Agarwal et al.

Kekebalan & Penuaan ( 2018) 15:19

https://doi.org/10.1186/s12979-018-0124-9

PENELITIAN Akses terbuka

Respon kekebalan terhadap vaksinasi influenza pada

orang tua diubah oleh penggunaan obat kronis

Divyansh Agarwal 1, Kenneth E. Schmader 2, Andrew V. Kossenkov 3, Susan Doyle 2, Raj Kurupati 3
dan Hildegund CJ Ertl 3 *

Abstrak

Latar Belakang: Populasi pasien lansia adalah yang paling rentan terhadap infeksi virus influenza dan komplikasinya. Polifarmasi umum dijumpai
pada usia lanjut, yang sering memiliki banyak komorbiditas. Studi sebelumnya telah menunjukkan bahwa obat resep yang biasa digunakan dapat
memiliki dampak luas pada pertahanan kekebalan tubuh dan respons terhadap vaksinasi. Dalam penelitian ini, kami meneliti bagaimana dinamika
respon imun terhadap dua jenis virus influenza A dari trivalent inactivated influenza vaksin (TIV) dapat dipengaruhi oleh pasien. ' s riwayat
penggunaan obat resep Metformin, NSAID atau Statin.

Hasil: Kami memberikan bukti untuk produksi antibodi diferensial (Ab), perubahan fenotip sel-B, perubahan proporsi sel imun dan gangguan transkriptome pada
individu dengan riwayat penggunaan obat jangka panjang, dibandingkan dengan non-pengguna. Kami mencatat penurunan respons terhadap TIV pada lansia
yang menggunakan Metformin, sedangkan yang menggunakan NSAID atau Statin memiliki respons awal yang lebih tinggi tetapi mengurangi peningkatan relatif
pada Abs penetral virus (VNA) atau Abs yang terdeteksi oleh uji imunosorben terkait-enzim (ELISA) terkait enzim setelah vaksinasi .

Kesimpulan: Secara kolektif, temuan kami menyarankan jalur baru yang mungkin mendasari bagaimana penggunaan obat jangka panjang berdampak pada
respon imun terhadap vaksinasi influenza pada lansia. Mereka memberikan alasan kuat untuk menargetkan interaksi obat-kekebalan pada populasi usia lanjut
untuk meningkatkan respons vaksinasi.

Kata kunci: Vaksin influenza, Metformin, NSAID, Statin, Respon kekebalan tubuh

Latar Belakang
Vaksin influensa triaktif (TIV) trivalen melindungi terhadap influenza berat
dengan menginduksi produksi virus yang menetralkan Abs. Menurut
perkiraan terbaru oleh Pusat Pengendalian & Pencegahan Penyakit
(CDC), antara 1 Oktober 2017 dan 3 Februari 2018, laboratorium klinis
menguji lebih dari 600.000 spesimen untuk virus influenza, sekitar
125.000 di antaranya dinyatakan positif [ 1 ] Di antara individu yang dites
positif, mayoritas memiliki influenza A, subtipe H3N2 dan H1N1. Lebih
dari sepertiga dari kasus ini adalah pasien ≥ 65 tahun, yang mengalami
penyakit lebih parah daripada kelompok umur lainnya. Mereka tidak
hanya menyumbang lebih dari setengahnya
* Korespondensi: ertl@wistar.org
3 The Wistar Institute, Philadelphia, PA 19104, AS. Daftar lengkap informasi
rawat inap terkait influenza, tingkat kematian mereka juga tertinggi.
Studi terbaru menunjukkan bahwa pada orang berusia di atas 65
tahun, kemanjuran vaksin terhadap virus influenza A kurang dari 20% [ 2 , 3
] Efektivitas vaksin pada orang tua adalah variabel, sekunder karena
berbagai alasan seperti latar belakang etnis, respons peradangan pada
awal, waktu vaksinasi, jenis kelamin dan riwayat vaksinasi sebelumnya [ 2 -
5 ] Selanjutnya, respons sel-B primer
pada lansia umumnya rendah dan berumur pendek,
menghasilkan Abs dengan afinitas rendah [ 6 ] Penurunan pembentukan pusat
germinal dan penurunan ekspresi B dan T lymphocyte attenuator (BTLA)
pada sel B selama immunosenescence juga berkontribusi pada kurangnya
tanggapan Ab yang berkelanjutan pada usia lanjut. 7 ] Antibodi yang cocok
secara tidak sempurna karena dosa antigenik selanjutnya dapat
mengakibatkan respons yang buruk terhadap vaksin influenza dan

penulis tersedia di akhir artikel

© Penulis 2018 Akses terbuka Artikel ini didistribusikan di bawah ketentuan Lisensi Internasional Creative Commons Attribution 4.0 ( http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
), yang mengizinkan penggunaan, distribusi, dan reproduksi tanpa batas dalam media apa pun, asalkan Anda memberikan kredit yang sesuai kepada penulis asli
dan sumbernya, memberikan tautan ke lisensi Creative Commons, dan menunjukkan apakah ada perubahan. Pengabaian Dedikasi Domain Publik Creative
Commons ( http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/ ) berlaku untuk data yang tersedia dalam artikel ini, kecuali dinyatakan lain.
Agarwal et al. Kekebalan & Penuaan ( 2018) 15:19
kontrol patogen suboptimal pada populasi usia. Itu ' dosa antigenik asli ' Konsep
data pada setiap pasien, (ii) menguji setiap individu ' s Ab menanggapi dua
mengacu pada dampak pertemuan pertama dengan antigen dari virus
influenza pada kekebalan seumur hidup [ 8 ] Ketika strain virus mengalami
penyimpangan antigenik, beberapa epitop tetap dipertahankan, dan
antibodi yang sudah ada pada epitop tersebut bereaksi silang dengan
strain yang terseret. Ini pada gilirannya menekan tingkat antigen melalui
epitope masking dan mekanisme yang dimediasi Fc. Konsekuensinya,
respons antibodi spesifik virus influenza yang sudah ada sebelumnya
ditingkatkan sementara keragaman tanggapan keseluruhan berkurang. Ini
menjadi semakin jelas pada usia lanjut yang biasanya terpajan
berkali-kali terhadap varian virus pengaruh A yang berbeda. Selain itu,
telah ditunjukkan bahwa cacat dalam tanggapan sel-B pada lansia terkait
dengan penurunan fungsi penolong dari CD4 +. Sel-T [ 9 ], dan
berkurangnya ekspresi reseptor kostimulatori, seperti CD28 dan CD40L,
yang sangat penting untuk aktivasi sel B dan pembentukan pusat
germinal [ 10 ]
Meskipun pemahaman kita tentang proses biologis kompleks yang
mengatur respon vaksin pada orang tua telah berkembang selama
dekade terakhir, masih belum jelas bagaimana penggunaan obat jangka
panjang pada individu dengan penyakit kronis mempengaruhi respon
imun terhadap vaksinasi. Sementara beberapa vaksin - interaksi obat,
seperti influenza - warfarin, telah dilaporkan, kemungkinan banyak orang
lain tetap tidak dikenali. Mekanisme non-spesifik yang mendasari
interaksi antara vaksin influenza dan obat-obatan seperti warfarin,
fenitoin, dan teofilin diduga disebabkan oleh vaksin tersebut. ' s
kemampuan untuk menonaktifkan sistem sitokrom P-450 hati, sehingga
mengurangi pembersihan obat [ 11 ] Baru-baru ini, penelitian telah
menemukan bahwa titer penetral virus V (VNA) untuk influenza A (H1N1
dan H3N2), dan strain B lebih rendah pada subjek yang menerima terapi
Statin kronis, dibandingkan dengan mereka yang tidak menerima obat ini
dan efektivitas vaksin terhadap strain H1N1. dikurangi [ 12 , 13 ]
Sehubungan dengan itu, telah ditunjukkan bahwa obat Diabetes Tipe 2
(T2D), Metformin, meningkatkan proporsi sirkulasi sel-sel memori B yang
diaktifkan, mengurangi fraksi sel-sel memori B yang habis, dan
mengurangi peradangan sel-B sel-intrinsik [ 14 ] Akibatnya, titer VNA yang
lebih tinggi dalam menanggapi vaksinasi influenza telah dikaitkan dengan
penggunaan Metformin pada pasien [ 14 ] Pengamatan ini telah
menggarisbawahi pentingnya meneliti efek dari penggunaan obat kronis
pada tanggapan vaksin untuk lebih memahami bagaimana obat
mengubah kekebalan pada orang tua, serta merancang pendekatan
terapi tambahan untuk orang tua yang rentan terhadap infeksi virus
influenza, dan terdiri dari segmen pelanggan terbesar untuk obat yang
diresepkan untuk kondisi kronis.
Kami berusaha untuk memeriksa pertanyaan ini dalam studi 5 tahun dari tanggapan
TIV pada lansia yang sehat dan tinggal di komunitas ( ≥ Usia 65 tahun) pada (i)
mengumpulkan penggunaan narkoba sebelumnya
Halaman 2 dari 13
virus influenza A vaksin, H1N1 dan H3N2, (iii) mengukur proporsi dan
fenotipe subset sel B yang berbeda, dan (iv) melakukan analisis ekspresi
gen seluruh gen seluruh darah. Parameter imunologis dan klinis ini dicatat
pada awal (pra-vaksinasi) dan pada hari ke 7 dan 14 atau 28 setelah
vaksinasi, yang memungkinkan kami untuk memeriksa tren longitudinal.
Tujuan keseluruhan dari penelitian kami adalah untuk menganalisis
bagaimana penggunaan obat kronis dari obat-obatan yang diresepkan pada
orang tua dapat mempengaruhi tanggapan terhadap vaksin influenza. Kami
ingin mengkorelasikan perubahan pasca vaksinasi dalam sistem kekebalan
dengan pasien ' Riwayat penggunaan narkoba sebelumnya. Asosiasi ini akan
memungkinkan kita untuk menilai dampak polifarmasi pada bagaimana
tubuh manusia yang menua merespons vaksin influenza. Dengan
memberikan gambaran yang lebih lengkap tentang cara pengobatannya - interaksi
imunitas mengubah respons vaksinasi, studi ini dapat membantu memandu
pengembangan strategi alternatif untuk mempromosikan kekebalan jangka
panjang dan melindungi populasi lansia yang berisiko dan lebih berisiko.
Hasil
Karakteristik pasien
Antara 2011 dan 2016, kami mencatat 164 vaksinasi di 80 orang. Dari
jumlah tersebut, data untuk tiga belas pasien disaring pada kontrol
kualitas awal karena mereka memiliki nilai yang hilang untuk pengukuran
Ab atau beberapa parameter fenotip sel-B, atau kami tidak dapat
memperoleh data array mikro yang dapat diandalkan pada transkriptom
mereka. Dengan demikian, untuk analisis selanjutnya, kami memeriksa
data dari pasien yang set datanya lengkap, termasuk 131 vaksinasi pada
67 orang dengan usia rata-rata 76,3 tahun (Tabel 1 : Ringkasan
Karakteristik Pasien). Beberapa individu didaftarkan berulang kali selama
periode studi 5 tahun. Setiap vaksinasi dianggap independen dan
didistribusikan secara identik ( iid) data, asumsi yang diperlukan untuk
melakukan inferensi statistik pada dataset. Kami mendefinisikan “ tua ”
populasi sebagai individu ≥ Usia 65 tahun. Usia maksimum dalam kohort
kami adalah 89 tahun. Mayoritas subjek manusia dalam penelitian kami
adalah Putih / Kaukasia (91,6%),
diikuti oleh Afrika-Amerika (5,3%) dan lainnya (3,1%). Kami
mencatat riwayat klinis sebelumnya dari penggunaan obat untuk setiap
pasien, dan mengubah informasi ini menjadi variabel biner: 1, jika pasien
memiliki satu tahun atau lebih besar dari penggunaan obat dan
menggunakan obat pada saat penilaian, dan 0 sebaliknya. Kami membagi
kelompok pasien menjadi dua kategori untuk masing-masing dari tiga obat -
Metformin, Obat Antiinflamasi Non-Steroidal (NSAID) dan Statin. Lima
puluh dua persen dari pengamatan kami berhubungan dengan pengguna
NSAID kronis. Sebaliknya, hanya 32% dan 8% dari lansia yang terdaftar
menggunakan Statin dan Metformin, masing-masing. Betina terdiri
Agarwal et al. Kekebalan & Penuaan ( 2018) 15:19 Halaman 3 dari 13

Tabel 1 Ringkasan Karakteristik Pasien perbedaan signifikan dipertahankan dengan sampel yang dikumpulkan pada
Usia rata-rata 76,3 tahun kunjungan 2 dan 3 (Gbr. 1d ). Pengguna NSAID memiliki titer VNA yang lebih

# Kunjungan % tinggi ke H1N1 dan H3N2 pada awal, meskipun peningkatan titer sebanding

Total 131
antara pengguna dan bukan pengguna. (Ara. 1b , e ). Pada kunjungan 2 dan 3
berikutnya, pengguna NSAID memiliki titer absolut yang lebih tinggi dibandingkan
Perempuan 86 65.6
dengan yang bukan pengguna. Individu yang menggunakan terapi Statin juga
Pria 45 34.4
cenderung memiliki titer VNA awal yang lebih tinggi dibandingkan dengan yang
Vaksinasi pada pagi hari 85 64.9
bukan pengguna walaupun perbedaan ini tidak mencapai ambang batas untuk
Vaksinasi pada PM 46 35.1 signifikansi statistik. Menariknya, tingkat perubahan lipat titer serupa antara

Ras pengguna Statin dan non-pengguna (Gbr. 1c , f ). Selain perbedaan titer VNA,

Kaukasia 120 91.6

kami mengamati bahwa individu yang menggunakan terapi Metformin jangka
panjang memiliki respons IgA, IgG, dan IgM yang secara signifikan lebih rendah
Hitam 7 5.3
terhadap galur H1N1 setelah vaksinasi. Dibandingkan dengan bukan pengguna,
Lainnya 4 3.1
mereka menunjukkan penurunan respons IgM Ab hingga kunjungan 3 (Gbr. 2a ).
Pengguna Metformin 11 8.4
Demikian pula, kami mengamati penurunan produksi IgA dan IgM terhadap strain
Perempuan 8 72.7 H3N2 pada pengguna Metformin pada kunjungan 2. Setelah satu minggu

Pria 3 27.3 tambahan, kadar IgA Ab pada pengguna Metformin secara signifikan lebih rendah

NSAID-Pengguna 68 51.9
dibandingkan dengan yang bukan pengguna (Gbr. 2b ; p- nilai <0,05). Tidak ada
perbedaan signifikan dalam respon Ig-Ab yang terlihat pada kohort NSAID (data
Perempuan 47 69.1
tidak ditampilkan). Individu dengan riwayat penggunaan Statin jangka panjang
Pria 21 30.9
menunjukkan penurunan level IgG dan IgM terhadap kedua jenis vaksin
Pengguna Statin 42 32.1
influenza. Mereka memiliki tingkat IgG yang secara signifikan lebih rendah untuk
Perempuan 22 52.4 galur H3N2, dan kadar IgM dan IgG yang jauh lebih rendah terhadap galur H1N1

Pria 20 47.6 pada kunjungan 2 dan 3 (lihat file tambahan 1 : Gambar S1).

sebagian besar subjek dalam penelitian kami, 65,6%. Enam puluh lima
persen dari vaksinasi juga dilakukan sebelum tengah hari dan yang lainnya
dilakukan pada sore hari.

Tingkat VNA titer dan Ig ab memberikan bukti untuk obat -

interaksi kekebalan
Kami menentukan titer VNA dan isotipe imunoglobulin (Ig) yang dikuantifikasi
menjadi H1N1 dan H3N2 pada awal (Hari 0, kunjungan 1), dan pada satu
(kunjungan 2) dan dua atau empat minggu (kunjungan 3) setelah vaksinasi.
Berdasarkan perbandingan nilai absolut, kami menemukan bahwa pada
ketiga titik waktu, pengguna Metformin secara signifikan lebih rendah titer
VNA ke H1N1 dibandingkan dengan non-pengguna. Perbedaan ini menjadi
lebih jelas setelah vaksinasi, ketika dengan kunjungan 3 pengguna Metformin
ditemukan memiliki titer yang jauh lebih rendah (840 unit internasional [IU]
dibandingkan 2065 IU pada non-pengguna (Gbr. 1a ), p- nilai <0,05). Ketika
tingkat kunjungan 1 dan 2 titer dinormalisasi oleh tingkat awal, respon yang
buruk pada pengguna Metformin menjadi lebih jelas -
Penanda fenotip sel-B memberikan wawasan tentang efek penggunaan
obat kronis pada respons vaksin
Didorong oleh hasil awal kami dari tanggapan diferensial terhadap vaksin
influenza yang bersyarat pada riwayat penggunaan obat di kalangan orang
tua, kami berusaha untuk memeriksa mekanisme yang mendasarinya, yang
mungkin menjelaskan perbedaan-perbedaan tersebut. Menggunakan flow
cytometry, kami mendefinisikan lima himpunan bagian dari sel-B, yaitu,
transisional, naif dewasa, memori non-switched, memori yang diaktifkan dan
sel pensekresi Ab (ASCs), dan kemudian diuji untuk ekspresi fenotipik atau
penanda metabolik sel B. . B dan T attenuator limfosit (BTLA), protein
kematian sel terprogram (PD) 1, ligan kematian terprogram (PD-L) 1 dan

2, spesies oksigen reaktif mitokondria (ROS), limfoma sel-B (Bcl) -6,

pada kunjungan 2, mereka menyaksikan peningkatan titer VNA H1N1 3 kali lipat, faktor transkripsi Octamer (Okt) -2 dan Sirtuin (Sirt) 1 menunjukkan
dibandingkan dengan peningkatan non-pengguna 20 kali lipat ( p- nilai = 0,002), dan perbedaan tingkat intensitas floresensi rata-rata (MFI) pada pengguna
pada kunjungan 3, kelompok yang terakhir mengalami peningkatan titer 37 kali lipat narkoba. Penanda ini dipilih berdasarkan peran mereka dalam mengatur
dibandingkan dengan peningkatan 5 kali lipat saja pada pengguna Metformin ( p = 0,003). aspek fisiologis yang berbeda dari diferensiasi sel B dan metabolisme.
Demikian pula, kami menemukan bahwa pengguna Metformin cenderung memiliki BTLA dan PD1 adalah imunoinhibitor, yang berinteraksi dengan mediator
titer VNA H3N2 yang lebih rendah di semua titik waktu penelitian. Pada awal, entri virus herpes atau PD-L1 / L2 masing-masing [ 15 , 16 ] Mereka juga
pengguna memiliki titer rata-rata 625 IU dibandingkan dengan 4749 IU pada berperan dalam interaksi antara sel-B dan sel T-helper folikel.
non-pengguna ( p- nilai = 2 × 10 - 4). Ini
Agarwal et al. Kekebalan & Penuaan ( 2018) 15:19 Halaman 4 dari 13

Fig. 1 Titer VNA spesifik virus influenza: Respons antibodi penetral virus (VNA) dirangkum antara pengguna narkoba dan bukan pengguna untuk masing-masing dari tiga kategori obat yang diperiksa. Garis
dalam plot kotak menunjukkan median (nilai ditulis berdekatan dengan kotak), dan kotak menunjukkan kisaran interkuartil untuk tingkat titer H1N1- ( ac) dan spesifik H3N2 ( df) VNA dalam serum. Panel
atas a, d menunjukkan titer VNA untuk 11 sampel dari individu yang menggunakan Metformin kronis dibandingkan dengan 120 sampel dari bukan pengguna. Panel tengah b, e tunjukkan titer untuk 68
dan 63 sampel, masing-masing, dari individu dengan atau tanpa riwayat penggunaan NSAID dan panel bawah c, f menunjukkan titer untuk 42 sampel dari pengguna Statin, dibandingkan dengan 89
sampel dari bukan pengguna. Perbedaan pasangan-bijaksana antara dua kohort di masing-masing enam panel dilakukan dengan menggunakan Mann-Whitney U Test non-parametrik. Bintang di atas
kotak menunjukkan perbedaan yang signifikan * p- nilai ≤ 0,05, ** p- nilai ≤ 0,005

Bcl-6 memainkan peran penting dalam pematangan pusat sel germinal sel
B [ 17 ], sementara faktor transkripsi Oct-2 mensponsori diferensiasi sel-B
menjadi sel plasma yang mensekresi Ab [ 18 ] Karena diferensiasi sel-B
juga didorong oleh isyarat metabolik, kami menguji sejumlah penanda
yang mengindikasikan jalur produksi energi. Peningkatan ROS diamati
dalam sel yang meningkatkan produksi energi melalui fosforilasi oksidatif
mitokondria [ 19 ] Sirt1, sensor energi nuklir yang diaktifkan oleh NAD +,
meningkatkan oksidasi asam lemak dan glukoneogenesis [ 20 ] Sirt1
mengurangi reaksi inflamasi melalui penghambatan NF- κ B, meningkatkan
sekresi insulin dan toleransi glukosa dan mengatur ritme sirkadian [ 20 , 21 ]
Sirt1 juga menghambat regulasi T (T reg) pembentukan sel, dan
meningkatkan pembentukan sel Th17 [ 22 ] Dalam sel-B, itu meningkatkan
produksi sitokin [ 23 ] Aktivitasnya juga meningkat pada pembatasan kalori
serta sebagai respons terhadap kerusakan DNA yang terjadi selama reaksi
switching kelas sel-B. Bergantung pada jenis kerusakan DNA, Sirt1
meningkatkan kelangsungan hidup sel dan memengaruhi umur
keseluruhan [ 24 , 25 ]
Kami menemukan banyak penanda sel-B yang secara signifikan diubah dalam kohort
individu yang menggunakan salah satu dari keduanya
mediasi yang diteliti, bila dibandingkan dengan kohort pengguna non-narkoba
yang sesuai menggunakan uji-t dua sampel. Di antara pengguna Metformin,
kami menemukan peningkatan kadar MFI Oktober-2 yang signifikan dalam
transisi, sel naif dewasa dan memori B-sel yang tidak diaktifkan (Gbr. 3a ).
Kami juga menemukan peningkatan kadar Sirt1 pada sel B dewasa yang naif,
meskipun sel B memori yang tidak diaktifkan dan ASC pada pengguna
Metformin mengalami penurunan kadar Sirt1 dibandingkan dengan yang
bukan pengguna (Gbr. 3b ). Selain itu, kami mendeteksi peningkatan kadar
BTLA dan PD1 dalam sel B naif dewasa di antara pengguna Metformin (lihat
file tambahan 2 : Gambar S2).
Di antara individu yang merupakan pengguna jangka panjang NSAID,
subset sel B yang dipindah memori ditemukan memiliki tingkat MFI yang lebih
tinggi pada spesies oksigen reaktif mitokondria (MROS) dan penurunan level
Bcl-6 (lihat file tambahan 3 : Gambar S3). Demikian pula, sel-B naif dewasa
dalam kelompok pengguna NSAID menunjukkan intensitas BTLA dan PD1
yang lebih besar secara dramatis (lihat file tambahan 2 : Gambar S2); p- nilai
<0,005, untuk setiap perbandingan pasangan-bijaksana). Ketika memeriksa
individu-individu yang menggunakan terapi Statin jangka panjang, kadar
PD-L1 ditemukan
Agarwal et al. Kekebalan & Penuaan ( 2018) 15:19 Halaman 5 dari 13

Fig. 2 Isotipe antibodi spesifik virus influenza. Respons isotipe antibodi terhadap virus H1N1 dan H3N2 pada individu lansia dengan riwayat penggunaan Metformin dibandingkan dengan individu yang tidak
memiliki riwayat penggunaan narkoba sebelumnya ditunjukkan. Sampel serum dikumpulkan sebelum dan pada dua kunjungan terpisah setelah vaksinasi diuji untuk IgA, IgG dan IgM ke H1N1 ( Sebuah) dan
H3N2 ( b) virus oleh ELISA. Plot biola menunjukkan median Ab meningkat relatif terhadap titer pra-vaksinasi pada orang tua dengan riwayat penggunaan Metformin (1 pada sumbu Y) dibandingkan dengan
orang yang tidak memiliki riwayat penggunaan narkoba sebelumnya (0 pada sumbu Y). Titik putih di dalam plot menunjukkan hasil median, garis hitam tebal di dalam plot menunjukkan kisaran interkuartil,
ketebalan plot menunjukkan distribusi perubahan. Perbedaan pasangan-bijaksana antara dua kohort di masing-masing enam panel dilakukan dengan menggunakan Mann-Whitney U Test non-parametrik.
Bintang-bintang di sebelah kanan plot menunjukkan perbedaan yang signifikan: * a p- nilai ≤ 0,05, ** p- nilai ≤ 0,005

untuk diangkat dalam sel B transisi, sel B naif dewasa dan ASC (Gbr. 3c ). ASC
dan sel-B memori yang diaktifkan pada pengguna Statin juga diamati memiliki
LKM Bcl-6 yang jauh lebih rendah dibandingkan dengan yang bukan pengguna
(Gbr. 3d ).
Analisis transkriptome lengkap dan perubahan level jalur
Profil ekspresi gen darah utuh yang diperoleh pada awal dan pada
kunjungan 2 setelah vaksinasi menunjukkan perbedaan ekspresi 51 gen
(FDR <10%) pada individu yang menerima Metformin dibandingkan dengan
non-pengguna; sebagian besar gen ini diregulasi dalam kelompok pengguna
Metformin dan diberi kode untuk protein eksosom ekstraseluler, serta enzim
yang terlibat dalam pencernaan protein, biosintesis histamin dan
penghambatan fungsi RXR yang dimediasi oleh LPS / IL-1 ((lihat file
tambahan 4 : Gambar S4); Meja 2 ).
Pada manula yang menggunakan NSAID, analisis ekspresi gen
menunjukkan perbedaan signifikan untuk 42 probe (FDR <10%) (Gbr. 4 ).
Khususnya, DAVID mengidentifikasi banyak gen yang terlibat dalam
pertahanan antivirus, terutama dengan menghambat replikasi genom virus,
dan memediasi kekebalan bawaan dan jalur pensinyalan interferon tipe-1
(Tabel 1). 1 ). Sebagai contoh, gen RSAD2, yang mengkode Viperin,
menunjukkan peningkatan 1,6 kali lipat pada pengguna NSAID. Viperin
mengganggu rakit lipid pada membran plasma sel dan menghambat
penyebaran dan pelepasan virus influenza [ 26 ] Peningkatan regulasi pada
pengguna NSAID, yang ditemukan memiliki produksi Ab yang lebih jelas dan
titer VNA yang lebih baik terhadap H1N1, menunjukkan mekanisme yang
memungkinkan NSAID dapat mengubah respons kekebalan terhadap vaksin
influenza. Demikian pula, 39 gen ditemukan
Agarwal et al. Kekebalan & Penuaan ( 2018) 15:19 Halaman 6 dari 13

Fig. 3 Fenotip himpunan bagian sel B. Boxplots menunjukkan tingkat MFI dari penanda yang diubah secara signifikan pada himpunan sel B yang berbeda (menggunakan flow cytometry) dari individu yang tidak

memiliki riwayat penggunaan obat (0 pada sumbu X), dibandingkan dengan individu yang menggunakan Metformin atau Statin (1 pada X- sumbu). Garis dalam plot kotak menunjukkan median, kotak

menunjukkan rentang interkuartil dan garis menunjukkan data maksimal dan minimal. Panel Sebuah dan b menampilkan peningkatan level Oct-2 dan Sirt1, masing-masing, di berbagai himpunan sel-B pada

pengguna Metformin. Panel c dan d menunjukkan peningkatan level PD-L1 dan penurunan level Bcl6, masing-masing, di berbagai himpunan sel B pada pengguna Statin. Perbedaan pasangan-bijaksana antara

kohort di setiap panel dilakukan dengan menggunakan Uji U Mann-Whitney. Bintang di atas kotak menunjukkan perbedaan yang signifikan: * p- nilai ≤ 0,05,

* * p- nilai ≤ 5 × 10 - 3 dan *** p- nilai ≤ 5 × 10 - 4

memiliki ekspresi diferensial yang signifikan secara statistik (FDR <10%)
dalam kohort menggunakan Statin bila dibandingkan dengan
non-pengguna (lihat file tambahan 5 : Gambar S5). Beberapa gen ini
menyandikan protein yang diketahui memengaruhi jalur regulasi imun
utama, seperti jalur pensinyalan OX40, pengembangan sel B, dan
Pemberian Sinyal CD28 dan iCOS-iCOSL pada sel T Helper (Tabel 1 ).
Perbedaan dalam proporsi sel kekebalan dalam kohort yang
menggunakan obat
Kami menilai distribusi sel dengan mendekonvolusi data ekspresi gen
menggunakan CIBERSORT [ 27 ] Perubahan yang paling luar biasa adalah
dalam proporsi sel T CD8 + pada individu yang menggunakan Metformin.
Pada awal, kami menemukan bahwa individu dengan riwayat penggunaan
Metformin jangka panjang cenderung memiliki proporsi sel T CD8 + 25%
lebih tinggi. Satu minggu setelah vaksinasi influenza, tampaknya ada
perubahan minimal dalam proporsi sel T CD8 + di
bukan pengguna, sedangkan pengguna metformin memiliki proporsi 41% lebih
tinggi (Gbr. 5 ). Selain itu, pada kunjungan 2, pengguna Metformin ditemukan
memiliki proporsi sel mast beristirahat yang lebih rendah 60%. Selain itu, ketika
kami memeriksa proporsi jenis sel pada individu dengan riwayat penggunaan
NSAID dibandingkan mereka yang bukan pengguna, kami menemukan bahwa
kelompok sebelumnya memiliki jumlah yang secara signifikan lebih rendah. γ-δ Sel-T.
Pada kunjungan 2, meskipun perbedaan ini tidak lagi signifikan secara statistik,
kelompok NSAID sekarang ditemukan memiliki fraksi sel B memori yang 39% lebih
besar dibandingkan dengan pengguna non-NSAID. Kami juga mencatat individu
dengan riwayat penggunaan Statin jangka panjang cenderung memiliki proporsi T
yang jauh lebih rendah reg sel, baik pada awal dan pada kunjungan 2 setelah
vaksinasi. Pada kunjungan 1, pengguna Statin memiliki proporsi T rata-rata 25%
lebih rendah reg sel. Meskipun pada kunjungan 2, kedua kelompok melihat
peningkatan absolut 0,2% di T reg
proporsi, pengguna Statin terus memiliki fraksi T 25% lebih rendah reg sel
(Gbr. 5 ).
Agarwal et al. Kekebalan & Penuaan ( 2018) 15:19 Halaman 7 dari 13

Meja 2 Jalur Tanda Tangan Diubah Antara Kelompok Pengguna Narkoba dan Pengguna Non-Pengguna berdasarkan gen DE yang signifikan. Pengayaan jalur dinilai
menggunakan Laboratorium Immunopathogenesis dan sumber daya Bioinformatika, DAVID. Hanya asosiasi Pathway dengan a p- nilai <0,05 dan FDR <10%
dianggap penting secara statistik

Jalur Canonical Terbaik yang terkait dengan gen DE FDR (%) p- nilai

METFORMIN

Exosome ekstraseluler 6.2 2,5 × 10 - 3

LPS / IL-1 Dimediasi Penghambatan Fungsi RXR 8.1 1.1 × 10 - 3

Biosintesis Histamin 8.1 2,0 × 10 - 3

Pencernaan Protein 8.5 2,8 × 10 - 4

OAINS

Pertahanan Antiviral 2 × 10 - 2 5,6 × 10 - 7

Pembelahan Sel dan Partisi Kromosom 9,8 × 10 - 2 6,6 × 10 - 6

jalur pensinyalan interferon tipe I 0,16 3,2 × 10 - 6

Penghambatan Replikasi Genom Virus 2.2 3,5 × 10 - 5

Kekebalan bawaan 5.7 4,7 × 10 - 4

STATIN

Jalur Presentasi Antigen 1 × 10 - 3 1,5 × 10 - 7

Jalur pensinyalan yang dimediasi oleh interferon-gamma 1,9 × 10 - 3 2,9 × 10 - 8

Peraturan sekresi interleukin-10 5.1 × 10 - 3 2 × 10 - 9

OX40 Signaling Pathway 8,7 × 10 - 3 5,2 × 10 - 6

Peraturan produksi interleukin-4 1 × 10 - 2 7,8 × 10 - 9

Pengembangan Sel B 1,5 × 10 - 2 1,2 × 10 - 5

Cdc42 Signaling 3,4 × 10 - 2 5,7 × 10 - 5

Nur77 Signaling pada Limfosit T 3,4 × 10 - 2 5,7 × 10 - 5

Jalur Aktivasi Th1 dan Th2 4.3 × 10 - 2 8,7 × 10 - 5

Pematangan Sel Dendritik 4,6 × 10 - 2 1 × 10 - 4

Signaling iCOS-iCOSL di Sel T Pembantu 0,17 5.1 × 10 - 4

Signaling CD28 di Sel T Pembantu 0,19 6,3 × 10 - 4

Pematangan Phagosome 0,26 8,7 × 10 - 4

Signaling PKCtheta pada Limfosit T 0,3 1.1 × 10 - 3

Peran NFAT dalam Regulasi Respon Kekebalan Tubuh 0,46 1,7 × 10 - 3

Peran kinase keluarga JAK dalam Cytokine Signaling tipe IL-6 7.1 3,1 × 10 - 2

Diskusi juga beralih ke glikolisis setelah aktivasi dan obat-obatan yang

Studi saat ini secara sistematis memeriksa efek dari tiga obat yang biasa
digunakan pada sistem kekebalan tubuh ' Tanggapan orang tua terhadap
vaksinasi influenza. Kami menguatkan perbedaan yang diamati pada
tingkat VNA titer atau Ab dengan studi penanda sel B terfokus serta
analisis transkripomik darah global. Obat-obatan yang kami analisis
termasuk Metformin, NSAID dan Statin. Metformin mengaktifkan AMPK
dan menghambat aktivasi mTOR dan STAT3 [ 28 ] Ini juga mengaktifkan
IKK α / β, mengurangi produksi ROS dan menumpulkan sekresi sitokin
proinflamasi [ 29 ] Metformin meningkatkan fosforilasi oksidatif dan
katabolisme asam lemak dan dengan demikian mempromosikan
pembentukan memori sel T alih-alih diferensiasinya menjadi sel efektor,
yang lebih disukai menggunakan glikolisis untuk produksi energi dan
biomassa [ 30 , 31 ] Sel B
mempromosikan jalur produksi energi selain glikolisis dapat mengurangi
proliferasi sel B [ 32 ] Metformin mirip dengan pemecah DNA, yang terjadi
selama reaksi peralihan kelas imunoglobulin, menonaktifkan CREB
Regulated Transcription Coactivator 2, yang pada gilirannya
mempromosikan diferensiasi sel B [ 33 ] Saat ini tidak diketahui bagaimana
Metformin mempengaruhi berbagai langkah perkembangan sel plasma;
obat ' Efek pada glikolisis dapat meredam sementara perannya pada
regulasi transkripsional dapat meningkatkan respons antibodi.
NSAID berfungsi melalui penghambatan sintesis prostaglandin dan
siklooksigenase 1 dan 2 (Cox-1 dan Cox-2), dua komponen rantai
pernapasan yang mengkatalisis pengurangan oksigen ke air [ 34 ] Cox-2
diregulasi dalam limfosit B manusia teraktivasi dan
Agarwal et al. Kekebalan & Penuaan ( 2018) 15:19
Fig. 4 Perbedaan dalam profil ekspresi gen pada pengguna NAIDS. Peta panas ekspresi
gen dari gen DE diketahui antara individu pada NAIDS atau non-pengguna dengan False
Discovery Rate (FDR) <10% ditampilkan. Cut-off 10% dipilih apriori berdasarkan
keseimbangan antara kesalahan Tipe 1 dan Tipe 2 sebagaimana dijelaskan lebih lanjut
dalam metode. Peta panas menunjukkan gen yang DE pada awal (D0, hari 0, kunjungan
1), 1 minggu setelah vaksinasi (D7, hari 7, kunjungan 2) dan sebagai respons antara dua
kunjungan (D7 / D0). Warna di kolom pertama menunjukkan titik waktu di mana gen
ditemukan menjadi DE antara kedua kelompok, sedangkan warna peta panas menyoroti
perubahan-lipat. Peta panas dibagi menjadi empat kisi, di mana kelompok kiri bawah
menunjukkan gen yang secara signifikan diregulasi dalam pengguna NSAID,
diperlukan untuk sintesis Ab optimal. Telah ditemukan bahwa produksi
antibodi tumpul NSAID pada sel mononuklear darah perifer manusia yang
terstimulasi (PBMC) [ 35 ] dengan mengurangi ekspresi Blimp-1 faktor
transkripsi yang sangat penting untuk diferensiasi sel plasma [ 36 ] Ini juga
menekan aktivasi sel-T dengan menghambat induksi p38 MAPK.
Statin menghambat reduktase HMG-CoA dan dengan demikian jalur
mevalonat, yang mengarah pada produksi kolesterol dan heme; yang
terakhir berperan dalam diferensiasi sel B dan pergantian kelas [ 37 ] Statin
sebagian melalui pengurangan kolesterol intraseluler, yang merupakan
komponen dinding sel penting yang diperlukan untuk membagi sel,
mengurangi proliferasi sel [ 38 ] Ini menghambat peningkatan sitokin yang
diinduksi dalam ekspresi MHC kelas II [ 39 ] dan dengan demikian
mempengaruhi stimulasi sel T CD4 + yang digerakkan oleh antigen. Statin
juga menghambat produksi koenzim Q10, pembawa elektron dalam rantai
transpor elektron, yang menggeser keseimbangan dari energi mitokondria
Halaman 8 dari 13
produksi menuju glikolisis. Mereka telah terbukti mengurangi ekspresi CD40
/ CD40L, menghambat aktivasi sel-T serta mengurangi produksi Ab [ 40 ]
Studi sebelumnya telah menemukan korelasi antara penggunaan obat dan
disregulasi sistem kekebalan tubuh. Misalnya, penggunaan Metformin telah
terbukti meningkatkan metabolisme asam lemak dan meningkatkan
pembentukan sel T memori CD8 +, sehingga mendukung pengembangan
memori imunologis [ 41 ] Selain memiliki titer VNA awal yang lebih rendah
untuk galur virus influenza H1N1 dan H3N2, kami menemukan bahwa
individu yang menggunakan Metformin juga menekan respons Ab setelah
vaksinasi dikombinasikan dengan ekspresi penanda fenotip metabolik yang
lebih rendah, seperti Sirt1 pada Ab yang mensekresi dan memori yang tidak
diaktifkan. Sel-B. Metformin mungkin telah menghambat pembentukan ASCs
dengan mengurangi saklar metabolik menjadi glikolisis, yang merupakan ciri
khas limfosit yang menjalani aktivasi dan yang penting untuk menyediakan
energi dan biomassa yang cepat untuk sel-sel yang berproliferasi. Selain itu,
kami menemukan bukti kuat bahwa pada awal dan satu minggu setelah
vaksinasi, pengguna Metformin menunjukkan proporsi CD8 + yang jauh
lebih tinggi. Sel-T. Mayoritas gen yang terlibat dalam LPS / IL-1 - penghambatan
dimediasi fungsi RXR jalur kanonik juga downregulated pada pengguna
Metformin. RXR adalah reseptor nuklir yang bergantung pada ligan yang
mempengaruhi reseptor transkripsional, dan penghambatan yang dimediasi
LPS / IL-1 terhadap fungsi RXR merusak metabolisme, transportasi dan
biosintesis lipid dan kolesterol [ 42 ], yang penting untuk pembentukan
membran oleh sel-sel yang berkembang biak. Dengan demikian, hasil kami
konsisten dengan hubungan sebelumnya antara Metformin ' Efek pada
kekebalan melalui disregulasi metabolik. Masih, pengamatan ini
mengusulkan mekanisme menyeluruh menjelaskan bagaimana Metformin
berpotensi menghambat RXR, mengubah pemanfaatan asam lemak oleh
limfosit dan melemahkan kemampuan mereka untuk berkembang biak.
Meskipun demikian, harus ditunjukkan bahwa hasil kami dari penurunan
respons antibodi terhadap vaksinasi influenza pada pengguna Metformin
berbeda dengan penelitian sebelumnya, yang menunjukkan bahwa pada
individu dengan T2D Metformin meningkatkan respons [ 14 ] Kami berasumsi
bahwa hasil yang kontras mencerminkan bahwa dalam penelitian ini pasien
lebih muda dari kohort kami dan pengguna Metformin dibandingkan dengan
individu diabetes, yang belum memulai pengobatan.
Hasil kami menunjukkan bahwa meskipun titer VNA absolut lebih tinggi pada
individu yang menerima NSAID, relatif terhadap baseline pra-vaksinasi mereka,
tidak ada perbedaan yang signifikan secara statistik dalam tanggapan vaksin antara
pengguna dan bukan pengguna. Pengamatan ini sejalan dengan penelitian
sebelumnya [ 43 , 44 ] yang telah menyarankan bahwa efektivitas vaksinasi influenza
kemungkinan tidak berkurang pada pasien yang menggunakan NSAID. Dalam
penelitian kami, individu yang menggunakan NSAID juga mengalami peningkatan
kadar BTLA pada sel B dewasa naif mereka, yang seperti yang kami laporkan
sebelumnya terkait dengan
Agarwal et al. Kekebalan & Penuaan ( 2018) 15:19 Halaman 9 dari 13

Fig. 5 Distribusi subset limfosit yang bersirkulasi. Biola Plot menunjukkan distribusi jenis sel yang berbeda pada individu dengan riwayat penggunaan Metformin, NSAID atau Statin (1 pada sumbu X)
dibandingkan dengan individu yang tidak memiliki riwayat penggunaan obat resep ini (0 pada sumbu X). Titik-titik merah di tengah plot menunjukkan hasil median, yang juga ditunjukkan oleh angka di
atas plot. Garis merah menunjukkan rentang interkuartil. Perbedaan pair-bijaksana antara kohort dilakukan menggunakan Mann-Whitney U Test non-parametrik. Perbedaan yang signifikan antara
kedua kelompok ditunjukkan oleh bintang di atas plot. * p- nilai adalah sebagai berikut: Pengguna metformin vs. non-pengguna: CD8 + sel-T pada awal: p- nilai = 0,04; CD8 + Sel-T pada 1 minggu
setelah TIV: p- nilai = 0,01. Pengguna NSAID dibandingkan dengan non-pengguna: sel B memori pada 1 minggu setelah TIV: p- nilai = 0,0004); γ-δ Sel-T pada awal ( p- nilai = 0,03). Pengguna statin vs
non-pengguna: Sel T regulator pada awal: p- nilai = 0,02; sel T regulator pada 1 minggu setelah TIV: p- nilai = 0,04

tanggapan Ab yang lebih tinggi dan lebih berkelanjutan untuk vaksinasi
influenza [ 7 ] Satu minggu setelah vaksinasi, pengguna NSAID mengalami
peningkatan proporsi sel-B memori (Gbr. 5 ). Temuan ini menguatkan
laporan sebelumnya dan membantu menyediakan hubungan yang hilang
antara NSAID, sel-B memori dan mekanisme yang memungkinkan NSAID
dapat mempengaruhi respons vaksin pada usia lanjut. Baru-baru ini, telah
ditemukan yang diaktifkan γ-δ Sel-T dapat mengatur organisasi sel-B
dalam folikel jaringan limfoid; mereka juga penting dalam induksi imunitas
yang dimediasi-vaksin dalam berbagai model hewan [ 45 , 46 ] Menariknya,
kami mencatat bahwa pada awal, pengguna NSAID memiliki proporsi yang
lebih rendah secara signifikan γ-δ Sel-T. Terapi Statin jangka panjang telah
dikaitkan dengan berkurangnya respons terhadap vaksin influenza pada
orang tua [ 12 ] dan peningkatan penyakit pernapasan akut yang diderita
secara medis serta kunjungan kantor terkait influenza atau rawat inap
pada individu yang divaksinasi [ 13 , 47 ] Telah dilaporkan bahwa ini
disebabkan oleh aksinya pada faktor transkripsi Foxp3, yang pada
gilirannya mempengaruhi diferensiasi CD4 + Sel-T menjadi T reg sel dan
mengubah migrasi CD4 + CD25 + T regs [ 48 ] Sesuai dengan penelitian
sebelumnya, kami menemukan bahwa pengguna Statin memiliki
tanggapan IgG dan IgM yang lemah terhadap jenis virus influenza H1N1
dan H3N2. Meskipun kami mengamati titer VNA awal yang lebih tinggi
pada pengguna Statin dibandingkan dengan non-pengguna, tingkat
peningkatan titer pada kunjungan 2 dan 3 sebanding antara kedua kohort.
Titer absolut yang lebih tinggi kemungkinan disebabkan oleh induksi yang
lebih baik
satu minggu setelah vaksinasi, kami menunjukkan bahwa pengguna
Statin memiliki proporsi T yang beredar secara signifikan lebih rendah regs di
kedua titik waktu. Lebih lanjut, respons yang berkurang dikaitkan dengan
berkurangnya ekspresi Bcl-6 pada kedua sel B-memori yang diaktifkan
dan ASC. Bcl-6 sangat penting untuk pembentukan sel germinal dan
menghambat diferensiasi terminal sel-B menjadi sel plasma. Di sisi lain,
PD-L1, yang memfasilitasi interaksi antara sel B dan sel T helper folikuler,
meningkat pada sel B transisional dan naif serta ASC dari pengguna
Statin. Keterbatasan mendasar dari pendekatan analitik korelatif seperti
kita adalah bahwa pembentukan tatanan kausal yang sempurna tidak
selalu mungkin. Temuan kami dengan demikian tidak dimaksudkan untuk
menyelesaikan masalah interaksi vaksinasi obat pada orang tua,
melainkan berkontribusi pada dialog yang baru saja dimulai. Pengamatan
ini semua lebih merangsang karena tiga obat yang diselidiki dalam
penelitian ini secara luas dan umum digunakan oleh orang tua, yang juga
merupakan populasi yang paling rentan terhadap komplikasi infeksi
influenza. Keterbatasan lain dari penelitian kami termasuk ukuran sampel
yang sederhana, yang mungkin menjelaskan mengapa banyak
perbedaan titer Ab dan VNA yang diamati antara pengguna Statin /
NSAID dan bukan pengguna tidak mencapai signifikansi statistik. Karena
terbatasnya jumlah subyek manusia yang terdaftar dalam penelitian ini,
kami juga tidak mempertimbangkan interaksi obat-obat karena kurang
dari 10% individu menggunakan beberapa obat, dan ukuran sampel
tersebut secara drastis akan membatasi kekuatan untuk mendeteksi
perbedaan yang berarti. serta membatasi kepercayaan kami pada
validitas biologis hasil. Selain itu,

ASC jangka panjang pada individu dengan

penggunaan Statin jangka panjang. Menggunakan dekonvolusi pada microarray
yang diperoleh dari individu sebelum vaksinasi dan
Agarwal et al. Kekebalan & Penuaan ( 2018) 15:19
dan alasan rekrutmen pasien. Perbedaan jenis kelamin dan ras dalam kekebalan
telah didokumentasikan dengan baik, dan secara umum, perempuan telah terbukti
mengembangkan respons Ab yang lebih tinggi daripada laki-laki [ 3 ], meskipun kami
gagal mengkonfirmasi tren ini dalam penelitian kami. Keterbatasan potensial lainnya
adalah bahwa faktor tambahan, yang berpotensi memengaruhi respons imun,
seperti kebugaran secara keseluruhan, tingkat aktivitas fisik harian, penyakit kronis
yang mendasarinya, penggunaan obat resep lain, diet dan berat badan, dan lainnya,
tidak diperhitungkan. Dengan demikian, kehati-hatian harus diambil ketika
menafsirkan hasil kami di seluruh individu dari latar belakang etnis / ras yang
berbeda, dan kami mendorong penelitian di masa depan untuk melihat epistasis
antara pasien ' riwayat penggunaan obat-obatan dan faktor-faktor lain seperti jenis
kelamin dan jenis kelamin. Karena kami mengikuti 67 orang selama 5 tahun dan
menggunakan data mereka untuk mengevaluasi empat kondisi. yaitu, penggunaan
Metformin, penggunaan NSAID, penggunaan Statin dan tidak ada penggunaan obat,
kesimpulan kami dipengaruhi oleh kesalahan Tipe 1 dan Tipe 2. Meskipun demikian,
penelitian kami membahas kesenjangan mendasar dalam pengetahuan mengenai
topik yang relevan secara klinis tentang bagaimana penggunaan obat kronis
memengaruhi respons vaksin pada usia lanjut, dan membuka pintu bagi penelitian
selanjutnya untuk mereplikasi temuan awal kami dalam kelompok yang lebih besar
dan beragam.
Kesimpulan
Kami menunjukkan bahwa dibandingkan dengan non-pengguna, pengguna Metformin
menunjukkan peningkatan titer VNA dan Abs yang secara signifikan lebih rendah diuji oleh ELISA
setelah vaksinasi influenza, sementara individu yang menggunakan NSAID dan Statin
mengembangkan respons absolut yang lebih tinggi tetapi karena titer awal mereka cenderung
lebih tinggi, mereka peningkatan keseluruhan Abs khusus virus influenza setelah vaksinasi juga
dilemahkan. Kami mengkorelasikan pengamatan ini dengan perbedaan fenotip sel B, seluruh
analisis transkriptom dan disimpulkan distribusi sel imun berdasarkan dekonvolusi. Analisis jalur
berikutnya mengungkapkan rute mekanistik yang mendasari interaksi obat-kekebalan dalam
menanggapi vaksinasi. Kami menyimpulkan bahwa penggunaan obat kronis pada populasi usia
lanjut secara signifikan berdampak pada respons imun terhadap vaksinasi, dan penekanan yang
lebih besar harus diberikan pada riwayat pengobatan sambil mempertimbangkan strategi
perlindungan alternatif untuk lansia untuk mengurangi kematian terkait influenza. Secara
keseluruhan, hasil kami penting dalam dua cara: pertama, mereka menawarkan langkah penting
dalam upaya berkelanjutan untuk menjelaskan tanggapan diferensial terhadap vaksin influenza
pada populasi lansia yang terpapar. Kedua, mereka memberikan sebagian peta jalan bagi para
peneliti vaksin dan ahli imunologi yang dapat memulai transisi dari mendokumentasikan efek
penggunaan obat jangka panjang pada imunosenensi menjadi menjelaskan bagaimana
penggunaan obat dapat dieksploitasi atau dilawan untuk memastikan bahwa manula dilindungi
secara memadai oleh vaksin influenza. . Singkatnya, kami menghasilkan data baru untuk
menjelaskan bagaimana penggunaan obat kronis dalam hasil kami penting dalam dua cara:
pertama, mereka menawarkan langkah penting dalam upaya berkelanjutan untuk menjelaskan
tanggapan diferensial terhadap vaksin influenza pada populasi lansia yang terpapar. Kedua,
mereka memberikan sebagian peta jalan bagi para peneliti vaksin dan ahli imunologi yang dapat
memulai transisi dari mendokumentasikan efek penggunaan obat jangka panjang pada
imunosenensi menjadi menjelaskan bagaimana penggunaan obat dapat dieksploitasi atau dilawan
untuk memastikan bahwa manula dilindungi secara memadai oleh vaksin influenza. . Singkatnya,
kami menghasilkan data baru untuk menjelaskan bagaimana penggunaan obat kronis dalam hasil
kami penting dalam dua cara: pertama, mereka menawarkan langkah penting dalam upaya berkelanjutan untuk menjelaskan tanggapan diferensial terhadap vaksin influenza pada populasi lansia yang terpapar. Kedua, mereka
Halaman 10 dari 13
lansia memengaruhi sistem kekebalan tubuh mereka, dan pada gilirannya mengubah respons
mereka terhadap vaksinasi.
Metode
Subjek manusia dan desain penelitian
Darah dikumpulkan di Unit Penelitian Klinis Duke (DCRU) setelah
mendapat persetujuan dari komunitas
orang-orang yang tinggal di daerah Durham-Raleigh-Chapel Hill dari North
Carolina (AS). Delapan puluh orang yang sehat,
≥ Usia 65 tahun, yang tidak memenuhi kriteria untuk kelemahan terkait
usia, dilibatkan dalam penelitian ini. Subjek dengan infeksi demam akut
atau penyakit yang mendasari atau terapi yang mempengaruhi sistem
kekebalan tubuh tidak terdaftar. Subjek dengan kontraindikasi vaksinasi
influenza, seperti hipersensitivitas anafilaksis terhadap telur atau
komponen lain dari vaksin, atau penyakit akut dengan atau tanpa demam,
atau riwayat Sindrom Guillain-Barré dalam waktu 6 minggu setelah dosis
vaksin influenza sebelumnya tidak terdaftar. Data demografis dan riwayat
medis termasuk diagnosa medis, pengobatan, vaksinasi sebelumnya, dan
riwayat influenza atau penyakit serupa influenza selama 5 tahun terakhir
dicatat. Subjek berdarah dan divaksinasi dengan TIV. Subjek berdarah
lagi pada hari 7 dan 14 atau 28, setelah injeksi TIV.
Strain virus
Strain vaksin influenza yang diadaptasi telur, H1N1 dan H3N2, hadir
dalam vaksin selama penelitian kami diperoleh dari Pusat Pengendalian
dan Pencegahan Penyakit (CDC), Atlanta, Georgia. Strain H1N1 yang
sama
yaitu, A / California / 7/2009, digunakan sepanjang seluruh periode. Noda
H3N2 diubah sepanjang periode penelitian: 2011/12: A / Perth / 16/2009,
2 - 12/2013/2014 : A / Victoria / 361/2011; 2014/15: A / Texas / 50/2012;
2015/16: A / Switzerland / 9715293/2013. Virus diperluas pada telur
berembrio 10 hari yang bebas patogen. Cairan allantoic yang telah
dibersihkan dimurnikan dengan fraksinasi lebih dari 10 - 55% gradien
kepadatan sukrosa pada 25.000 rpm selama 2 jam. Dosis infektif kultur
jaringan rata-rata (TCID 50) ditentukan dengan titrasi pada sel-sel
Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) setelah 3 hari infeksi dengan
skrining untuk efek sitopatik (CPE).
Sampel darah dan serum
Darah dikumpulkan dari individu yang terdaftar. Sampel darah untuk
analisis ekspresi gen dikumpulkan dalam tabung PaxGene untuk segera
menstabilkan RNA untuk analisis seperti yang dijelaskan sebelumnya [ 49 ]
Sampel dikirim semalam dari titik pengumpulan di DCRU ke The Wistar
Institute di Philadelphia, PA (AS). Sera diisolasi dan dibekukan - 20 ° C
sampai digunakan lebih lanjut. Sera diinaktivasi panas dengan inkubasi
30 menit pada 56 ° C sebelum pengujian.
Agarwal et al. Kekebalan & Penuaan ( 2018) 15:19
Uji netralisasi mikro
Sera manusia dua kali lipat yang dilarutkan secara serial (1:20 hingga 1:
10240) diuji untuk menetralkan Abs untuk influenza A dari strain virus oleh
tes mikro-netralisasi [ 50 ] Secara singkat, volume yang sama dari 100 TCID 50
per sumur dari virus yang dititrasi ditambahkan ke serum yang diencerkan
dalam 96-piring yang baik dan diinkubasi pada suhu 37 ° C. Setelah 1 jam,
campuran virus serum ditambahkan ke sel MDCK yang telah dicuci dua kali
dengan Dulbecco bebas serum ' s Modifikasi Eagles Medium (DMEM). Sel-sel
diinkubasi selama dua jam pada suhu 37 ° C dengan 5% CO 2. Sel-sel dicuci
dan diinkubasi ulang dengan DMEM ditambah dengan L - 1-Tosylamide-2-phenylethyl
Sel Mati Aqua yang Dapat Diperbaiki / Hidup Mati (Teknologi Kehidupan,
chloromethyl keton (TPCK) trypsin selama 3 hari. CPE dinilai di bawah
mikroskop. Titer netralisasi didefinisikan sebagai pengenceran serum yang
menghasilkan 50% penghambatan pembentukan CPE.
Uji imunosorben terkait-enzim (ELISA)
Isotipe Ab mengikat H1N1 dan H3N2 spesifik diukur dengan ELISA.
Secara singkat, sumur Nunc Maxisorp ™
piring dilapisi dengan 10 μ g / ml virus influenza H1N1 atau H3N2
bersama dengan standar isotipe untuk IgA1, IgG dan IgM (Athens
Research & Technology, Inc., Georgia, USA) dalam buffer bikarbonat
semalam pada suhu 4 ° C. Pelat diblokir dengan 3% BSA dalam saline
fosfat-buffered (PBS) dan diinkubasi selama 2 jam. pada suhu kamar
dengan serum yang tidak diaktifkan untuk subjek pada pengenceran
1/250. Pelat dicuci 4X dengan PBS yang mengandung 0,05% PBS-tween
(PBST) dan diinkubasi selama 1 jam. pada suhu kamar dengan alkali
fosfatase tikus terkonjugasi IgA1 anti-manusia pada 1: 1000, IgG pada 1:
3000 dan IgM pada pengenceran 1: 1000 (Southern Biotech, Alabama,
USA). Setelah inkubasi, piring dicuci 4X dengan PBST dan
dikembangkan menggunakan substrat alkali fosfatase yang mengandung
tablet pNPP (Sigma Aldrich, Missouri, USA) yang dilarutkan dalam buffer
DEA. Nilai adsorbsi dicatat pada 405 nm dan diplot terhadap kurva
standar dari setiap plat untuk setiap isotipe. Konsentrasi Ab ditentukan,
dan dinyatakan dalam μ g / ml.
Deteksi sel B dengan flow cytometry
Sel mononuklear darah perifer (PBMC) diisolasi seperti yang dijelaskan
sebelumnya [ 7 ] Setiap subjek ' Sampel PBMC awalnya dirawat dengan
Human TruStain FcX Fc Receptor Blocking solution (BioLegend, San
Diego, CA) selama 30 menit, dicuci dengan PBS pada 1500 rpm selama 5
menit dan kemudian diwarnai dengan
Fluor-terkonjugasi Abs.
Sitometri multi-parametrik dilakukan pada PBMC menggunakan panel
untuk mendeteksi subset sel B dengan mengidentifikasi sel B naif dewasa
(CD19 + CD20 + IgD + C
D27 - CD38 -), sel B transisi (CD19 + CD20 + IgD + CD2 7 +/- CD38 + / -), sel B
memori yang tidak diaktifkan (CD19 + CD 20 + IgD + CD27 + CD38 -),
beralih sel B memori
(CD19 + CD20 +/- IgD - CD27 + CD38 -), ganda-negatif B
Halaman 11 dari 13
sel (CD19 + CD20 + IgD - CD27 - CD38 -) dan ASC
(CD19 + CD20 - IgD - CD27 ++ CD38 ++). PBMC diwarnai dengan konjugat
Ab untuk penanda permukaan berikut: CD3-Pacific Blue (UCHT1,
Biolegend, San Diego, CA), CD14-Pacific Blue (M5E2, Biolegend),
CD19-BV650 (HIB19, Biolegend), CD20-BV570 ( 2H7, Biolegend),
CD27-BV785 (O323, Biolegend), CD38-BV711 (HIT2, Biolegend),
IgD-PerCP / Cy5.5 (IA6 - 2, Biolegend),
BTLA-PE (MIH26, Biolegend), PD1-PE / Cy7 (EH12.2H7, Biolegend), dan Noda
Carlsbad, CA) selama 30 menit pada suhu 4 ° C. Sel dicuci dua kali dengan
buffer pewarnaan sel (Biolegend), dan difiksasi menggunakan Cytofix /
Cytoperm (BD Biosciences). Antigen intraseluler dideteksi dengan pewarnaan
untuk IgG-BV605 (G18 - 145, BD Biosciences, San Jose, CA) dan IgM-APC /
Cy7 (MHM-88, Biolegend) selama 30 menit pada 4 ° C. Sampel yang diwarnai
dianalisis dalam LSRII flow cytometer (BD Biosciences, San Jose, CA)
menggunakan FlowJo (Tree Star, Ashland, OR).
Analisis data microarray dan inferensi statistik
Tabung PAXgene disimpan di - 80 ° C sampai ekstraksi RNA. RNA
diekstraksi menggunakan PAXgene Blood RNA Kit IVD untuk isolasi dan
pemurnian RNA intraseluler menurut produsen ' s arah. Integritas RNA
(RIN) dinilai menggunakan bioanalyzer dan hanya sampel dengan skor
RIN> 7,5 yang diproses untuk array. Jumlah yang konstan (400 ng) dari
total RNA diamplifikasi, seperti yang direkomendasikan oleh Illumina, dan
hibridisasi ke seluruh larik manik genom manusia Illumina H12-v4.
Semua array diproses di Wistar Institute Genomics Facility. Perangkat
lunak Illumina GenomeStudio digunakan untuk mengekspor level
ekspresi dan deteksi p- nilai untuk setiap probe dari setiap sampel. Dari
hibridisasi individu, normalisasi data dan transformasi untuk membuat
perbandingan tingkat ekspresi yang bermakna dan gen terpilih untuk
analisis lebih lanjut dan penambangan data dilakukan seperti yang
dijelaskan sebelumnya [ 51 ] Data intensitas sinyal dinormalisasi kuantitatif
dan log2 ditransformasikan. Perbandingan tingkat ekspresi antara dua
kelompok dilakukan dengan menggunakan uji dua sampel dan koreksi
Benjamini-Hochberg (BH) untuk beberapa pengujian dilakukan [ 52 ]
Tingkat Penemuan Salah (FDR) <10% digunakan sebagai ambang batas
signifikansi. Kami memutuskan cut-off 10% a priori berdasarkan
keseimbangan toleransi untuk kesalahan Tipe 1 vs Tipe 2. FDR 0,1
memastikan bahwa sebagian besar gen yang terdeteksi sebagai yang
diekspresikan secara berbeda-beda kemungkinan mewakili perbedaan
biologis yang sebenarnya, namun ia memberikan kita toleransi optimal
dari kesalahan positif untuk memaksimalkan penemuan sinyal biologis
nyata. Selain itu, kami menggunakan data ekspresi gen untuk
memperkirakan kelimpahan berbagai jenis sel imun dalam populasi sel
darah campuran. Dekonvolusi dilakukan menggunakan CIBERSORT,
vektor dukungan
Agarwal et al. Kekebalan & Penuaan ( 2018) 15:19
model berbasis regresi [ 27 ] Kami kemudian membandingkan perbedaan
dalam komposisi jenis sel dalam sampel yang dikumpulkan dari
orang-orang yang menggunakan pengobatan dibandingkan dengan
mereka yang tidak, menggunakan Mann-Whitney U Test. Analisis
pengayaan set gen untuk fungsi biologis dan jalur kanonik juga dilakukan
menggunakan Basis Data untuk Anotasi, Visualisasi, dan Penemuan
Terpadu (DAVID) v 6.8 [ 53 ] Semua analisis statistik adalah konduksi
menggunakan bahasa statistik R v 3.4.3. Hasil dengan BH dikoreksi p- nilai
<0,05 dianggap signifikan kecuali disebutkan sebaliknya.
File tambahan
File tambahan 1: Gambar S1. Sampel serum dikumpulkan pada dua kunjungan terpisah setelah vaksinasi
diuji untuk IgA, IgG dan IgM ke virus H1N1 dan H3N2 oleh ELISA. Plot biola seperti yang dijelaskan dalam
legenda untuk Gambar. 2 perlihatkan median level Ab antara kedua kelompok. Perbedaan
pasangan-bijaksana antara dua kohort di masing-masing dari enam panel dilakukan dengan menggunakan
Uji U Mann-Whitney, * p- nilai-nilai ≤ 0,05 dan ** p- nilai-nilai ≤ 0,005. (PDF 728 kb)
File tambahan 2: Gambar S2. Boxplots menunjukkan tingkat MFI dari penanda yang berubah secara signifikan,
PD1 dan BTLA, pada himpunan sel B yang berbeda dari individu yang tidak memiliki riwayat penggunaan obat,
dibandingkan dengan individu yang menggunakan Metformin, NSAID atau Statin seperti yang dijelaskan dalam
legenda untuk Gambar. 3 . Himpunan sel-B diidentifikasi menggunakan flow cytometry. Perbedaan
pasangan-bijaksana antara kohort di setiap panel dilakukan dengan menggunakan Uji U Mann-Whitney. Perbedaan
signifikan didakwa oleh bintang: * p- nilai-nilai ≤ 0,05, ** p- nilai-nilai
≤ 5 × 10 - 3, p- nilai ≤ 5 × 10 - 4. ( PDF 876 kb)
File tambahan 3: Gambar S3. Boxplots menunjukkan tingkat MFI dari penanda yang berubah secara signifikan,
Bcl-6, MROS dan PD-L2, pada himpunan sel B yang berbeda dari individu yang tidak memiliki riwayat
penggunaan obat, dibandingkan dengan individu yang menggunakan NSAID. seperti yang dijelaskan dalam
legenda untuk Gambar. 3 . Perbedaan pasangan-bijaksana antara kohort di setiap panel dilakukan dengan
menggunakan Uji Mann-Whitney U, perbedaan signifikan dituduhkan oleh bintang: * p- nilai
≤ 0,05, ** p- nilai ≤ 5 × 10 - 3, *** p- nilai ≤ 5 × 10 - 4. ( PDF 866 kb)
File tambahan 4: Gambar S4. Gen yang diekspresikan berbeda (DE) dalam kohort Metformin-pengguna
kronis dibandingkan dengan non-pengguna. Peta panas ekspresi gen dari gen DE yang diketahui antara
dua kohort dengan False Discovery Rate (FDR) <10% ditampilkan. Peta panas menunjukkan gen yang DE
pada awal (D0, hari 0, kunjungan 1), 1 minggu setelah vaksinasi (D7, hari 7, kunjungan 2) dan sebagai
respons antara dua kunjungan (D7 / D0). (PDF 5059 kb)
File tambahan 5: Gambar S5. Gen yang diekspresikan berbeda (DE) dalam kohort Statin-pengguna kronis
dibandingkan dengan non-pengguna. Peta panas ekspresi gen dari gen DE yang diketahui antara dua
kohort dengan False Discovery Rate (FDR) <10% ditampilkan. Peta panas menunjukkan gen yang DE pada
awal (D0, hari 0, kunjungan 1), 1 minggu setelah vaksinasi (D7, hari 7, kunjungan 2) dan sebagai respons
antara dua kunjungan (D7 / D0). (PDF 4428 kb)
Singkatan
Ab: Antibodi; ASCs: Ab mensekresi sel; Bcl6: Limfoma sel B 6; BH: Benjamini-Hochberg;
BTLA: B dan T attenuator limfosit; CD: Cluster of Diferationation; CDC: Pusat Pengendalian
dan Pencegahan Penyakit; Cox: Cyclooxygenase; CPE: Efek sitopatik; DAVID: Database untuk
Anotasi, Visualisasi, dan Penemuan Terpadu; DCRU: Unit Penelitian Klinis Duke; DMEM:
Dulbecco ' s Modifikasi Eagles Medium; ELISA: Uji imunosorben yang diinkubasi; Ig:
Immunoglobulin; MDCK: Ginjal Madin-Darby Canine; MFI: Intensitas Florescence Rata-Rata;
MROS: Spesies Oksigen Reaktif Mitokondria; NSAID: Obat antiinflamasi nonsteroid; Oct2:
Faktor transkripsi oktamer 2; PBMC: Sel mononuklear darah tepi; PBS: Saline dengan Bufer
Fosfat; PD1: Protein kematian sel 1 terprogram; PD-L: Program-ligan kematian; RIN: integritas
RNA; ROS: Spesies Oksigen Reaktif; Sirt1: Sirtuin 1; TCID: Dosis infektif kultur jaringan; TIV:
Vaksin influenza trivalen yang tidak aktif; TPCK: Tosylamide-2-phenylethyl chloromethyl keton;
Treg: Sel-T regulatori; VNA: Ab yang menetralkan virus
Halaman 12 dari 13
Pendanaan
Pekerjaan ini didukung oleh National Institutes of Health, National Institute of Allergy and Infectious
Disease (NIAID) Kontrak [BAA 26620050030] untuk HCJE. KES juga menerima dukungan dari
National Institute on Aging (NIA), Grant Pepper Center Older American Independence Grant
P30AG028716.
Ketersediaan data dan materi
Data tersedia di basis data ImmPort ( https://immport.niaid.nih.gov ) dengan nomor studi yang
sesuai N01-AI-100018C: dataset SDY272, SDY622, SDY648, SDY739 dan SDY819.
Penulis ' kontribusi
HCJE, RK, dan AK merancang dan mengatur penelitian ini. KES dan SD mengawasi penelitian
klinis. DA dan AK menganalisis data. DA menulis draf pertama makalah ini. Semua penulis
membaca dan menyetujui naskah akhir.
Persetujuan etika dan persetujuan untuk berpartisipasi
Semua sukarelawan menandatangani informed consent dan studi menerima persetujuan dari
Institutional Review Board dari Duke University School of Medicine, North Carolina, AS.
Persetujuan untuk publikasi
Tak dapat diterapkan.
Minat bersaing
Para penulis menyatakan bahwa mereka tidak memiliki kepentingan yang bersaing.
Penerbit ' s Note
Springer Nature tetap netral sehubungan dengan klaim yurisdiksi dalam peta yang
diterbitkan dan afiliasi kelembagaan.
Rincian penulis
1 Genomik dan Biologi Komputasi, Sekolah Kedokteran Perelman, Universitas Pennsylvania,
Philadelphia, PA 19104, AS. 2 Divisi Geriatri, Pusat Medis Universitas Duke; Pusat Penelitian,
Pendidikan, dan Klinik Geriatric, Pusat Medis Durham VA, Durham, NC 27705, AS. 3 Institut
Wistar, Philadelphia, PA 19104, AS.
Diterima: 19 Juni 2018 Diterima: 21 Agustus 2018
Referensi
1. Budd AP. Pembaruan: Aktivitas Influenza - Amerika Serikat, 1 Oktober 2017 -
3 Februari 2018. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2018; 67. Tersedia dari:
https://www.cdc.gov/mmwr/volumes/67/wr/mm6706a1.htm . [dikutip 2018 Agustus 1]
2. Nakaya HI, T Hagan, Duraisingham SS, Lee EK, Kwissa M, Rouphael N, dkk. Analisis sistem kekebalan
terhadap vaksinasi influenza selama beberapa tahun dan dalam populasi yang beragam menunjukkan
tanda tangan molekul bersama. Kekebalan. 2015; 43: 1186 - 98.
3. Giefing-Kröll C, Berger P, Lepperdinger G, Grubeck-Loebenstein B. Bagaimana jenis kelamin dan usia
memengaruhi respons imun, kerentanan terhadap infeksi, dan respons terhadap vaksinasi. Sel penuaan. 2015;
14: 309 - 21
4. Kannan S, Kossenkov A, Kurupati RK, Xiang JZ, Doyle SA, Schmader KE, dkk. Interval yang
diperpendek antara vaksinasi dengan vaksin influenza trivalen yang tidak aktif meningkatkan
respons pada usia lanjut. Penuaan (Albany NY). 2015; 7: 1077 - 85.
5. Kurupati RK, Kossenkoff A, Kannan S, Haut LH, Doyle S, Yin X, et al. Efek waktu vaksinasi
influenza dan pengumpulan sampel pada titer antibodi dan tanggapan pada orang tua. Vaksin.
2017; 35: 3700 - 8.
6. Frasca D, Blomberg BB. Efek penuaan pada fungsi sel B. Curr Opin Immunol. 2009; 21:
425 - 30.
7. Kannan S, Kurupati RK, Doyle SA, Freeman GJ, Schmader KE, Ertl HCJ, dkk. Ekspresi BTLA menurun
pada sel B pada usia lanjut dan dikaitkan dengan responsif yang rendah terhadap vaksin influenza
trivalen. Oncotarget. 2015; 6: 19445 - 55.
8. Vatti A, DM Monsalve, Pacheco Y, Chang C, Anaya JM, Gershwin ME. Dosa antigenik asli:
tinjauan komprehensif. J Autoimmun. 2017; 83: 12 - 21
9. Herati RS, Reuter MA, Dolfi DV, Mansfield KD, Aung H, Badwan OZ, dkk. Respons CXCR5 + PD-1
+ yang beredar memprediksi respons antibodi vaksin influenza pada orang dewasa muda tetapi
tidak pada orang tua. J Immunol. 2014; 193: 3528 - 37.
Agarwal et al. Kekebalan & Penuaan ( 2018) 15:19 Halaman 13 dari 13

10. Moro-García MA, Alonso-Arias R, Lopez-Larrea C. Saat Penuaan Capai CD4
+ Sel-T: Perubahan Fenotipik dan Fungsional. Immunol depan. 2013; 4. Tersedia dari: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3650461/
. [dikutip 2018 Agustus 1]
11. D ' PF jelek. Interaksi obat-vaksin. Obat Intell Clin Pharm. 1984; 18: 697 - 700
12. Black S, Nicolay U, Del Giudice G, Rappuoli R. Pengaruh statin pada respon vaksin influenza
pada orang tua. J Infect Dis. 2016; 213: 1224 - 8.
13. Markas Besar McLean, Chow BDW, VanWormer JJ, Raja JP, Belongia EA. Efek penggunaan Statin pada
efektivitas vaksin influenza. J Infect Dis. 2016; 214: 1150 - 8.
14. Diaz A, Romero M, Vazquez T, Lechner S, Blomberg BB, Frasca D. Metformin meningkatkan fungsi
sel B in vivo dan in vitro pada individu dengan obesitas dan diabetes tipe-2. Vaksin. 2017; 35:
35. Bancos S, Bernard MP, Topham DJ, Phipps RP. Ibuprofen dan obat antiinflamasi nonsteroid lainnya
banyak digunakan menghambat produksi antibodi dalam sel manusia. Immunol sel. 2009; 258: 18 -
28.
36. Bernard MP, Phipps RP. Penghambatan cyclooxygenase-2 merusak ekspresi faktor
transkripsi sel plasma esensial dan diferensiasi Blymphocyte manusia. Imunologi.
2010; 129: 87 - 96.
37. Mehrbod P, Omar AR, Rambut-Bejo M, Haghani A, Ideris A. Mekanisme Aksi dan Khasiat Statin
terhadap Influenza. BioMed Research International. 2014. Tersedia dari: https://www.hindawi.com/journals/bmri/
2014/872370 / . [dikutip 2018 Agustus 1]
38. Warita K, Warita T, Beckwitt CH, Schurdak ME, Vazquez A, A Wells, dkk. Penghambatan jalur mevalonat

2694 - 700 yang diinduksi statin melemahkan pertumbuhan sel kanker mirip mesenkim yang tidak memiliki kohesi

15. Lasaro MO, Tatsis N, Hensley SE, Whitbeck JC, Lin SW, Rux JJ, dkk. Penargetan sel termediasi E-cadherin fungsional. Sci Rep. 2014; 4: 7593.

antigen ke mediator entri herpes menambah respons imun adaptif primer. Nat Med.
2008; 14: 205 - 12. 39. Kwak B, Mulhaupt F, Myit S, Mach F. Statin sebagai jenis imunomodulator yang baru dikenal.

16. Lages CS, Lewkowich I, Sproles A, Wills-Karp M, Chougnet C. Pemulihan parsial fungsi sel-T Nat Med. 2000; 6: 1399 - 402.

pada tikus tua dengan blokade in vitro dari jalur PD-1 / PD-L1. Sel penuaan. 2010; 9: 785 - 98. 40. Bu D, Griffin G, Lichtman AH. Mekanisme untuk efek antiinflamasi statin. Curr Opin
Lipidol. 2011; 22: 165.
17. Zhang TT, Gonzalez DG, Cote CM, SM Kerfoot, Deng S, Cheng Y, dkk. Pengembangan sel B pusat germinal 41. Pearce EL, Walsh MC, Cejas PJ, Harms GM, Shen H, Wang LS, et al. Meningkatkan memori sel

memiliki tahapan yang diatur dengan jelas yang diselesaikan dengan melepaskan diri dari bantuan sel T. T CD8 dengan memodulasi metabolisme asam lemak. Alam. 2009; 460: 103 - 7.

Elife. 2017; 6. https://doi.org/

10.7554 / eLife.19552 . 42. CD Klaassen, Aleksunes LM. Xenobiotik, Asam Empedu, dan pengangkut Kolesterol:

18. Emslie D, D ' Costa K, Hasbold J, Metcalf D, Takatsu K, Hodgkin PO, dkk. Oct2 meningkatkan fungsi dan regulasi. Pharmacol Rev. 2010; 62: 1 - 96.

diferensiasi sel yang mensekresi antibodi melalui regulasi reseptor IL-5 α ekspresi berantai pada sel B 43. Jackson ML, Bellamy A, Wolff M, Hill H, Jackson LA. Penggunaan aspirin dosis rendah tidak mengurangi

yang diaktifkan. J Exp Med. 2008; 205: 409 - 21 respon imun terhadap vaksin influenza H1N1 monovalen pada orang dewasa yang lebih tua. Infeksi

Epidemiol. 2016; 144: 768 - 71.

19. Zorov DB, Juhaszova M, Sollott SJ. Spesies oksigen reaktif mitokondria (ROS) dan pelepasan ROS
yang diinduksi ROS. Physiol Rev. 2014; 94: 909 - 50. 44. Epperly H, Vaughn FL, Mosholder AD, Maloney EM, Rubinson L. Obat antiinflamasi

20. Rahman S, Islam R. Mammalian Sirt1: wawasan tentang fungsi biologisnya. Komunikasi dan nonsteroid dan penggunaan aspirin, dan kematian di antara pasien influenza H1N1 pandemi

Sinyal Sel. 2011; 9:11. kritis: analisis eksplorasi. Jpn J Infect Dis. 2016; 69: 248 - 51.

21. Yuan Y, Cruzat VF, Newsholme P, Cheng J, Chen Y, Lu Y. Regulasi SIRT1 dalam penuaan: peran
45. Hogg AE, Senilai A, Beverley P, Howard CJ, Villarreal-Ramos B. Memori antigenspesifik respon
dalam fungsi mitokondria dan biogenesis. Mech Aging Dev. 2016; 155: 10 - 21
sel CD8 + yang diinduksi oleh BCG pada sapi berada di CD8 + γ / δ TCR - CD45RO + populasi
sel-T. Vaksin. 2009; 27: 270 - 9.
22. Lim HW, Kang SG, Ryu JK, Schilling B, Fei M, Lee IS, dkk. SIRT1 deacetylates ROR γ t dan
46. ​Zaidi I, Diallo H, Conteh S, Robbins Y, Kolasny J, Orr-Gonzalez S, dkk. γδ T
meningkatkan generasi sel Th17. J Exp Med. 2015; 212: 973.
Sel-sel diperlukan untuk induksi imunitas steril selama vaksinasi Sporozoit iradiasi.
23. Wang Q, Yan C, Xin M, Han L, Zhang Y, Sun M. Sirtuin 1 (Sirt1) berlebih dalam sel BaF3
J Immunol. 2017; 199: 3781 - 8.
berkontribusi terhadap promosi proliferasi sel, resistensi apoptosis dan produksi sitokin
47. Omer SB, Phadke VK, Bednarczyk RA, Chamberlain AT, Brosseau JL, Orenstein WA. Dampak statin
pro-inflamasi. Med Sci Monit. 2017; 23: 1477 - 82.
pada efektivitas vaksin influenza terhadap penyakit pernapasan akut yang diderita secara medis. J
Infect Dis. 2016; 213: 1216 - 23.
24. Boily G, Seifert EL, Bevilacqua L, He XH, Sabourin G, Estey C, dkk. SirT1 mengatur metabolisme
48. Mascitelli L, Goldstein MR. Bagaimana pengaturan induksi sel-T oleh statin dapat mengganggu
energi dan respons terhadap pembatasan kalori pada tikus. PLoS Satu. 2008; 3: e1759.
imunogenisitas dan efektivitas vaksin influenza. J Infect Dis. 2016; 213: 1857.

25. Bordone L, Cohen D, Robinson A, Motta MC, van Veen E, Czopik A, dkk. Tikus transgenik SIRT1
49. Rainen L, Oelmueller U, Jurgensen S, Wyrich R, Ballas C, Schram J, dkk. Stabilisasi ekspresi
menunjukkan fenotipe yang menyerupai pembatasan kalori. Sel penuaan. 2007; 6: 759 - 67.
mRNA dalam sampel darah lengkap. Klinik Chem. 2002; 48: 1883 - 90.

26. Wang X, Hinson ER, Cresswell P. Protein yang diinduksi interferon Viperin menghambat pelepasan virus
50. Laurie KL, Engelhardt OG, Wood J, Heath A, Katz JM, Peiris M, dkk. Perbandingan laboratorium
influenza dengan mengganggu rakit lipid. Tuan Sel Mikroba. 2007; 2: 96 - 105.
internasional dari tes influenza microneutralization untuk (H1N1) pdm09, a (H3N2), dan virus
influenza (H5N1) oleh CONSISE. Klinik Vaksin Immunol. 2015; 22: 957 - 64.
27. Newman AM, Liu CL, MR Hijau, AJ Gentles, Feng W, Xu Y, et al. Enumerasi subset sel
yang kuat dari profil ekspresi jaringan. Metode Nat. 2015; 12: 453 - 7.
51. Quackenbush J. Microarray normalisasi dan transformasi data. Nat Genet. 2002; 32: 496 - 501.

28. Sukumar M, Liu J, Ji Y, Subramanian M, Crompton JG, Yu Z, et al. Menghambat metabolisme

52. Green GH, Diggle PJ. Pada karakteristik operasional prosedur tingkat penemuan palsu
glikolitik meningkatkan CD8 + Memori sel T dan fungsi antitumor. J Clin Invest. 2013; 123: 4479 - 88.
Benjamini dan Hochberg. Stat Appl Genet Mol Biol. 2007; 6: Pasal27.

29. Rena G, Hardie DG, Pearson ER. Mekanisme aksi metformin. Diabetologia. 2017; 60:
53. Huang DW, Sherman BT, Lempicki RA. Analisis sistematis dan integratif dari daftar gen besar menggunakan
1577 - 85.
sumber daya bioinformatika DAVID. Nat Protoc. 2009; 4: 44 - 57.
30. Ravera S, Cossu V, Tappino B, Nicchia E, Dufour C, Cavani S, dkk. Efek metabolik yang
bergantung pada konsentrasi metformin dalam sel limfoblas anemia sehat dan Fanconi. J Cell
Physiol. 2018; 233: 1736 - 51.
31. Prlic M, Imunologi BMJ. Peralihan metabolisme ke memori. Alam. 2009; 460: 41 - 2.

32. Doughty CA, Bleiman BF, Wagner DJ, Dufort FJ, Mataraza JM, Roberts MF, dkk. Reseptor antigen - perubahan
yang dimediasi dalam metabolisme glukosa pada limfosit B: peran pensinyalan fosfatidylinositol
3-kinase dalam kontrol pertumbuhan glikolitik. Darah. 2006; 107: 4458 - 65.

33. Sherman MH, AI Kuraishy, ​Deshpande C, Hong JS, Cacalano NA, Gatti RA, dkk. Stres
genotoksik yang diinduksi AID mendorong diferensiasi sel B di pusat germinal melalui
pensinyalan ATM dan LKB1. Sel Mol. 2010; 39: 873 - 85.
34. Tsurufuji S, Sugio K, Sato H, Ohuchi K. Tinjauan mekanisme kerja obat antiinflamasi steroid dan
non-steroid. Peradangan: mekanisme dan perawatan. Dordrecht: Springer; 1980. hlm. 63 - 78.
Tersedia dari: https: // tautan. springer.com/chapter/10.1007/978-94-010-9423-8_7 . [dikutip 2018
Agustus 1]