada kapas
kesterilan yang harus selalu dijaga agar steril kemudian gosokkan pada cawan petri
terbebas dari kontaminan yang dapat dan gelas objek secara merata.
mencemari. Populasi mikroba di alam Sterilisasi Basah
sekitar kita sangat besar dan komplek. Isi autoklaf dengan air sehingga dasar
Beratus-ratus spesies berbagai mikroba berlubang, masukkan alat yang akan
biasanya menghuni bermacam-macam disterilkan, seperti tabung reaksi dan
bagian tubuh kita, termasuk mulut, saluran cawan petri yang telah dibungkus
pencernaan, dan kulit. Sekali bersin menggunakan kertas dan plastic. Lalu
terdapat beribu-ribu mikroorganisme tutup sekrup autoklaf dengan rapat,
sehingga diperlukan teknik yang dapat letakkan autoklaf diatas kompor gas
meminimalisirnya seperti pengisolasian kemudian nyalakan sehingga suhu
(Rachmawati 2008). mencapai 121°C selama 15-20 menit. Lalu
Metode matikan kompor jika sterilisasi selesai.
Sebelum memulai percobaan, cucilah Tunggu hingga dingin sebelum membuka
tangan dengan menggunakan air dan autoklaf.
sabun, serta keringkan, lalu semprot Sterilisasi Kering
alcohol 70% pada bagian telapak dan Siapkan alat yang akan disterilkan,
punggung tangan, semprotkan juga meja bungkus menggunakan kertas, lalu
kerja yang akan digunakan dengan alcohol masukkan kedalam oven dan atur waktu
70%. Namun, sebelum meja kerja dan suhunya. Setelah sterilisai selesai,
disemprot menggunkan alcohol 70%, meja tunggu hingga dingin sebelum membuka
dan alat-alat yang akan digunakan pada oven tersebut.
percobaan di bersihkan terlebih dahulu, Teknik Aseptis
lalu bersihkan sisa semprotan alcohol Cucilah tangan dan membersihkan meja
menggunakan kertas tisu bersih dengan dengan alkohol 70 %, Lalu pakai sarung
satu arah (Tim dosen,2020). tangan dan masker. Memfiksasikan ujung
Sterilisasi Model Kimiawai jarum ose pada api bunsen. Lalu buka
tutup penyumbat tabung reaksi dengan
tangan kanan, dan tabung reaksi berada
pada tangan kiri. Memfiksasi tabung reaksi
pada lampu bunsen sesaat. Lalu ambil
inokulum bakteri dengan jarum ose dalam
keadaan dekat dengan api bunsen.
Memfiksasi kembali tabung reaksi
kemudian menutupnya dengan penyumbat.
Dan segera pindahkan inokulum dari
tabung reaksi ke dalam petridish yang
telah berisi media agar, dengan cara
mengoleskan zig-zag secara tipis dalam
keadaan dekat dengan api bunsen.
Hasil dan Pembahasan
Fungsi dari sterilisasi yaitu untuk
mencegah inflasi pada manusia, hewan dan
tumbuhan, untuk mematikan/ meyingkir-
kan atau menghambat pertumbuhan mikro-
organisme, untuk mencegah gangguan
kontaminasi terhadap mikroorganisme dan
juga untuk mencegah kontaminasi bahan
bahan yang dipakai.
Cara pembungkusan berbeda-beda,
contohnya cawan petri, batang pengaduk
cukup dibungkus saja, sedangkan
Erlenmeyer, gelas ukur, tabung reaksi dan
gelas kimia perlu dilakukan penyumbatan
mulut tabung agar mikroba tidak dapat
masuk kedalam alat tersebut. Apabila
hanya dibungkus dengan kertas maka
kemungkinan bakteri dari udara masih bisa
masuk kedalamnya sebelum dan sesudah
disterilkan oven.
Dalam pengamatan semua alat harus
dibungkus dengan baik tanpa ada bagian
kertas yang terbuka dan alat-alat tersebut
berhasil disterilkan tanpa kontaminasi oleh
mikroba diudara walaupun sudah di
keluarkan dari oven. Berdasarkan hasil
tersebut maka sterilisasi berjalan dengan
baik.
Kesimpulan
Alat-alat mikrobiologi memiliki nama,
fungsi dan cara penggunaan yang berbeda-
beda, dan pada umumnya terbuat dari kaca
karena tidak beraksi dengan zat kimia dan
yang terpenting tahan terhadap panas.
Sterilisasi sangat penting dilakukan
dikarenakan untuk menghindari terjadinya
kontaminasi terhadap alat-alat maupun
bahan yang akan digunakan untuk
praktikum. Secara umum sterilisasi alat
gelas biasanya menggunakan oven,
sedangkan alat non gelas/ alat yang tidak
tahan panas menggunakan autoklaf.
Daftar pustaka
Fardiaz, S. Ananlisi Mikrobiologi Pangan
I. Jakarta : Gramedia Pustaka Utama.
1992.
Gunawan, A. W. 2008. Usaha Pembibitan
Jamur. Penebar Swadaya. Jakarta
Lay, B. W. dan Hastowo. Mikrobiologi.
Jakarta: Rajawali Press, 1982
Ike Rachmawati Kusdyah.
2008.Manajemen Sumber Daya Manusia.
Yogyakarta
Pelczar, M. J. & E.C.S. Chan, 1986, Tim dsoen. 2020. Panduang Praktikum
Mikrobiologi.penerjemah Ratna Siri Mikrobiologi. Institut Sains dan Teknologi
Hadioetomo 1, Universitas Indonesia Nasional. Jakarta
Press. Unit Bidang Ilmu Farmakologi, 2019.
Suriawiria, Unus. Pengantar Mikrobiologi Modul Praktikum Mikrobiologi Dan
Umum. Bandung: Angkasa, 1995 Virologi.
Universitas Muhamadiyyah Prof. Dr.
Hamk. Jakarta.